CN114222558A

CN114222558A - 抑制par2激活的方法以及用于该方法的组合物

Info

Publication number: CN114222558A
Application number: CN202080047257.6A
Authority: CN
Inventors: 箱崎智洋; 方滨; L·T·罗琳二世
Original assignee: Procter and Gamble Co
Current assignee: Procter and Gamble Co
Priority date: 2019-06-28
Filing date: 2020-06-25
Publication date: 2022-03-22
Also published as: KR20220004119A; US11786451B2; US20230404892A1; EP3989922A1; US20200405614A1; JP2022536333A; WO2020264568A1

Abstract

本发明提供了用于改善皮肤外观的方法和组合物。所述方法和组合物尤其适于通过利用水百合提取物和维生素B3化合物的协同组合来抑制皮肤中PAR2的激活。所述方法涉及通过在处理期间将包含有效量的水百合提取物和维生素B3化合物的组合的护肤组合物施用于目标皮肤部分来处理色素沉着过度的皮肤。

Description

抑制PAR2激活的方法以及用于该方法的组合物

技术领域

本发明整体涉及抑制皮肤中par-2激活的组合物和方法。更具体地讲，本发明涉及利用水百合提取物和维生素B₃化合物的组合协同抑制par-2激活的组合物和方法。

背景技术

黑素是皮肤色素沉着中的基本化合物。黑素由黑素细胞内一系列复杂的生化反应产生，所述生化反应在基础水平上涉及酪氨酸酶和作为底物的L-酪氨酸。酪氨酸酶催化L-酪氨酸转化成DOPA(L-3,4-二羟基苯丙氨酸)以及DOPA转化成多巴醌。多巴醌经历进一步转化以形成黑素，其在被称为黑素体的细胞器中聚集。然后黑素体沿着被称为枝状体的黑素细胞的细长丝转移到角质细胞。

存在大约1500种基因产物，它们表达于黑素细胞中，其中600种是在任何给定时间表达的，并且其中100种据信是黑素体独有的。此外，存在许多调控元件，它们涉及信号传导、黑素体在黑素细胞内的转运、以及黑素体向角质细胞的转移。黑素产生周期中的一个机制是黑素体通过吞噬作用从黑素细胞转移到角质细胞。研究已发现，在角质细胞上表达的蛋白酶激活的受体-2基因(PAR2)涉及黑素体转移并因此可调节色素沉着。参见Seiberg,M.等人，The Protease-Activated Receptor 2Regulates Pigmentation viaKeratinocyte-Melanocyte Interactions,Experimental Cell Research 254,25-32(2000)。用胰蛋白酶(或胰蛋白酶样蛋白酶)或蛋白酶激活的受体-2激活肽(SLIGRL)激活PAR2诱导色素沉着，这在一些情况下可表现为色素沉着过度的斑点或不均匀的肤色。因此，据信抑制胰蛋白酶激活PAR2的化合物破坏或减少角质细胞对黑素细胞的吞噬作用。抑制PAR2激活的化合物可有助于调节色素沉着过度和黑素过度产生。

与黑素过度产生相关联的状况被称为“色素沉着过度”，并且其特征在于形成通常在脸颊、前额上，并且有时在上唇和颈部上对称分布的清晰分界的斑污褐色斑点。市售用于改善色素沉着过度皮肤的外观的活性成分是已知的。例如，使用N-酰基氨基酸化合物(例如，N-酰基苯丙氨酸和N-酰基酪氨酸)和维生素B₃化合物已显示出有益于体外黑素产生的调节。参见Millikin,C.L.等人(2008年2月)。然而，持续需要有效调节色素沉着过度的新型活性物质。

因此，期望提供抑制皮肤中PAR2激活以处理色素沉着过度的皮肤状况的改善方法。

发明内容

一种处理色素沉着过度的皮肤的方法，该方法包括：a)鉴定人身上期望处理的目标皮肤部分；以及在处理期间将包含有效量的水百合提取物和维生素B3化合物的组合物施用于所述目标皮肤部分，其中所述水百合提取物和维生素B3化合物以1:4至5:1的水百合提取物与烟酰胺的体积/重量比存在。

具体实施方式

长期存在对改善色素沉着过度的皮肤外观和/或抑制或甚至预防皮肤色素沉着过度的美容护肤活性物质的需要。已知维生素B₃化合物诸如烟酰胺通过抑制黑素从黑素细胞向角质细胞的转移来用于处理色素沉着过度状况。已知水百合提取物(INCI:白睡莲(Nymphaea Alba)的花提取物)用于处理受刺激的皮肤并促进伤口愈合。然而，水百合提取物未知用于处理色素沉着过度的皮肤或用于抑制PAR2激活。现已发现，水百合提取物抑制PAR2激活，并且令人惊讶的是，当水百合提取物和维生素B3化合物以一定比率混合时，它们协同抑制PAR2激活。

说明书中对“实施方案”或类似方法的引用意指与该实施方案结合描述的具体材料、特征、结构、和/或特性包括在至少一个实施方案、任选多个实施方案中，但这并不意味所有实施方案包括所描述的材料、特征、结构、和/或特性。此外，材料、特征、结构、和/或特性可以任何合适的方式结合在不同的实施方案中，并且材料、特征、结构、和/或特性可以省略或替换所描述的。因此，除非另外说明或声明不相容性，否则尽管未在组合中明确地例示，本文所述的实施方案和方面可包括其他实施方案和/或方面的元件或组件或者可与其他实施方案和/或方面的元件或组件组合。

在所有实施方案中，除非另外特别说明，否则所有成分百分比均基于化妆品组合物的重量计。除非另外特别说明，否则所有比率均为重量比。所有范围是包括端值在内的且可组合的。有效数字的数表示既不表达对所示量的限制，也不表达对测量精确性的限制。所有数值应理解为被词“约”修饰，除非另外特别指明。除非另外指明，否则所有测量均被理解为是在大约25℃和环境条件下进行的，其中“环境条件”是指在约1个大气压和约50％的相对湿度下的条件。所有数值范围是包括端值在内的更窄的范围；所描述的范围上限和下限是可互换的，以进一步形成没有明确描述的范围。

本发明的组合物可包含本文所述的基本组分以及任选的成分，基本上由其组成或由其组成。如本文所用，“基本上由...组成”是指组合物或组分可包含附加成分，只要附加成分不在本质上改变受权利要求书保护的组合物或方法的基本特征和新颖特征。如说明书和所附权利要求书中所用，除非上下文另外清楚地指明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该(所述)”旨在也包括复数形式。

本文所公开的基因和蛋白质对应于截至2019年6月24日它们各自已知的序列。

定义

“约”通过指代等于加上或减去指定值的百分之二十(+/-20％)或更小(例如，小于15％、10％或甚至小于5％)的范围来修饰特定值。

如参照组合物所用的“施用(Apply或application)”意指将本发明的组合物施用或铺展到人类皮肤表面，诸如表皮上。

“化妆剂”意指旨在被擦涂、倾倒、喷洒、喷涂、引入或以其它方式施用于哺乳动物身体或其任何部位以提供美容效果的任何物质及其任何组分。化妆剂可包含通常被美国食品及药品管理局承认安全(GRAS)的物质、食品添加剂和用于非化妆消费品(包括非处方药物)的材料。

“化妆品组合物”是指包含化妆剂(诸如本文所述的水百合提取物)的组合物。化妆品组合物的示例包括有色化妆品(例如粉底、唇膏、遮瑕物和睫毛膏)、护肤组合物(例如保湿剂和防晒剂)、个人护理组合物(例如洗去型和免洗型沐浴剂和皂)、毛发护理组合物(例如洗发剂和调理剂)。

“有效量”是指足以在治疗期的过程内显著诱导对角质组织的积极有益效果的化合物或组合物的量。积极有益效果可为健康、外观和/或感觉有益效果，其包括独立的或组合的本文所公开的有益效果。在具体示例中，有效量意指水百合提取物和维生素B₃化合物组合的足以提供期望有益效果(例如，PAR2激活的协同减少或色素沉着过度的斑点外观的改善)的量。

“酶促水解物”意指使用包括至少一个酶促水解步骤的方法(例如，从白睡莲)获得的提取物。

“水解物”意指通过使用包括至少一个酶促或化学水解步骤的方法(例如，从白睡莲)获得的提取物。

“色素沉着过度的斑点”意指限定的皮肤区域，其中由于局部的和慢性的或系统性的黑素过度产生，该皮肤区域的色素沉着大于相邻皮肤区域的色素沉着。色素沉着过度的斑点的直径通常介于2mm和10mm之间，但更小或更大的斑点也是可能的。通常已知的色素沉着过度的斑点的示例是老年斑、太阳斑、日光性着色班、低黑色素病变、雀斑和黄褐斑。

“改善外观”意指在男性和/或女性肤色外观中提供可测量的、期望的变化或有益效果，其可例如通过皮肤的b*值的降低或色素沉着过度的斑点的大小和/或外观的变化来量化。用于确定外观改善的示例性方法更详细地描述于下文中。

“汁液”是指因挤压或其它机械加工而从水百合植物材料中排出的液体。汁液可在含水乳清中包含多种尺寸的水不混溶性液体的固体颗粒、半固体颗粒和/或液滴(统称为“水百合颗粒”)。

“L*a*b*”是指由国际照明委员会(“CIE”)规定的公认的颜色空间。三个坐标代表：(i)色彩的明度(即，L*＝0产生黑色并且L*＝100指示弥散白色)；(ii)在品红和绿色之间的色彩位置(即，负a*值指示绿色而正a*值指示品红)；以及(iii)在黄色和蓝色之间的色彩位置(即，负b*值指示蓝色并且正b*值指示黄色)。

“安全有效量”是指足够低以避免严重副作用的成分有效量(在合理的医学判断范围内)。

“护肤”是指调节和/或改善皮肤状况。一些非限制性示例包括通过提供更光滑、更均匀的外观和/或感觉来改善皮肤外观和/或感觉；增加皮肤的一个或多个层的厚度；改善皮肤的弹性或回弹性；改善皮肤的紧致度；和减少皮肤的油性的、有光泽的、和/或无光泽的外观、改善皮肤的水合状态或保湿状态、改善细纹和/或皱纹的外观、改善皮肤剥落或脱屑、使皮肤丰满、改善皮肤阻隔性、改善肤色、减少发红或皮肤疹斑的外观、和/或改善皮肤的亮度、光彩、或半透明性。

“护肤活性物质”是指当施用于皮肤时，向皮肤或通常存在于其中的细胞类型提供即时和/或长久有益效果的化合物或化合物的组合。护肤活性物质可调节和/或改善皮肤或其相关细胞(例如，改善皮肤弹性、水合、皮肤屏障功能，和/或改善细胞代谢)。

“护肤组合物”是指包含护肤活性物质并且调节和/或改善皮肤状况的组合物。

“肤色”是基础皮肤颜色或颜色均匀度的总体外观。与局部皮肤色素沉着特征(诸如色素沉着过度的斑点)相反，肤色通常特征在于较大的皮肤区域，其通常大于100mm²，直至并包括整个面部皮肤或其它身体皮肤表面(例如，臂部、腿部、背部、手部、颈部、胸部和腹部)。肤色可由图像分析测定。肤色的一种量度是亮度，其可通过L*a*b*色彩空间中的L*坐标(国际照明委员会)测量。发色团标测，诸如黑素标测和黑素浓度也可被用作肤色的指示。平均黑素可由发色团标测图数据进行计算。另外，肤色可与也可由发色团标测图数据计算的黑素均匀度(例如，标准偏差)相关。

“协同作用”及其变型意指由两种或更多种材料(例如，维生素B₃化合物和水百合提取物)的组合提供的效果大于这些材料预期的累加效果。例如，当PAR2激活被烟酰胺和水百合提取物的组合抑制的程度大于其计算的累加效果时，展示出协同作用。

如本文所用，“处理期”意指将材料或组合物施用于目标皮肤表面的时间长度和/或频率。

组合物

本文的组合物包含有效量的设置在皮肤病学可接受的载体中的水百合提取物和维生素B₃化合物的组合，并且旨在局部施用于人类皮肤。水百合提取物和维生素B₃化合物的量应足以展示体外PAR2抑制有益效果和/或在合适的处理过程(例如，2周、4周或8周)后改善色素沉着过度的皮肤的外观。令人惊讶地发现，在1:4至5:1(例如，1:2至2.5:1)范围内的水百合提取物与维生素B₃化合物的比率(体积/重量)可协同抑制PAR2激活，而在该范围之外的比率不抑制PAR2激活。本发明的护肤组合物可任选地包含一种或多种附加皮肤活性物质或通常包含于局部用护肤组合物中的其它类型成分。本文的护肤组合物可使用混合护肤成分的常规方法制备。

本文的护肤组合物可为化妆品组合物、药物组合物或药用化妆品组合物，并且可以各种产品形式提供，包括但不限于溶液、悬浮液、乳液、霜膏、凝胶、调色剂、条棒、喷剂、气溶胶剂、软膏剂、清洁液体洗涤剂和固体棒、糊剂、泡沫、摩丝、剃刮膏、擦拭物、条、贴片、电动贴片、水凝胶、成膜产品、面部和皮肤面膜(带有和不带有不溶性片材)、化妆品诸如粉底、眼线和眼影等。在一些情况下，所述组合物形式可符合所选的具体皮肤病学可接受的载体。例如，组合物(和载体)可以乳液(例如，油包水、水包油或水包油包水)或水性分散体的形式提供。

水百合提取物

本文的组合物包含有效量的从睡莲(Nymphaea)属植物获得的水百合提取物。水百合提取物可作为液体(例如，包含水百合植物材料的水性溶液)或作为固体(例如，通过干燥液体水百合提取物和/或其麦芽糖糊精载体形成的粉末)提供。在掺入到化妆品组合物中之前，水百合提取物可与合适的载体混合。例如，粉末状水百合提取物可与麦芽糖糊精载体(例如，以1:9的比率)或水性载体(例如，水和/或水溶性/可混溶材料)混合。提取物的有效量可因提取物的一种特定来源而异(例如供应商)，并且可由技术人员例如通过根据下文更详细描述的PAR2抑制测定测量PAR2激活抑制的水平来确定。与任何提取物一样，活性组分的浓度和/或具体提取物的活性水平将取决于诸如提取物产品的最终稀释体积、所采用的具体提取方法、个体植株之间的天然的变化范围、以及本领域的技术人员已知的其它常见因素的因素。

本发明的水百合提取物可从合适种类的水百合和/或水百合植物的一部分(例如，花、根、叶、茎、种子、汁液、以及它们的组合)获得，只要该提取物提供期望的PAR2激活抑制即可。可适用于本文的水百合种类的示例包括白睡莲(Nymphaea alba)、澳洲睡莲(Nymphaea gigantea)、子午莲(Nymphaea tetragona)、齿叶睡莲(Nymphaea lotus)、蓝睡莲(Nymphaea caerulea)、柔毛睡莲(Nymphaea pubescens)、亚马逊睡莲(Nymphaeaamazonum)、美洲白睡莲(Nymphaea ampla)、Nymphaea blanda、Nymphaea calliantha、雪白睡莲(Nymphaea candida)、埃及蓝睡莲(Nymphaea capensis)、蓝星睡莲(Nymphaeacolorata)、康纳迪睡莲(Nymphaea conardii)、优雅睡莲(Nymphaea elegans)、Nymphaeafennica、Nymphaea flavovirens、加德纳睡莲(Nymphaea gardneriana)、小腺睡莲(Nymphaea glandulifera)、厄德洛睡莲(Nymphaea heudelotii)、詹姆森睡莲(Nymphaeajamesoniana)、莱贝格睡莲(Nymphaea leibergii)、小籽睡莲(Nymphaea macrosperma)、黄睡莲(Nymphaea Mexicana)、四色睡莲(Nymphaea micrantha)、延药睡莲(Nymphaeanouchali)、香睡莲(Nymphaea odorata)、红睡莲(Nymphaea rubra)、鲁吉娜睡莲(Nymphaearudgeana)、Nymphaea stuhlmannii、观音睡莲(Nymphaea sulfurea)、侏儒卢旺达睡莲(Nymphaea thermarum)和紫色睡莲(Nymphaea violacea)。从白睡莲的花获得的提取物可特别适用于本文的组合物。白睡莲包括Castalia alba(L.)Greene、Castalia minorifloraSimonk、Castalia speciosa Salisb、Nymphaea occidentalis Moss或Nymphaeaminoriflora(Simonk.)Wissjul，但不包括莲花(Lotus)或荷花(Nelumbo nucifera)的种类。

水百合提取物可为黄色无气味水性溶液的形式，其具有介于约10和55g/L之间(例如，介于15和45g/L之间，介于20和40g/L之间，或甚至介于24和35g/L之间)的干物质含量。从水百合提取物获得的活性成分可包含碳水化合物、蛋白质或矿物质、这些物质的水解物、以及它们的组合。在一些情况下，水解物可包括酶促水解物，该酶促水解物通过对水百合提取物或其组分(例如，碳水化合物或蛋白质)进行一个或多个酶促水解而获得。当进行另外两个酶促水解时，可使用不同类型的酶(例如，糖酶和蛋白酶、两种不同的糖酶、或两种不同的蛋白酶)。水百合提取物可具有基于干物质的重量计介于20重量％和70重量％之间(例如，23重量％至62重量％或25重量％至55重量％)的碳水化合物级分。碳水化合物含量可通过DUBOIS方法(Dubois M等人，Analytical Chemistry,28,3,350-356,1956)确定，并被表示为水百合提取物的总干物质含量的百分比。在一些情况下，水百合提取物可具有基于干物质的重量计介于20重量％和60重量％之间(例如，25重量％至50重量％或甚至30重量％至45重量％)的矿物质级分。矿物质级分可通过称量由活性成分样品在550℃下在马弗电炉中焚烧所得的粗灰残余物来确定。

可能期望最小化或消除存在于水百合提取物中的肽/蛋白质和/或多酚的含量，这降低使用者发生变应性应答或其它不良反应的风险。因此，本文的水百合提取物可具有基于干物质的重量计小于20重量％(例如，小于15重量％、10重量％、或甚至小于5重量％)的肽级分，并且可不含或基本上不含多酚化合物(即，基于干物质的重量计小于3重量％、1重量％、0.5重量％、或甚至小于0.2重量％)。水百合提取物的蛋白质级分可通过LOWRY方法(Lowry等人，Protein measurement with the Folin reagent,J.Biol.Chem.,193,265,1951)确定。在某些情况下，还可能期望确定存在的肽化合物的大小，例如经由FPLC型色谱。多酚化合物的含量可根据下文更详细提供的方法确定。水百合提取物中的肽/蛋白质和/或多酚含量可作为用以从植物材料获得水百合提取物的初始加工的一部分或者通过使水百合提取物经受进一步加工而提供。

在一些情况下，在掺入到组合物中之前，水百合提取物可与其它合适的材料(例如，水、增稠剂、湿润剂、溶剂、防腐剂和/或增溶剂)混合。例如，可将水百合提取物与水或另一种合适的载体(例如，多元醇诸如甘油)混合以提供包含0.001％至50％(例如，0.01％至40％、0.1％至20％、0.5％至10％、或甚至1％至5％)的水百合提取物的混合物。水百合提取物和/或水百合混合物可以0.00001重量％至15重量％、0.0001重量％至10重量％、0.001重量％至15重量％、0.025重量％至10重量％、0.05重量％至10重量％、0.05重量％至5重量％、或甚至0.1重量％至5重量％的量包含于组合物中。

维生素B₃化合物

如本文所用，“维生素B₃化合物”是指具有下式的化合物：

其中R为-CONH₂(即烟酰胺)、-COOH(即烟酸)或-CH₂OH(即烟醇)；它们的衍生物；以及前述物质中的任一种的盐。维生素B₃化合物可以按总组合物的重量计0.00005％至15％、0.0001％至10％、0.001％至15％、0.025％至10％、0.05％至10％、0.05％至5％、或甚至0.1％至5％的量存在。特别合适的维生素B₃化合物是烟酰胺。

皮肤病学可接受的载体

本文的护肤组合物包含皮肤病学可接受的载体(其可以被称为“载体”)。短语“皮肤病学可接受的载体”是指所述载体适于局部施用于角质组织，具有良好的美学性质，与所述组合物中的活性物质相容，并且不引起任何不合理的安全或毒性问题。在一个实施方案中，载体以约50重量％至约99重量％、约60重量％至约98重量％、约70重量％至约98重量％、或另选地约80重量％至约95重量％的含量存在。

载体可为多种形式。在一些情况下，组分(例如提取物、防晒活性物质、附加组分)的溶解度或分散度可决定载体的形式和特征。非限制性示例包括简单溶液(例如水性的或无水的)、分散体、乳液和固体形式(例如凝胶、条棒、可流动的固体或无定形材料)。在一些情况下，皮肤病学可接受的载体为乳液的形式。乳液可具有连续水相(例如水包油或水包油包水乳液)或连续油相(例如油包水或油包水包油乳液)。本发明的油相可包含有机硅油、非有机硅油(诸如烃油、酯、醚)以及它们的混合物。水相通常包含水和水溶性成分(例如，水溶性保湿剂、调理剂、抗微生物剂、湿润剂和/或其它皮肤护理活性物质)。然而，在一些情况中，水相可包含不是水的组分，该组分包括但不限于水溶性保湿剂、调理剂、抗微生物剂、湿润剂和/或其它水溶性皮肤护理活性物质。在一些情况下，组合物的非水组分包括湿润剂，诸如甘油和/或其它多元醇。

在一些情况下，本文的组合物为提供轻度且非油腻的知觉感觉的水包油(“O/W”)乳液的形式。本文的合适O/W乳液可包含按组合物的重量计大于50％的连续水相，并且剩余部分为分散的油相。水相可包含基于水相的重量计1％至99％的水，以及任何水溶性和/或与水混溶的成分。在这些情况下，分散的油相将通常以按组合物的重量计小于30％(例如，1％至20％、2％至15％、3％至12％、4％至10％、或甚至5％至8％)存在，以帮助避免油性组合物的一些不期望的感觉效果。油相可包括一种或多种挥发性油和/或非挥发性油(例如，植物油、有机硅油和/或烃油)。可适用于本发明组合物的油的一些非限制性示例公开于美国专利9,446,265和美国公布2015/0196464中。

载体可包含一种或多种皮肤病学可接受的亲水性稀释剂。如本文所用，“稀释剂”包括水百合提取物能够分散、溶解或以其它方式掺入其中的材料。亲水性稀释剂包括水、有机亲水性稀释剂诸如低级一价醇(例如C₁-C₄)和低分子量二醇和多元醇，包括丙二醇、聚乙二醇(例如分子量200g/mol至600g/mol)、聚丙二醇(例如分子量425g/mol至2025g/mol)、甘油、丁二醇、1,2,4-丁三醇、山梨醇酯、1,2,6-己三醇、乙醇、异丙醇、山梨醇酯、丁二醇、醚丙醇、乙氧基化醚、丙氧基化醚以及它们的组合。

其它任选的成分

本发明的组合物可任选地包含一种或多种常用于化妆品组合物中的附加成分(例如，着色剂、皮肤护理活性物质、抗炎剂、防晒剂、乳化剂、缓冲液、流变改性剂、这些的组合等)，前提条件是该附加成分不会不利地改变由本发明组合物提供的皮肤健康或外观有益效果。当掺入组合物中时，附加成分应该适用于与人类皮肤组织接触，而没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、变应性应答等等。另外的活性物质的一些非限制性示例包括维生素、矿物质、肽和肽衍生物、糖胺、防晒剂、控油剂、颗粒、类黄酮化合物、毛发生长调节剂、抗氧化剂和/或抗氧化剂前体、防腐剂、蛋白酶抑制剂、酪氨酸酶抑制剂、抗炎剂、保湿剂、去角质剂、亮肤剂、免晒美黑剂、润滑剂、抗痤疮活性物质、抗蜂窝炎活性物质、螯合剂、抗皱纹活性物质、抗萎缩活性物质、植物甾醇和/或植物激素、N-酰基氨基酸化合物、抗微生物剂和抗真菌剂。可适用于本文的附加成分和/或护肤活性物质的其它非限制性示例描述于美国公布2002/0022040；2003/0049212；2004/0175347；2006/0275237；2007/0196344；2008/0181956；2008/0206373；2010/00092408；2008/0206373；2010/0239510；2010/0189669；2010/0272667；2011/0262025；2011/0097286；US2012/0197016；2012/0128683；2012/0148515；2012/0156146；和2013/0022557；以及美国专利5,939,082；5,872,112；6,492,326；6,696,049；6,524,598；5,972,359；和6,174,533中。

调理剂

本文的组合物可包含0.1重量％至50重量％的调理剂(例如，0.5重量％至30重量％、1重量％至20重量％、或甚至2重量％至15重量％)。添加调理剂可有助于为组合物提供期望的感觉特性(例如，施用时丝滑、润滑的感觉)。调理剂的一些非限制性示例包括烃油和蜡、硅氧烷、脂肪酸衍生物、胆固醇、胆固醇衍生物、甘油二酯、甘油三酯、植物油、植物油衍生物、乙酰甘油酯、烷基酯、烯基酯、羊毛脂、蜡酯、蜂蜡衍生物、甾醇和磷脂、它们的盐、异构体和衍生物、以及它们的组合。特别合适的调理剂示例包括挥发性或非挥发性硅氧烷流体，诸如聚二甲基硅氧烷共聚多元醇、二甲基聚硅氧烷、二乙基聚硅氧烷、混合的C1-30烷基聚硅氧烷、苯基聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、硅氧烷交联聚合物、以及它们的组合。聚二甲基硅氧烷可为尤其合适的，因为一些消费者将由某些聚二甲基硅氧烷流体提供的感觉特性与良好的保湿相关联。可适用作调理剂的硅氧烷流体的其它示例描述于美国专利5,011,681中。

流变改性剂

本文的组合物可包含0.1％至5％的流变改性剂(例如增稠剂)以向组合物提供合适的流变学和皮肤感觉特性。增稠剂的一些非限制性示例包括交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖、树胶、以及它们的混合物。在一个特别合适的示例中，组合物可包含超吸收聚合物增稠剂，诸如聚丙烯酸钠、淀粉接枝的聚丙烯酸钠、或这些物质的组合。超吸收聚合物增稠剂的一些非限制性示例描述于例如美国专利9,795,552中。

一些消费者发现使用硅氧烷流体作为调理剂的组合物具有不期望的油腻感或厚重感。因此，可能期望提供不含或基本上不含硅氧烷流体的组合物。还可能期望定制超吸收聚合物增稠剂以例如通过调节组合物中水的量、水:油比率(例如，12:1至1:1)、和/或水与增稠剂或油与增稠剂的比率来为组合物提供轻盈的透气感。

乳化剂

当皮肤病学可接受的载体为乳液形式时，可能希望包含乳化剂以提供稳定组合物(例如，不发生相分离)。当包含乳化剂时，乳化剂可以0.1％至10％(例如，1％至5％、或2％至4％)的量存在。乳化剂可为非离子型、阴离子型或阳离子型。可适用于本文的乳化剂的一些非限制性示例公开于美国专利3,755,560、4,421,769、和McCutcheon的Detergents andEmulsifiers，北美版，第317-324页(1986)中。

当在本文组合物中包含任选成分时，可能期望选择不与在低pH的组合物中的其它成分，尤其是对pH敏感的成分如烟酰胺、水杨酸盐和肽形成络合物或以其它方式不期望地相互作用的成分(例如，棕榈酰-赖氨酸-苏氨酸(pal-KT)或棕榈酰-赖氨酸-苏氨酸-苏氨酸-赖氨酸-丝氨酸(pal-KTTKS))。在一些情况下，可能期望选择经由不同生物学途径起作用的皮肤护理活性物质，使得所述活性物质不相互干扰，这种相互干扰可降低两种试剂的功效。当存在时，所述任选成分可以以按所述组合物的重量计0.0001％至50％；0.001％至20％；或甚至0.01％至10％(例如50％、40％、30％、20％、10％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.1％)的量被包含。

使用方法

本发明方法包括鉴定人身上需要处理的目标皮肤部分，以及将包含有效量的水百合提取物和维生素B₃化合物以及任选地一种或多种附加护肤剂的组合物施用于目标皮肤部分。目标皮肤部分可在面部皮肤表面上(诸如前额、口周、颏、眶周、鼻部和/或面颊)或身体的另一部分(例如手、臂、腿、背、胸)。需要处理的人可以是表现出色素沉着过度的皮肤状况的人。在一些情况下，目标皮肤部分可能不表现出色素沉着过度状况，但是如果目标皮肤部分是易于发展成色素沉着过度(例如，暴露于阳光的皮肤诸如面部皮肤和臂部皮肤)的部分，则使用者可能仍然希望将目标皮肤部分作为预防措施来处理。以这种方式，本发明的方法和组合物可以预防地使用。

组合物可施用于皮肤的目标部分，并且如果需要，施用于周围皮肤，在治疗期期间每天至少一次、每天两次或以每天更频繁的方式施用。当每天两次地施用时，第一次与第二次施用相隔至少1至12个小时。通常，所述组合物可在早上和/或晚上临睡觉前施用。当根据本文的方法使用时，本发明的组合物可通过抑制PAR2激活来改善色素沉着过度的皮肤的外观，如色素沉着过度的斑点的大小和/或颜色的改善所展示的。在一些情况下，由水百合提取物提供的胆红素降低有益效果可通过提供相对于预定值(即，在处理期开始之前确定)改善的PAR2激活抑制来展示。附加地或另选地，PAR2激活抑制有益效果可通过将本发明组合物的测量值与对照值(例如载体对照)或其它参考值进行比较而在体外展示。

理想的是，使用本文组合物的处理期足以使水百合提取物和维生素B₃化合物改善色素沉着过度状况的外观。治疗期可持续至少1周(例如，约2周、4周、8周或甚至12周)。在一些情况下，治疗期将延长至多个月(即3个月至12个月)。在一些情况下，组合物可在一周中的大多数时间(例如，每周至少4天、5天或6天)施用，在至少2周、4周、8周或12周的处理期间至少每天一次或甚至每天两次。

施用组合物的步骤可通过局部施用来实现。关于组合物的施用，术语“局部的”、“局部”、“局部地”意指将组合物递送到目标区域(例如，色素沉着过度的斑点或其部分)而使对不期望治疗的皮肤表面的递送最小化。组合物可施用到并且轻轻揉进皮肤区域中。组合物或皮肤病学可接受的载体的形式应被选择成有利于局部施用。虽然本文的某些实施方案设想将组合物局部施用到某一区域，但应当理解，本文的组合物可更全面地或广泛地施用到一个或多个皮肤表面。在某些实施方案中，本文的组合物可用作多步美容方案的一部分，其中本发明的组合物可在一种或多种其它组合物之前和/或之后施用。

方法

酚类化合物测定

该方法提供合适的手段来确定水百合提取物中多酚化合物的量。在存在铁氰化钾的情况下，多酚化合物形成可在715nm处检测到的有色化合物。着色强度与多酚化合物的量成比例。从范围在40和120mg/l之间的没食子酸标准样品获取读数。针对样品获得的结果允许根据浓度来追踪直线光密度，并且在该直线上直接读取样品的多酚含量。根据本发明的水解物的多酚化合物的含量可被表示为没食子酸当量相对于水百合提取物的干物质含量的百分比。

PAR2抑制测定

该方法提供了用于测量一种或多种材料抑制PAR2激活的能力的合适测定。测定原理依赖于β抑制蛋白募集到激活的PAR2受体，从而导致形成活性β半乳糖苷酶，其裂解底物，从而产生可定量的发光信号。PAR2可通过添加胰蛋白酶和/或通过添加SLIGRL来激活。

表达偶联到β-半乳糖苷酶的α片段的PAR2受体和表达偶联到β-半乳糖苷酶的β片段的β抑制蛋白的细胞是从DiscoveRx Corp.(Freemont,CA)获得的。在37℃下，使细胞在补充有10％热灭活胎牛血清、500单位/mL青霉素、500ug/mL链霉素、800ug/mL庆大霉素和300ug/mL潮霉素的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbeccos Modified Eagle Medium)的培养基中在T75或T150培养瓶(所有培养基组分均购自Invitrogen Corp.(Carlsbad,CA))中于CO₂培养箱中增殖。当细胞达到大约80％融汇时，使用细胞解离缓冲液(可购自Invitrogen Corp.(Carlsbad,CA))将细胞与烧瓶分离。使用血球计对细胞进行计数，并以10000个细胞/孔接种到384孔板中的20uL/孔

培养基(购自Invitrogen Corp.(Carlsbad,CA))中。将细胞培养24-48小时。

为了测量材料胰蛋白酶对PAR2激活抑制的能力，将每个孔用1uL测试材料的水溶液处理。每种测试材料一式三份地运行。将细胞于CO₂培养箱中温育30分钟，之后添加1uL胰蛋白酶(大约0.1ug/uL)。将细胞于CO₂培养箱中温育一小时，之后加入细胞裂解底物溶液(11uL/孔)。裂解底物溶液以PathHunter^TM检测试剂盒(目录号93-0001)购自DiscoveRxCorp.(Freemont,CA)，其中各组分以下列比率混合：

测定缓冲液:底物1:底物2＝19:5:1

将板在800倍重力(xg)下短暂离心(大约5分钟)以移除气泡，然后在室温下温育1小时。在Envision^TM2101品牌的多标签读取器(购自PerkinElmer,Inc.(Boston,MA))上读取每个孔的发光。该范围由具有溶剂对照+胰蛋白酶的孔(高对照)和具有溶剂对照但无胰蛋白酶的孔(低对照)确定。每种处理的PAR2抑制百分比通过以下式计算发光信号：

在Excel中通过使用T-测试函数进行统计，单尾具有不均匀的分布函数。p≤0.1的P值被认为具有统计意义上的显著性。p≤0.25的P值被认为是趋势。

实施例

实施例1：配制品

下表1提供了包含水百合提取物的局部用护肤组合物的实施例。通过用合适的搅拌器(例如，Tekmar RW20DZM或等同物)共混A相组分并加热至70–80℃的温度，并且在搅拌的同时保持温度，来制备示例性组合物。单独地，用合适的搅拌器共混B相组分并加热至70-75℃，同时在混合期间保持温度。将相B添加到相A中，同时充分混合以形成水包油(O/W)乳液。然后使用合适的研磨机(例如，Tekmar T-25或等同物)将乳液研磨5分钟。当乳液处于60℃时，添加相C，同时继续混合。处于40℃时，将相D和相E的成分添加到乳液。然后将乳液研磨5分钟以提供均匀的组合物。

表1

实施例2：液体水百合提取物

该实施例描述了用于提供适用于本文化妆品组合物的水百合提取物的方法。在该实施例中，将白睡莲植物的花干燥，然后研磨成粉末。将干粉溶解于水(100g/L)中并用糖酶(例如纤维素酶、葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶、阿拉伯糖或它们的组合)和蛋白酶(例如内切蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、外肽酶、氨肽酶、金属蛋白酶或它们的组合)进行酶促水解。分离可溶相(即水相)和不溶相，并且可弃去不溶相。对可溶相进行热处理以使可能存在的任何酶失活。然后将溶液净化和纯化。经净化和纯化的溶液的浓度可通过添加或去除水而调节至所需水平。然后将溶液过滤并灭菌以提供用于掺入到产品中的水百合提取物。下表3列出了所得水百合提取物的物理特性的非限制性示例。表2中所示的多酚、碳水化合物、蛋白质和矿物质的量均为基于干物质重量计的重量百分比。

表3

性能	值
		干物质含量	29g/L
多酚含量	<0.2％(阈值检测)
		碳水化合物含量	51％
蛋白质含量	10％
		矿物质含量	39％

实施例3：PAR2激活的协同抑制

该实施例展示了有效量的水百合提取物和维生素B₃化合物的组合协同抑制PAR2激活的能力。该测试中的水百合提取物为购自Silab(France)的白睡莲的花提取物。该测试中使用的水百合提取物不可商购获得。维生素B₃化合物为以产品号N5535购自SigmaAldrich(St.Louis,MO)的烟酰胺。以1:100至20:1(水百合:烟酰胺)范围内的比率测试水百合提取物和烟酰胺。根据以上PAR2抑制测定来确定水百合提取物和烟酰胺的组合抑制PAR2激活的能力。协同因子计算如下：

其中p值≤0.05的大于1.00的协同因子指示统计意义上显著的协同作用。该测试的结果汇总于下表3中。

表3

WL:N	观察到的抑制	预期的抑制	协同因子	p值(观察到的相对于预期的)
					1:100	23	24	0.96	0.87
1:4	29	27	1.07	0.78
					1:2	65	29	2.24	0.0007
1:1	74	33	2.24	0.003
					2.5:1	63	34	1.85	0.012
5:1	39	32	1.22	0.11
					20:1	28	32	0.88	0.23

如表3中可见，仅1:4至5:1的水百合提取物与烟酰胺的比率展示出对PAR2激活的抑制。而这些比率之外的比率不提供协同的PAR2激活抑制。

本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。

除非明确排除或以其它方式限制，本文中引用的每一篇文献，包括任何交叉引用或相关专利或专利申请以及本申请对其要求优先权或其有益效果的任何专利申请或专利，均据此全文以引用方式并入本文。对任何文献的引用不是对其作为与本发明的任何所公开或本文受权利要求书保护的现有技术的认可，或不是对其自身或与任何一个或多个参考文献的组合提出、建议或公开任何此类发明的认可。此外，当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文献中相同术语的任何含义或定义矛盾时，应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。

虽然已举例说明和描述了本发明的具体实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出各种其它变化和修改。因此，本文旨在于所附权利要求中涵盖属于本发明范围内的所有此类变化和修改。

Claims

1.一种化妆用护肤组合物，所述化妆用护肤组合物包含：

a)有效量的水百合提取物和维生素B₃化合物的组合，其中所述水百合提取物和所述维生素B₃化合物以1:4至5:1的水百合提取物与维生素B₃化合物的体积/重量比存在；以及

b)皮肤病学可接受的载体。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述水百合提取物包含水解物。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述维生素B₃化合物以按所述组合物的重量计0.001％至10％存在。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含基于所述组合物的重量计0.0001重量％至10重量％的水百合提取物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物和所述维生素B₃化合物以1:2至2.5:1的水百合提取物与维生素B₃化合物的体积/重量比存在。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物是从白睡莲(Nymphaea alba)的花获得的。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物为具有10g/L至50g/L的干物质含量的水性溶液。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物包含基于所述干物质的重量计20％至70％的碳水化合物。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物包含基于所述干物质的重量计20％至60％的矿物质。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物包含基于所述干物质的重量计小于20％的蛋白质。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述水百合提取物包含基于所述干物质的重量计小于3％的多酚。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含包含至少一种附加成分，所述至少一种附加成分选自维生素、矿物质、肽、糖胺、防晒剂、控油剂、类黄酮化合物、抗氧化剂、防腐剂、蛋白酶抑制剂、酪氨酸酶抑制剂、抗炎剂、保湿剂、剥落剂、亮肤剂、润滑剂、抗痤疮活性物质、螯合剂、抗皱活性物质、抗萎缩活性物质、植物甾醇、N-酰基氨基酸化合物、抗微生物剂和抗真菌剂、调理剂、乳化剂、流变改性剂、以及这些物质的组合。

13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述附加成分包括超吸收聚合物增稠剂，所述超吸收聚合物增稠剂选自聚丙烯酸钠、淀粉接枝的聚丙烯酸钠、以及它们的组合。

14.用于协同抑制PAR2激活的水百合提取物和维生素B₃化合物的组合的非治疗性用途，包括：

a)鉴定人身上期望处理的目标皮肤部分；以及

b)在处理期间将根据权利要求1至12中任一项所述的组合物施用于所述目标皮肤部分，其中所述水百合提取物和维生素B₃化合物的组合协同抑制PAR2激活。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述PAR2激活的协同抑制比根据PAR2抑制测定计算的累加效果强至少10％。