CN114231543A - 水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用，属于功能基因技术领域。以超表达OsARP6基因的植株和野生型植株为研究对象测试植株的耐旱性，与野生型相比，OsARP6超表达突变体通过增加渗透物质积累量提高植株耐旱性。本发明提供的水稻OsARP6基因在提高植株耐旱性方面功能明确，为进一步培育、筛选或构建高产量水稻品种奠定了基础。

Description

水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用

技术领域

本发明属于功能基因技术领域，具体涉及水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用。

背景技术

水稻是全世界最重要的粮食作物，世界上超过一半以上的人口以大米为主食。自然灾害的发生，例如干旱、高温、洪涝以及病虫害等成分影响水稻产量损伤的主要原因。同时优异的农艺性状对水稻产量起到积极的影响。因此，开发具有优异的农艺性状或抗性品种是提高水稻产量的有效途径。

水稻基因研究有利于开发与农艺性状和抗性性状紧密关联的功能基因，用于水稻遗传改良，可以快速、高效且稳定的获得优异的水稻品种。水稻OsARP6基因被证实是一种影响水稻农艺性状的功能基因。例如，公开号CN111848764A的专利记载了水稻OsARP6基因通过控制水稻株高和分蘖数来影响水稻株型，为遗传改良高产量的水稻品种奠定了基础。然而，目前，尚未有关于水稻OsARP6基因对其他性状调控作用的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种水稻OsARP6基因的新用途，具体为水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用。

本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在植物耐旱中的应用。

优选的，所述水稻OsARP6基因通过正调控提高植物的耐旱性。

本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在培育和/或筛选耐旱植物的植物中的应用。

本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在构建耐旱的转基因植物中的应用。

优选的，所述水稻OsARP6基因为以下几项中的一项：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段；

2)在SEQ ID NO:1的基础上经过删除、插入或缺失一个或几个核苷酸形成的与序列SEQ ID NO:1的同源性达到90％以上的DNA片段。

优选的，所述含水稻OsARP6基因的重组载体包括35S启动子。

优选的，所述含水稻OsARP6基因的重组载体的骨架载体为双元载体pCAMBIA1300。

优选的，所述含水稻OsARP6基因的重组载体中，水稻OsARP6基因插入的多克隆位点为XbaI/BglII。

优选的，所述植物包括水稻。

本发明提供的水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在植物耐旱中的应用。将含水稻OsARP6基因的重组载体导入水稻中，构建超表达OsARP6基因的植株，分别以超表达OsARP6基因的植株和野生型植株为研究对象测试植株的耐旱性，与野生型相比，超表达植株叶片中H₂O₂积累量显著增加，并且渗透调节物质含量也显著升高，表明OsARP6超表达突变体通过增加渗透物质积累量提高植株耐旱性。可见，本发明提供的水稻OsARP6基因在提高植株耐旱性功能明确，为进一步培育、筛选或构建高产量水稻品种奠定了基础。

附图说明

图1为本发明提供的水稻OsARP6基因目标片段的扩增结果；

图2为T-载体酶切结果；其中1-1、1-2、1-4鉴定正确，1-3和1-5鉴定错误；

图3为水稻OsARP6基因目标片段和双元载体酶切产物回收电泳图；

图4为重组载体p1300:35S:OsARP6c-GFP的酶解鉴定结果；酶切检测1-1，1-2，1-3均正确；

图5为转基因株系中OsARP6基因的表达水平；

图6为Westernblot检测超表达株系中GFP标签蛋白水平；

图7为OsARP6基因响应非生物胁迫表达水平分析，其中图7A、图7B、图7C：OsARP6基因受PEG、甘露醇和ABA诱导表达模式分析；

图8为OsARP6基因苗期抗旱性结果，其中图8(a)：OsARP6基因超表达植株在20％PEG模拟干旱胁迫处理下的表型；图8(b)：PEG模拟干旱胁迫处理复水后的存活率；图8(c)：NBT染色检测正常条件和PEG处理下，叶片中O₂ ^-积累量；图8(d)、图8(e)、图8(f)：干旱胁迫处理前后H₂O₂、可溶性糖、脯氨酸含量；

图9为OsARP6基因表达模式检测水稻幼苗取样示意图，其中，DL1为新生叶，DL2为半展开叶，DL3为全展开叶，ASA为茎尖生长点；

图10为不同水稻组织中OsARP6基因表达模式，其中：OsARP6基因在根(root)、茎(stem)、鞘(sheath)、茎端生长点(ShootApical Meristem，SAM)、新生叶(Developing Leaf1，DL1)、半展开叶(Developing Leaf2，DL2)以及全展开叶(Developed Leaf3，DL3)中的表达水平。

图11为OsARP6基因亚细胞定位结果；

图12为双元载体pCAMBIA1300的谱图。

具体实施方式

本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在植物耐旱中的应用。

在本发明中，所述水稻OsARP6基因为以下几项中的一项：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段；

2)在SEQ ID NO:1的基础上经过删除、插入或缺失一个或几个核苷酸形成的与序列SEQ ID NO:1的同源性达到90％以上的DNA片段。

所述水稻OsARP6基因序列来源于日本晴材料。所述水稻OsARP6基因的转录本序列如SEQ ID NO:2所示。所述水稻OsARP6基因的CDS如SEQ ID NO:3所示。所述水稻OsARP6基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

在本发明中，所述含水稻OsARP6基因的重组载体优选为超表达重组载体。所述超表达重组载体包括CaMV 35S启动子。所述CaMV 35S启动子通过高效启动水稻OsARP6基因的表达，实现水稻OsARP6基因的超表达。本发明对重组载体的骨架载体的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的植物表达载体即可。在本发明实施例中，所述含水稻OsARP6基因的重组载体以双元载体pCAMBIA1300为骨架载体。改造的pCAMBIA1300的谱图见图12，具体携带由强启动子CaMV35S驱动的hyg和Kan两个筛选标记基因。本发明所涉及的双元载体pCAMBIA1300为现有技术已知的重组载体，具体参见Zhu M.,Hu Y.J.,Tong A.Z.,YanB.W.,Lv Y.P.,Wang S.Y.,Ma W.H.,Cui Z.B.,Wang X.X.2020.LAZY1 Controls TillerAngle and Shoot Gravitropism by Regulating the Expression of AuxinTransporters and Signaling Factors in Rice.Plant and Cell Physiology,61(12):2111-2125.。所述含水稻OsARP6基因的重组载体中，水稻OsARP6基因插入的多克隆位点为XbaI/BglII。

在本发明中，所述植物优选包括禾本植物。在本发明实施例中，以水稻为代表，说明水稻OsARP6基因在提高植物耐旱性的生物学性能，但不能理解为对本发明保护范围的限制。

本发明对所述含水稻OsARP6基因的重组载体的构建方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的重组载体构建方法即可，包括扩增目标片段，采用相同的内切酶组合酶切，回收酶切片段，连接，重组载体酶切鉴定，获得构建成功的重组载体。

在发明实施例中，将上述构建成功的重组载体采用常规方法转化植株，获得超表达水稻OsARP6基因的植株。以超表达水稻OsARP6基因的植株进行耐旱性的实验评估，结果发现，所述水稻OsARP6基因优选通过正调控提高植物的耐旱性。

鉴于水稻OsARP6基因具有提高植物耐旱性的功能，本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在培育和/或筛选耐旱植物的植物中的应用。

在本发明中，所述培育或筛选耐旱植物的方法，以OsARP6基因作为筛选的目标片段，以高表达OsARP6基因的植株进行育种。检测OsARP6基因高表达的引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:5(GGGTTTGTGAAGGACTTGGA)所示的正向引物OsARP6ReF和核苷酸序列如SEQID NO:6(TCGGTGAATCGAGGGAATAG)所示的反向引物OsARP6ReR。

检测时反应体系优选为95℃10s；95℃3s，6030s，7230s，40个循环。检测时反应程序优选为20μL，具体如下：

本发明提供了水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在构建耐旱的转基因植物中的应用。

在本发明中，所述耐旱的转基因植物的构建方法，优选包括以下步骤：

将上述方法构建得到的含水稻OsARP6基因的重组载体转染植物，经抗性筛选和鉴定，得到超表达OsARP6基因的植物。

在本发明中，所述抗性筛选包括潮霉素标记检测。所述潮霉素标记检测为对潮霉素标记基因进行PCR扩增检测。所述PCR扩增时优选采用核苷酸序列如SEQ ID NO:7(ATTTGTGTACGCCCGACAGT)所示的正向引物HygF2和核苷酸序列如SEQ ID NO:8(GATGTAGGAGGGCGTGGATA)所示的反向引物HygR2。检测时反应体系优选如下：

DNA	1μl
		10×PCR Buffer	1μl
dNTPmix(2.5mM)	0.75μl
		正向引物(10μM)	0.5μl
反向引物(10μM)	0.5μl
		rTaq	0.2μl
ddH<sub>2</sub>O	6.05μl

检测时反应程序如下：

所述鉴定优选包括OsARP6基因超表达检测。OsARP6基因超表达检测的方法同上述检测OsARP6基因高表达的方法一致，在此不做赘述。经验证，超表达OsARP6基因的植物较野生型相比，抗旱性强。

下面结合实施例对本发明提供的水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

试剂、仪器来源说明

1质粒和菌株

克隆方法中所用T载体为pMD20-T(购自TaKaRa公司)，双元载体pCAMBIA1300改造，分别携带由强启动子CaMV35S驱动的hyg和Kan两个筛选标记基因。大肠杆菌菌株为Top10(购自天根生化科技(北京)有限公司)，农杆菌菌株为EHA105。

2主要试剂及仪器

高保真酶FastPfu DNA Polymerase购自北京全式金公司；凝胶回收试剂盒购自Axygen；限制性内切酶购自TaKaRa公司，DNA Market购于天根生化科技(北京)有限公司；大肠杆菌Top10感受态细胞购自天根生化科技(北京)有限公司；T4 DNA聚合酶购自TaKaRa公司；

RNA浓度测定采用Thermo公司的NanoDrop8000；实时荧光定量PCR采用ABI公司的7500；摇床采用NBS公司的Innova40、水浴锅采用北京五洲东方科技发展有限公司的YIQI010、培养箱采用上海博泰实验设备有限公司的LRHS-150B、凝胶成像采用Bio-Rad公司的170-8270，PCR仪采用Bio-Rad公司的186-1096

3引物

所用的引物主要是利用引物设计软件Primer 5.0设计，并按需要添加接头，北京六合华大基因科技股份有限公司合成。

实施例1

一种超表达水稻OsARP6基因的重组载体的构建方法

1.目的片段的扩增和回收

以水稻品种日本晴叶片为材料，利用TaKaRa公司的RNAiso Plus(货号D9108A)抽提水稻总RNA，并利用Fermentas公司(货号K1622)反转录试剂盒将所得RNA反转录为cDNA。具体操作参照说明。以cDNA为模板，NCBI中水稻碱基序列为准，通过常规PCR，用全式金高保真酶FastPfu扩增基因CDS，命名为OsARP6c。

1.1目的片段扩增

获得目的基因序列，选择合适基因的载体pCAMBIA1300，对目的基因的序列进行酶切位点的分析，设计引物，选择引物两端的酶切位点，合成引物OsARP6cF/OsARP6cR(TCTAGAATGACGGGTGGATCAGGTG，SEQ ID NO：9；AGATCTGTGAAAGAATCTACGACGGCAC，SEQ IDNO：10)。用水将引物稀释成一定浓度的溶液，50μM进行PCR扩增，具体反应程序如下：

保存在4～12℃中。

PCR反应多采用50μl体系，按照产品使用说明书进行操作，具体如下：

DNA	5.0μL
		5×fastpfuBuffer	10μL
dNTP	4.0μL
		P1(10μM)	1.0μL
P2(10μM)	1.0μL
		FastPfu	0.5μL
ddH<sub>2</sub>O	28.5μL

1.2电泳检测及回收目的片段

将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测片段大小是否正确。配制琼脂糖凝胶1.5％，加marker点样，跑胶，照胶分析图像。

胶回收：琼脂糖与缓冲液一比一制胶，经过切胶回收目的产物，也有目的产物纯化的功能；

将照胶后的胶块放在紫外灯光下照射，带防紫外线的黄色眼镜及手套，尽量切除其余胶片，放入干净离心管中。

对切下来的胶片进行称重，采用差量法进行，用万分之一天平，计算出胶片重量后按照0.1g:100μL溶解液的比例像离心管中加入此3倍的PN溶解液，50℃水浴锅溶解10min。

将吸附柱放入收集管中，加入500μl平衡液，BL于吸附柱内，12krpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中离心温室放置2min 12krpm离心1min；

重复上述操作；

离心除去漂洗液，静止5min彻底晾干；

将装有DNA(30μl)离心管放入-20℃冰箱中储存，标记。

检测胶：琼脂糖与缓冲液一比二制胶，为了检测目的条带与预期是否相符。

2T-载体的连接

2.1加A反应

配制反应体系10μL/Rxn

回收DNA	7.5μL
		10×Buffer	1.0μL
dNTP	1.0μL
		rTaq	0.5μL

反应条件:70℃30min；4℃10min。

2.2连T载体

在0.5ml离心管中配制下列DNA溶液10μL进行连接，体系如下，16℃120min。

PDM 18-T载体	1.0μL
		加A后的DNA	4.0μL
Solution1	5.0μL

2.3转化大肠杆菌感受态，涂布相应抗生素

反应结束前6min，从-80℃冰箱中取出大肠杆菌感受态细胞，在超净工作台中将上述链接液全10μL加入到100μL的感受态细胞中，冰上放置30min。冰上反应结束后，42℃水浴加热90s，再冰置5min。预热2XYT无抗培养基，吸取900μL至感受态细胞中，恢复培养，37℃，150rpm，1h，恢复培养后5000rm离心5min，接种至Amp⁺培养基上过夜培养。

2.4T-载体中目的基因的检测和鉴定

第二天早晨，利用菌落PCR的方法，筛选抗性培养基上的大肠杆菌的阳性菌落；傍晚，挑取菌落PCR阳性的菌落接种在相应抗性的培养基中，37℃，250rmp，摇陪过夜；第三天早晨，提取质粒，经过HindIII/XbaI进行酶切验证，在37℃下反应2h，得到酶切产物进行电泳检测。；将酶切鉴定正确的克隆的菌液或质粒送到测序公司测序；对测序公司的测序结果进行分析和比对，若T-载体中目的片段的序列和参考序列完全一致，且外加的酶切位点也正确，说明T-载体的连接完成。

3.目的片段和双元载体的连接和遗传转化

将连在T-载体中的目的基因片段用选定的酶进行酶切，产物跑胶回收，即为目的片段；将双元载体也用相应酶切，酶切产物跑胶回收即为双元载体。将上述两步的片段建立连接反应；即将目的片段连入植物转基因载体；用热击法将连接反应转化大肠杆菌的感受态细胞；恢复培养后，将菌液涂到相应的抗性培养基上，在37℃培养箱，倒置培养过夜。

4.双元载体连接转化的筛选鉴定

第二天早晨，利用菌落PCR方法，筛选抗性培养基上的大肠杆菌的阳性菌落；傍晚，挑取菌落PCR阳性的菌落接种在相应抗性的培养基中，37℃，250rmp，摇陪过夜；第三天早晨，提取质粒，酶切鉴定；酶切鉴定正确的克隆即为转基因载体。

5.超表达植株的构建

35S:OsARP6-GFP的超表达载体采用农杆菌介导转化野生型水稻SN9816，采用qRT-PCR检测转基因后代株系中OsARP6的基因表达水平，利用Western Blot技术鉴定超表达株系中GFP标签蛋白水平。

结果与分析

本实验主要目的在于成功完成p1300:35S:OsARP6c-GFP的构建，转化农杆菌EHA105，用于转化水稻，作为该基因的过表达突变体，进一步研究OsARP6的基因功能。

1.目的基因的扩增

OsARP6c的扩增，电泳结果如图1所示。显示均已获得相应片段，OsARP6c 1290bp。

2.T-载体酶切

酶切检测如图2所示，1-1，1-2，1-4鉴定正确，1-3，1-5鉴定错误。

3.目的片段和双元载体的酶切验证回收

如图3所示，目的片段经XbaI/BglII后得到预期目的片段1290bp，说明目标片段准确。双元载体经XbaI/BamHI酶切后，得到预期的片段化载体。说明双元载体片段准确。

4.酶切鉴定

利用胶回收方法将3.3所得正确片段回收，将回收回来的片段和载体建立连接反应，转化大肠杆菌感受态细胞，构建p1300:35S:OsARP6c-GFP双元载体。如图4所示，酶切检测用酶HindIII/XbaI，结果为850bp、1008bp检测正确的质粒即为所要构建的载体p1300:35S:OsARP6c-GFP，选p1300:35S:OsARP6c-GFP-1转化农杆菌EHA105，用于转化水稻，作为该基因的过表达突变体。

5.超表达水平鉴定

35S:OsARP6-GFP的超表达载体经农杆菌介导转化野生型水稻SN9816，获得了三株OsARP6基因超表达株系D1(OE-D1)、D2(OE-D2)和D4(OE-D4)。同时，利用Western Blot技术鉴定超表达株系中GFP标签蛋白，D1、D2和D4植株中均表达GFP蛋白，而野生型植株未表达GFP蛋白。

实施例2

水稻OsARP6基因表达模式

利用qRT-PCR方法检测水稻幼苗中OsARP6基因在不同组织和渗透胁迫处理下的表达模式。

OsARP6基因表达水平检测所用引物：

OsARP6ReF，GGGTTTGTGAAGGACTTGGA(SEQ ID NO：5)；

OsARP6ReR，TCGGTGAATCGAGGGAATAG(SEQ ID NO：6)；

内参基因的扩增引物为：

RAct1ReF：CTATGTTCCCTGGCATTGCT(SEQ ID NO：11)；

RAct1ReR：GGCGATAACAGCTCCTCTTG(SEQ ID NO：12)。

qPCR 20μl反应体系如下：

cDNA(1:5稀释)	2μl
		SYBR	10μl
ROX	0.4μl
		PrimerMix(1.25μM)	1.6μl
ddH<sub>2</sub>O	6μl

qPCR反应条件如下：95℃变性10s；95℃变性3s，60℃退火30min，72℃延伸34s，扩增40个循环。

结果显示，OsARP6基因在根、茎、叶、叶鞘、生长点、穗中呈组成型表达，在叶片中表达量最高(图7A)。分别用30％PEG、300mM甘露醇和100μMABA处理培养30天的野生型SN9816幼苗，在处理0h、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h时取样检测OsARP6基因的表达量，发现该基因受渗透胁迫和外源激素ABA诱导表达，推测该基因可能参与水稻干旱胁迫响应。

实施例3

OsARP6基因正调控水稻苗期抗旱性

以SN9816、OsARP6-OE(OsARP6超表达材料)为材料，营养液培养30天后拍照，并进行PEG模拟干旱处理。20％PEG处理12h后拍照，继续处理至SN9816叶片完全卷曲，复水后拍照并调查存活率。

结果显示，85％～90％的OsARP6-OE幼苗能恢复(图8(a)和图8(b))。利用NBT染色法检测胁迫下叶片中O₂ ^-积累量，结果表明，超表达植株叶片中O₂ ^-积累量显著增加(图8(c))。正常条件和20％PEG处理12h后，取幼苗叶片100mg，测定脯氨酸、可溶性糖和H₂O₂含量，发现胁迫诱导下，渗透调节物质含量在OsARP6-OE株系均显著升高(图8(d)、图8(e)、图8(f))。因此，在干旱胁迫下，OsARP6超表达突变体通过增加渗透物质积累量提高植株耐旱性。

实施例4

OsARP6基因的时空表达模式

本实施例检测了OsARP6基因的表达模式

野生型水稻品种沈农9816在水稻光照培养箱培养，培养条件白天14h，光照10000lux，温度26℃；晚上8小时，温度24℃。培养30天后，根(root)、茎(stem)、鞘(sheath)、茎端生长点(ShootApical Meristem,SAM)、新生叶(Developing Leaf 1，DL1)、半展开叶(Developing Leaf2，DL2)以及全展开叶(Developed Leaf3，DL3)，分别取样0.1g，迅速放入液氮备用。取样位置如图9所标。同时，在相同条件下培养幼苗至抽穗，取穗部样品。

qPCR结果显示，OsARP6基因呈组成型表达，营养生长期，在叶片中表达量较高，在根中表达量最低(见图10)。

实施例6

将实施例1构建的重组载体转入水稻原生质体。利用激光共聚焦显微镜在GFP通道、DAPI通道以及明场下观察。

结果见图11。结果显示，OsARP6基因定位在细胞核中，可能与该基因所包含的结构域有关。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 沈阳农业大学

<120> 水稻OsARP6基因在植物耐旱中的应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 4325

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

aaacgctact acccctccgc cacagcgtcc acacccgcgc cgccgccgcc ctcaccctcg 60

ccgccgcgca tcccgcggtc ccaccgtcgc cgattccacc gctgccacgg acaaccccgc 120

cgcccctttc cttcctcgcc gtgggagcgc cccccccctc caggttggct agcagctagc 180

tccgccggcc gcccttcccc gatgggggca gcggcgtagg cgccgccatc agccgccgta 240

cgtatgtgag cggcgcctgc gcacgcctcc agctggtccg cgcgaggtaa ctgtgtgggg 300

taaaattcct ctctagtctt cgctttcgcc atatcgcatt ttcgagaata cctaatgccg 360

tagtaagcca tacgggggtc gttttattgc ttttatgctt aagtcacaca cttcgagcaa 420

gtctattgaa tctatactcg ggtagaagta atgcgcgctc atctccaacg cctattttgc 480

aaaagaagaa gaagaagcag aagagagaaa cagtggcttt tgtactactc ttgcacatag 540

aaccccttct cgacttgcta tcaacagttg gtttgaaact tagcatttct ttgttatgcg 600

cagttttgct gaaccagatg ccgatgcagt gacgattcgt tggccgagga tcgcgttctt 660

ataggcccga tttgcaaagg tactactgca gtggcggagc ttgagagaga ttctagatgg 720

ggccagctat tatagagtgg aaatgttggt aatggcagaa gtagaatttg tagaagggct 780

attcatattg taaaataatt tccaagcatg tttttgttaa gaaaaaatat atgttatacc 840

taagtatagc tgttaaacag gtggaaaagg atcactcaag ttataaaaga caacatatca 900

aagttattgt aaattaacag gttttaagag agctatttta ttaagataaa aatgtttgtc 960

atccatagga ggaaaatgat ttagtaagca attaaactga agaaaaagaa tggacttctc 1020

aggatttgaa caccaaactt ccaagaaagc atctgccctc ttcacttgct aatcaattga 1080

gcagaaaata aattttctta ctagatactt gttaagtata tatgtgtttg ctgccaaagc 1140

tgagggggca acacccaggt tggcctccat gaagctccac ctctgtacta ttagctgttg 1200

ttggaactat attggtcgca tcaagcttcc gccaatgttt gcagggttaa aatacttggt 1260

ggtctgtcat gctgtatgtt gatgttatgc attgcttttg gtacaaccga gttccttttt 1320

cctgactggt tccatggttg gttgagatat ggatgctatg tattgttctt taatgttaca 1380

ctttagcaaa attttcccag attacgtaag caactactcc atccatttta tattataagt 1440

cgttttgatt tttttcctag tcaaactttt tttaagttgg accaagttta tagaaaaaca 1500

taatagtatt ttaaacacat tatattatca aaatatattc aatgttagat ttaatgaaac 1560

taatttggtg ttttagatgt tgctaatttt ttctaactta taatatgaaa cggagggagt 1620

attgattaca aacatgatgg ctacttcatt tgattttatt tagcattagc tgtttcaatc 1680

ttggcaattt accatttcca tctgttgtgt ggttttattt atgtaggagt gcttgtaaat 1740

ccaatcatac catttcgatt ttcatttgac caaggatagg caagaatagg aggaaaaagg 1800

agagtggcat ataatgacgg gtggatcagg tgttgtggtg ctagacaatg ggggtggtct 1860

tctgaaggct ggatttggtg gggacatgaa tccgactgct gttgtcccca actgtatggc 1920

caagccccct ggttccaaga aatggctagt tgctgaccag ctgcaggcac aagatgttga 1980

tgttactggc atgacattga ggcgtcctat tgatcgtggc tatctcatca atcaagaagt 2040

gcaacgggag gtgtgggagc gggttatacg caacctactg caggtggatc ctaacaactc 2100

atcgttgcta ctggtggaac cacagttcaa ccctccagca ctgcagcatg caaccgatga 2160

gcttgttttt gaggagcttg gtttcaaatc tctttgtgtt gcagatgccc cttcccttgt 2220

tcacctttat gaggctagcc gccagccatc gctgtttcga gctcaatgta gccttgttgt 2280

tgactgtggc ttctctttca ctcatgcatc tcccgtgctt caaaacttta cactgaatta 2340

tgctgtgcgg cgcatggacc ttggtggaaa ggccctcaca aactatctca aagagctcat 2400

ttcatatcgc tcccttaatg tcatggatga aacactcctc attgatgatg caaaggaaaa 2460

actatgcttt gtatcccttg atgtccctgg tgatcttcgt cttgccaggt ctgttgccat 2520

tctcatccca ccacatatgg atacatgctt gcctattgtt tagggttcaa atttaacctg 2580

atttcaagtt tatcttcaag gtcaaatggt ccttcacaca gaaagtcctg ctaagaatgt 2640

tttgcttgtg taaccagctt aatgagatgt agatagctta gtatcttatc tttggaactt 2700

agtgctgtag ttgacaaagg tggctttgtg tttcatatgt atgtatgaag ggttggtatt 2760

tcctttatta gaagctagat tttgaaactt tgaattgcac ttctgggaca gcacaatcac 2820

tgattgagat ggtaatagtt tttcattaaa taattagttg gtccacgtgt tgaatacagt 2880

tgaggttttt atccatctaa gtttcaattc taaatagttt ttgtagtgtc tttcctagta 2940

tctaagttac aaacatgcta tgcaattatt tgcaggttat catctaatga caaccctttt 3000

agatgctcct acattctccc tgatggtata acatacaaga aagggtttgt gaaggacttg 3060

gatgaggcat gcagatacag ctctctgcct gctaatggag aatcggttag aaaggatagt 3120

tctgacagcg ataggagcaa gtttgaggat aagaaaaagc ctgaacttag tcaaaatgta 3180

acatctcgag ctataattac atgcttaata ttatttggca tcatctaact gggttgttcc 3240

tattcaggaa tttgtgttga ccaatgagag gttcctagtg ccagagatgc ttttccatcc 3300

aattgatctg ggtcagcaga tctactaaaa tgtcatgtgt actttgagct gttcattgtt 3360

gctctgttaa tctcactact gtgcatgttc ataggtatga atcaagctgg gcttgctgag 3420

tgcatagttc gtgctataca agcttgccac ccacatcttc aacctgtgct ttttgagagg 3480

tatcatttat ttattgtctg aattctgaac ctatcttgac atttgaatat acatccatgt 3540

tactatgtgt tggtttgttt ccactctcca gaattatcct gacaggagga agcacgctat 3600

tccctcgatt caccgaaaga ttgtaagttg atctttttat tatttttgta catcagaaat 3660

accatctcaa ggggtgtggg atttattgtt tgctattcac agggaaaagg aacttcgtcc 3720

tcttgtgcct gatgactacc aagtaaagat aattgctcag gaggagtatg taccactcta 3780

tctcttttgc acacgtgcgc tgttggacat gtatagtcac caacttacca ttaacatcct 3840

gttgctttgt ctagcccaat tcttggtgcc tggagaggtg gatctctttt ggcgcacagg 3900

cctgattttg aatcaatgtg cattacaaaa tcagagtatg aagagatggg ttcaatgcgg 3960

tgccgtcgta gattctttca ctgaaagttg tgtgccagca gctcagtaga agtgcaattt 4020

gtaagtatga ttcagcacta tctagttcag gtcttgaaga aatactcatt aattaggcaa 4080

acgagaagtt tggttctaga aggtaatgat gcacaatttt aacacgtggt cattttttta 4140

cataggaatt agaagctatt actccatgta tctggtcccc cttattactg gcaaccaatt 4200

ctttcagcct tcctaccagc taaatatgca gatatagtcc ttaccaggga aaacctttgt 4260

ggtctaacac cctcggaaca cagttgctct gagataaatg gtgaattttg cttttctgct 4320

cggtg 4325

<210> 2

<211> 2116

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aaacgctact acccctccgc cacagcgtcc acacccgcgc cgccgccgcc ctcaccctcg 60

ccgccgcgca tcccgcggtc ccaccgtcgc cgattccacc gctgccacgg acaaccccgc 120

cgcccctttc cttcctcgcc gtgggagcgc cccccccctc caggttggct agcagctagc 180

tccgccggcc gcccttcccc gatgggggca gcggcgtagg cgccgccatc agccgccgta 240

cgtatgtgag cggcgcctgc gcacgcctcc agctggtccg cgcgagaaga agaagaagca 300

gaagagagaa acagtggctt ttttttgctg aaccagatgc cgatgcagtg acgattcgtt 360

ggccgaggat cgcgttctta taggcccgat ttgcaaagga gtgcttgtaa atccaatcat 420

accatttcga ttttcatttg accaaggata ggcaagaata ggaggaaaaa ggagagtggc 480

atataatgac gggtggatca ggtgttgtgg tgctagacaa tgggggtggt cttctgaagg 540

ctggatttgg tggggacatg aatccgactg ctgttgtccc caactgtatg gccaagcccc 600

ctggttccaa gaaatggcta gttgctgacc agctgcaggc acaagatgtt gatgttactg 660

gcatgacatt gaggcgtcct attgatcgtg gctatctcat caatcaagaa gtgcaacggg 720

aggtgtggga gcgggttata cgcaacctac tgcaggtgga tcctaacaac tcatcgttgc 780

tactggtgga accacagttc aaccctccag cactgcagca tgcaaccgat gagcttgttt 840

ttgaggagct tggtttcaaa tctctttgtg ttgcagatgc cccttccctt gttcaccttt 900

atgaggctag ccgccagcca tcgctgtttc gagctcaatg tagccttgtt gttgactgtg 960

gcttctcttt cactcatgca tctcccgtgc ttcaaaactt tacactgaat tatgctgtgc 1020

ggcgcatgga ccttggtgga aaggccctca caaactatct caaagagctc atttcatatc 1080

gctcccttaa tgtcatggat gaaacactcc tcattgatga tgcaaaggaa aaactatgct 1140

ttgtatccct tgatgtccct ggtgatcttc gtcttgccag gttatcatct aatgacaacc 1200

cttttagatg ctcctacatt ctccctgatg gtataacata caagaaaggg tttgtgaagg 1260

acttggatga ggcatgcaga tacagctctc tgcctgctaa tggagaatcg gttagaaagg 1320

atagttctga cagcgatagg agcaagtttg aggataagaa aaagcctgaa cttagtcaaa 1380

atgaatttgt gttgaccaat gagaggttcc tagtgccaga gatgcttttc catccaattg 1440

atctgggtat gaatcaagct gggcttgctg agtgcatagt tcgtgctata caagcttgcc 1500

acccacatct tcaacctgtg ctttttgaga gaattatcct gacaggagga agcacgctat 1560

tccctcgatt caccgaaaga ttggaaaagg aacttcgtcc tcttgtgcct gatgactacc 1620

aagtaaagat aattgctcag gaggacccaa ttcttggtgc ctggagaggt ggatctcttt 1680

tggcgcacag gcctgatttt gaatcaatgt gcattacaaa atcagagtat gaagagatgg 1740

gttcaatgcg gtgccgtcgt agattctttc actgaaagtt gtgtgccagc agctcagtag 1800

aagtgcaatt tgtaagtatg attcagcact atctagttca ggtcttgaag aaatactcat 1860

taattaggca aacgagaagt ttggttctag aaggtaatga tgcacaattt taacacgtgg 1920

tcattttttt acataggaat tagaagctat tactccatgt atctggtccc ccttattact 1980

ggcaaccaat tctttcagcc ttcctaccag ctaaatatgc agatatagtc cttaccaggg 2040

aaaacctttg tggtctaaca ccctcggaac acagttgctc tgagataaat ggtgaatttt 2100

gcttttctgc tcggtg 2116

<210> 3

<211> 1290

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgacgggtg gatcaggtgt tgtggtgcta gacaatgggg gtggtcttct gaaggctgga 60

tttggtgggg acatgaatcc gactgctgtt gtccccaact gtatggccaa gccccctggt 120

tccaagaaat ggctagttgc tgaccagctg caggcacaag atgttgatgt tactggcatg 180

acattgaggc gtcctattga tcgtggctat ctcatcaatc aagaagtgca acgggaggtg 240

tgggagcggg ttatacgcaa cctactgcag gtggatccta acaactcatc gttgctactg 300

gtggaaccac agttcaaccc tccagcactg cagcatgcaa ccgatgagct tgtttttgag 360

gagcttggtt tcaaatctct ttgtgttgca gatgcccctt cccttgttca cctttatgag 420

gctagccgcc agccatcgct gtttcgagct caatgtagcc ttgttgttga ctgtggcttc 480

tctttcactc atgcatctcc cgtgcttcaa aactttacac tgaattatgc tgtgcggcgc 540

atggaccttg gtggaaaggc cctcacaaac tatctcaaag agctcatttc atatcgctcc 600

cttaatgtca tggatgaaac actcctcatt gatgatgcaa aggaaaaact atgctttgta 660

tcccttgatg tccctggtga tcttcgtctt gccaggttat catctaatga caaccctttt 720

agatgctcct acattctccc tgatggtata acatacaaga aagggtttgt gaaggacttg 780

gatgaggcat gcagatacag ctctctgcct gctaatggag aatcggttag aaaggatagt 840

tctgacagcg ataggagcaa gtttgaggat aagaaaaagc ctgaacttag tcaaaatgaa 900

tttgtgttga ccaatgagag gttcctagtg ccagagatgc ttttccatcc aattgatctg 960

ggtatgaatc aagctgggct tgctgagtgc atagttcgtg ctatacaagc ttgccaccca 1020

catcttcaac ctgtgctttt tgagagaatt atcctgacag gaggaagcac gctattccct 1080

cgattcaccg aaagattgga aaaggaactt cgtcctcttg tgcctgatga ctaccaagta 1140

aagataattg ctcaggagga cccaattctt ggtgcctgga gaggtggatc tcttttggcg 1200

cacaggcctg attttgaatc aatgtgcatt acaaaatcag agtatgaaga gatgggttca 1260

atgcggtgcc gtcgtagatt ctttcactga 1290

<210> 4

<211> 429

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Met Thr Gly Gly Ser Gly Val Val Val Leu Asp Asn Gly Gly Gly Leu

1 5 10 15

Leu Lys Ala Gly Phe Gly Gly Asp Met Asn Pro Thr Ala Val Val Pro

20 25 30

Asn Cys Met Ala Lys Pro Pro Gly Ser Lys Lys Trp Leu Val Ala Asp

35 40 45

Gln Leu Gln Ala Gln Asp Val Asp Val Thr Gly Met Thr Leu Arg Arg

50 55 60

Pro Ile Asp Arg Gly Tyr Leu Ile Asn Gln Glu Val Gln Arg Glu Val

65 70 75 80

Trp Glu Arg Val Ile Arg Asn Leu Leu Gln Val Asp Pro Asn Asn Ser

85 90 95

Ser Leu Leu Leu Val Glu Pro Gln Phe Asn Pro Pro Ala Leu Gln His

100 105 110

Ala Thr Asp Glu Leu Val Phe Glu Glu Leu Gly Phe Lys Ser Leu Cys

115 120 125

Val Ala Asp Ala Pro Ser Leu Val His Leu Tyr Glu Ala Ser Arg Gln

130 135 140

Pro Ser Leu Phe Arg Ala Gln Cys Ser Leu Val Val Asp Cys Gly Phe

145 150 155 160

Ser Phe Thr His Ala Ser Pro Val Leu Gln Asn Phe Thr Leu Asn Tyr

165 170 175

Ala Val Arg Arg Met Asp Leu Gly Gly Lys Ala Leu Thr Asn Tyr Leu

180 185 190

Lys Glu Leu Ile Ser Tyr Arg Ser Leu Asn Val Met Asp Glu Thr Leu

195 200 205

Leu Ile Asp Asp Ala Lys Glu Lys Leu Cys Phe Val Ser Leu Asp Val

210 215 220

Pro Gly Asp Leu Arg Leu Ala Arg Leu Ser Ser Asn Asp Asn Pro Phe

225 230 235 240

Arg Cys Ser Tyr Ile Leu Pro Asp Gly Ile Thr Tyr Lys Lys Gly Phe

245 250 255

Val Lys Asp Leu Asp Glu Ala Cys Arg Tyr Ser Ser Leu Pro Ala Asn

260 265 270

Gly Glu Ser Val Arg Lys Asp Ser Ser Asp Ser Asp Arg Ser Lys Phe

275 280 285

Glu Asp Lys Lys Lys Pro Glu Leu Ser Gln Asn Glu Phe Val Leu Thr

290 295 300

Asn Glu Arg Phe Leu Val Pro Glu Met Leu Phe His Pro Ile Asp Leu

305 310 315 320

Gly Met Asn Gln Ala Gly Leu Ala Glu Cys Ile Val Arg Ala Ile Gln

325 330 335

Ala Cys His Pro His Leu Gln Pro Val Leu Phe Glu Arg Ile Ile Leu

340 345 350

Thr Gly Gly Ser Thr Leu Phe Pro Arg Phe Thr Glu Arg Leu Glu Lys

355 360 365

Glu Leu Arg Pro Leu Val Pro Asp Asp Tyr Gln Val Lys Ile Ile Ala

370 375 380

Gln Glu Asp Pro Ile Leu Gly Ala Trp Arg Gly Gly Ser Leu Leu Ala

385 390 395 400

His Arg Pro Asp Phe Glu Ser Met Cys Ile Thr Lys Ser Glu Tyr Glu

405 410 415

Glu Met Gly Ser Met Arg Cys Arg Arg Arg Phe Phe His

420 425

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gggtttgtga aggacttgga 20

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tcggtgaatc gagggaatag 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

atttgtgtac gcccgacagt 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gatgtaggag ggcgtggata 20

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tctagaatga cgggtggatc aggtg 25

<210> 10

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

agatctgtga aagaatctac gacggcac 28

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ctatgttccc tggcattgct 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ggcgataaca gctcctcttg 20

Claims (9)

1.水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在植物耐旱中的应用。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述水稻OsARP6基因通过正调控提高植物的耐旱性。

3.水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在培育和/或筛选耐旱植物的植物中的应用。

4.水稻OsARP6基因或含水稻OsARP6基因的重组载体在构建耐旱的转基因植物中的应用。

5.根据权利要求1～4任意一项所述应用，其特征在于，所述水稻OsARP6基因为以下几项中的一项：

1)核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段；

2)在SEQ ID NO:1的基础上经过删除、插入或缺失一个或几个核苷酸形成的与序列SEQID NO:1的同源性达到90％以上的DNA片段。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述含水稻OsARP6基因的重组载体包括35S启动子。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述含水稻OsARP6基因的重组载体的骨架载体为双元载体pCAMBIA1300。

8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述含水稻OsARP6基因的重组载体中水稻OsARP6基因插入的多克隆位点为XbaI/BglII。

9.根据权利要求1～4和6～8任意一项所述应用，其特征在于，所述植物包括水稻。

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