CN114182016A - Ap006284.1作为前列腺癌分子靶标的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体为一种AP006284.1作为前列腺癌分子靶标的应用。经研究发现，AP006284.1在前列腺癌组织中的含量高于前列腺正常组织中的含量，表明AP006284.1与前列腺癌的肿瘤发生、发展密切相关。因此本发明提供AP006284.1作为与前列腺癌相关的新的前列腺癌分子靶标，用于制备前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗及状况监测、预后监测的试剂盒。本发明还包括该前列腺癌分子靶标的抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物中的应用。使用本发明诊断试剂盒诊断前列腺癌，操作简单、取材方便、安全无创伤，且具有较高的特异性和灵敏度，易于进行大量筛查。

Description

AP006284.1作为前列腺癌分子靶标的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种前列腺癌分子靶标AP006284.1的应用。

背景技术

液体活检技术，根据《ASCO年度报告：2015临床肿瘤学进展》中相关内容，被列为肿瘤治疗领域下一个十年趋势之一。血液中的一些分子标志物已经被应用于一些疾病的诊断，如谷丙转氨酶用于肝炎的诊断，白细胞数目用于判断炎症。血液循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，ctDNA)是一种无细胞状态的胞外游离DNA，存在于血液、滑膜液和脑脊液等体液中，体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统，其主要是由短的单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成，以DNA蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。ctDNA来自肿瘤细胞的体细胞突变，因此，ctDNA是一种特征性的新的肿瘤生物标记物，并且还可以被定性、定量和追踪，将成为临床肿瘤的早期诊断、预后判定及跟踪随访等提供一系列方便、快捷、特异、无创或微创和分子生物学检测手段，尤其对于一些不具有典型临床症状、检查无特异性和诊断困难的肿瘤可避免复杂的、具有创伤性的活检。结合新一代测序技术(NGS)将变成“液体活检”，并替代侵入组织性活检。

AP006284.1属于lncRNA（long non-coding RNA，长链非编码RNA），是一类转录本长度超过200个碱基并且不编码蛋白的RNA。近年来，lncRNA的功能在很多生物过程的作用被发现：它参与细胞分化、调控细胞对抗逆境的反应、影响胚胎干细胞多能化等多样的生物过程。在肿瘤研究领域，lncRNA对于各种细胞表型（增殖、凋亡、细胞周期、侵袭转移等）的影响都提示其在癌症中具有特异性调控功能。目前己有较多lncRNA被证实在包括乳腺癌、前列腺、黑色素瘤、肝癌、结肠癌、膀胱癌等在内的人类多种肿瘤中存在差异表达并执行重要的调控功能。早期有效检测肿瘤的发生、发展及提高抗癌药物的疗效对于癌症的治疗尤为重要，发现新型肿瘤标志物作为诊断与治疗的靶点一直是肿瘤研究的热点。

前列腺癌（Prostate cancer, PCa）是一种常见的男性生殖系统恶性肿瘤。2020年，世界范围内，前列腺癌发病率在男性恶性肿瘤中位居第二，致死率排在第五。在中国，随着社会的发展和人们生活方式的改变，前列腺癌发病率近年来呈现持续上升趋势，前列腺癌发病率在男性恶性肿瘤中排在第六，而死亡率位居第九。另外，前列腺癌在年龄大于60岁的男性中发病率显著升高。近50年来，雄激素剥夺疗法成为前列腺癌的主要治疗手段。然而，大多数前列腺癌在接受雄激素剥夺治疗18到24个月后对雄激素的依赖性逐渐减弱，最终发展为雄激素非依赖性肿瘤。此时即使接受治疗，绝大多数患者将发展为去势抵抗性前列腺癌，病变已达晚期，预后极差。

前列腺癌的临床诊断方式目前主要有直肠指检、血清前列腺特异性抗原（PSA）检测、直肠超声波检测、活组织病理检查等。直肠指检是最简单、最经济实用的方法，主要通过医生的食指触摸前列腺，用以发现很多无症状的前列腺癌患者，有可能获得早期诊断及根治的机会。但以上的方法都存在局限性。例如直肠指检的局限性主要在4个方面：（1）患者前列腺肿块不大时，易漏诊；（2）部分患者前列腺癌肿大不明显，但已属于晚期，不易根治；（3）患者直肠有疾患时不能使用此检测；（4）医生经验不足时可能有漏诊或者误诊的可能。正常情况下血液中的PSA不高（不高于4ng／ml），当处于前列腺癌及其他前列腺疾病患病状态时，PSA升高成为目前筛查前列腺癌最敏感的瘤标，但其也存在一定局限性：（1）需要取血检测，对患者有一定的损伤；（2）PSA增高也常见与非前列腺癌疾病，如前列腺炎症、前列腺肥大等，因此不易确诊；（3）PSA增高确诊前列腺癌时，往往患者已经属于中后期，达不到早期诊断的目的。前列腺超声波检测操作简单直观、无损伤，通过显示肿块的大小、数目、位置、密度、边缘、形体、有无钙化及钙化的形态、大小、数目、分布以及周围的晕环、皮肤改变等提供定位及定性征象并判断病变的性质；其局限性是：（1）对致密性的小癌灶容易漏诊；（2）有时候不能提供明确的定性诊断；（3）因其不能显示肿瘤的内部结构及周围组织所以诊断符合率很低；（4）对一些缺乏典型征象的实性良恶性肿块有较高的误诊率。活组织病理检查因其创伤性、复杂性不能作为初筛的手段，但它是前列腺癌确诊的金标准，一般与其他方法技术连用。

近年来的研究表明，lncRNA与前列腺癌密切相关，它们可能参与肿瘤的发生、发展和转移，所以对肿瘤的发病机制、早期诊断、个体化治疗、转移的检测和预后等可能有相应的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供AP006284.1作为前列腺癌分子靶标的应用，包括作为标志物在制备前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测的诊断试剂盒中的应用，以及作为抑制剂在制备预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物中的应用。

经发明人研究发现，AP006284.1在前列腺癌组织样本中的含量比前列腺正常组织样本中的含量高，提示AP006284.1与前列腺癌的肿瘤发生、发展存在着密切的相关性。因此本发明提供AP006284.1作为与前列腺癌相关的新的前列腺癌分子靶标，用于制备前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗及状况监测、预后监测的试剂盒。

AP006284.1作为前列腺癌分子靶标，是一种lncRNA，全长2210bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的前列腺癌分子靶标AP006284.1作为标志物在制备前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测的试剂盒中的应用，是通过检测被试者组织样本、血液和尿液中的AP006284.1的含量，并与正常水平AP006284.1含量相比较，以进行前列腺癌高危人群筛选、诊断、治疗状况监测、预后监测。

所述被试者组织样本、血液和尿液中的AP006284.1的含量，是通过总RNA提取、反转录、定量PCR进行检测得到。

所述的试剂盒，包括：

（1）组织样本、血液和尿液中总RNA提取试剂；

（2）反转录试剂；

（3）定量PCR试剂；

（4）所用对照为β-ACTIN，其引物序列如下：

β-ACTIN上游引物序列：5＇- CCTCTCCCAAGTCCACACAG -3＇（SEQ ID NO.2）；

β-ACTIN下游引物序列：5＇- GGGCACGAAGGCTCATCATT -3＇（SEQ ID NO.3）；

（5）用于检测前列腺癌分子靶标AP006284.1的引物序列：

上游引物序列：5＇-CAGGCGTCACCACTTACTCACA -3＇（SEQ ID NO.4）；

下游引物序列：5＇- GGACACCACATCACAGGCAAA -3＇（SEQ ID NO.5）。

本发明还提供所述的前列腺癌分子靶标AP006284.1，可用于筛选预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物。

本发明还提供所述的前列腺癌分子靶标AP006284.1的抑制剂，可用于制备预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物。

前述的前列腺癌分子靶标AP006284.1的抑制剂制备的药物包括AP006284.1 的siRNA。

本发明为前列腺癌的诊断和治疗提供了一种新的分子靶标AP006284.1，可作为标志物应用于制备诊断试剂盒中，同时该分子靶标的抑制剂可用于制备治疗前列腺癌的药物。

使用该分子靶标及含有该分子靶标的诊断试剂盒诊断前列腺癌，操作简单、取材方便、安全无创伤，且具有较高的特异性、灵敏性和方便大量筛查的特点。该分子靶标适合应用于前列腺癌高危人群的筛选、前列腺癌的鉴定、前列腺癌治疗及状况的监测、前列腺癌指导用药的监测和前列腺癌预后监测等领域。

附图说明

图1为AP006284.1在前列腺癌组织样本中和正常组织样本中的含量检测。

图2为AP006284.1在前列腺癌不同癌病理分级分期组织样本中的含量分析。

图3为在前列腺癌LNCaP和C4-2B细胞系中AP006284.1 抑制剂对AP006284.1抑制效率。

图4.AP006284.1的抑制剂显著促进前列腺癌细胞的凋亡。

图5.AP006284.1的抑制剂显著抑制前列腺癌细胞的迁移。

图6.AP006284.1的抑制剂显著抑制前列腺癌细胞的增殖。

具体实施方式

为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例进一步阐述本发明，但下述实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围，下面实施例中未提及的具体实验方法，按照常规实验方法进行。

实施例1：AP006284.1在前列腺癌组织样本中和正常组织样本中的含量检测

本实施例中使用的AP006284.1检测引物序列为：

AP006284.1上游引物序列：5＇- CAGGCGTCACCACTTACTCACA -3＇（SEQ ID NO.4）

AP006284.1下游引物序列：5＇- GGACACCACATCACAGGCAAA -3＇（SEQ ID NO.5）

本实施例的主要步骤如下：

1、组织样本中总RNA的提取

获得47对前列腺癌根治术患者手术后的组织样本，同时获得淋巴结清扫术的患者切除的组织样本作为对照。提取前述组织样本的总RNA于无DNA和无RNA酶污染的1.5毫升离心管中。

组织样本中提取总RNA的试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司。提取的总RNA通过使用Therm NanoDrop2000c分光光度计，测定260/280nm紫外波长的比值进行的浓度测定。

2、定量检测组织样本中的lncRNA

（1）反转录RNA得到cDNA单链

按照下表1配置反转录体系，配置过程在冰上进行。配置好的体系在PCR仪

上进行反转录。反应条件为 38摄氏度15分钟，85摄氏度5秒。

表1

表1中，X表示加入的RNA体积由RNA浓度来确定，本实验中为X＝500纳克／RNA浓度。前述反转录试剂盒购自大连宝生物有限公司（Takara）。

（2）qPCR定量检测

以cDNA稀释液为实时定量PCR模板，引物终浓度为200nM，反应总体积为10μl。实时定量PCR仪器使用Roche LightCycler480 Ⅱ，用384孔板完成。每个样本重复三次。在溶解曲线基本符合要求无非特异性扩增的情况下，参考操作手册，采用threshold cycle （Ct）方法获得相对表达量，以β-ACTIN为内参。具体程序参看表2。

表2

。

3、采用Array Tools 4.1.0 进行数据分析

用前述方法可测得样品中目标lncRNA和参照lncRNA的Ct值水平求得目标lncRNA在组织中的相对含量。用β-ACTIN为参照矫正lncRNA的量，通过qPCR检测中经典的2^-ΔΔCt的方法表示组织样本中lncRNA的水平（-ΔCt为目标lncRNA与对照的Ct值之差）。

4、组织样本中AP006284.1水平诊断前列腺癌

如图1，分析AP006284.1在47对前列腺癌/癌旁组织样本中的表达情况，结果显示与正常对照组织样本中AP006284.1的低含量相比，前列腺癌患者组织样本中的AP006284.1含量相对较高，且普遍高于正常组织样本的平均值，差异有统计学意义。

实施例2：AP006284.1在前列腺癌不同癌病理分级分期组织样本中的含量分析。

主要步骤如下：

1、前列腺癌TCGA数据库的获取

从BROAD网站选择前列腺癌对应的TCGA数据进行下载；

2、分析AP006284.1在不同前列腺癌病理分级、分期中的含量：

（1）AP006284.1在TCGA数据库中前列腺癌组织和正常组织的含量

将TCGA数据库中前列腺组织样本进行分类，包括前列腺癌组织和正常组织，分析TCGA数据库中AP006284.1在前列腺癌组织和正常组织的含量。

（2）AP006284.1在不同前列腺癌病理分级的含量

分析TCGA数据库中的病人组织样本信息，将前列腺癌组织样本按照Gleason指数进行病理分级，病理分级越高代表肿瘤的恶性程度更高，分析AP006284.1在不同前列腺癌病理分级的含量。

（3）AP006284.1在不同前列腺癌病理分期的含量

分析TCGA数据库中的病人组织样本信息，将前列腺癌组织样本按照Gleason指数进行病理分级，病理分级越高代表肿瘤的恶性程度更高，分析AP006284.1在不同前列腺癌病理分级的含量。

如图2，分析TCGA数据库中AP006284.1的表达情况，与正常对照组织样相比，AP006284.1在前列腺癌患者组织样本中的含量相对较高，且AP006284.1在高病理分级、高病理分期中的肿瘤患者中的表达量更高，即AP006284.1在恶性程度更高的肿瘤中表达更为显著，差异有统计学意义。

实施例3：前列腺癌细胞系中AP006284.1 siRNA对AP006284.1敲低效率检测

使用的前列腺癌分子靶标AP006284.1的siRNA序列为：

AP006284.1 siRNA正义链序列：5＇- GCUUUGAGGCCUCCUGAUU -3＇（SEQ ID NO.6）

AP006284.1 siRNA反义链序列：5＇- AAUCAGGAGGCCUCAAAGC -3＇（SEQ ID NO.7）

使用的阴性对照(NC)的siRNA序列为

NC siRNA正义链序列：5＇- UUCUCCGAACGUGUCACGU -3＇（SEQ ID NO.8）

NC siRNA反义链序列：5＇- ACGUGACACGUUCGGAGAA -3＇（SEQ ID NO.9）

本实施例主要步骤如下：

1.细胞的siRNA转染（以六孔板为例）

将前列腺癌LNCaP或C4-2B细胞系接种到六孔板中，铺板两天后细胞密度达到约60-70%，实验全程使用无RNA酶的枪头。向EP管中加入120μL opti-MEM、200pmol siRNA、5μLHilyMax转染试剂，混匀离心，静置孵育15min后加1mL无血清培养基终止孵育，混匀后加入到六孔板中，siRNA的终浓度为50uM/mL。4-6小时后更换成完全培养基继续培养。

2. 细胞中总RNA的提取

细胞转染并培养36h后，收集细胞并提取其总RNA，提取方法同实施例1。

3.定量检测细胞中的lncRNA并进行数据分析

定量检测及数据分析方法同实施例1。

4. AP006284.1 siRNA对AP006284.1敲低效率

如图3，在LNCaP或C4-2B细胞中转染AP006284.1 siRNA之后，AP006284.1的表达量下降了60％以上。证明AP006284.1 siRNA可以有效敲低AP006284.1在前列腺癌细胞系中的表达。

实施例4： AP006284.1 siRNA显著促进前列腺癌细胞的凋亡。

本实施例的主要步骤如下：

1、细胞的siRNA转染（以六孔板为例）

转染方法同实施例3。

2、细胞凋亡实验

细胞消化后重悬，接种于六孔中，培养48h后，收集细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡。

3、AP006284.1 siRNA影响前列腺癌细胞的凋亡情况

如图4，与对照组相比，AP006284.1siRNA转染前列腺癌细胞后，早期和晚期凋亡细胞数量显著增加，表明AP006284.1 siRNA显著促进前列腺癌细胞的凋亡。

实施例5： AP006284.1 siRNA显著抑制前列腺癌细胞的迁移。

本实施例的主要步骤如下：

1、细胞的siRNA转染（以六孔板为例）

转染方法同实施例3。

2、细胞凋亡实验

转染后细胞按照10000细胞/孔的量接种于迁移小室中，细胞继续培养36h后，用结晶紫对迁移小室下层细胞进行染色，显微镜观察细胞迁移情况。

3、AP006284.1 siRNA影响前列腺癌细胞的迁移情况

如图5，与对照组相比，AP006284.1 siRNA转染前列腺癌细胞后，前列腺癌细胞迁移量明显减少，表明AP006284.1 siRNA显著抑制前列腺癌细胞的迁移。

实施例6： AP006284.1 siRNA显著抑制前列腺癌细胞的增殖。

本实施例的主要步骤如下：

1、细胞的siRNA转染（以六孔板为例）

转染方法同实施例3。

2、细胞增殖实验

转染后的细胞按照4000细胞/孔的量均匀的接种于96孔板，检测时，向96孔板内加入10μl CCK-8试剂，重新放置于培养箱中继续培养2h，使用酶标仪检测样品吸光度，波长450nm为检测波长，波长615nm为参考波长。

3、AP006284.1 siRNA影响前列腺癌细胞的增殖情况

如图6，与对照组相比，AP006284.1 siRNA转染前列腺癌细胞后，前列腺癌细胞增殖速度有所减慢，表明AP006284.1 siRNA显著抑制前列腺癌细胞的增殖。

实施例7：本前列腺癌的诊断试剂盒的应用

本实施例的主要步骤如下：

1、组织样本、血液、尿液中总RNA的提取

按照每50mg组织或200ul血液或200ul尿液使用1mL的Trizol试剂的量处理组织样本、血液、尿液，吹打均匀后转移到无RNA酶的1.5ml Ep管中；向匀浆中加入1/5体积的氯仿，振荡离心管至溶液乳化成乳白状，无分相，12000 rpm 4°C离心15min；吸取上清至新管，加入等体积异丙醇，轻轻混匀，-20°C 2h沉淀； 12000 rpm 4°C离心10min；弃上清，沿管壁轻轻加入1ml 75％乙醇，轻洗EP管，12000 rpm 4°C离心2min；弃上清，短暂离心，用枪吸去剩余上清，置于通风橱内晾干；加入适量DEPC水，用枪吹打使沉淀溶解；定量：电泳检测抽提质量，紫外分光光度计检测OD260/OD280和样品浓度；得到组织样本、血液、尿液中总RNA，放置-80°C保存。

2、检测组织样本、血液、尿液中的AP006284.1相对前列腺正常组织表达量变化

使用试剂盒中试剂，按照实施例1中反应体系与条件，使用试剂盒中前列腺正常组织cDNA作为qPCR定量检测中的对照cDNA，检测组织样本、血液、尿液中的AP006284.1相对前列腺正常组织表达量变化，分析检测结果，样本和对照间比较采用t检验，P<0.05为差异显著，判为检测样本阳性。

以上显示和描述了本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和本发明的优点。本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

序列表

<110> 复旦大学

<120> AP006284.1作为前列腺癌分子靶标的应用

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2210

<212> RNA

<213> 智人种(Homo sapiens)

<400> 1

uuucagagag gucgcuuggg uccaucagag ucucugccgu cacuaccugc aagaggggac 60

cggaagccag ugggcagggg cugggugcuc cccuacagca ccucuccucu uugaccucac 120

cugugcuuug aggccuccug auuccucccu gcuggagccc agaguuccag aggcaccuga 180

gcagggcagg cuuccaggca ggccagggcg ccccagcaga ggcacccgac gagaugggga 240

gggcugggga gggcagccug gggcaggagg gcuuggggga caggcucacc uccacacugc 300

cagucuggga ucguagcaug cggcccaccc acgaggagcg ggccagcugc aggaggcagg 360

acuucugcaa guucugcagc ucggccucca ucuccuggag cgugcgggug gucugcagca 420

gccgcuccuc caggugcucc uucuccugcu ccgagagggc cugugguugg uggugggggg 480

gugucuucug cagaaggccc ccaggccagc cccagccugg cuccccaaca ccaggacccu 540

gcccacuccc ugugccccug ccucacccac ugggcucgcu ccuucuguuc cuucaacucc 600

uggaucagcu ucuggaccug guucugcagg aguuucuccu gacuguggga gcuccuggag 660

gaggggugac cucagcagcc cccacccugc ucaggcaggg guuccuaaug ucaggucagu 720

ggcgaaggag gggagaagga ggggcuccac ugccaccuug gccccaaggg cacacaguac 780

agccccgcug gggcuggcca gccuccggcu ggucuggaca agggucuagc acccauccac 840

augcgcaggg uuagggugga ggcuauagcg uguuaacuua ggaucagggu ggagggucag 900

cgcgggcaag gaugagggua aggaucugcc ucagcgguug ggguuggggu cagacagaaa 960

ccaggagucc gggcgaggac agggcggggu uggguugggc uggggacugu gcugcagacc 1020

ucuugggcgg aagccccgcc accucuucca ggauguggca gagccgggcg uccucgccau 1080

ucuggauggc ccaccgcaag gccuggaucu ccaguucucg cugucuccac agcagccgca 1140

gugugcgagg guccagggac ucaagagcca accugcagcg gcagcagacc cugcugcuua 1200

cucaggccgg ccccuggcca ccuggcccag gaggcucacc aguccucccu cuccuccuua 1260

cugcgggucg gcagagcaga ccaccggugc gggguggggc guggugucug gcaggcacgu 1320

gggagucucg ggggcugcag gugcgccugc uggagguccc aggugaccac ugaccgacuc 1380

uugcucugug ggggacagga gagccucuuc cucgguuucu ucaaccuccu ggccagacuu 1440

gggggccauu cucaauguuc uucgggagcu gggaggggug gggggcccgu cugccgugug 1500

cgccucgugu ggccacacag guuggagcag cccaggcguc accacuuacu cacagagcgu 1560

ugcucucuga agggacccac augugggugu ccacacccgu guguuucuga ccaggcuggc 1620

gcagcagguc accacccgac augucccugg cguguacccc ugccacccag gugcuggccc 1680

uuugccugug augugguguc ccucuuucuc ucucuugucc ccccagcuca gggcccuacc 1740

cccagcacuc accugaggcc cgaccuccaa gcaggccugg gagggaaggg cuguauaccg 1800

uugccaugga uaccagcacc cagaaggggu ggggcuguuu guuaccagga gccuccaggg 1860

agaccccaga ccaggccccu agagacaggg ucuugcuccg cuguccaggc uggaaugcuu 1920

cggugugaug acagcgcacg uuaaccucga auuccugggc ucaggugauc cucccacuuc 1980

cgccuccuga cuugcugaaa cuacaggcac ccgccuccac cgccaggccc agcccacagc 2040

uccuuugacc ucagugacag gcacucaccu accugacccc caaacugaag ccucacuuuu 2100

cccagccgug uccacacccu cugggcuacc ccauuaccau gacaaguauu cccucugcuc 2160

caggagaaaa gccagguccc agaccugacc cauuaaaacc caaucauucc 2210

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

cctctcccaa gtccacacag 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gggcacgaag gctcatcatt 20

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

caggcgtcac cacttactca ca 22

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggacaccaca tcacaggcaa a 21

<210> 6

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gcuuugaggc cuccugauu 19

<210> 7

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aaucaggagg ccucaaagc 19

<210> 8

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

uucuccgaac gugucacgu 19

<210> 9

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acgugacacg uucggagaa 19

Claims (7)

1.AP006284.1前列腺癌分子靶标作为标志物在制备前列腺癌高危人群筛选、诊断或预后监测的试剂盒中的应用，所述AP006284.1的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，是通过检测被试者血清、尿液和组织样本中AP006284.1的含量，并与正常样本中AP006284.1含量相比较，以进行前列腺癌高危人群筛选、诊断及预后监测。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，是将被试者血清、尿液和组织样本中AP006284.1的含量通过总RNA提取、反转录、定量PCR进行检测。

4.根据权利要求1-3之一所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：

（1）组织样本、血液和尿液中总RNA提取试剂；

（2）反转录试剂；

（3）定量PCR试剂；

（4）所用对照为β-ACTIN，其引物序列如下：

β-ACTIN上游引物序列：5＇- CCTCTCCCAAGTCCACACAG -3＇

β-ACTIN下游引物序列：5＇- GGGCACGAAGGCTCATCATT -3＇；

（5）用于检测前列腺癌分子靶标AP006284.1的引物序列：

上游引物序列：5＇-CAGGCGTCACCACTTACTCACA -3＇

下游引物序列：5＇- GGACACCACATCACAGGCAAA -3＇。

5.AP006284.1作为前列腺癌分子靶标在筛选预防、缓解和/或治疗前列腺癌的药物中应用。

6.AP006284.1前列腺癌分子靶标的抑制剂在制备缓解和/或治疗前列腺癌的药物中的应用；所述AP006284.1的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

7.根据权利要求6所述的应用，所述药物包括AP006284.1的siRNA。

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