CN114177176A - 化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及化合物盐酸赛庚啶在预防或治疗非洲猪瘟中的应用。本发明发现化合物盐酸赛庚啶能够显著抑制ASFV复制。并且发现盐酸赛庚啶不仅抑制靶标蛋白D1133L的转录和蛋白表达，而且可以降低p30和p72的转录和蛋白表达水平，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV的早、晚期感染。因此，化合物盐酸赛庚啶可用于预防或治疗非洲猪瘟。

Description

化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用
技术领域
本发明属于非洲猪瘟治疗技术领域，具体涉及一种化合物盐酸赛庚啶(Cyproheptadine hydrochloride)用于预防或治疗非洲猪瘟的新用途。
背景技术
非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus， ASFV)感染引起的的一种急性、高度接触性传染性疾病，死亡率高达100％。自2018年传入中国，对国内养猪业造成重大的经济损失。目前还无商业化疫苗，所以以合理的成本开发有效的抗病毒药物对治疗非洲猪瘟具有重要意义。尽管目前已报道了各种类型的活性抗 ASFV药物，但尚未对这些化合物的体内药效进行评估。
ASFV是一种双链DNA病毒，主要在单核细胞和巨噬细胞中复制，编码50多种结构蛋白和100多种非结构蛋白。D1133L是其编码的解旋酶之一，属于非结构蛋白，对病毒复制发挥着至关重要的作用，是抗病毒药治疗的潜在靶点。p30和p72是ASFV中的关键结构蛋白，能够在病毒攻击易感细胞后中和病毒，抑制病毒的依附、复制及内化的过程。其中p30是构成病毒颗粒的主要结构蛋白，也是重要的表面抗原，与宿主细胞嗜性、致病性与免疫原性密切相关。p30表达于ASF的感染早期，通常在感染后2～4h产生，并持续表达于整个感染期间，参与病毒内化，与病毒入侵宿主细胞有关。而p72是一种衣壳蛋白，是非洲猪瘟病毒的主要结构蛋白，能保护病毒核酸免受环境中核酸酶或其他理化因素破坏，同时参与病毒的感染过程且具有良好的免疫原性，该蛋白产生于病毒感染晚期，p72作为 ASFV的重要抗原蛋白，是病毒二十面体的主要成分，对于病毒衣壳的形成至关重要，参与病毒结合细胞。
Cyproheptadine hydrochloride中文名为盐酸赛庚啶，分子式为C21H24ClNO。CAS号为41354-29-4。结构式为
Figure RE-GDA0003470517190000011
是一种抗组胺药，是5-羟色胺(5-HT)和组胺2的拮抗剂，并有明显的抗胆碱和中枢抑制作用。临床上主要用于治疗皮肤粘膜的过敏性疾病。Okuma Hirohisa等研究学者在学术文章中报道过该化合物(具体参见OkumaHirohisa,Iijima Kazuyuki,Yasuda Takashi et al.Preventive effect ofcyproheptadine hydrochloride in refractory patients with frequent migraine.[J].Springerplus,2013,2:573.)，但目前并没有研究表明Cyproheptadinehydrochloride具有抗非洲猪瘟病毒作用。
发明内容
本发明在对虚拟筛选的靶向ASFV D1133L蛋白的小分子抑制剂进行基于细胞的抗病毒活性验证时发现化合物盐酸赛庚啶(Cyproheptadine hydrochloride)能够显著抑制ASFV 复制。并且发现Cyproheptadine hydrochloride不仅抑制靶标蛋白D1133L的转录和蛋白表达，而且可以降低p30和p72的转录和蛋白表达水平，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV 的早、晚期感染。因此，化合物Cyproheptadine hydrochloride可用于预防或治疗非洲猪瘟。
所述化合物Cyproheptadine hydrochloride的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure RE-GDA0003470517190000021
首先，本发明的目的之一在于提供化合物Cyproheptadine hydrochloride在制备治疗非洲猪瘟药物中的应用。
其次，本发明的另一目的在于提供化合物Cyproheptadine hydrochloride在制备预防非洲猪瘟药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供化合物Cyproheptadine hydrochloride在制备抑制非洲猪瘟病毒基因转录药物中的应用。所述基因为非洲猪瘟病毒D1133L基因、p30基因、p72基因。
本发明的再一目的在于提供化合物Cyproheptadine hydrochloride在制备抑制非洲猪瘟病毒蛋白表达药物中的应用。所述蛋白为非洲猪瘟病毒D1133L蛋白、p30蛋白、p72蛋白。
优选地，所述药物为化合物Cyproheptadine hydrochloride加入药学上可接受的载体和/ 或辅料，制成片剂、喷雾剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、针剂、混悬剂的任一种剂型。
本发明的有益效果是：
本发明在对虚拟筛选的靶向ASFV D1133L蛋白的小分子抑制剂进行基于细胞的抗病毒活性验证时发现化合物Cyproheptadine hydrochloride能够显著抑制ASFV复制。并且发现Cyproheptadine hydrochloride不仅抑制靶标蛋白D1133L的转录和蛋白表达，而且可以降低p30和p72的转录和蛋白表达水平，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV的早、晚期感染。因此，化合物Cyproheptadine hydrochloride可用于预防或治疗非洲猪瘟。
附图说明
图1为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒荧光图。GFP和TRANS 行分别表示在绿色荧光和白光下观察，ASFV列、DMSO列、12μM、18μM、22μM和50μM 表示细胞分别用ASFV荧光毒、ASFV荧光毒+DMSO、ASFV荧光毒混合用DMSO溶解的不同浓度的Cyproheptadine hydrochloride(12μM、18μM、22μM、50μM)。
图2为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒拷贝数结果图。
图3为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒TCID50结果图。
图4为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒D1133L转录。
图5为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒p30和p72转录。
图6为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒D1133L蛋白表达。
图7为化合物Cyproheptadine hydrochloride抑制非洲猪瘟病毒p30和p72蛋白表达。
图8为化合物Cyproheptadine hydrochloride细胞毒性检测结果图。
保藏信息：
保藏时间：2020年12月21日；
保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心；
保藏编号：CCTCC NO:V202096；
保藏单位地址：中国武汉大学；
分类命名：II型非洲猪瘟病毒株ASFV CN/GS 2018。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。但本发明的保护范围并不局限于以下实施例所述。
以下实施例中所述的实验获得生物安全许可和非洲猪瘟实验室活动许可：
中国农业科学院兰州兽医研究所根据生物安全3级实验室(BSL-3)和非洲猪瘟相关生物安全的相关要求，经兰州兽医研究所生物安全委员会、实验动物伦理委员会、中国农业科学院生物安全委员会、兰州兽医研究所实验动物伦理委员会、兰州兽医研究所生物安全委员会逐级上报，获得农业部关于开展高致病性ASFV病原及动物研究许可，并已在农业农村部备案，符合国家生物安全等级的要求。
以下实施例中所述的实验细胞、病毒来源：
原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)取自5周龄左右的仔猪，无菌采集PAM细胞后，用红细胞裂解液(购自Biosharp公司)去除红细胞，低速离心后，弃上清，将细胞沉淀重悬于含有10％FBS(购自Gibco公司)的RPMI 1640完全培养基(购自Gibco公司)中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。
ASFV为病毒株CN/GS 2018，ASFV CN/GS 2018分离株来自国家非洲猪瘟区域实验室 (兰州)，属于基因II型，病毒效价为5×107TCID50/mL，为PAM细胞扩繁后的第4代种毒，于2020年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：V202096。ASFV 荧光毒为含有eGFP筛选表达盒基因片段、缺失了MGF-360-9L基因的ASFV荧光病毒，其制备方法参考公开号为CN 111593028 A的中国发明专利申请。
化合物Cyproheptadine hydrochloride购自上海陶术生物科技有限公司。
实施例中其他试剂如果没有特别说明均为常见的市售试剂；实施例中的操作如果没有特别说明均是本领域知晓的操作方法。
实施例1化合物Cyproheptadine hydrochloride对非洲猪瘟病毒复制和基因的转录表达的影响
1.荧光下观察化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV感染和复制的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)，实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(12μM、18μM、22μM、50μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI ＝0.5)混合DMSO(＜1％)处理细胞。另外，将只用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)处理细胞的作为感染空白组。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h后显微镜下观察荧光变化。
实验结果如图1所示，图1A表明，在荧光下和白光下，感染对照组和感染空白组均没有显著差异，表明DMSO对细胞的感染和复制没有影响。
图1B显示，感染对照组(DMSO)中荧光较亮，而用不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride处理后荧光逐渐变暗，其中当用50μM的Cyproheptadine hydrochloride处理后，荧光已完全消失。上述结果表明，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够显著抑制ASFV 的感染和复制，且随着化合物浓度的增加，抑制效果愈加明显。
2.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV感染和复制过程中的病毒基因组拷贝数的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)，实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(14μM、18μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合 DMSO(＜1％)处理细胞。另外，将只用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)处理细胞的作为感染空白组。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h，然后将细胞板置于-80℃冻融三次灭活后用以ASFVP72基因为靶点的荧光定量PCR检测病毒基因组拷贝数。RT-qPCR反应体系总体积20μL，包括10μL的Premix Ex Taq(2×)，0.2μL的ROX Reference DyeⅡ(50×)， 0.6μL的引物，0.1μL的ASFV探针引物，2μL的模板，补充无菌去离子水到20μL。反应条件为：50℃，2min；95℃，2min；95℃，15s；58℃，1min；共45个循环。
其中，ASFV-P72上游引物：5’-GATACCACAAGATCAGCCGT-3’；下游引物：5’-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-3’；ASFV探针引物：5’-CCACGGGAGGAATACCAA CCCAGTG-3’。
ASFV病毒基因组拷贝数实验结果如图2所示，图2A是感染对照组与感染空白组对病毒复制的抑制效果比较图，该图表明DMSO对病毒复制的抑制效果与空白组相比差异不显著。
图2B是不同浓度化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV复制的抑制效果对比图，该图表明，加入化合物Cyproheptadine hydrochloride后ASFV病毒基因组拷贝数有所降低，且化合物Cyproheptadine hydrochloride剂量为18μM时，对ASFV病毒基因组拷贝数的抑制率高于50％。
3.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV的TCID50的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)，实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(12μM、18μM、22μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合DMSO(＜1％)处理细胞。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h后将细胞板置于-80℃冻融三次后作为样品，分别用无血清RPMI 1640连续10倍稀释，做6个稀释度，每个稀释度重复8个孔，接种到PAM细胞进行培养，将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养5天，每天观察各细胞培养孔中荧光变化，计算TCID50。
实验结果如图3所示，12μM、18μM、22μM化合物Cyproheptadine hydrochloride均降低了ASFV荧光毒TCID50，当化合物Cyproheptadine hydrochloride浓度为22μM时，ASFV荧光毒TCID50与对照相比，差异显著。
4.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV的D1133L RNA转录水平的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)；实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(6μM、12μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合 DMSO(＜1％)处理细胞。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h后收集细胞培养物，离心，弃上清。用Trizol法提取总RNA，使用RT Primer Mix试剂盒合成cDNA后，用 RT-qPCR方法检测D1133L RNA的表达差异。
RT-qPCR反应体系总体积10μL，包括0.4μL的上下游引物，2μL的cDNA，5μL的TBGreenTM Premix Ex Taq(TaKaRa)，补充无菌去离子水到10μL。反应条件为：95℃，2min； 95℃，10s，60℃，34s，40个循环。
其中，扩增D1133L的引物序列为：上游引物：5’-CTTCTGGAAAACGGGGTACA-3’；下游引物：5’-CAAGATAAGAACCCCCGACA-3’。
实验结果如图4所示，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够抑制非洲猪瘟病毒基因中D1133L的RNA表达水平，当化合物Cyproheptadine hydrochloride剂量为12μM时，对 D1133L RNA表达水平的抑制率高于50％。
5.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV的p30和p72的RNA转录水平的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)；实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(p30:6μM和12μM；p72：12μM和25μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合DMSO(＜1％)处理细胞。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养 48h后收集细胞培养物，离心，弃上清。用Trizol法提取总RNA，使用RT Primer Mix试剂盒合成cDNA后，用RT-qPCR方法检测p30和p72 RNA的表达差异。
RT-qPCR反应体系总体积10μL，包括0.4μL的上下游引物，2μL的cDNA，5μL的TBGreenTM Premix Ex Taq(TaKaRa)，补充无菌去离子水到10μL。反应条件为：95℃，2min； 95℃，10s，60℃，34s，40个循环。
其中，扩增p30的引物序列为：上游引物：5’-CTCCGATGAGGGCTCTTGCT-3’；下游引物：5’-AGACGGAATCCTCAGCATCTTC-3’；
扩增p72的引物序列为：上游引物：5’-TGCGATGATGATTACCTT-3’；下游引物： 5’-ATTCTCTTGCTCTGGATAC-3’。
实验结果如图5所示，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够抑制非洲猪瘟病毒基因中p30和p72的RNA表达水平，且化合物Cyproheptadine hydrochloride剂量为6μM时，对p30 RNA表达水平的抑制率高于50％，化合物Cyproheptadine hydrochloride剂量为12μM 时，对p30 RNA表达水平的抑制率高于95％；化合物Cyproheptadine hydrochloride剂量为 12μM时，对p72 RNA表达水平的抑制率高于50％，化合物Cyproheptadinehydrochloride 剂量为25μM时，对p72 RNA表达水平的抑制率高于95％。
6.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV的D1133L的蛋白水平的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)，实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(16μM、20μM)处理细胞，感染对照组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合DMSO(＜1％)处理细胞。另外，将只用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)处理细胞的作为感染空白组。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h后收集细胞培养物，离心，弃上清。提取总蛋白，用western-blotting方法检测D1133L蛋白的表达差异。
实验结果如图6所示，与未感染对照组(Mock组)相比，感染空白组(ASFV)、感染对照组(DMSO)和实验组(Cyproheptadine hydrochloride+ASFV)的D1133L蛋白表达水平增加；但是，相对于感染对照组(DMSO)，实验组(Cyproheptadine hydrochloride+ASFV)中D1133L 蛋白表达水平显著降低。结果表明，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够显著抑制非洲猪瘟病毒基因中D1133L蛋白表达水平。
7.化合物Cyproheptadine hydrochloride对ASFV的p30和p72的蛋白表达水平的影响
在12孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×106/孔)，实验组用ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合用DMSO(＜1％)溶解的不同浓度的Cyproheptadinehydrochloride(p30：8μM、12μM、16μM；p72：20μM、20μM)处理细胞后，感染对照组用 ASFV荧光毒(MOI＝0.5)混合DMSO(＜1％)处理细胞。另外，将只用ASFV荧光毒(MOI ＝0.5)处理细胞的作为感染空白组。然后将细胞板置于37℃，5％CO2条件培养48h后收集细胞培养物，离心，弃上清。提取总蛋白，用western-blotting方法检测p30和p72蛋白的表达差异。
实验结果如图7所示，与未感染对照组(Mock组)相比，感染空白组(ASFV)、感染对照组(DMSO)和实验组(Cyproheptadine hydrochloride+ASFV)的p30和p72蛋白表达水平增加；但是，相对于感染对照组(DMSO)，实验组(Cyproheptadine hydrochloride+ASFV)中p30和p72蛋白表达水平显著降低。结果表明，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够显著抑制非洲猪瘟病毒基因中p30和p72蛋白表达水平。
上述结果表明，化合物Cyproheptadine hydrochloride能够显著抑制ASFV的RNA转录和蛋白表达水平，阻止病毒入侵宿主细胞，可用于抑制ASFV的早、晚期感染。
实施例2化合物Cyproheptadine hydrochloride的细胞毒性
在PAM细胞上用MTT法对小分子化合物Cyproheptadine hydrochloride进行细胞毒性检测。在96孔板中用RPMI 1640+10％FBS培养基培养猪肺泡巨噬细胞(PAM，2×105/孔)，向孔中加入DMSO溶解的不同浓度的Cyproheptadine hydrochloride(8μM、20μM、24μM、50μM)处理细胞作为实验组，同时设置空白对照组(培养基+DMSO)和阴性对照组(细胞+ 培养基+DMSO)。将培养板在培养箱中孵育48后，向板的每个孔中加入10μL的MTT溶液，将培养板在培养箱中继续孵育4小时后，向板的每个孔中加入100μL的Formazan溶解液，适当混匀，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现Formazan全部溶解。然后读取酶标仪测量570nm处的吸光度，根据公式[((OD实验组-OD空白对照组)/(OD阴性对照-OD空白对照))×100％]计算每种浓度的细胞存活率。另外还测定了最终浓度的DMSO的细胞毒性。
结果如图8所示，化合物Cyproheptadine hydrochloride对细胞的毒性较小，甚至使用剂量达到50μM时，细胞存活率活依然可达到50％以上，细胞毒性小，安全性较好。DMSO对细胞存在轻微毒性。综上所述，本发明所述化合物Cyproheptadine hydrochloride对非洲猪瘟病毒具有较好的抑制作用，并且细胞毒性小，安全性较好，可用于预防或治疗非洲猪瘟。
以上之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，并非限制本发明的实施范围故凡依本发明专利范围的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括于本发明申请专利范围。

Claims (7)

1.化合物盐酸赛庚啶在制备治疗非洲猪瘟药物中的应用，其特征在于，所述化合物盐酸赛庚啶的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0003392428320000011
2.化合物盐酸赛庚啶在制备预防非洲猪瘟药物中的应用，其特征在于，所述化合物盐酸赛庚啶的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0003392428320000012
3.化合物盐酸赛庚啶在制备抑制非洲猪瘟病毒基因转录药物中的应用，其特征在于，所述化合物盐酸赛庚啶的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0003392428320000013
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因为非洲猪瘟病毒D1133L基因、p30基因、p72基因。
5.化合物盐酸赛庚啶在制备抑制非洲猪瘟病毒蛋白表达药物中的应用，其特征在于，所述化合物盐酸赛庚啶的结构式如下式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0003392428320000021
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述蛋白为非洲猪瘟病毒D1133L蛋白、p30蛋白、p72蛋白。
7.根据权利要求1～6任一项所述的应用，所述药物为化合物盐酸赛庚啶加入药学上可接受的载体和/或辅料，制成片剂、喷雾剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、针剂或混悬剂。
CN202111471299.5A 2021-12-04 2021-12-04 化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用 Active CN114177176B (zh)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022188898A3 (zh) * 2021-12-04 2022-11-03 中国农业科学院兰州兽医研究所 化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用
CN115350190A (zh) * 2022-08-11 2022-11-18 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一种小檗胺在制备治疗非洲猪瘟的制剂中的应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115778946B (zh) * 2022-11-04 2023-08-01 中国农业科学院兰州兽医研究所 化合物zpp在制备抗病毒药物中的应用
CN116589538B (zh) * 2023-04-10 2023-12-05 中国农业科学院兰州兽医研究所 七组分抗原非洲猪瘟亚单位疫苗

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060030550A1 (en) * 2004-08-04 2006-02-09 Lithgow Theodore L Pharmaceutical formulations
WO2010101649A2 (en) * 2009-03-05 2010-09-10 Pablo Gastaminza Sigma 1 receptor inhibition as a novel therapeutical approach against hepatitis c virus infection
US20110028564A1 (en) * 2009-02-20 2011-02-03 Johansen Lisa M Compositions and methods for treatment of filovirus-mediated diseases

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1568990A (zh) * 2004-05-13 2005-01-26 南昌弘益科技有限公司 盐酸赛庚啶滴丸及其制备方法
CN105801526A (zh) * 2016-05-31 2016-07-27 黄芳 盐酸赛庚啶的药物组合物及其在生物医药中的应用
CN114177176B (zh) * 2021-12-04 2022-07-12 中国农业科学院兰州兽医研究所 化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060030550A1 (en) * 2004-08-04 2006-02-09 Lithgow Theodore L Pharmaceutical formulations
US20110028564A1 (en) * 2009-02-20 2011-02-03 Johansen Lisa M Compositions and methods for treatment of filovirus-mediated diseases
WO2010101649A2 (en) * 2009-03-05 2010-09-10 Pablo Gastaminza Sigma 1 receptor inhibition as a novel therapeutical approach against hepatitis c virus infection

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
于香安等: "抗病毒霜的制备及临床应用", 《中国医院药学杂志》 *
于香安等: "抗病毒霜的制备及临床应用", 《中国医院药学杂志》, vol. 21, no. 8, 31 August 2001 (2001-08-31), pages 500 - 501 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022188898A3 (zh) * 2021-12-04 2022-11-03 中国农业科学院兰州兽医研究所 化合物盐酸赛庚啶在制备预防或治疗非洲猪瘟药物中的应用
CN115350190A (zh) * 2022-08-11 2022-11-18 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一种小檗胺在制备治疗非洲猪瘟的制剂中的应用
CN115350190B (zh) * 2022-08-11 2024-01-26 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一种小檗胺在制备治疗非洲猪瘟的制剂中的应用

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