CN114246898A - 一种发酵中药制剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种发酵中药制剂的制备方法,属于微生物发酵技术领域。本发明的发酵中药制剂的制备方法,包括以下步骤:将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行发酵;所述药性基质主要由中药和营养基质组成,所述中药包括杜仲和杨树花。本发明利用蝙蝠蛾拟青霉双向发酵杜仲和杨树花天然药物,实现一次发酵双向转化,同时获取两种药物的有效成分,起到协同增效的作用。发酵中药制剂中的多糖,甘露醇类似物和多酚物质用于畜禽因细菌,病毒引起的疾病中,不但避免了使用西药会产生的药物残留和耐药现象,而且使得动物机体的免疫力有了整体提高,达到了标本兼治的效果。

Description

一种发酵中药制剂的制备方法
技术领域
本发明涉及一种发酵中药制剂的制备方法,属于微生物发酵技术领域。
背景技术
蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen et Dai,sp.Nov)是从天然冬虫夏草子实体中分离而得,再将蝙蝠蛾拟青霉进行人工培养制成蝙蝠蛾拟青霉菌丝体。蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的有效成分主要是虫草多糖和甘露醇类似物,虫草多糖是蝙蝠蛾拟青霉菌丝体体内含量最丰富、最重要的生物活性物质之一,从发酵培养的菌丝体(胞内多糖)和发酵液(胞外多糖)中提取制成。
发酵中药是将天然药物提取物以优选的肠道益生菌菌群中一种或几种、一株或几株益生菌或蝙蝠蛾拟青霉等作为菌种,利用微生态学、仿生学的方法,通过生物嫁接的方式,在体外模拟机体的肠道环境和中药成分在机体内的消化分解过程,对提取的中药有效成分进行生物学转化,将中药的大分子物质经过微生物转化成为能够被机体肠道直接吸收的小分子成分,使中药成为快速吸收、定量疗效的新型药物,利用了天然微生物发酵中药以提高中药药效、消除中药毒副作用、改变中药药性。
随着我国经济的快速发展和人民健康观念的改变,人们对畜禽的肉类品质和饮食安全的要求越来越高。当治疗畜禽因细菌,病毒引起的疾病时,西药虽然本身具有纯度高见效快等优点,但是其本身也会产生一定的副作用,会产生药物残留和耐药现象。长期使用这些西药会在畜禽体内残留药物,这不但增加了畜禽的抗药性,而且使动物体内菌群失调、耐药菌株的产生,且影响了畜禽的肉类品质,并且畜禽的排泄物中残留物直接污染环境,给养殖业造成了极大的经济损失并严重威胁着人类的健康。
发明内容
本发明的目的在于提供一种发酵中药制剂的制备方法,用于解决目前使用西药治疗畜禽因细菌或病毒引起的疾病时产生的药物残留和耐药的问题。
为了实现上述目的,本发明的发酵中药制剂的制备方法所采用的技术方案为:
一种发酵中药制剂的制备方法,包括以下步骤:将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行发酵;所述药性基质主要由中药和营养基质组成,所述中药包括杜仲和杨树花。
本发明提供了一种蝙蝠蛾拟青霉发酵中药制剂的制备方法,利用蝙蝠蛾拟青霉双向发酵杜仲和杨树花天然药物,实现一次发酵双向转化,同时获取两种药物的有效成分,起到协同增效的作用。
虫草多糖是蝙蝠蛾拟青霉菌丝体体内含量最丰富、最重要的生物活性物质之一,虫草多糖具有免疫调节、抗菌、抗病毒、增加脾脏营养血流量,保肝、耐缺氧、镇静等作用。天然药物杜仲(杜仲叶)和杨树花粉碎后的粗粉经蝙蝠蛾拟青霉发酵,产生多糖、甘露醇类似物和多酚物质。多糖,甘露醇类似物和多酚物质用于治疗畜禽因细菌,病毒引起的疾病时,不但避免了使用西药会产生药物残留和耐药的现象,而且使得动物机体的免疫力有了整体提高,达到了标本兼治的效果。
优选地,所述杜仲和杨树花的质量比为1:(1~4)。进一步优选地,所述杜仲和杨树花的质量比为1:1。当杜仲和杨树花的质量比为上述范围时,可以保证最低成本的同时获得活性成分含量较高的发酵中药制剂。
优选地,中药在药性基质中的质量分数为30~60%。进一步优选地,中药在药性基质中的质量分数为50%。当中药在药性基质中的质量分数为其保证最优成本的同时达到更好的发酵效果,并且能保证蝙蝠蛾拟青霉较好的生长。
优选地,所述营养基质主要由玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖和硫酸铵组成。营养基质作为碳氮源,可以促使蝙蝠蛾拟青霉更好的生长发酵。优选地,所述玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖和硫酸铵的质量比为(1~2):(0.5~1):(0.5~1):(0.1~0.2):(0.04~0.06)。例如,所述玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖和硫酸铵的质量比为1:0.5:0.5:0.1:0.04。本发明的土豆汁由水和土豆碎屑组成,优选地,所述土豆汁由包括以下步骤的制备方法得到:将粉碎后的新鲜土豆在沸水中煮1h,然后进行过滤,得到土豆汁;所述土豆汁中水的质量分数为40~60%。进一步优选地,所述土豆汁中水的质量分数为60%。优选地,过滤所用筛孔的尺寸为60目。
为了保证蝙蝠蛾拟青霉适宜的生长条件,从而达到更好的发酵效果,优选地,将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中后,进行发酵的温度为25~27℃;发酵的时间为3~7d。进一步优选地,将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中后,进行发酵的温度为25℃;发酵的时间为7d。
优选地,蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行发酵所采用的发酵设备为恒温培养箱。
优选地,所述将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中是将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中。优选地,所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液由包括以下步骤的制备方法制得:将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中进行培养。为了提供较优的碳氮比,从而获得蝙蝠蛾拟青霉菌丝体含量较高的蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液,优选地,所述液体发酵培养基由酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、维生素B1、维生素B6和水制成。优选地,所述酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、维生素B1、维生素B6和水的质量比为(2~4):(1~3):(0.1~0.3):(0.02~0.04):(0.1~0.3):(0.02~0.06):(0.02~0.06):(93~97)。进一步优选地,所述酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、维生素B1、维生素B6和水的质量比为4:2:0.2:0.02:0.2:0.05:0.05:93.48。
为了保证蝙蝠蛾拟青霉较充分地将中药分解,避免造成资源浪费,优选地,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接与药性基质的体积比为(30~50):100。进一步优选地,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接与药性基质的体积比为50:100。
优选地,所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的含量为18~25g/L。进一步优选地,所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的含量为19.1~22.5g/L。
为了保证蝙蝠蛾拟青霉更好地进行生长繁殖,需要为其提供适宜的培养温度,优选地,将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中后,进行培养的温度为25~27℃;培养的时间为5~8d。进一步优选地,将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中后,进行培养的温度为25℃;培养的时间为8d。
优选地,将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中进行培养前,先将蝙蝠蛾拟青霉菌丝体接种于PDA培养基中进行培养活化,然后再将活化后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体接种于种子培养基中进行培养,得到种子培养液,然后再将种子培养液接种于所述液体发酵培养基中进行培养,得到所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液。
优选地,将活化后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体接种于种子培养基中后,进行培养的温度为25℃;培养的时间为6d。
优选地,将种子培养液接种于所述液体发酵培养基中进行培养时,种子培养液与所述液体发酵培养基的体积比为15:100。当种子培养液与液体发酵培养基的体积比为上述数值时,液体发酵培养基的利用率可以达到最优化,在保证蝙蝠蛾拟青霉生长所需基本营养的同时,可以达到扩繁种子液的目的。
所述发酵中药制剂可以为固体发酵中药制剂,也可以为液体发酵中药制剂,当发酵中药制剂为液体发酵中药制剂时,可以将发酵产物进行提取,得到含有活性物质的提取液。
优选地,所述发酵中药制剂为固体发酵中药制剂。优选地,所述发酵中药制剂的制备方法还包括以下步骤:将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行培养后的产物依次进行烘干处理和粉碎处理。优选地,所述发酵中药制剂的粒度为60~80目。
一种由上述发酵中药制剂的制备方法制备的发酵中药制剂。
本发明的发酵中药制剂由蝙蝠蛾拟青霉在含有杜仲(杜仲叶)和杨树花的药性基质中发酵制得,发酵中药制中含有虫草多糖、甘露醇类似物和多酚等物质,用于畜禽因细菌,病毒引起的疾病中,不但避免了使用西药会产生的药物残留和耐药现象,而且使得动物机体的免疫力有了整体提高,达到了标本兼治的效果。
一种上述发酵中药制剂作为猪饲料添加剂的应用。
优选地,所述猪饲料添加剂为生长猪或仔猪饲料添加剂。
本发明的发酵中药制剂作为猪饲料添加剂时,具有提高生长猪采食量、提高生长猪体重、提高生长猪料重比或降低仔猪腹泻率的作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案进行进一步说明。
本发明实施例中所用土豆汁由包括以下步骤的制备方法得到:首先将新鲜土豆粉碎,得到平均尺寸为3cm×3cm×3cm的土豆块,再将所得土豆块加入沸水中煮1h,然后进行过滤,过滤所用筛孔的尺寸为60目,得到土豆汁,土豆汁中水的质量分数为60%。
实施例1
本实施例的发酵中药制剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)虫草发酵菌液的制备:
先将一管斜面蝙蝠蛾拟青霉菌丝体接种于PDA培养基中进行活化,得到含有活化后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和PDA培养基的混合物,然后将活化后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体接种于种子培养基(含有活化后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体和PDA培养基的混合物与种子培养基的体积比为10:100)中,然后在26℃和转速为160r/min的条件下震荡培养6d,得到种子培养液,再将种子培养液接种到液体发酵培养基中,种子培养液与液体发酵培养基的体积比为15:100,然后在26℃和转速为160r/min的条件下震荡培养5d,得到蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液;PDA培养基由马铃薯浸粉、葡萄糖和水组成,PDA培养基中马铃薯浸粉的浓度为3g/L,葡萄糖的浓度为20g/L;种子培养基由以下重量百分比的组分组成:葡萄糖3%、蛋白胨0.5%、酵母粉0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%和水96.3%;液体发酵培养基由以下重量百分比的原料经121℃灭菌20min制成:酵母粉4%、葡萄糖2%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸铵0.02%、硫酸镁0.2%、维生素B1 0.05%、维生素B6 0.05%和水93.48%。
(2)固体发酵中药制剂的制备:
将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液与药性基质的体积比为50:100,再将含有蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液和药性基质的混合物搅拌均匀,并于25℃的恒温培养箱中培养7d,然后将发酵产物进行粉碎,过60、80目筛,收集粒度为60~80目的发酵产物颗粒,得到固体发酵中药制剂;药性基质由杜仲、杨树花、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水经121℃灭菌20min制成,杜仲、杨树花、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水的质量比为25:25:1:0.5:0.5:0.1:0.04:47.86。
实施例2
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(1)中,将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的温度为25℃。
实施例3
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(1)中,将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的温度为27℃。
实施例4
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(1)中,将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的时间为5d。
实施例5
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(1)中,将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的时间为7d。
实施例6
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(1)中,将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的时间为8d。
实施例7
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(2)中,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液与药性基质的体积比为30:100。
实施例8
本实施例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(2)中,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液与药性基质的体积比为40:100。
对比例1
本对比例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(2)中,药性基质由杨树花、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水经121℃灭菌20min制成,杨树花、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水的质量比为25:1:0.5:0.5:0.1:0.04:47.86。
对比例2
本对比例的发酵中药制剂的制备方法与实施例1的区别仅在于,步骤(2)中,药性基质由杜仲、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水经121℃灭菌20min制成,杜仲、玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖、硫酸铵和水的质量比为25:1:0.5:0.5:0.1:0.04:47.86。
实验例1
分别测试实施例1-6中步骤(1)得到的蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体含量,实验结果如表1所示。然后测试实施例1、实施例7-8和对比例1-2制备的固体发酵中药制剂中总多糖和总多酚的含量,测试结果如表2所示。
其中,总多糖含量的测试方法如下:
(1)粗多糖的提取
取适量样品和水放于100℃的沸水浴中2h左右,再在超声条件下提取30min,得到样品提取液。
(2)标准曲线的制定
精密称取10mg葡萄糖于100mL容量瓶中并定容,配成浓度0.1mg/mL的溶液,然后分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL的葡萄糖溶液于试管中,再加水至2mL,然后加入1mL质量分数为5%的苯酚溶液和5mL质量分数为98%的浓硫酸,静置10min,摇匀后放于沸水浴中20min,于490nm波长下测吸光值(OD)。用蒸馏水作空白对照,作三次平行实验。以OD值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标,绘制标准曲线,然后求得回归方程。
(3)样品总多糖的测定
精密取样品提取液1mL,加入1mL质量分数为5%的苯酚溶液和5mL质量分数为98%的浓硫酸,静置10min,摇匀后放于沸水浴中20min,于490nm波长下测吸光值。作三次平行实验,若吸光度过大,则进行样品稀释,使吸光值在0.2~0.8之间。根据标准曲线所得的回归方程粗略计算样品中总多糖的含量。
总多酚含量的测试方法如下:
(1)标准曲线的绘制
精密称取没食子酸0.033g,置于50mL容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度线,得浓度为0.662mg/mL的没食子酸标准溶液,标记为母液。再吸取0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3mL母液于10mL容量瓶中,依次加入0.5mL福林酚试剂,4mL质量分数为7.5%的Na2CO3溶液,然后加入蒸馏水定容至刻度线,摇匀,在37℃水浴条件下避光显色30min,以只加显色试剂溶液作空白对照,在波长722nm处测定其吸光度值A,以吸光度值A为横坐标X,以没食子酸标准溶液的质量浓度(μg/mL)为纵坐标Y,绘制标准曲线,得出线性回归方程,结果显示其在0~86.06μg/mL范围内线性关系良好。
(2)多酚含量测定
精密称取样品1.0g,置于100mL具塞锥形瓶中,加入25mL质量分数为60%的乙醇和质量分数为0.2%的盐酸溶液,精密称定。在超声频率为100Hz和温度为45℃的条件下避光提取60min,放冷称重,加入相应溶剂补足失重,摇匀后抽滤,得提取液。精密吸取提取液60μL,用相应溶剂稀释至10mL,摇匀得待测液。精密吸取待测液1mL于10mL容量瓶中,依次加入0.5mL福林酚试剂,4mL质量分数为7.5%的Na2CO3溶液,加入蒸馏水定容至刻度线,摇匀,在37℃水浴条件下避光显色30min,在波长为722nm处测定其吸光度值A,并根据标准曲线计算样品中多酚含量。
3、多酚含量计算公式
多酚含量(mg/g)=V1×C1×D1×10-3/M1
式中:V1—多酚待测液体积(mL);C1—根据标准曲线求得的待测液中多酚质量浓度(μg/mL);D1—多酚提取液稀释倍数;M1—样品质量(g)。
表1实施例1-6中步骤(1)得到的蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体含量
样品 蝙蝠蛾拟青霉菌丝体含量(单位g/L)
实施例1 22.5
实施例2 20.7
实施例3 19.2
实施例4 20.3
实施例5 19.9
实施例6 19.1
表2实施例1、7-8和对比例1-2制备的固体发酵中药制剂中总多糖和总多酚含量
Figure BDA0003432490700000071
Figure BDA0003432490700000081
由表1可知,与其他实施例相比,实施例1中步骤(1)得到的蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体含量最高,说明将种子培养液接种到液体发酵培养基中后,培养的最佳温度为26℃,最佳的培养时间为5d。
由表2可知,与实施例7和对比例1-2相比,实施例8制备的固体发酵中药制剂中总多糖和总多酚含量最高,因此,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液与药性基质的最佳体积比为40:100。
实验例2
选择健康、平均体重为(14.8±0.20kg)的“杜长大”三元杂交生长猪90头,按体重、性别基本一致的原则随机分为2组,每组平均分成3小组,每小组15头。对照组饲喂基础日粮;试验组饲喂添加含有实施例1制备的固体发酵中药制剂(固体发酵中药制剂的添加量为基础日粮质量的0.5%)的基础日粮,试验期为35d。实验过程中记录测定生长猪的平均日增重、平均日采食量、料重比和腹泻率,结果如表3所示。
表3对照组和试验组生长猪的平均日增重、平均日采食量、料重比和腹泻率
项目 对照组 试验组
始重/kg 14.65±0.41 14.70±0.32
末重/kg 28.65±0.51<sup>b</sup> 29.94±0.25<sup>ab</sup>
平均日增重/g 469.03±9.25<sup>b</sup> 508.95±4.10<sup>ab</sup>
平均采食量/g 886.55±12.50<sup>b</sup> 905.41±10.77<sup>b</sup>
料重比 2.04±0.25<sup>b</sup> 1.89±0.15<sup>ab</sup>
腹泻率/% 5.50±0.26<sup>b</sup> 2.56±0.20<sup>ab</sup>
注:数据肩标字母不同表示差异显著(P<0.05)。
由表3可知,试验组生长猪的平均日增重明显高于对照组生长猪的平均日增重,料重比和腹泻率也明显低于对照组生长猪的料重比和腹泻率,说明实施例1制备的固体发酵中药制剂具有较好的促生长效果。
实验例3
本实验例以感染细小病毒及沙门氏菌而引起腹泻拉稀症状的断奶仔猪为研究对象。由感染细小病毒及沙门氏菌而引起腹泻拉稀症状的轻重的分类标准如下:出现淡黄色恶臭的稀粪,食欲不振等症状的为症状轻的仔猪;出现粥状或水样下痢,常混有黏液或血液等症状的为症状重的仔猪。
随机选择160头症状轻的断奶仔猪,分为8组,每组数量20头,标记为a1、b1、c1、d1、a2、b2、c2、d2组。
另外,随机选择160头症状重的断奶仔猪,分为8组,每组数量20头,标记为A1、B1、C1、D1、A2、B2、C2、D2组。
a1、b1、c1、d1组和A1、B1、C1、D1组使用医用针管每天饲喂含有实施例1制备的固体发酵中药制剂(固体发酵中药制剂在水稀释液中的质量分数为10%)的水稀释液,根据仔猪体重,每g仔猪每天的饲喂量均为1mL,饲喂时间均为3d;a2、b2、c2、d2组和A2、B2、C2、D2组使用医用针管每天饲喂含有对比例1制备的固体发酵中药制剂(固体发酵中药制剂在水稀释液中的质量分数为10%)的水稀释液,根据仔猪体重,每g仔猪每天的饲喂量均为1mL,饲喂时间均为3d。实验过程中测定仔猪腹泻拉稀症状的治愈缓解情况,结果如表4所示。
表4实施例1和对比例制备的固体发酵中药制剂对仔猪感染细小病毒及沙门氏菌而引起腹泻拉稀症状的治疗效果
组别 治愈的头数 组别 治愈的头数
a1 16 a2 14
b1 16 b2 14
c1 17 c2 15
d1 17 d2 15
A1 13 A2 11
B1 13 B2 11
C1 14 C2 12
D1 14 D2 12
由表4可知,实施例1制备的固体发酵中药制剂能有效治疗仔猪由于感染细小病毒及沙门氏菌而引起的腹泻拉稀症状,并且对症状轻的仔猪的治愈率显著高于对症状重的仔猪的治愈率;从两组治愈头数可以看出,实施例1制备的固体发酵中药制剂比对比例制备的固体发酵中药制剂具有更好的治疗效果。

Claims (10)

1.一种发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行发酵;所述药性基质主要由中药和营养基质组成,所述中药包括杜仲和杨树花。
2.如权利要求1所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,所述杜仲和杨树花的质量比为1:(1~4)。
3.如权利要求2所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,中药在药性基质中的质量分数为30~60%。
4.如权利要求3所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,所述营养基质主要由玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖和硫酸铵组成;所述土豆汁由包括以下步骤的制备方法得到:将粉碎后的新鲜土豆在沸水中煮1h,然后进行过滤,得到土豆汁;所述土豆汁中水的质量分数为40~60%。
5.如权利要求4所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,所述玉米粉、土豆汁、豆粕、葡萄糖和硫酸铵的质量比为(1~2):(0.5~1):(0.5~1):(0.1~0.2):(0.04~0.06)。
6.如权利要求1-5任一项所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中后,进行发酵的温度为25~27℃;发酵的时间为3~7d。
7.如权利要求1所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,所述将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中是将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中;所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液由包括以下步骤的制备方法制得:将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中进行培养;所述液体发酵培养基由酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、维生素B1、维生素B6和水制成;所述酵母粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸铵、硫酸镁、维生素B1、维生素B6和水的质量比为(2~4):(1~3):(0.1~0.3):(0.02~0.04):(0.1~0.3):(0.02~0.06):(0.02~0.06):(93~97)。
8.如权利要求7所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,将蝙蝠蛾拟青霉接种于液体发酵培养基中后,进行培养的温度为25~27℃;培养的时间为5~8d。
9.如权利要求7或8所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,将蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接种于药性基质中时,蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液接与药性基质的体积比为(30~50):100;所述蝙蝠蛾拟青霉发酵菌液中蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的含量为18~25g/L。
10.如权利要求1-5、7-8任一项所述的发酵中药制剂的制备方法,其特征在于,发酵中药制剂为固体发酵中药制剂;所述发酵中药制剂的制备方法还包括以下步骤:将蝙蝠蛾拟青霉接种于药性基质中进行培养后的产物依次进行烘干处理和粉碎处理。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104940375A (zh) * 2015-06-01 2015-09-30 河南欧普生物科技有限公司 乳酸菌发酵杨树花口服液的生产方法
CN108815201A (zh) * 2018-07-20 2018-11-16 湖北武当动物药业有限责任公司 一种防治仔猪白痢的生物兽药及其制备方法
CN109394823A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 四川长重宝生物工程有限责任公司 一种以复合菌发酵制备改良益母健的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104940375A (zh) * 2015-06-01 2015-09-30 河南欧普生物科技有限公司 乳酸菌发酵杨树花口服液的生产方法
CN108815201A (zh) * 2018-07-20 2018-11-16 湖北武当动物药业有限责任公司 一种防治仔猪白痢的生物兽药及其制备方法
CN109394823A (zh) * 2018-12-13 2019-03-01 四川长重宝生物工程有限责任公司 一种以复合菌发酵制备改良益母健的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
徐丽丽等: "蛹虫草固态发酵杜仲的工艺优化", 《广东农业科学》 *

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