CN114264815A - 克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒及检测方法，属于快速检测免疫分析领域，克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，包括ID芯片卡和装配在铝箔袋中的检测卡、干燥剂，所述检测卡由试纸条和塑料夹片组成，所述试纸条包括试纸条支持物、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、DNP‑BSA 0.4mg/mL。本方案量子点是将抗原先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当样品加入到样品孔后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断，检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3‑10min，灵敏度高，标本用量少。
Description
技术领域
本发明涉及快速检测免疫分析技术领域，具体为克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒及检测方法。
背景技术
盐酸克伦特罗又称"瘦肉精"，是一种平喘药。该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。克伦特罗在家畜和人体内吸收好，而且与其它β-兴奋剂相比，它的生物利用度高，以致食用了含有克伦特罗的猪肉出现中毒。自2002年9月10起在中国境内禁止在饲料和动物饮用水中使用盐酸克伦特罗。盐酸克伦特罗属于中度蓄积性药物，在动物组织内的蓄积与其剂量和给药持续时间有关，其残留量随停药期的延长逐渐下降。大量试验已证明盐酸克伦特罗在动物体内的残留主要集中在眼睛、毛发、肺、肝、肾及肌肉和脂肪组织。其中眼睛的视网膜和脉络膜、毛发中残留最高，是因为其消除最慢；其次是肺、肝和肾；肌肉组织和脂肪组织中的残留情况大致相当，约为肝脏中的1/5。克伦特罗在肺、肝脏中的残留普遍高于肾脏，且残留时间较长。
盐酸克仑特罗在作为饲料添加剂销售时的商品名又称为"瘦肉精"、"肉多素"等。不良反应：盐酸克伦特罗可使骨骼肌慢收缩纤维上的β受体，使之加速收缩，表现为手不能握住，走路困难，面颈部骨骼肌震颤，尤其是交感神经功能亢进者更易发生，β受体激动时可抑制淋巴细胞的增殖，抑制淋巴因子和抗体的形成，抑制诱发的血小板激活；盐酸克伦特罗可使血糖升高，胰岛素分泌增加，引起厌食；盐酸克伦特罗可激动骨骼肌细胞膜上Na/K+/ATP酶，促使K+进入细胞，血液中K+浓度下降，诱发心律失常。此外，β2受体兴奋能引起血乳酸、丙酮酸升高，并可出现酮体，引起代谢紊乱。这些药理作用是盐酸克伦特罗引起不良反应的原因。
而目前市面上有胶体金酶联免疫荧光化学发光测克伦特罗含量方法学，胶体金酶联免疫需配备相应仪器，虽然仪器价格低，体积小，操作简便，但实现大批量样本检测，耗时约10-20min，灵敏度不高。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒及检测方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，包括ID芯片卡和装配在铝箔袋中的检测卡、干燥剂；
所述检测卡由试纸条和塑料夹片组成，所述试纸条包括试纸条支持物、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、DNP-BSA 0.4mg/mL、克伦特罗抗原0.7mg/mL、量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体0.05μg/人份、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体0.01μg/人份；
所述DNP-BSA为质控线包被抗原，所述DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，所述克伦特罗抗原为原检测线包被抗原，所述克伦特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，所述量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体均固定在玻璃纤维素膜上，所述试纸条支持物为PVC板。
优选的，所述检测卡的制备包括以下步骤：
一、硝酸纤维素膜的包被：将质控线包被抗原和检测线包被抗原包被到硝酸纤维素膜上，干燥后装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用；
二、样品垫的处理：
S1、样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；
S2、转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；
S3、裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm。
S4、封装：在操作间内相对湿度30％以下的条件下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；
三、量子点荧光标记探针的喷制：
(1)量子点荧光标记探针偶联；
(2)量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置。
(3)干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜。
(4)封装：在操作间内(相对湿度30％以下)，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封；
四、组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物上；
五、切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；
六、装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内，用压壳机压紧得到检测卡，将装配好的检测卡、干燥剂装入铝箔袋，热封机封口，每袋一人份。
优选的，所述硝酸纤维素膜的包被具备操作步骤如下：
Ⅰ、将硝酸纤维素膜裁切成300mm长，25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物的特定位置上；
Ⅱ、用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.4mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成0.7mg/mL的检测线包被液；
Ⅲ、包被：在操作间环境温度为18℃-28℃、相对湿度为45％-65％的条件下，将质控线包被液、检测线包被液分别划到硝酸纤维素膜上；
Ⅳ、干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；
Ⅴ、封装：在操作间相对湿度30％以下的条件下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用。
优选的，所述量子点荧光标记探针偶联具体操作步骤如下：
a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；
b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；
c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；
d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。
e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。
优选的，所述活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20；所述偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20；所述保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA。
本发明要解决的另一技术问题是提供克伦特罗含量的量子点免疫分析检测方法，包括以下步骤：
S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启；
S2.在所述干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；
S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；
S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；
S5.样本准备，所述样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，所述需要前处理的样本包括蛋、饲料、组织、牛奶、奶粉；
S6.用移液器取60μL的样本加入检测卡的加样孔并在干式荧光免疫分析仪中选择相应样本类型，将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息；
S7.干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；
S8.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。
优选的，所述蛋的处理操作如下：
(1)取1mL样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 0.5X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10。
优选的，所述饲料的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.05ml上层液，加入0.95ml 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：100。
优选的，所述组织包括肌肉、肝脏，所述组织的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10。
优选的，所述牛奶的处理操作如下：
(1)取0.5mL样品，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16。
优选的，所述奶粉的处理操作如下：
①称取1±0.05g奶粉样品，加入10mL水，充分溶解；
②取0.5mL溶解物，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
③室温4000g离心3分钟；
④取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
⑤每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16。
与现有技术相比，本发明提供了克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒及检测方法，具备以下有益效果：
本方案量子点是将抗原先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当样品加入到样品孔后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断，检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3-10min，灵敏度高，标本用量少。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，包括ID芯片卡和装配在铝箔袋中的检测卡、干燥剂；
检测卡由试纸条和塑料夹片组成，试纸条包括试纸条支持物、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、DNP-BSA 0.4mg/mL、克伦特罗抗原0.7mg/mL、量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体0.05μg/人份、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体0.01μg/人份；
DNP-BSA为质控线包被抗原，DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，克伦特罗抗原为原检测线包被抗原，克伦特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体均固定在玻璃纤维素膜上，试纸条支持物为PVC板。
检测卡的制备包括以下步骤：
一、硝酸纤维素膜的包被：
Ⅰ、将硝酸纤维素膜裁切成300mm长，25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物的特定位置上；
Ⅱ、用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.4mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成0.7mg/mL的检测线包被液；
Ⅲ、包被：在操作间环境温度为18℃-28℃、相对湿度为45％-65％的条件下，将质控线包被液、检测线包被液分别划到硝酸纤维素膜上；
Ⅳ、干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；
Ⅴ、封装：在操作间相对湿度30％以下的条件下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用。
二、样品垫的处理：
S1、样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；
S2、转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；
S3、裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm。
S4、封装：在操作间内相对湿度30％以下的条件下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；
三、量子点荧光标记探针的喷制：
(1)量子点荧光标记探针偶联：
a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；
b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20，加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；
c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；
d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。
e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。
(2)量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置；
(3)干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜；
(4)封装：在操作间内(相对湿度30％以下)，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封。
四、组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物上；
五、切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；
六、装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内，用压壳机压紧得到检测卡，将装配好的检测卡、干燥剂装入铝箔袋，热封机封口，每袋一人份。
其中，物理性状要求：
1.外观：检测卡外观应平整，无毛刺、无破损、无污染，材料附着应牢固，卡固定紧密，中文包装标签应字迹清晰，无磨损，粘贴位置正确、牢固。
2.膜条宽度：试纸条宽度应在3.0mm-4.0mm。
3.液体移行速度：液体移行速度应≥10mm/min。
4.线性范围：在10-1000pg/ml范围内，相关系数r值应≥0.990。
精密度要求：
1.批内精密度：变异系数(CV)应不大于15％。
2.批间精密度：变异系数(CV)应不大于20％。
3.准确度：相对偏差应不大于20％。
4.最低检出限：应不高于5ng/ml。
本试剂盒检测是将仪器读取的检测线(T)与质控线(C)的信号比值(T/C)，通过ID芯片卡或者二维码中的标准曲线换算成具体浓度值，质控线作为检测卡的质控标准，若质控线无条带或者条带异常，超过仪器质控范围，则检测结果显示无效，并建议重新检测一次。
本发明提供一种克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启；
S2.在干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；
S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；
S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；
S5.样本准备，样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，需要前处理的样本包括蛋、饲料、组织、牛奶、奶粉；
S6.对于处理好的样本，然后取60μL混匀后的样本加入检测卡的加样孔，并在“样本类型”中选择“相应样本”按键，开始计时；
S7.对于可直接使用的样本，可采用“直接加样”模式，请使用移液器直接取60ul样本加入检测卡的加样孔，并在“样本类型”中选择“相应的样本”按键，开始计时；
S8.如选择“标准检测”模式，在加入样本至检测卡加样孔后，应立即将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息，自动进入倒计时状态；
S9.如选择“快速检测”模式，在加入样本至检测卡加样孔后，开始计时，8-10分钟时，立即将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；
S10.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。
其中，样本的处理操作：
一、蛋的处理操作如下：
(1)取1mL样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 0.5X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10；
二、饲料的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.05ml上层液，加入0.95ml 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：100。
三、组织包括肌肉、肝脏，组织的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10。
四、牛奶的处理操作如下：
(1)取0.5mL样品，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16。
五、奶粉的处理操作如下：
①称取1±0.05g奶粉样品，加入10mL水，充分溶解；
②取0.5mL溶解物，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
③室温4000g离心3分钟；
④取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
⑤每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16。
综上：本方案采用量子点荧光标记技术和竞争免疫层析法原理，分别将克伦特罗抗原包被在硝酸纤维素膜上，将量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体分布在玻璃纤维素膜中；
在检测过程中，将样本加入加样孔，如样本中含有克伦特罗，可与量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体结合，探针或结合物可通过毛细管作用继续移动到硝酸纤维素膜上，并可被该处含有的相应抗原所捕捉，形成量子点荧光检测条带，在一定范围内，样本中的克伦特罗的浓度与检测线的量子点荧光强度成负相关，经过干式荧光免疫分析仪的测定计算，可以确定样本中克伦特罗的浓度。是将抗原先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当样品加入到样品孔后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断。检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3-10min。灵敏度高，标本用量少。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，其特征在于：包括ID芯片卡和装配在铝箔袋中的检测卡、干燥剂；
所述检测卡由试纸条和塑料夹片组成，所述试纸条包括试纸条支持物、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜、DNP-BSA 0.4mg/mL、克伦特罗抗原0.7mg/mL、量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体0.05μg/人份、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体0.01μg/人份；
所述DNP-BSA为质控线包被抗原，所述DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，所述克伦特罗抗原为原检测线包被抗原，所述克伦特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，所述量子点荧光标记的克伦特罗单克隆抗体、量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体均固定在玻璃纤维素膜上，所述试纸条支持物为PVC板。
2.根据权利要求1所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，其特征在于：所述检测卡的制备包括以下步骤：
一、硝酸纤维素膜的包被：将质控线包被抗原和检测线包被抗原包被到硝酸纤维素膜上，干燥后装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用；
二、样品垫的处理：
S1、样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；
S2、转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；
S3、裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm；
S4、封装：在操作间内相对湿度30％以下的条件下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；
三、量子点荧光标记探针的喷制：
(1)量子点荧光标记探针偶联；
(2)量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置。
(3)干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜；
(4)封装：在操作间内(相对湿度30％以下)，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封；
四、组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物上；
五、切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；
六、装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内，用压壳机压紧得到检测卡，将装配好的检测卡、干燥剂装入铝箔袋，热封机封口，每袋一人份。
3.根据权利要求2所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜的包被具备操作步骤如下：
Ⅰ、将硝酸纤维素膜裁切成300mm长，25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物的特定位置上；
Ⅱ、用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.4mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成0.7mg/mL的检测线包被液；
Ⅲ、包被：在操作间环境温度为18℃-28℃、相对湿度为45％-65％的条件下，将质控线包被液、检测线包被液分别划到硝酸纤维素膜上；
Ⅳ、干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；
Ⅴ、封装：在操作间相对湿度30％以下的条件下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用。
4.根据权利要求2所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，其特征在于：所述量子点荧光标记探针偶联具体操作步骤如下：
a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；
b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；
c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；
d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。
e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。
5.根据权利要求4所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒，其特征在于：所述活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20；所述偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20；所述保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA。
6.根据权利要求1-5任一所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启；
S2.在所述干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；
S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；
S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；
S5.样本准备，所述样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，所述需要前处理的样本包括蛋、饲料、组织、牛奶、奶粉；
S6.用移液器取60μL的样本加入检测卡的加样孔并在干式荧光免疫分析仪中选择相应样本类型，将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息；
S7.干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；
S8.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。
7.根据权利要求6所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒的检测方法，其特征在于：
所述蛋的处理操作如下：
(1)取1mL样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 0.5X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10；
所述饲料的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.05ml上层液，加入0.95ml 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：100。
8.根据权利要求6所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒的检测方法，其特征在于：
所述组织包括肌肉、肝脏，所述组织的处理操作如下：
(1)取1g样品，加入3mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.15mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：10。
9.根据权利要求6所述的克伦特罗含量的量子点免疫分析试剂盒的检测方法，其特征在于：
所述牛奶的处理操作如下：
(1)取0.5mL样品，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
(2)室温4000g离心3分钟；
(3)取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
(4)每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16；
所述奶粉的处理操作如下：
①称取1±0.05g奶粉样品，加入10mL水，充分溶解；
②取0.5mL溶解物，加入1.5mL无水甲醇，混匀；
③室温4000g离心3分钟；
④取0.1mL上层液，加入0.3mL 1X样品稀释液，混匀；
⑤每孔取60μL样品进行检测；
稀释倍数：16。
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