CN114181840B - 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法 - Google Patents

高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114181840B
CN114181840B CN202111573898.8A CN202111573898A CN114181840B CN 114181840 B CN114181840 B CN 114181840B CN 202111573898 A CN202111573898 A CN 202111573898A CN 114181840 B CN114181840 B CN 114181840B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mortierella alpina
ginseng
culture
plants
soil
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111573898.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114181840A (zh
Inventor
杨洪岩
赵敏
王岩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northeast Forestry University
Original Assignee
Northeast Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northeast Forestry University filed Critical Northeast Forestry University
Priority to CN202111573898.8A priority Critical patent/CN114181840B/zh
Publication of CN114181840A publication Critical patent/CN114181840A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114181840B publication Critical patent/CN114181840B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K17/00—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
    • C09K17/14—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing organic compounds only
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2101/00—Agricultural use

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法。本发明提供了一株高山被孢霉YW25，所述的高山被孢霉YW25的保藏编号为CGMCC No.23073。本发明所述高山被孢霉YW25能够有效促进五加科人参属植物生长。

Description

高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科 植物生长的方法
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法。
背景技术
高山被孢霉(Mortierella capitata)是一种广泛报道的具有很强脂质合成能力的产油丝状真菌，其油脂积累量超过自身干重的50％，目前已经应用于工业化生产花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)等。在禾本科作物研究中发现，M.capitata可通过改变根基因表达水平或与根际细菌间的相互作用来促进玉米的生长。对树木的研究发现，被孢霉属可以通过竞争养分或其抗生素活性来抑制苹果再植土壤中的土传病原菌。此外，被孢霉属还被证明具有降解多种除草剂，缓解土壤重金属污染，生物修复硫丹污染土壤等多种生态功能。但尚未见被孢霉在五加科人参属植物上具有促生的作用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法。本发明所述高山被孢霉YW25能够有效促进五加科人参属植物生长。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一株高山被孢霉(Mortierella alpina)YW25，所述的高山被孢霉YW25的保藏编号为CGMCC No.23073。
本发明提供了上述技术方案所述高山被孢霉YW25的培养方法，包括以下步骤：将高山被孢霉YW25接种于培养基中，在恒温条件下进行培养，得到扩繁后的高山被孢霉YW25。
优选的，所述恒温的温度为28～32℃；所述培养的转速为150～200rmp；所述培养的的时间为5～7d。
本发明提供了一种促进五加科植物生长的菌剂，所述菌剂的有效成分包括上述技术方案所述的高山被孢霉YW25。
优选的，所述菌剂中高山被孢霉YW25的浓度为1.0×106～1.0×109个孢子/mL。
本发明提供了上述技术方案所述的高山被孢霉YW25或上述技术方案所述菌剂在促进五加科植物生长和/或促进土壤转化中的应用。
优选的，所述五加科植物包括人参属植物。
优选的，所述五加科植物包括人参。
本发明提供了一种促进五加科植物生长的方法，包括以下步骤：
将上述技术方案所述菌剂施入五加科植物根际。
优选的，所述施入的方式为灌根或喷施。
有益效果：本发明提供了一株高山被孢霉YW25，所述的高山被孢霉YW25的保藏编号为CGMCC No.23073。本发明所述高山被孢霉YW25能够有效促进五加科人参属植物生长。试验结果表明，采用所述高山被孢霉YW25后，与对照相比，土壤中速效氮含量显著提高；植株叶片中叶绿素a含量提高9％，叶绿素b含量提高23.7％；植株总长度提高40.4％，总鲜重提高50％。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为高山被孢霉YW25的菌落形态图；
图2为高山被孢霉YW25的系统发育树；
图3为高山被孢霉YW25的IAA产量；
图4为铁载体定性检测的菌落图，其中A、B、C为3次重复试验；
图5为不同处理土壤速效养分含量的柱形图；
图6为人参植株图片，其中A为对照组人参，B为实验组人参。
生物保藏说明
高山被孢霉(Mortierella alpina)YW25，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2021年8月5日，保藏编号为CGMCC No.23073。
具体实施方式
本发明提供了一株高山被孢霉(Mortierella alpina)YW25，所述高山被孢霉YW25的保藏编号为CGMCC No.23073。
本发明所述高山被孢霉YW25分离自健康人参根际土壤。在本发明中，所述高山被孢霉YW25 ITS转录间隔区序列优选为SQE ID No.1所示：CCTTCCGTTAAGGGTGACCTGCGGAAGGATCATTCATAATCAAGTGTTTTTATGGCACTTTCAAAAATCCATATCCACCTTGTGTGCAATGTCATCTCTCTGGGGGCTGCCGGCTGTCAAAAGCCGTGTGGTCACCTTTGGGATTTATATCTACTCAGAACTTTAGTGATTTTGTCTGAAACATATTATGAATACTTAATTCAAAATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCATATTGCGCTCTCTGGTATTCCGGAGAGCATGCTTGTTTGAGTATCAGTAAACACCTCAACTTCCATATCTTTTTTGAAATGGGAGTTGGACTTGAGTGATCCCAACGCTTTTCCTTACCGAAAAGTGGCGGGTTACTTGAAATGCAGGTGCAGCTGGACTTTTCTCTGAGCTATAAGCATATCTATTTAGTCTGCCTAAAAACAGATTATTACCTTTGCTGCAGCTAACATAAAGGAGATTAGTTCTTGTGCTGACTGATGCAGGATTCACAAAGACAGGCTTCGGCCGACTTTGTAAACTCGATCTCAAATCAAGTAAGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAAGCGGAGGAA。
在本发明中，高山被孢霉YW25的菌落为白色，表面平坦，被丝绒状，呈裂片状生长。本发明所述高山被孢霉YW25在培养4天时，IAA(吲哚乙酸)产量最高，达到141.37mg/L；同时具有产生铁载体的能力。现有研究表明，当添加1％色氨酸为底物时，黑曲霉9-P的IAA产量最高，为60.04mg/L，远低于本发明中高山被孢霉YW25菌株，且目前被孢霉属内未见有分泌IAA的报道。可见本发明所述高山被孢霉YW25能够产生IAA和铁载体，其中，铁载体可以捕获土壤中的不溶性铁，在贫铁环境下提高植物的铁营养；IAA调控植物发育和生长的各个过程，可以通过增加根系生长和发育来改善对土壤养分和水分的吸收，可见该菌株具有促进土壤养分转化和人参植株生长的能力；而且该菌株能在土壤环境中自行增殖，具有无毒、无致病性、对环境友好、抗逆性强等特性，具有广阔的应用前景。
本发明提供了上述高山被孢霉YW25的培养方法，包括以下步骤：
将高山被孢霉YW25接种于培养基中，在恒温条件下进行培养，得到扩繁后的高山被孢霉YW25。
本发明将高山被孢霉YW25接种于培养基中，在恒温条件下进行培养，得到扩繁后的高山被孢霉YW25。
在本发明中，所述培养基的组分优选包括：每1000mL水中含有200g去皮马铃薯、20g葡萄糖。在本发明中，所述接种时，当接种量以孢子数计时，所述接种量优选为1×108个孢子/mL培养基；当接种量以菌块计时，所述接种量优选为每100mL培养基接种5～10个直径为5mm菌块，进一步优选为6～9个，更优选为7～8个。本发明所述恒温的温度优选为28～32℃，更优选为29～31℃，最优选为30℃；所述培养的转速优选为150～200rmp，更优选为160～190rpm，最优选为180rmp；所述培养的时间优选为5～7d，更优选为7d。在本发明所述条件参数下培养该菌株，能够保证该菌株的菌丝体干重最大，即菌丝体长的更为壮硕。
在本发明中，所述高山被孢霉YW25优选为经活化得到的；所述活化采用的培养基优选为PDA培养基；所述PDA培养基的制备方法优选包括以下步骤：取削皮后的马铃薯20g煮沸20分钟取汁，将汁与2g葡萄糖、1.5g琼脂和水配成100mL；所述PDA培养基的pH优选为6.8～7.0；所述活化的温度优选为30℃；所述活化的时间优选为5d；所述活化时的接种量优选为每100mL培养基接种1～3个直径为5mm菌块，进一步优选为1～2个，最优选为1个。
本发明提供给了一种促进五加科植物生长的菌剂，所述杀菌剂的有效成分包括上述的高山被孢霉YW25。在本发明中，所述菌剂中有效活性成分优选为高山被孢霉YW25的悬浮液。在本发明中，所述菌剂中高山被孢霉YW25的浓度优选为1.0×106～1.0×109个孢子/mL，进一步优选为1.0×107～1.0×109个孢子/mL，最优选为1.0×108～1.0×109个孢子/mL。
本发明所述高山被孢霉YW25具有促进土壤养分转化和人参植株生长的能力；而且该菌株能在土壤环境中自行增殖，具有无毒、无致病性、对环境友好、抗逆性强等特性。因此，本发明所述高山被孢霉YW25或含有所述高山被孢霉YW25的菌剂能够用于促进植物生长和促进土壤转化。
本发明提供了上述的高山被孢霉YW25或上述菌剂在促进植物生长和/或促进土壤转化中的应用。在本发明中，所述促进土壤养分转化优选为土壤中硝态氮含量，降低铵态氮含量。在本发明中，所述五加科植物优选包括人参属植物，更优选包括人参。本发明具体实施例结果表明：采用本发明所述高山被孢霉YW25能够使人参植株总长度提高56％，总鲜重提高96％，叶片中的植株叶片中叶绿素a含量提高9％，叶绿素b含量提高23.7％；同时该菌株可显著提高植株根际土壤中硝态氮含量，降低铵态氮含量。
本发明提供了一种促进五加科植物生长的方法，包括以下步骤：将上述菌剂施入五加科植物根际。
在本发明中，施入的方式优选为灌根或喷施；以菌剂中高山被孢霉YW25发酵液的体积计，所述灌根或喷施的用量优选为2～20L/亩，更优选为2.1～18L/亩，最优选为2.3～12L/亩。在本发明具体实施例中，采用盆栽的方式和田间试验的方式进行的验证，实验过程中优选将菌剂与水混合后，得稀释菌剂；将稀释菌剂第一次施入五加科植物根际，第一次施入后2周五加科植物根际后第二次将所述稀释菌剂施入五加科植物根际。
当采用盆栽的方式验证时，所述菌剂与水的比例优选为1：100，即将菌剂稀释100倍使用；采用的花盆的上口直径优选为19cm，高优选为16cm，底直径为优选为14cm，面积为优选为0.028m2，体积优选为700mL；在第一次施入五加科植物根际和第二次施入五加科植物根际过程中，所述施入的方式优选为灌根；以菌剂中高山被孢霉YW25发酵液的体积计，所述灌根的用量每盆的灌根的用量优选为0.1～0.5mL，更优选为0.2mL。
当采用田间试验的方式验证时，所述菌剂与水的比例优选为1：100，即将菌剂稀释100倍使用；在第一次施入五加科植物根际和第二次施入五加科植物根际过程中，所述施入的方式优选为喷施；以菌剂中高山被孢霉YW25发酵液的体积计，所述喷施的用量25～50mL/3m2，进一步优选为30～45mL/3m2，更优选为35～40mL/3m2。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1菌株Ⅰ的分离纯化
PDA平板组成为：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g和水1000mL。
取人参根际土壤10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振摇20min，得到土壤稀释液；
将200μL土壤稀释液涂布于PDA平板，置于30℃培养箱培养5d。
挑取培养后长出的单个菌落接种于新的PDA平板上继续培养，培养时间为5d，培养温度为30℃，之后重复将单个菌落接种于新的PDA平板上接续培养，培养时间为5d，培养温度为30℃，直至平板上无杂菌；
于PDA平板培养7d后，得到菌株Ⅰ，该菌株的菌落形态如图1所示，菌落为白色，表面平坦，被丝绒状，呈裂片状生长。
实施例2菌株Ⅰ的鉴定
使用Solarbio公司D2300真菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株Ⅰ的DNA，并委托哈尔滨擎科生物公司进行测序鉴定，测定ITS序列，即转录间隔区序列，测得的序列为SEQ IDNo.1所示；其近缘种相似率见表1，其中表1中的相似率采用NCBI中Highly similarsequences(megablast)的方法计算，可知该菌株与Mortierella alpina JZ-157和Mortierella alpina OVR3的相似率达到99.22％，与Mortierella alpina LZ15-01的相似率为98.92％，同时根据最大似然法于MEGA7构建系统发育树，详见图2，发现该菌株属于高山被孢霉。因此，将菌株Ⅰ命名为高山被孢霉YW25。
表1近缘种相似率
种名 相似率(％)
MortierellaalpinaJZ-157 99.22
MortierellaalpinaOVR3 99.22
MortierellaalpinaLZ15-01 98.92
实施例3高山被孢霉YW25生产IAA和铁载体的测定
IAA的定量检测：将6块长有高山被孢霉YW25菌丝的菌块(实施例1所得的PDA平板上的菌块，直径为5mm)接种于100ml含有3mM色氨酸的PDA液体培养基中，在30℃恒温摇床中以180rmp速率下进行培养。
分别取2mL培养2、3、4和5d菌液10000r/min，4℃离心10min，将上清液与Salkowski比色液等体积混合，室温避光静置30min，在波长535nm处分别检测其吸光值，并设置三次重复，结果求均值，高山被孢霉YW25的IAA产量见表2和图3。
表2不同发酵天数下IAA产量
天数 2d 3d 4d 5d
IAA(mg/L) 25.27±18.6 131.15±6.1 141.37±10.6 29.48±6.68
由表2和图3记载的可知，高山被孢霉YW25在培养4d时，IAA产量最高，为141.37mg/L。
铁载体的定性检测：
CAS蓝色定性平板的制备方法：取0.12g CAS(络天青)溶于100mL去离子水中，并与20mL 1mmol/L FeCl3溶液混匀，得溶液a；
取0.15g十六烷基三甲基溴化铵溶于80mL去离子水中，得溶液b；
将得到的溶液a缓慢加入溶液b中，充分混合均匀即得到200mL染液c；
取0.1mol/L磷酸盐溶液(2.427gNa2HPO4·12H2O、0.5905g NaH2PO4·2H2O、0.075gKH2PO4、0.125g NaCl、0.25g NH4Cl和去离子水100mL)10mL、哌嗪二乙醇磺酸6.04g加入盛有150mL蒸馏水的干净三角瓶，混匀后调pH至6.8，最后加入琼脂4g，得培养基d；
将染液c、培养基d、1mmol/L CaCl2、1mmol/L MgSO4·7H2O、20％葡萄糖、10％酪蛋白氨基酸进行灭菌处理，灭菌的温度为121℃，时间为15min。分别量取上述灭菌所得的1mmol/L CaCl20.2mL、1mmol/L MgSO4·7H2O 4mL、10％酪蛋白氨基酸6mL、20％葡萄糖溶液2mL至上述灭菌所得的培养基d中，再缓慢加入20mL上述灭菌所得的染液c，充分摇匀后获得蓝色定性检测培养基，立即倒平板即为CAS蓝色定性平板。
将1块长有高山被孢霉YW25菌丝的菌块(实施例1所得的PDA平板上的菌块，直径为5mm)接种于CAS蓝色定性平板，于30℃恒温培养箱，培养7d。然后观察菌落周围形成橘黄色晕圈情况，晕圈越大、颜色越深，表明铁载体产量越高，设置三次重复，检测结果如图4所示：菌落周围出现明显橘黄色晕圈，表明所述被孢霉具有铁载体产生能力。
实施例4盆栽试验
PDA液体培养基组成为：去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、水1000mL；
将6块长有高山被孢霉YW25菌丝的菌块(实施例1所得的PDA平板上的菌块，直径为5mm)接种于PDA液体培养基中，在恒温摇床中30℃，180rmp，培养7d。纱布过滤除去菌丝体，得到1.2×108个孢子/mL的孢子悬液，用于人参盆栽接种，盆栽接种所用花盆的直径为上口19cm，下底为14cm，高度为16cm，面积为0.28m2，体积为700mL。人参种植两周后，采用灌根的方式，将0.1mL孢子悬液(1.2×108个孢子/mL)，用水稀释至10mL，灌根于花盆中，记为实验组；10mL蒸馏水接种为对照组，每组设置3次重复，间隔两周后，再灌根一次，再灌根的灌根量与第一次灌根量相同。
人参种植70d后，收集各处理根际土壤，进行土壤速效养分的测定，测定方法如下：
采用NaCl溶液浸提-锌还原-紫外分光光度法测定土壤硝态氮，用1mol/LNaCl溶液浸提土壤中的NO3 -，之后使用紫外分光光度计在波长210nm比色测定NO3 --N含量；采用靛酚蓝比色法测定土壤铵态氮含量，用2mol/LKCl溶液浸提吸附在土壤胶体上的NH4 +及水溶性NH4 +，浸提液中的NH4 +与次氯酸盐和苯酚作用生成水溶性染料靛酚蓝后，之后使用分光光度计在波长625nm比色测定NH4 +-N含量；采用盐酸-硫酸浸提比色法测定有效磷含量，用0.05mol/L盐酸-0.025mol/L硫酸来浸提土壞中的磷酸根离子和一些弱酸性磷酸盐化合物，经钼锑抗显色剂显色后，使用分光光度计在波长700nm处测定吸光值，并计算有效磷含量，土壤速效养分含量检测结果见表3和图5。
表3不同处理下土壤速效养分含量
硝态氮(mg/L) 铵态氮(mg/L) 有效磷(mg/L)
对照组 14.76±0.67 2.61±0.33 1.30±0.05
实验组 26.94±2.71 0.94±0.15 1.24±0.07
由表3和图5记载的可知，实验组(接种高山被孢霉YW25)可显著提高植株根际土壤中硝态氮含量，降低铵态氮含量，对于有效磷含量无显著影响。
人参种植90d后，将植株挖出洗净，并用吸水纸吸干表面水分，然后使用刻度尺和天平测量植株长度及鲜重，三次重复求均值，植株长度及鲜重的测定结果见表4和图6。
表4人参植株生物学性状
由图4和图6记载的可知，实验组(接种高山被孢霉YW25)人参植株显著增长，根系更发达，相较于对照组，实验组的植株总长度提高40.4％，总鲜重提高50％。
人参种植90d后，叶绿素含量的测定方法为选取实验组和对照组中代表普遍情况的叶片，即大小均一，生长状况类似的叶片，擦净、剪碎、混匀，分别称取0.2g放入研钵中，加少量石英砂、CaCO3及2～3mL 80％的丙酮，研磨成匀浆，再加80％丙酮5mL继续研磨，全部移入10mL棕色容量瓶，80％丙酮洗净研钵、研棒，分别在波长663、645nm下用紫外分光光度计测定吸光值，叶片设3次重复，然后求均值，测定结果见表5。计算公式如下：
叶绿素a:Ca＝12.21A663-2.81A645，式Ⅰ；其中Ca为叶绿素a，A663为663nm下的吸光度，A645为645nm下的吸光度；
叶绿素b:Cb＝20.13A645-5.03A663，式Ⅱ；其中Cb为叶绿素a，A663为663nm下的吸光度，A645为645nm下的吸光度。
表5不同处理下叶片叶绿素含量
叶绿素a(mg/g) 叶绿素b(mg/g)
对照组 1.210±0.02 0.839±0.12
实验组 1.319±0.02 1.038±0.21
由表5记载的结果表明，与对照组相比，实验组的植株叶片中叶绿素a含量提高9％，叶绿素b含量提高23.7％。
由上述实施例记载的可知，本发明所述高山被孢霉YW25能够有效促进五加科人参属植物生长。试验结果表明，采用所述高山被孢霉YW25后，与对照相比，土壤中速效氮含量显著提高；植株叶片中叶绿素a含量提高9％，叶绿素b含量提高23.7％；植株总长度提高40.4％，总鲜重提高50％
实施例5
一、菌剂制作
1.菌种活化：将实施例1得到的高山被孢霉YW25接种到活化培养基PDA培养基(PDA培养基的制作方法：取削皮后的马铃薯20g煮沸20分钟取汁，将汁与2g葡萄糖、1.5g琼脂和水配成100mL，pH 6.8～7.0，121℃灭菌15min)上，接种量为1块直径为5mm的菌块，在30℃培养5天。
2.菌液制备：将上述活化好的菌种按1×108个孢子/mL接种至灭菌的液体发酵培养基(1L液体发酵培养基中，含有25g玉米粉，15g酵母粉，2g的CaC03，0.2g的MgSO4，0.1gMnSO4)，30℃培养180rpm振荡培养7d，得到高山被孢霉YW25悬液，内部孢子数量采用血球计数板确定，浓度为3×108个孢子/mL，用水稀100倍后作为菌剂施入田间，得菌剂，即微生物液体菌剂。
二、微生物菌剂大田试验的应用
1、供试菌液：上述的微生物液体菌剂。
2、供试作物与防治对象：三生人参苗。
3、试验地点：吉林省延边市龙井人参种植区
4、大田试验：
试验设计及安排：
小区设置：宽1.5m，长2m；其中处理1为对照(水)，处理2为生物菌液2500mL/3m2(即25mL高山被孢霉YW25悬液用水定容至2500mL)，处理3为为生物菌液5000mL/3m2(即50mL高山被孢霉YW25悬液用水定容至5000mL)；每个处理重复3次，共计9个小区，随机排列，于人参种植2周后，贴植株根部喷施，隔两周后再次喷施一次，再喷施的喷施量与第一次喷施的喷施量相同。
试验调查及计算方法：
人参栽植后，于9月中旬收获，每小区取5株，将植株挖出洗净，并用吸水纸吸干表面水分，使用刻度尺和天平测量植株长度及鲜重，三次重复共15株求均值，植株长度及鲜重的测定结果见表6。
表6田间种植人参植株生物学性状
从表6记载的可知，高山被孢霉YW25在田间施用后对人参根部生长及鲜重增加方面都有显著的效果。
由上述实施例记载的可知，本发明所述高山被孢霉YW25能够有效促进五加科人参属植物生长。试验结果表明，采用所述高山被孢霉YW25后，与对照相比，土壤中速效氮含量显著提高；植株叶片中叶绿素a含量提高9％，叶绿素b含量提高23.7％；植株总长度提高40.4％，总鲜重提高50％。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 东北林业大学
<120> 高山被孢霉YW25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 677
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ccttccgtta agggtgacct gcggaaggat cattcataat caagtgtttt tatggcactt 60
tcaaaaatcc atatccacct tgtgtgcaat gtcatctctc tgggggctgc cggctgtcaa 120
aagccgtgtg gtcacctttg ggatttatat ctactcagaa ctttagtgat tttgtctgaa 180
acatattatg aatacttaat tcaaaataca actttcaaca acggatctct tggctctcgc 240
atcgatgaag aacgcagcga aatgcgatac gtaatgtgaa ttgcagaatt cagtgaatca 300
tcgaatcttt gaacgcatat tgcgctctct ggtattccgg agagcatgct tgtttgagta 360
tcagtaaaca cctcaacttc catatctttt ttgaaatggg agttggactt gagtgatccc 420
aacgcttttc cttaccgaaa agtggcgggt tacttgaaat gcaggtgcag ctggactttt 480
ctctgagcta taagcatatc tatttagtct gcctaaaaac agattattac ctttgctgca 540
gctaacataa aggagattag ttcttgtgct gactgatgca ggattcacaa agacaggctt 600
cggccgactt tgtaaactcg atctcaaatc aagtaagact acccgctgaa cttaagcata 660
tcaataaagc ggaggaa 677

Claims (8)

1.一株高山被孢霉(Mortierellaalpina)YW25，其特征在于，所述的高山被孢霉YW25的保藏编号为CGMCCNo.23073。
2.权利要求1所述高山被孢霉YW25的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将高山被孢霉YW25接种于培养基中，在恒温条件下进行培养，得到扩繁后的高山被孢霉YW25。
3.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于，所述恒温的温度为28～32℃；所述培养的转速为150～200rmp；所述培养的时间为5～7d。
4.一种促进人参生长的菌剂，其特征在于，所述菌剂的有效成分包括权利要求1所述的高山被孢霉YW25。
5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中高山被孢霉YW25的浓度为1.0×106～1.0×109个孢子/mL。
6.权利要求1所述的高山被孢霉YW25或权利要求4或5所述菌剂在促进人参生长和/或促进土壤转化中的应用，其特征在于，所述土壤转化的类型为提高植株根际土壤中硝态氮含量和降低铵态氮含量。
7.一种人参生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求4或5所述菌剂施入人参根际。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述施入的方式为灌根或喷施。
CN202111573898.8A 2021-12-21 2021-12-21 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法 Active CN114181840B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111573898.8A CN114181840B (zh) 2021-12-21 2021-12-21 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111573898.8A CN114181840B (zh) 2021-12-21 2021-12-21 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114181840A CN114181840A (zh) 2022-03-15
CN114181840B true CN114181840B (zh) 2023-10-20

Family

ID=80605759

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111573898.8A Active CN114181840B (zh) 2021-12-21 2021-12-21 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114181840B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016187703A1 (en) * 2015-05-22 2016-12-01 Institut National De La Recherche Scientifique Bacterial and fungal metabolites possessing anti-microbial activity against xanthomonas species, compositions, methods, kits and uses relating to same
CN108315291A (zh) * 2017-01-17 2018-07-24 华中科技大学 一种高山被孢霉的生长调节剂及发酵方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016187703A1 (en) * 2015-05-22 2016-12-01 Institut National De La Recherche Scientifique Bacterial and fungal metabolites possessing anti-microbial activity against xanthomonas species, compositions, methods, kits and uses relating to same
CN108315291A (zh) * 2017-01-17 2018-07-24 华中科技大学 一种高山被孢霉的生长调节剂及发酵方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
高效利用木糖产油的氮离子注入Mortierella alpina诱变选育研究;张腊梅;袁成凌;李娟;王鹏;王丽;郑之明;;激光生物学报(第05期);全文 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114181840A (zh) 2022-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107446847B (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用
CN111944716B (zh) 一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用
US20220369648A1 (en) Endophytic falciphora oryzae fo-r20 and its application
CN114437982A (zh) 一种提高土壤肥效的解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN114806895B (zh) 内生真菌m-b927在提高水稻谷粒产量中的应用
CN115927034A (zh) 一种防治柑橘溃疡病的枯草芽孢杆菌、菌剂及其应用
US20220386625A1 (en) Application of endophytic falciphora oryzae fo-r20 in controlling panicle blast
CN115612638A (zh) 一株罗氏假单胞菌oor2-11菌株及其应用
CN111373899B (zh) 一种利用深色有隔内生真菌浸种促进植物幼苗生长发育的方法
CN115725419B (zh) 一株解磷蓝莓内生木霉菌及其应用
CN114181840B (zh) 高山被孢霉yw25及其培养方法、菌剂及其应用和促进五加科植物生长的方法
CN113999778B (zh) 一种深绿木霉微菌核及其制剂的制备方法和应用
CN111471627B (zh) 一株粘质沙雷氏菌bsz及应用
CN112812988B (zh) 一种绿针假单胞菌菌株、生防菌剂及其制备方法与应用
CN113897316A (zh) 地衣芽孢杆菌BLc06及其制备的功能型瓜果育苗生物基质和应用
CN111909863B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其用途
CN115851524B (zh) 一株增加农作物产量的菌株及其应用
CN113481104B (zh) 一种抗黄曲霉促作物生长的无孢子木霉制剂及其制备与应用
CN115005216B (zh) 纳米几丁质在促进瓜类果蔬生产中的应用
CN117431166B (zh) 短密木霉菌新菌株tb2及其应用
CN112920963B (zh) 一种防治棉花枯萎病的生防菌株、生防菌剂及其制备方法与应用
CN116769607B (zh) 内生真菌a21-1-1在防治水稻稻瘟病中的应用
AU2021104551A4 (en) Enterobacter ludwigii PN6 and its application
CN107164266B (zh) 一株小单孢菌属放线菌及其应用
TW202145897A (zh) 一種芽孢桿菌所屬之貝萊斯菌株、微生物製劑及該微生物製劑之使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant