CN114264812A - 一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法，属于检测技术领域，包括检测卡、ID芯片卡、说明书，所述检测卡由试纸条、塑料夹片组成，所述试纸条上的组成成分包括：0.5mg/mL的DNP‑BSA、1mg/mL的齐帕特罗抗原。采用量子点荧光标记技术和竞争免疫层析法原理，将齐帕特罗抗原包被在硝酸纤维素膜上的某一区带，当样本加入到加样孔后，由于毛细管作用，样本将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样本中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断，检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3‑10min，灵敏度高，标本用量少。

Description

一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体为一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法。

背景技术

齐帕特罗(zilpater01)属于β2一肾上腺素受体激动剂，是一种与克伦特罗(俗称瘦肉精)、莱克多巴胺、沙丁胺醇等具有同样生理效应的生长促进剂，属于违禁药物。但其化学结构却与常见的B-兴奋剂不同，其毒性也是莱克多巴胺的15倍。然而，随着相关兽药监管部门对克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等常见8一兴奋剂打击力度的增大和相关检测技术的日趋成熟，齐帕特罗极有可能被不法分子利用，成为食品安全的潜在杀手。鉴于以上原因，我国已于1997年将沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺等β-受体激动剂可明显促进动物生长，并增加瘦肉率。它能够改变动物体内的代谢途径，促进肌肉，特别是骨骼肌中蛋白质的合成，抑制脂肪的合成，从而加快生长速度，瘦肉相对增加，改善胴体品质。但是齐帕特罗也有严重的副作用，会导致人和动物心律不齐，严重的会导致死亡，和其他兴奋剂一样列为禁止在饲料和养殖家畜饮用水中使用的药品。但是，目前仍有养殖者将其违法使用在畜牧业中，引发药物残留，从而对消费者健康造成严重损害。

目前市面上有胶体金酶联免疫荧光化学发光测齐帕特罗含量方法学，胶体金酶联免疫需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现大批量样本检测，耗时约10-20min，灵敏度不高，另外化学发光需配备相应仪器，仪器价格昂贵，成本高。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒，包括检测卡、ID芯片卡、说明书；

所述检测卡由试纸条、塑料夹片组成，所述试纸条上的组成成分包括：0.5mg/mL的DNP-BSA、1mg/mL的齐帕特罗抗原、0.06μg/人份的量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体、0.01μg/人份的量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜和试纸条支持物；

所述试纸条支持物为聚氯乙烯聚合物材料的硬板，所述DNP-BSA为质控线包被抗原，所述DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，所述齐帕特罗抗原为检测线包被抗原，所述齐帕特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，所述量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上，所述量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上。

作为本发明进一步的方案，所述检测卡的制备包括以下流程：

一.硝酸纤维素膜的包被：

①将硝酸纤维素膜裁切成300mm长、25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物上；

②用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.5mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成1.0mg/mL的检测线包被液；

③包被：在操作间环境温度为18℃-28℃内、相对湿度保持为45％-65％的条件下，将包被液以合适的包被量分别划到硝酸纤维素膜上；

④干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；

⑤封装：在操作间相对湿度30％以下的环境下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

二.样品垫的处理：

①样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；

②转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；

③裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm；

④封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

三.量子点荧光标记探针的喷制

Ⅰ量子点荧光标记探针偶联：

a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；

b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，所述偶联液的加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；

c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，乙醇胺加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；

d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。

e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。

Ⅱ量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置；

Ⅲ干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜；

Ⅳ封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

四.组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物(PVC底板)上；

五.切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；

六.装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内得到检测卡，用压壳机压紧，将装配好的检测卡装入有干燥剂的铝箔袋内，热封机封口，每袋一人份。

作为本发明进一步的方案，所述活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20；所述偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20；所述保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA。

本发明要解决的另一技术问题是提供一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，包括以下步骤：

S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启；

S2.在所述干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；

S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；

S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；

S5.样本准备，所述样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，所述需要前处理的样本包括饲料、组织、鲜奶、尿样、血清、血浆；

S6.用移液器取50μL的样本加入检测卡的加样孔并在干式荧光免疫分析仪中选择相应样本类型，将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息；

S7.干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；

S8.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。

作为本发明进一步的方案，所述饲料的处理包括以下步骤：

1)样品使用适当的匀浆器进行匀质；

2)称取1g匀质的样品，加入10ml的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者用手震摇10分钟；

3)室温下(20-25℃)4000g离心10分钟；

4)转移0.5ml上清液到另一管中，加入0.5ml的1×样品稀释液，混匀；

5)每孔取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：20。

作为本发明进一步的方案，所述组织包括肌肉、肝脏，所述组织的处理包括以下步骤：

1)取1g匀浆样品，加入3mL的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者手摇震动10分钟；

2)室温(20-25℃)4000g离心5分钟；

3)每孔取50μL用于检测；

稀释倍数：4。

作为本发明进一步的方案，所述鲜奶的处理包括以下步骤：

1)取1ml的牛奶样品，加入50L样品提取液A，摇匀5秒，加入50L样品提取液B，涡旋30秒；

2)4000g离心5分钟；

3)转移150L提取液到新离心管，加入450L的1×样品稀释液，混匀30秒；

4)取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：4.4。

作为本发明进一步的方案，所述尿样、血清、血浆的处理为：

直接取50ul用于检测，若样品比较浑浊，在室温条件下4000rpm离心5分钟，取50ul上清液检测；

稀释倍数：1。

与现有技术相比，本发明提供了一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒及检测方法，具备以下有益效果：

采用量子点荧光标记技术和竞争免疫层析法原理，将齐帕特罗抗原包被在硝酸纤维素膜上的某一区带，当样本加入到加样孔后，由于毛细管作用，样本将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样本中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断，检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3-10min，灵敏度高，标本用量少。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒，包括检测卡、ID芯片卡、说明书；

检测卡由试纸条、塑料夹片组成，试纸条上的组成成分包括：0.5mg/mL的DNP-BSA、1mg/mL的齐帕特罗抗原、0.06μg/人份的量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体、0.01μg/人份的量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜和试纸条支持物；

试纸条支持物为聚氯乙烯聚合物材料的硬板，DNP-BSA为质控线包被抗原，DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，齐帕特罗抗原为检测线包被抗原，齐帕特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上，量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上。

检测卡的制备包括以下流程：

一.硝酸纤维素膜的包被：

①将硝酸纤维素膜裁切成300mm长、25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物上；

②用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.5mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成1.0mg/mL的检测线包被液；

③包被：在操作间环境温度为18℃-28℃内、相对湿度保持为45％-65％的条件下，将包被液以合适的包被量分别划到硝酸纤维素膜上；

④干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；

⑤封装：在操作间相对湿度30％以下的环境下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

二.样品垫的处理：

①样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；

②转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；

③裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm；

④封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

三.量子点荧光标记探针的喷制

Ⅰ量子点荧光标记探针偶联：

a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；

b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20，偶联液的加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；

c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，乙醇胺加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；

d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。

e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。

Ⅱ量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置；

Ⅲ干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜；

Ⅳ封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

四.组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物(PVC底板)上；

五.切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；

六.装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内得到检测卡，用压壳机压紧，将装配好的检测卡装入有干燥剂的铝箔袋内，热封机封口，每袋一人份。

对于试剂盒进校测的物理性状要求如下：

①外观：检测卡外观应平整，无毛刺、无破损、无污染，材料附着应牢固，卡固定紧密。中文包装标签应字迹清晰，无磨损，粘贴位置正确、牢固。

②膜条宽度：试纸条宽度应在3.0mm-4.0mm。

③液体移行速度：液体移行速度应≥10mm/min。

④线性范围：在10-1000pg/ml范围内，相关系数r值应≥0.990。

精密度要求如下：

①批内精密度：变异系数(CV)应不大于15％。

②批间精密度：变异系数(CV)应不大于20％。

③准确度：相对偏差应不大于20％。

④最低检出限：应不高于1ng/ml。

本发明还提供一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，包括以下步骤：

S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启，其中，干式荧光免疫分析仪分为“快速检测”和“标准检测”两种检测模式，在检测前应按照干式荧光免疫分析仪使用说明书选择所需的检测模式；

S2.在干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；

S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；

S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；

S5.样本准备，样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，需要前处理的样本包括饲料、组织、鲜奶、尿样、血清、血浆；

S6.对于处理好的样本，然后取60μL混匀后的样本加入检测卡的加样孔，并在“样本类型”中选择“相应样本”按键，开始计时；

S7.对于不用处理的样本，可采用“直接加样”模式，请使用移液器直接取60ul样本加入检测卡的加样孔，并在“样本类型”中选择“相应的样本”按键，开始计时；

S8.如选择“标准检测”模式，在加入样本至检测卡加样孔后，应立即将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息，自动进入倒计时状态；

S9.如选择“快速检测”模式，在加入样本至检测卡加样孔后，开始计时，8-10分钟时，立即将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；

S10.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。

本试剂盒检测是将仪器读取的检测线(T)与质控线(C)的信号比值(T/C)，通过ID芯片卡或者二维码中的标准曲线换算成具体浓度值。质控线作为检测卡的质控标准，若质控线无条带或者条带异常，超过仪器质控范围，则检测结果显示无效，并建议重新检测一次。

其中，样本处理具体操作如下：

饲料的处理包括以下步骤：

1)样品使用适当的匀浆器进行匀质；

2)称取1g匀质的样品，加入10ml的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者用手震摇10分钟；

3)室温下(20-25℃)4000g离心10分钟；

4)转移0.5ml上清液到另一管中，加入0.5ml的1×样品稀释液，混匀；

5)每孔取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：20。

6.根据权利要求4的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：组织包括肌肉、肝脏，组织的处理包括以下步骤：

1)取1g匀浆样品，加入3mL的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者手摇震动10分钟；

2)室温(20-25℃)4000g离心5分钟；

3)每孔取50μL用于检测；

稀释倍数：4。

鲜奶的处理包括以下步骤：

1)取1ml的牛奶样品，加入50L样品提取液A，摇匀5秒，加入50L样品提取液B，涡旋30秒；

2)4000g离心5分钟；

3)转移150L提取液到新离心管，加入450L的1×样品稀释液，混匀30秒；

4)取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：4.4。

尿样、血清、血浆的处理为：

直接取50ul用于检测，若样品比较浑浊，在室温条件下4000rpm离心5分钟，取50ul上清液检测；

稀释倍数：1。

综上所述：采用量子点荧光标记技术和竞争免疫层析法原理，分别将齐帕特罗抗原包被在硝酸纤维素膜上，将量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体分布在玻璃纤维素膜中。在检测过程中，将样本加入加样孔，如样本中含有齐帕特罗，可与量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体结合，探针或结合物可通过毛细管作用继续移动到硝酸纤维素膜上，并可被该处含有的相应抗原所捕捉，形成量子点荧光检测条带。在一定范围内，样本中的齐帕特罗的浓度与检测线的量子点荧光强度成负相关，经过干式荧光免疫分析仪的测定计算，可以确定样本中齐帕特罗的浓度。是将抗原先固定于硝酸纤维膜的某一区带，当样品加入到样品孔后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗原发生竞争，量子点可使该区域不显示荧光信号，从而实现特异性的免疫诊断。检测需配备相应仪器，仪器价格低，体积小，操作简便，可实现床边检测，耗时约3-10min。灵敏度高，标本用量少。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒，其特征在于：包括检测卡、ID芯片卡、说明书；

所述检测卡由试纸条、塑料夹片组成，所述试纸条上的组成成分包括：0.5mg/mL的DNP-BSA、1mg/mL的齐帕特罗抗原、0.06μg/人份的量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体、0.01μg/人份的量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜和试纸条支持物；

所述试纸条支持物为聚氯乙烯聚合物材料的硬板，所述DNP-BSA为质控线包被抗原，所述DNP-BSA固定在硝酸纤维素膜上的“质控线”区，所述齐帕特罗抗原为检测线包被抗原，所述齐帕特罗抗原固定在硝酸纤维素膜上的“检测线”区，所述量子点荧光标记的齐帕特罗单克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上，所述量子点荧光标记的兔抗DNP多克隆抗体固定在玻璃纤维素膜上。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒，其特征在于：所述检测卡的制备包括以下流程：

一.硝酸纤维素膜的包被：

①将硝酸纤维素膜裁切成300mm长、25mm宽，粘贴到特定型号的试纸条支持物上；

②用质控线缓冲液将质控线包被抗原配制成0.5mg/mL的质控线包被液，用检测线缓冲液将检测线包被抗原配制成1.0mg/mL的检测线包被液；

③包被：在操作间环境温度为18℃-28℃内、相对湿度保持为45％-65％的条件下，将包被液以合适的包被量分别划到硝酸纤维素膜上；

④干燥：将包被后的硝酸纤维素膜转入干烤箱干燥，55℃干燥过夜后用铝箔袋包封硝酸纤维素膜，再55℃干燥2天；

⑤封装：在操作间相对湿度30％以下的环境下，将干燥好的硝酸纤维素膜装入有硅胶干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

二.样品垫的处理：

①样品垫处理液加样：将一整张样品垫放入托盘内，均匀将50mL样品垫处理液加到干净的托盘内，完全浸泡1min；

②转移和干燥：用镊子将加完样的样品垫转移到洁净平坦的纱网上，放入鼓风干燥箱内，将温度控制在37℃，干燥过夜；

③裁切：将滚刀式裁切器裁切用干擦拭布进行擦拭，将样品垫30cm宽的两边边缘切除，边缘切除范围0.5cm-1.0cm，将样品垫裁切成每条宽20mm，长300mm；

④封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将处理好的样品垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

三.量子点荧光标记探针的喷制

Ⅰ量子点荧光标记探针偶联：

a、活化：在离心管上做好标识，用移液枪准确量取生产指令要求的量子点溶液的体积加入离心管中，再加入活化液，活化液的体积(ml)＝5×量子点溶液的体积，混匀；放置在超声波清洗机中超声5min；44912g/min 4℃离心15min，弃上清；

b、偶联：将已活化好的量子点溶液中加入偶联液，所述偶联液的加入体积(ml)＝2.66×量子点溶液的体积，混匀，放置在超声波清洗机中超声至完全均匀分散；加入标记单抗，标记单抗的体积(ml)＝(0.3483×抗体比例×量子点溶液的体积)/标记单抗的浓度；加入完毕后，混匀，放置在旋转培养器上4℃反应过夜；

c、封闭：反应结束后取下离心管加入乙醇胺，乙醇胺加入的体积(ml)＝0.016×量子点溶液的体积，混匀，放置在旋转培养器上30℃反应30min；

d、冲洗：反应结束后，往离心管中补充冲洗液至约量子点溶液体积的10倍，混匀；离心15min，弃上清。

e、保存：将已冲洗并弃上清的量子点溶液中加少量保存液，然后定容，定容的体积(ml)＝1/3×量子点溶液的体积。

Ⅱ量子点荧光标记探针的包被：将配好的量子点荧光标记探针溶液均匀喷到处理好的样品垫的指定位置；

Ⅲ干燥：调试好操作间的真空干燥箱，温度25℃，真空度≤-0.09MPa，干燥过夜；

Ⅳ封装：在操作间内相对湿度30％以下的环境下，将包被好的量子点荧光标记探针垫装入有干燥剂的铝箔袋内密封，待用；

四.组板：按生产工艺要求将量子点荧光标记探针垫、吸水纸粘贴在试纸条支持物(PVC底板)上；

五.切条：用切条机将贴好的大板切成3.5±0.1mm宽的半成品试纸条；

六.装配、置袋：将半成品试纸条装配在塑料夹片内得到检测卡，用压壳机压紧，将装配好的检测卡装入有干燥剂的铝箔袋内，热封机封口，每袋一人份。

3.根据权利要求2所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量试剂盒，其特征在于：所述活化液为5mM BS(ph7.2)+0.01％Tween20；所述偶联液为5mM BS(ph8.0)+0.01％Tween20；所述保存液为2.5mM BS(ph8.0)+0.1％BSA。

4.根据权利要求1-3任一所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将试剂盒及待检样本取出，平衡至室温，确认干式荧光免疫分析仪接通电源，开关开启；

S2.在所述干式荧光免疫分析仪上插入ID芯片卡；

S3.检查装有检测卡的铝箔袋包装是否完好，若有破损或漏气请勿使用；

S4.从铝箔袋中取出检测卡，打开后应在30分钟内使用；

S5.样本准备，所述样本包括需要前处理的样本和直接使用的样本，所述需要前处理的样本包括饲料、组织、鲜奶、尿样、血清、血浆；

S6.用移液器取50μL的样本加入检测卡的加样孔并在干式荧光免疫分析仪中选择相应样本类型，将检测卡插入干式荧光免疫分析仪，仪器自动扫描检测卡上的二维码信息；

S7.干式荧光免疫分析仪根据检测卡上的二维码读取产品信息，从而读取检测卡的测试结果；

S8.测试结束后的检测卡、移液器枪头、废弃检测卡及剩余样本按传染性物品进行处理。

5.根据权利要求4所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：所述饲料的处理包括以下步骤：

1)样品使用适当的匀浆器进行匀质；

2)称取1g匀质的样品，加入10ml的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者用手震摇10分钟；

3)室温下(20-25℃)4000g离心10分钟；

4)转移0.5ml上清液到另一管中，加入0.5ml的1×样品稀释液，混匀；

5)每孔取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：20。

6.根据权利要求4所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：所述组织包括肌肉、肝脏，所述组织的处理包括以下步骤：

1)取1g匀浆样品，加入3mL的1×样品稀释液，最大转速漩涡振荡3分钟或者手摇震动10分钟；

2)室温(20-25℃)4000g离心5分钟；

3)每孔取50μL用于检测；

稀释倍数：4。

7.根据权利要求4所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：所述鲜奶的处理包括以下步骤：

1)取1ml的牛奶样品，加入50L样品提取液A，摇匀5秒，加入50L样品提取液B，涡旋30秒；

2)4000g离心5分钟；

3)转移150L提取液到新离心管，加入450L的1×样品稀释液，混匀30秒；

4)取50μL上清液用于检测；

稀释倍数：4.4。

8.根据权利要求4所述的一种快速检测食品齐帕特罗含量的检测方法，其特征在于：所述尿样、血清、血浆的处理为：

直接取50ul用于检测，若样品比较浑浊，在室温条件下4000rpm离心5分钟，取50ul上清液检测；

稀释倍数：1。