CN114177109B - 一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用，本发明所述纳米组合物包括如下组分：神经酰胺NP，神经酰胺NS/神经酰胺NG，神经酰胺AP，神经酰胺EOP，神经酰胺AS、植物鞘氨醇，岩兰草提取物，胆甾醇，磷脂，液体脂质，乳化剂，助乳化剂，促渗剂和余量的水。本发明提供的复合神经酰胺纳米组合物可以提高神经酰胺在配方应用中的保湿功效，同时将多种神经酰胺共载负，显著提升神经酰胺皮肤储留量，提高其经皮渗透生物利用度，综合提高皮肤的水合能力及角质屏障功能。此外，纳米组合物明显提高了神经酰胺的溶解度，可广泛应用于护肤品中。

Description

一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于护肤品技术领域，具体涉及一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用。

背景技术

神经酰胺是由一个鞘脂基作主链和一个酰胺连接的脂肪酸为第二链组成的一类脂质分子，根据鞘氨醇和脂肪酸碳链的不同，神经酰胺可分为神经酰胺EOP(1)、神经酰胺NS/神经酰胺NG(2)、神经酰胺NP(3)、神经酰胺AS(5)和神经酰胺AP(6)等不同的类型，皮肤中主要存在的神经酰胺类型为1、2、3和6。

随着年龄增长或皮肤衰老，神经酰胺合成量会减少，皮肤屏障功能减退，经皮水分流失(TEWL)增加，皮肤的润泽和弹性与皮肤含水量密切相关，皮肤水分过量丢失，会导致皮肤干燥、皲裂、皮肤屏障缺陷。神经酰胺作为皮肤角质层细胞间脂质的主要成分，对表皮角质层形成过程发挥重要作用，具有维持皮肤屏障、保湿、抗衰老和疾病治疗等作用。

神经酰胺是维持皮肤正常代谢、保持肌肤水分重要成分，因此在化妆品中应用广泛。神经酰胺溶解度小、水分散性差，很难直接应用于水剂产品中。护肤功效得以发挥的重要前提是活性成分能有效穿透皮肤表层并在皮肤组织中高浓度富集和长时间滞留，即实现护肤活性成分的皮肤靶向输送。由于皮肤自有的屏障功能，神经酰胺很难透过角质层发挥作用，同时神经酰胺在护肤品中添加量低，并且在放置过程中，易从护肤品中结晶析出，导致神经酰胺生物利用度低，护肤效果不佳。因此神经酰胺在配方应用和皮肤吸收方面仍存在问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用，以提高神经酰胺在配方应用中的保湿修复功效。

为实现上述目的，本发明提供了一种复合神经酰胺纳米组合物，所述复合神经酰胺纳米组合物由以下质量份数的组分制备得到：0.1～10份神经酰胺 NP，0.01～5份神经酰胺NS/神经酰胺NG，0.01～2份神经酰胺AP，0.0001～0.1 份神经酰胺EOP，0～1份神经酰胺AS、0.01～2份植物鞘氨醇，0.001～10份岩兰草提取物，0.1～5份胆甾醇，0.5～20份磷脂，1～20份液体脂质，1～20份乳化剂，5～40份助乳化剂，0.1～5份促渗剂，余量的水。

本发明以神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺EOP、神经酰胺AS、植物鞘氨醇和岩兰草提取物为活性成分，结合辅料制成纳米组合物。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.1～10份神经酰胺 NP，优选为0.5～9份，更优选为1～8份。在一个实施例中，所述神经酰胺NP 的质量份数为6～8份。在一个实施例中，所述神经酰胺NP的质量份数为8 份。神经酰胺NP能够修复皮脂膜和帮助皮肤天然保护层的更新，提升皮肤表层屏障功能，减少水分流失，起到保湿的效果。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.01～5份神经酰胺 NS/神经酰胺NG，优选为0.05～3份，更优选为0.1～2份。在一个实施例中，所述神经酰胺NS/神经酰胺NG的质量份数为0.5～1份。在一个实施例中，所述神经酰胺NS/神经酰胺NG的质量份数为1份。神经酰胺NS/神经酰胺NG 可以在完善皮脂膜的同时抑制活跃的皮脂腺分泌，使肌肤水油平衡，增强肌肤的自我保护。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.01～2份神经酰胺 AP，优选为0.05～1份，更优选为0.1～0.8份。在一个实施例中，所述神经酰胺AP的质量份数为0.1～0.5份。在一个实施例中，所述神经酰胺AP的质量份数为0.2份。神经酰胺AP类似于角质代谢成分，可以有效平滑角质层，使肌肤匀净透亮，效果较之酸类成分更温和。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.0001～0.1份神经酰胺EOP，优选为0.0005～0.05份，更优选为0.001～0.01份。在一个实施例中，所述神经酰胺EOP的质量份数为0.001～0.005份。在一个实施例中，所述神经酰胺EOP的质量份数为0.002份。神经酰胺EOP可以密集修补皮肤的天然皮脂膜，强化肌肤表层屏障的防御机能，减少水份蒸发和流失。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0～1份神经酰胺 AS，优选为0.1～0.8份，更优选为0.2～0.6份。在一个实施例中，所述神经酰胺AS的质量份数为0.2～0.6份。在一个实施例中，所述神经酰胺AS的质量份数为0.5份。神经酰胺AS可以加速皮肤表皮的新陈代谢，在角质表面形成一层有效的屏障从而防止水分流失。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.01～2份植物鞘氨醇，优选为0.05～1份，更优选为0.1～0.8份。在一个实施例中，所述植物鞘氨醇的质量份数为0.1～0.4份。在一个实施例中，所述植物鞘氨醇的质量份数为 0.2份。植物鞘氨醇与皮肤脂质较为相近，可以促进皮肤神经酰胺生成，刺激人体表皮角化细胞分化，是水分保持和屏障功能的重要组分，此外还能缓解皮肤刺激、抗菌消炎。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.001～10份岩兰草提取物，优选为0.005～6份，更优选为0.01～4份。在一个实施例中，所述岩兰草提取物的质量份数为0.01～1份。在一个实施例中，所述岩兰草提取物的质量份数为0.8份。在一个实施例中，所述岩兰草提取物可以为岩兰草提取液，如瑞士奇华顿公司开发的Vetivyne，所述Vetivyne包括1％质量百分含量的岩兰草根提取物。岩兰草提取物可以修复受损皮肤，保湿补水，滋养皮肤。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物包括质量份数为0.1～5份胆甾醇，优选为0.2～3份，更优选为0.5～2份。在一个实施例中，所述胆甾醇的质量份数为0.2～1份。在一个实施例中，所述胆甾醇的质量份数为0.5份。

本发明中所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、蛋黄卵磷脂、羟基化卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱中的两种以上；优选为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、羟基化卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱中的两种以上；更优选为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、羟基化卵磷脂中的两种以上。本发明所述磷脂优选由2～3种物质组成，本发明中所述磷脂优选为大豆卵磷脂和氢化卵磷脂的混合物，二者质量比优选为0.5～3:1，更优选为2:1。在一个实施例中，所述磷脂为质量比为1～3:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂。在一个实施例中，所述磷脂为质量比为2:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂。

本发明中所述磷脂质量份数为0.5～20份，优选为1～16份，更优选为4～12 份。在一个实施例中，所述磷脂质量份数为12～18份。在一个实施例中，所述磷脂质量份数为15份。

本发明中所述液体脂质为植物油脂、合成油脂中的两种以上，所述液体油脂为橄榄油、大豆油、蓖麻油、辛酸/癸酸甘油三酯、二异硬脂醇苹果酸酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、丙二醇辛酸酯、三一辛酸甘油酯和亚油酸甘油酯中的一种或多种。所述植物油脂为橄榄油、大豆油和蓖麻油中的一种或多种，优选为橄榄油或大豆油。所述合成油脂为辛酸/癸酸甘油三酯、二异硬脂醇苹果酸酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、丙二醇辛酸酯、三一辛酸甘油酯和亚油酸甘油酯中的一种或多种，优选为辛酸/癸酸甘油三酯、二异硬脂醇苹果酸酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、丙二醇辛酸酯和亚油酸甘油酯中的一种或多种，更优选为辛酸/癸酸甘油三酯、二异硬脂醇苹果酸酯、甘油三(乙基己酸)酯和亚油酸甘油酯中的一种或多种。本发明中所述液体脂质优选为2～3种，本发明所述液体脂质优选为亚油酸甘油酯和大豆油，质量比优选为0.5～2:1，更优选为1:1。在一个实施例中，所述液体脂质为质量比为1～3:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯。在一个实施例中，所述液体脂质为质量比为2:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯。

本发明中所述液体脂质质量份数为1～20份，优选为5～18份，更优选为 10～16份。在一个实施例中，液体脂质质量份数为12～16份。在一个实施例中，液体脂质质量份数为15份。

本发明中所述乳化剂为月桂酰乳酰乳酸钠、癸基葡糖苷、椰油基葡糖苷、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10油酸酯、PEG-40氢化蓖麻油和山梨坦倍半油酸酯中的两种以上，优选为月桂酰乳酰乳酸钠、癸基葡糖苷、椰油基葡糖苷、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10油酸酯和PEG-40氢化蓖麻油中的两种以上，更优选为月桂酰乳酰乳酸钠、PEG-40氢化蓖麻油、聚甘油-10肉豆蔻酸酯和聚甘油-10油酸酯中的两种以上。本发明所述乳化剂优选由2～3种物质组成，本发明中所述乳化剂优选为月桂酰乳酰乳酸钠和PEG-40氢化蓖麻油的混合物，二者质量比优选为0.5～2:1，更优选为1:1。在一个实施例中，所述乳化剂为质量比为0.5～1.5:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯。在一个实施例中，所述乳化剂为质量比为1:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯。

本发明中所述乳化剂质量份数为1～20份，优选为5～18份，更优选为10～16 份。在一个实施例中，所述乳化剂质量份数为12～16份。在一个实施例中，所述乳化剂质量份数为14份。

本发明中所述助乳化剂为辛基十二醇、二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、十三烷醇聚醚-12、甘油、丙二醇、1,2-戊二醇、丁二醇、1,2-己二醇和1,3-丙二醇中的两种以上，优选为辛基十二醇、二乙二醇单乙基醚、PPG-26- 丁醇聚醚-26、甘油、1,2-戊二醇、1,3-丙二醇、丁二醇和1,2-己二醇中的两种以上，更优选为二乙二醇单乙基醚、PPG-26-丁醇聚醚-26、甘油、1,2-戊二醇、 1,3-丙二醇和1,2-己二醇中的两种以上。本发明所述助乳化剂优选由2～3种物质组成，所述助乳化剂优选为1,2-戊二醇和1,3-丙二醇，质量比优选为0.2～0.8:1，更优选为0.4:1。在一个实施例中，所述助乳化剂为质量比为 0.5～1.5:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。在一个实施例中，所述助乳化剂为质量比为1:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

本发明中所述助乳化剂质量份数为5～40份，优选为10～35份，更优选为 20～30份。在一个实施例中，所述助乳化剂质量份数为25～30份。在一个实施例中，所述助乳化剂质量份数为30份。

本发明中所述促渗剂为水溶性促渗剂和油溶性促渗剂中的一种或多种，所述促渗剂为肌醇、异山梨醇酐二甲醚、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、四氢胡椒碱和月桂氮卓酮中的一种或多种。所述水溶性促渗剂为肌醇、异山梨醇酐二甲醚、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯的一种或多种，优选为肌醇和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯中的一种或两种。所述油溶性促渗剂为四氢胡椒碱和月桂氮卓酮中的一种或两种，优选为月桂氮卓酮。本发明所述促渗剂优选为月桂氮卓酮和双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯，质量比优选为1～3:1，更优选为2:1。在一个实施例中，所述促渗剂为四氢胡椒碱。

本发明中所述促渗剂质量份数为0.1～5份，优选为0.5～3份，更优选为1～2 份。在一个实施例中，所述促渗剂质量份数为2～4份。在一个实施例中，所述促渗剂质量份数为3.5份。促渗剂的加入有利于活性物质有效渗透进入皮肤并长时间滞留，缓释、控释活性物质，显著提升活性物质的皮肤储留量，提高其经皮渗透生物利用度。

在一个实施例中，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：0.1～10份神经酰胺NP、0.01～5份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.01～2份神经酰胺AP、0.0001～0.1份神经酰胺EOP、0～1份神经酰胺AS、0.01～2份植物鞘氨醇、0.001～10份岩兰草提取物、0.1～5份胆甾醇、0.5～20份磷脂、1～20 份液体脂质、1～20份乳化剂、5～40份助乳化剂、0.1～5份促渗剂和余量的水。所述磷脂包括质量比为1～3:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂，所述液体脂质包括质量比为1～3:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯，所述乳化剂包括质量比为0.5～1.5:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯，所述助乳化剂包括质量比为0.5～1.5:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

在一个实施例中，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：0.1～10份神经酰胺NP、0.01～5份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.01～2份神经酰胺AP、0.0001～0.1份神经酰胺EOP、0～1份神经酰胺AS、0.01～2份植物鞘氨醇、0.001～10份岩兰草提取物、0.1～5份胆甾醇、0.5～20份磷脂、1～20 份液体脂质、1～20份乳化剂、5～40份助乳化剂、0.1～5份促渗剂和余量的水。所述磷脂包括质量比为2:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂，所述液体脂质包括质量比为2:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯，所述乳化剂包括质量比为1:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯，所述助乳化剂包括质量比为1:1 的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

在一个实施例中，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：6～8份神经酰胺NP、0.5～1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.1～0.5份神经酰胺AP、0.001～0.005份神经酰胺EOP、0.2～0.6份神经酰胺AS、0.1～0.4份植物鞘氨醇、0.01～1份岩兰草提取物、0.2～1份胆甾醇、12～18份磷脂、12～16 份液体脂质、12～16份乳化剂、25～30份助乳化剂、2～4份促渗剂余量的水。所述磷脂包括质量比为1～3:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂，所述液体脂质包括质量比为1～3:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯，所述乳化剂包括质量比为0.5～1.5:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯，所述助乳化剂包括质量比为0.5～1.5:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

在一个实施例中，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：6～8份神经酰胺NP、0.5～1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.1～0.5份神经酰胺AP、0.001～0.005份神经酰胺EOP、0.2～0.6份神经酰胺AS、0.1～0.4份植物鞘氨醇、0.01～1份岩兰草提取物、0.2～1份胆甾醇、12～18份磷脂、12～16 份液体脂质、12～16份乳化剂、25～30份助乳化剂、2～4份促渗剂余量的水。所述磷脂包括质量比为2:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂，所述液体脂质包括质量比为2:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯，所述乳化剂包括质量比为1:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯，所述助乳化剂包括质量比为1:1 的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

在一个实施例中，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：8份神经酰胺NP、1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.2份神经酰胺AP、 0.002份神经酰胺EOP、0.5份神经酰胺AS、0.2份植物鞘氨醇、0.8份岩兰草提取物、0.5份胆甾醇、15份磷脂、15份液体脂质、14份乳化剂、30份助乳化剂、3.5份促渗剂和余量的水。所述磷脂包括质量比为2:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂，所述液体脂质包括质量比为2:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯，所述乳化剂包括质量比为1:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯，所述助乳化剂包括质量比为1:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚 -26。

本发明对组分的来源没有特殊要求，如无特殊说明，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。本发明所述复合神经酰胺纳米组合物粒径为 10～200nm，优选为20～80nm；多分散系数为0.1～0.3，优选为0.1～0.2。本发明得到的复合神经酰胺纳米组合物具有粒径小、比表面积大的特性。

本发明所述复合神经酰胺纳米组合物可以提高神经酰胺在配方应用中的保湿功效，通过将多种神经酰胺共负载，合理搭配，协同增效，综合提高了皮肤的水合能力及角质屏障功能。

实验结果表明，本发明所述复合神经酰胺纳米组合物可以显著提高神经酰胺在配方应用中的保湿功效以及细胞修复能力；本发明所述神经酰胺纳米组合物中不同的液体脂质、不同的乳化剂、不同的助乳化剂和不同的磷脂组合使用具有协同作用，可以使分子之间的作用更为紧密，形成更加紧密、高强度的复合膜，使得纳米组合物更加稳定。

本发明还提供了一种复合神经酰胺纳米组合物的制备方法，包括以下步骤：

将神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺 EOP、神经酰胺AS、植物鞘氨醇、磷脂、胆甾醇、液体脂质、乳化剂、助乳化剂和油溶性促渗剂混合后，得到油相；

将岩兰草提取物、水溶性促渗剂和水混合后，得到水相；

将所述油相与所述水相混合乳化后微米化处理，得到微米级分散体；

将所述微米级分散体进行纳米化处理，得到复合神经酰胺纳米组合物。

本发明所述神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺EOP、神经酰胺AS和植物鞘氨醇为油溶性成分，所述岩兰草提取物为水溶性成分，本发明采用分别制备油相和水相的方法，有利于提高活性成分的溶解度。

本发明所述油相的制备方法具体为：将神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺EOP、神经酰胺AS、植物鞘氨醇、磷脂、胆甾醇、液体脂质、乳化剂、助乳化剂和油溶性促渗剂混合，所述混合的温度为20～70℃，优选为30～50℃，更优选为40～45℃，得到油相。

本发明所述水相的制备方法具体为：将岩兰草提取物、水溶性促渗剂和水混合，所述混合温度为20～70℃，优选为30～50℃，更优选为40～45℃，得到水相。

本发明对所述水相和油相的制备时间顺序没有限定。

得到水相和油相后，将水相和油相进行混合乳化，可以将水相加入到油相中进行混合乳化，也可以将油相加入到水相中进行乳化。在本发明中，所述混合乳化的方式优选为将水相滴加入油相中，所述滴加的速度为1～5滴/秒，优选为2～3滴/秒。在一个实施例中，水相和油相的混合乳化在搅拌条件下进行，所述搅拌的速率为400～800r/min，优选为600～700r/min；所述混合乳化的温度为20～70℃，优选为30～50℃，更优选为40～45℃。

油相与水相混合乳化后，进行微米化处理。在本发明中，所述微米化处理的方式优选为高速剪切乳化处理，所述高速剪切乳化转速为 5000～13000rpm，优选为6000～8000rpm，更优选为6500～7000rpm；所述高速剪切乳化的剪切时间为1～10min，优选为3～8min，更优选为4～5min。

本发明所述微米级分散体粒径为1～100μm，优选为5～50μm，更优选为 10～30μm。

得到微米级分散体后，进行纳米化处理。本发明所述纳米化处理方法具体为：将所述微米级分散体进行高压均质处理或高速微射流处理，得到复合神经酰胺纳米组合物。

本发明所述高压均质的压力为300～1300bar，优选为600～1000bar，更优选为700～800bar；所述高压均质的循环次数为1～8次，优选为2～6次，更优选为3～4次；所述高压均质的温度为20～70℃，优选为30～50℃，更优选为 40～45℃。

本发明所述高速微射流处理压力优选为6000～15000psi，优选为 7000～10000psi，更优选为8000～9000psi；所述高速微射流处理循环次数为1～8 次，优选为2～6次，更优选为3～4次；所述高速微射流处理温度为20～70℃，优选为30～50℃，更优选为40～45℃。

本发明得到的复合神经酰胺纳米组合物具有粒径小、比表面积大的特性，与细胞之间具有更强的粘附性和生物相容性，能促进活性物质更加有效渗透进入皮肤并长时间滞留，显著提升神经酰胺皮肤储留量，提高其经皮渗透生物利用度。

本发明还提供了一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包括复合神经酰胺纳米组合物和化妆品辅料。本发明所述化妆品辅料为化妆品中可接受的辅料，在本发明中不做限定，可以为空白霜剂，也可以为空白膏剂。

在一个实施例中，化妆品辅料为空白霜剂，包括以下质量份数的组分：5 份辛酸癸酸甘油三酯、5份白油、2份十六十八醇、2份硬脂醇聚醚-2、2份硬脂醇聚醚～21、5份丙二醇、0.15份卡波姆、0.15份三乙醇胺、0.5份苯氧乙醇和余量的水。

本发明还提供了一种复合神经酰胺纳米组合物在保湿和修复功效的化妆品中的应用，所述化妆品的形式包括但不限于化妆水、精华、膏霜、乳液、面膜和凝胶。采用本发明所述复合神经酰胺纳米组合物制备化妆品时，可直接将所述复合神经酰胺纳米组合物添加于各类保湿、修复产品辅料中，使用方便。所述纳米组合物在化妆品中添加的质量百分含量为0.1～30％，优选为 0.5～10％。

本发明提供了一种复合神经酰胺纳米组合物及其制备方法和应用，将多种神经酰胺共负载，合理搭配，协同增效，提高了神经酰胺在配方中的皮肤吸收能力，同时综合提高了皮肤的水合能力及角质屏障功能；由于神经酰胺溶解度低，很难应用于水剂产品中，因此在护肤品中添加量低，并且在放置过程中神经酰胺易结晶析出，纳米包载后可以增大神经酰胺的溶解度，进而增加其在护肤品中的添加量，显著提升神经酰胺皮肤储留量，提高其经皮渗透生物利用度；神经酰胺纳米组合物中不同的液体脂质、不同的乳化剂、不同的助乳化剂、不同的磷脂组合使用具有协同作用，可以使分子之间的作用更为紧密，形成更加紧密、高强度的复合膜，使得纳米组合物更加稳定；该纳米组合物载药量高，稳定性好，安全性高，易溶于水，应用方便，可直接添加到不同类型的护肤品基质中，具有使用方便、温和无刺激的优点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为实施例16制备的纳米复合霜剂和对比例9制备的游离普通霜剂在 12h后体外皮肤累积透过量(与游离普通霜剂对比，^*P<0.05)；

图2为实施例16制备的纳米复合霜剂和对比例9制备的游离普通霜剂的体外皮肤滞留量(与游离普通霜剂对比，^*P<0.05)；

图3为不同样品细胞迁移率结果(与空白对照对比，^*P<0.05；与游离对照对比，^#P<0.05)；

图4为不同样品相关保湿因子FLG细胞分泌量结果(与空白对照对比，^*P<0.05；与游离对照对比，^#P<0.05)；

图5为不同样品相关保湿因子HA细胞分泌量结果(与空白对照对比，^*P <0.05；与游离对照对比，^#P<0.05)；

图6为纳米组合物对特应性皮炎小鼠耳组织形态学的影响；

图7为纳米组合物对炎症因子IFN-γ含量的影响(与正常对照组相比，^&&P <0.01；与模型组对比，^##P<0.01，^#P<0.05)；

图8为纳米组合物对炎症因子IL-4含量的影响(与正常对照组相比，^&&P <0.01；与模型组对比，^##P<0.01；与游离普通霜剂组对比，^*P<0.05)；

图9为纳米组合物对炎症因子TSLP含量的影响(与正常对照组相比，^&&P <0.01；与模型组对比，^##P<0.01；与游离普通霜剂组对比，^*P<0.05)；

图10为实施例14、实施例16和对比例9分别制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用8h后皮肤含水量变化率(与游离普通霜剂相比，^**P<0.01或^*P<0.05)；

图11为实施例14、实施例16和对比例9分别制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用14天皮肤含水量变化率(与游离普通霜剂相比，^*P<0.05)；

图12为实施例14、实施例16和对比例9制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用14天经皮失水值减少率(与游离普通霜剂相比，^*P< 0.05)。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。但本发明不限于以下实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

以下实施例，如无特殊说明，所提及的份数均为相应组分在复合神经酰胺纳米组合物中所占质量分数。

本发明实施例中采用的岩兰草提取物为瑞士奇华顿公司开发的Vetivyne。

实施例1：

将10份神经酰胺NP、0.01份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.01份神经酰胺AP、0.0001份神经酰胺EOP、0.01份植物鞘氨醇、0.1份胆甾醇、0.5份大豆卵磷脂、0.5份二硬脂酰磷脂酰胆碱、10份橄榄油、10份辛酸/癸酸甘油三酯、10份癸基葡糖苷、10份椰油基葡糖苷、20份辛基十二醇、20份1,2-戊二醇和5份月桂氮卓酮70℃水浴加热溶解得到油相；

将0.1份岩兰草提取物加入到3.7699份纯化水中，于70℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以3滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为700r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在8000rpm转速下高速剪切乳化4min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在70℃、1300bar条件下进行高压均质处理，循环8次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 180.4nm，PDI为0.247。

实施例2：

将0.1份神经酰胺NP、5份神经酰胺NS/神经酰胺NG、2份神经酰胺AP、 0.1份神经酰胺EOP、2份植物鞘氨醇、0.5份胆甾醇、5份氢化卵磷脂、8份蛋黄卵磷脂、5份大豆卵磷脂、8份二异硬脂醇苹果酸酯、8份辛酸/癸酸甘油三酯、10份聚甘油-10肉豆蔻酸酯、6份椰油基葡糖苷、10份二乙二醇单乙基醚、15份1,2-己二醇、5份1,2-戊二醇和4份四氢胡椒碱30℃水浴加热溶解得到油相；

将0.5份岩兰草提取物加入到5.8份纯化水中，于30℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以2滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为500r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在7000rpm转速下高速剪切乳化10min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在30℃、500bar条件下进行高压均质处理，循环2次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为127.4nm，PDI为0.108。

实施例3：

将1份神经酰胺NP、4份神经酰胺NS/神经酰胺NG、1份神经酰胺AP、 0.05份神经酰胺EOP、1份植物鞘氨醇、2.5份胆甾醇、5份羟基化卵磷脂、5 份二月桂酰磷脂酰胆碱、5份鲸蜡醇乙基己酸酯、5份辛基十二醇肉豆蔻酸酯、 5份聚甘油-10油酸酯、3份月桂酰乳酰乳酸钠、15份PPG-26-丁醇聚醚-26、 5份丙二醇和1份月桂氮卓酮40℃水浴加热溶解得到油相；

将4份岩兰草提取物和0.5份双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯加入到36.95份纯化水中，于40℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以3滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为600r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在9000rpm转速下高速剪切乳化8min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、700bar条件下进行高压均质处理，循环3次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 72.3nm，PDI为0.125。

实施例4：

将3份神经酰胺NP、3份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.5份神经酰胺AP、 0.01份神经酰胺EOP、0.8份植物鞘氨醇、2份胆甾醇、10份二棕榈酰磷脂酰胆碱、2份二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、6份甘油三(乙基己酸)酯、6份丙二醇辛酸酯、6份月桂酰乳酰乳酸钠、4份PEG-40氢化蓖麻油、15份十三烷醇聚醚-12、5份甘油和1份四氢胡椒碱50℃水浴加热溶解得到油相；

将2份岩兰草提取物和1份双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯加入到32.69份纯化水中，于50℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以4滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为700r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在11000rpm转速下高速剪切乳化6min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、900bar条件下进行高压均质处理，循环4次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 64.6nm，PDI为0.135。

实施例5：

将5份神经酰胺NP、2份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.3份神经酰胺AP、 0.005份神经酰胺EOP、0.5份植物鞘氨醇、1.5份胆甾醇、10份大豆卵磷脂、 5份氢化卵磷脂、4份蓖麻油、10份三一辛酸甘油酯、6份山梨坦倍半油酸酯、 6份癸基葡糖苷、20份辛基十二醇、5份丁二醇和3份月桂氮卓酮60℃水浴加热溶解得到油相；

将1份岩兰草提取物加入到20.695份纯化水中，于60℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以5滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为800r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在13000rpm转速下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在60℃、1100bar条件下进行高压均质处理，循环6次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 91.7nm，PDI为0.205。

实施例6：

将8份神经酰胺NP、1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.2份神经酰胺 AP、0.002份神经酰胺EOP、0.2份植物鞘氨醇、1份胆甾醇、10份羟基化卵磷脂、10份二硬脂酰磷脂酰胆碱、5份二异硬脂醇苹果酸酯、5份甘油三(乙基己酸)酯、5份辛酸/癸酸甘油三酯、7份月桂酰乳酰乳酸钠、7份PEG-40 氢化蓖麻油、15份二乙二醇单乙基醚、15份PPG-26-丁醇聚醚-26和3.5份四氢胡椒碱40℃水浴加热溶解得到油相；

将0.8份岩兰草提取物加入到6.298份纯化水中，于40℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以3滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为500r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在9000rpm转速下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、8000psi条件下进行高速微射流处理，循环4次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 158.6nm，PDI为0.198。

实施例7：

将7份神经酰胺NP、0.5份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.1份神经酰胺 AP、0.001份神经酰胺EOP、0.1份植物鞘氨醇、0.2份胆甾醇、5份二月桂酰磷脂酰胆碱、3份羟基化卵磷脂、9份亚油酸甘油酯、9份大豆油、5份聚甘油-10肉豆蔻酸酯、8份聚甘油-10油酸酯、5份PEG-40氢化蓖麻油、10份1,2- 戊二醇、25份1,3-丙二醇和3份月桂氮卓酮50℃水浴加热溶解得到油相；

将3份岩兰草提取物和1.5份肌醇加入到5.599份纯化水中，于50℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以2滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为600r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在6000rpm转速下高速剪切乳化3min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、800bar条件下进行高压均质处理，循环5次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 83.9nm，PDI为0.186。

实施例8：

将6份神经酰胺NP、0.1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.05份神经酰胺 AP、0.0005份神经酰胺EOP、0.05份植物鞘氨醇、3份胆甾醇、2份大豆卵磷脂、3份氢化卵磷脂、4份橄榄油、4份辛酸/癸酸甘油三酯、4份椰油基葡糖苷、1份月桂酰乳酰乳酸钠、10份1,2-戊二醇、5份1,2-己二醇和0.5份四氢胡椒碱45℃水浴加热溶解得到油相；

将6份岩兰草提取物和0.5份异山梨醇酐二甲醚加入到50.7995份纯化水中，于45℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以4滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为500r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在10000rpm转速下高速剪切乳化2min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在45℃、600bar条件下进行高压均质处理，循环4次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 55.6nm，PDI为0.120。

实施例9：

将4份神经酰胺NP、0.05份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.8份神经酰胺 AP、0.0008份神经酰胺EOP、0.3份植物鞘氨醇、4份胆甾醇、2份蛋黄卵磷脂、1份羟基化卵磷脂、3份亚油酸甘油酯、2份二异硬脂醇苹果酸酯、2份椰油基基葡糖苷、1份月桂酰乳酰乳酸钠、5份辛基十二醇、5份甘油和0.2 份月桂氮卓酮50℃水浴加热溶解得到油相；

将8份岩兰草提取物和0.3份异山梨醇酐二甲醚加入到61.3492份纯化水中，于50℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以2滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为700r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在12000rpm转速下高速剪切乳化7min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在50℃、9000psi条件下进行高速微射流处理，循环2次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 32.1nm，PDI为0.155。

实施例10：

将2份神经酰胺NP、0.2份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.4份神经酰胺 AP、0.02份神经酰胺EOP、0.6份植物鞘氨醇、5份胆甾醇、0.3份氢化卵磷脂、0.2份羟基化卵磷脂、0.5份丙二醇辛酸酯、0.5份二异硬脂醇苹果酸酯、 0.5份癸基葡糖苷、0.5份月桂酰乳酰乳酸钠、2份二乙二醇单乙基醚和3份 1,3-丙二醇20℃水浴加热溶解得到油相；

将10份岩兰草提取物和0.1份肌醇加入到74.18份纯化水中，于20℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以1滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为400r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在5000rpm转速下高速剪切乳化1min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在20℃、300bar条件下进行高压均质处理，循环1次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 15.1nm，PDI为0.131。

实施例11：

将8份神经酰胺NP、1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.2份神经酰胺 AP、0.002份神经酰胺EOP、1份神经酰胺AS、0.2份植物鞘氨醇、0.5份胆甾醇、10份大豆卵磷脂、5份氢化卵磷脂、10份亚油酸甘油酯、5份甘油三 (乙基己酸)酯、7份癸基葡糖苷、7份聚甘油-10肉豆蔻酸酯、15份二乙二醇单乙基醚、15份PPG-26-丁醇聚醚-26和3.5份四氢胡椒碱40℃水浴加热溶解得到油相；

将0.8份岩兰草提取物加入到10.798份纯化水中，于40℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以3滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为500r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在9000rpm转速下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、8000psi条件下进行高速微射流处理，循环4次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 114.6nm，PDI为0.158。

实施例12：

将8份神经酰胺NP、1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.2份神经酰胺 AP、0.002份神经酰胺EOP、0.5份神经酰胺AS、0.2份植物鞘氨醇、0.5份胆甾醇、10份大豆卵磷脂、5份氢化卵磷脂、10份亚油酸甘油酯、5份甘油三(乙基己酸)酯、7份癸基葡糖苷、7份聚甘油-10肉豆蔻酸酯、15份二乙二醇单乙基醚、15份PPG-26-丁醇聚醚-26和3.5份四氢胡椒碱40℃水浴加热溶解得到油相；

将0.8份岩兰草提取物加入到11.298份纯化水中，于40℃水浴搅拌溶解得到水相；

将水相以3滴/秒的速度加入油相，搅拌速率为500r/min，得到油水相混合物；

将油水相混合物在9000rpm转速下高速剪切乳化5min，得到微米级分散体；

将微米级分散体在40℃、8000psi条件下进行高速微射流处理，循环4次，冷却至室温，得到复合神经酰胺纳米组合物；

对上述纳米组合物的粒径和PDI进行检测，可得该纳米组合物粒径为 97.1nm，PDI为0.162。

对比例1：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含亚油酸甘油酯，且甘油三(乙基己酸)酯的质量份数为15份。

对比例2：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含甘油三(乙基己酸)酯，且亚油酸甘油酯的质量份数为15份。

对比例3：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含癸基葡糖苷，且聚甘油-10肉豆蔻酸酯的质量份数为14份。

对比例4：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含聚甘油-10肉豆蔻酸酯，且癸基葡糖苷的质量份数为14份。

对比例5：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含二乙二醇单乙基醚，且PPG-26-丁醇聚醚-26的质量份数为30 份。

对比例6：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含PPG-26-丁醇聚醚-26，且二乙二醇单乙基醚的质量份数为30份。

对比例7：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含大豆卵磷脂，且氢化卵磷脂的质量份数为15份。

对比例8：

根据实施例12的方法制备神经酰胺纳米组合物，区别在于，神经酰胺纳米组合物不含氢化卵磷脂，且大豆卵磷脂的质量份数为15份。

实施例13：

稳定性试验

将实施例1～12制备得到的纳米组合物和对比例1～8及其水稀释液(质量分数为10％)在密闭容器、室温条件下放置6个月，对纳米组合物的粒径、多分散系数(PDI)进行检测，检查纳米组合物及其水稀释液在贮存前后的性状，综合评价纳米组合物的稳定性。具体检测结果如表1所示，表1为实施例1～12复合神经酰胺纳米组合物和对比例1～8及其水稀释液稳定性结果。

表1实施例1～12复合神经酰胺纳米组合物和对比例1～8及其水稀释液稳定性结果

表1中实施例1～12结果表明，本发明采用高压均质处理和高速微射流处理制备的复合神经酰胺纳米组合物粒径在10～200nm之间，多分散系数PDI 在0.1～0.3之间，满足实际应用要求。纳米组合物在放置6个月后粒径、PDI 未发生显著性变化，仍然满足实际应用需求。纳米组合物在放置6个月后未出现析出、团聚、分层现象，水稀释液在放置6个月后未出现析出、浑浊现象，尤其在活性成分浓度高的情况下仍然较稳定，未发现结晶析出现象。因此，本发明提供的复合神经酰胺纳米组合物具有良好的稳定性。

表1中对比例1～8结果表明，对比例1～8制备的纳米组合物起始粒径和多分散系数PDI均比实施例12大，粒径分布不均，且对比例1～8制备的纳米组合物在放置6个月后出现析出、团聚、分层现象，水稀释液在放置6个月后出现析出、浑浊现象，说明本发明中不同的液体脂质、不同的乳化剂、不同的助乳化剂、不同的磷脂组合使用具有协同作用，不同的液体脂质、不同的乳化剂、不同的助乳化剂和不同的磷脂搭配使用能够使分子之间的作用更为紧密，形成更加紧密、高强度的复合膜，使得纳米组合物更加稳定。

实施例14：

制备空白霜剂：

将5份辛酸癸酸甘油三酯、5份白油、2份十六十八醇、2份硬脂醇聚醚 -2和2份硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；

将5份丙二醇、0.15份卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；

得到油相和水相后，于75℃条件下将油相以5滴/秒的速度滴加至水相中，滴加过程中控制搅拌速率为800rpm，混合完成后在10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.15份三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.5份苯氧乙醇，搅拌均匀即得空白霜剂。

实施例15：

刺激性试验：

将实施例1～12所制得的复合神经酰胺纳米组合物样品，分别与实施例14 中的空白霜剂按照质量比3:7进行复配，进行皮肤刺激性试验：

取健康家兔78只，体重(2.0±0.2)kg，随机分为13组，每组动物6只，于实验前24h将家兔背部皮肤两侧去毛，去毛后24h检查去毛皮肤是否受伤，受伤皮肤不宜做皮肤刺激性试验。每天涂抹使用实施例1～12得到的复合神经酰胺纳米组合物制备的复合霜剂3次，连续涂抹7天，同时涂抹空白霜剂(不给予任何药物)进行对照，观察试验结果，将试验结果列于表2中。

表2为实施例1～12样品制备的霜剂及空白组皮肤刺激性观察结果，根据表2中的试验结果可以看出，使用实施例1～12制备的复合神经酰胺纳米组合物制备的复合霜剂及空白霜剂涂抹于家兔皮肤后均无充血、红肿现象，说明本发明提供的复合神经酰胺纳米组合物对皮肤没有刺激性。

表2实施例1～12样品制备的霜剂及空白组皮肤刺激性观察结果

“+”家兔皮肤充血、红肿；“++”表示充血、红肿现象仍在，但有增加趋势；“—”表示无充血、红肿现象。

实施例16：

制备纳米复合霜剂：将实施例12制备的纳米组合物与实施例14中的空白霜剂按照质量百分含量1:9进行复配，得到纳米复合霜剂。

纳米复合霜剂中功效成分及含量分别为：0.8份神经酰胺NP、0.1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.02份神经酰胺AP、0.0002份神经酰胺EOP、0.05 份神经酰胺AS、0.02份植物鞘氨醇、0.08份岩兰草提取物。

对比例9：

制备与纳米复合霜剂中功效成分及含量相同的游离普通霜剂：将0.8份神经酰胺NP、0.1份神经酰胺NS/神经酰胺NG、0.02份神经酰胺AP、0.0002 份神经酰胺EOP、0.05份神经酰胺AS、0.02份植物鞘氨醇、4.5份辛酸癸酸甘油三酯、4.5份白油、1.8份十六十八醇、1.8份硬脂醇聚醚-2、1.8份硬脂醇聚醚-21于75℃水浴中加热熔融后得到油相；将0.08份岩兰草提取物、4.5 份丙二醇、0.135份卡波姆和余量的纯化水于75℃水浴溶解，得到水相；将油相滴加至水相搅拌混合，于10000rpm转速下剪切乳化3min，加入0.135份三乙醇胺，继续剪切2min，冷却后加入0.45份苯氧乙醇，搅拌均匀，即得与纳米复合霜剂中功效成分及含量相同的游离普通霜剂。

实施例17：

体外透皮实验：

采用垂直式Franz扩散池法进行离体鼠皮的透皮实验。将SD雄性大鼠腹部皮肤固定于接收室和供给室之间，取实施例16制备的纳米复合霜剂和对比例9制备的游离普通霜剂各1g于供给室中，以质量分数15％乙醇、5％吐温 80和80％的生理盐水为接收液，37℃下搅拌扩散。分别于1，2，4，6，8， 10，12h取0.5mL接收液，并即时补充等量恒温的新鲜接收液。采用HPLC 分析，计算不同时间特定药物单位面积累积透过量。12h后，取下皮肤，洗净后剪碎，研磨成匀浆液，加适量接收液离心，取上清液进行HPLC分析，计算特定药物的单位面积皮肤滞留量。本实验中测定的药物为神经酰胺NP。实验数据如图1、图2、表3所示，图1为实施例16制备的纳米复合霜剂和对比例9制备的游离普通霜剂在12h后体外皮肤累积透过量；图2为实施例16 制备的纳米复合霜剂和对比例9制备的游离普通霜剂的体外皮肤滞留量；表3为纳米复合霜剂和游离普通霜剂在12h后体外皮肤累积透过量和皮肤累积滞留量结果。

表3纳米复合霜剂和游离普通霜剂在12h后体外皮肤累积透过量和皮肤累积滞留量结果

与游离普通霜剂对比，^*P<0.05。

由图1和表3可知，对比例9制备的游离普通霜剂12h后皮肤累积透过量仅为167.3μg/cm²，而实施例16制备的纳米复合霜剂12h后皮肤累积透过量为258.3μg/cm²(^*P<0.05)，表明神经酰胺经纳米组合物包载后在皮肤中的累积透过量显著提高。神经酰胺透皮性差，且由于皮肤自有屏障功能，导致其难以透过角质层发挥作用，经纳米包载后纳米组合物粒径小，比表面积大，与细胞之间具有更强的粘附性和生物相容性，此外促渗剂的加入进一步使得神经酰胺等活性物更有效渗透进入皮肤，提高其生物利用度，发挥更好的保湿修复效果。

由图2和表3可知，对比例9制备的游离普通霜剂12h后皮肤滞留量仅为31.2μg/cm²，而实施例16制备的纳米复合霜剂12h后皮肤滞留量为 52.6μg/cm²(^*P<0.05)，表明神经酰胺经纳米包载后在皮肤中的滞留量显著提高。神经酰胺等活性物经纳米包载后在皮肤中能高浓度富集和长时间滞留，并能缓释、控释，延长活性成分的作用时间，增强保湿修复功效。

实施例18：

细胞迁移实验

测试样品：将实施例6～8所得纳米组合物用DMEM培养液稀释800倍得到的纳米组合物培养样品；取神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺EOP、植物鞘氨醇和岩兰草提取物作为游离活性原料，利用DMEM培养液稀释，至其百分含量与实施例8稀释800倍得到的纳米组合物培养样品相同，作为游离对照组。

收集对数生长期细胞，调整HaCaT细胞密度为5×10⁵个/mL，接种于6 孔板中，培养过夜。用微量枪头在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分，用PBS冲洗划掉的部分，空白对照组加入新鲜无血清培养基，给药组加入新鲜无血清培养基和测试样品，在培养箱中孵育24h，然后用显微镜观察划痕宽度，并拍照，根据细胞迁移距离计算细胞迁移率，实验结果见图3和表4，图 3为不同样品细胞迁移率结果，表4为不同样品细胞迁移率结果。

表4不同样品细胞迁移率结果

样品名称	空白对照	实施例6	实施例7	实施例8	游离对照
						细胞迁移率(％)	19.9±7.8	65.7±6.3<sup>*</sup>	54.9±9.8<sup>*</sup>	44.8±8.6<sup>*#</sup>	30.7±4.1<sup>*</sup>

与空白对照对比，^*P<0.05；与游离对照对比，^#P<0.05。

根据图3和表4可以得出，培养24h后，与空白对照组细胞迁移率(19.9％) 比较，实施例6～8制得的纳米组合物均能显著提升HaCaT细胞迁移率，细胞迁移率分别为65.7％、54.9％和44.8％(^*P<0.05)，说明本申请制备的复合神经酰胺纳米组合物具有优异的细胞修复的能力；与游离对照细胞迁移率 (30.7％)比较，实施例8制得的纳米组合物对细胞迁移率的提升具有显著性差异(^#P<0.05)，表明活性成分经纳米包载后细胞迁移能力显著增强，具有更优异的修复角质细胞的功效。

实施例19：

对相关保湿因子FLG(丝聚蛋白)细胞分泌量的影响。

测试样品：同实施例16.

FLG是参与皮肤屏障功能的重要因子，可参与表皮细胞的分化及皮肤屏障的形成。FLG可以在表皮角质层降解形成吸水性氨基酸混合物，组成具有渗透活性的物质，组成天然保湿因子，减少经皮失水，保持皮肤含水量，发挥较强的保湿功能。

收集对数生长期细胞，将HaCaT细胞以2×10⁵个/mL的密度接种到24孔细胞培养板内，每孔500μL，培养24h。实验分为空白对照组和给药组。空白对照组加入培养基，给药组加入相应测试样品，在培养箱中孵育48h，取上清液，根据ELISA试剂盒说明书测试FLG水平。实验结果见图4和表5，图4 为不同样品相关保湿因子FLG细胞分泌量结果；表5为不同样品相关保湿因子FLG细胞分泌量结果。

表5不同样品相关保湿因子FLG细胞分泌量结果

样品名称	空白对照	实施例6	实施例7	实施例8	游离对照
						FLG(pg/mL)	62.3±9.8	120.6±7.9<sup>*</sup>	109.7±8.4<sup>*</sup>	98.8±6.5<sup>*#</sup>	80.4±4.2<sup>*</sup>

与空白对照对比，^*P<0.05；与游离对照对比，^#P<0.05。

根据图4和表5可以得出，与空白对照组分泌FLG水平(62.3pg/mL)比较，实施例6～8制得的纳米组合物均能显著提高FLG水平，细胞FLG分泌量分别为120.6pg/mL、109.7pg/mL、98.8pg/mL(^*P<0.05)，说明本申请制备的复合神经酰胺纳米组合物具有优异的角质屏障修复能力；与游离对照FLG 水平(80.4pg/mL)比较，实施例8制得的纳米组合物对FLG水平的提升具有显著性差异(^#P<0.05)，表明活性成分经纳米包载后角质修复能力更优，角质屏障功能得到提高，能有效减少皮肤水分散失。

实施例20：

对相关保湿因子HA(透明质酸)细胞分泌量的影响。

测试样品：同实施例16。

HA是一种在皮肤细胞间质中存在的天然多糖，其分子结构中含有大量羟基，可以与水形成分子间氢键，具有很强的保水作用，增加角质层水分。

收集对数生长期细胞，将HaCaT细胞以2×10⁵个/mL的密度接种到24孔细胞培养板内，每孔500μL，培养24h。实验分为空白对照组和给药组。空白对照组加入培养基，给药组加入相应测试样品，在培养箱中孵育48h，取上清液，根据ELISA试剂盒说明书测试HA水平。实验结果见图5和表6，图5 为不同样品相关保湿因子HA细胞分泌量结果；表6为不同样品相关保湿因子HA细胞分泌量结果。

表6不同样品相关保湿因子HA细胞分泌量结果

样品名称	空白对照	实施例6	实施例7	实施例8	游离对照
						HA(ng/mL)	2.86±0.92	8.38±1.13<sup>*</sup>	6.82±0.85<sup>*</sup>	5.27±0.78<sup>*#</sup>	3.87±0.42<sup>*</sup>

与空白对照对比，^*P<0.05；与游离对照对比，^#P<0.05。

根据图5和表6可以得出，与空白对照组分泌HA水平(2.86ng/mL)比较，实施例6～8制得的纳米组合物均能显著提高HA水平，细胞HA分泌量分别为8.38ng/mL、6.82ng/mL和5.27ng/mL(^*P<0.05)，说明本申请制备的复合神经酰胺纳米组合物具有优异的保湿能力；与游离对照HA水平(3.87 ng/mL)比较，实施例8制得的纳米组合物对HA水平的提升具有显著性差异 (^#P<0.05)，表明活性成分经纳米包载后保湿、锁水能力显著增强，能提高细胞的水合能力，具有更优异的保湿功效。

实施例21：

对特应性皮炎小鼠作用的影响。

测试样品：实施例14制备的空白霜剂、实施例16制备的纳米复合霜剂、对比例9制备的游离普通霜剂。

BALB/c小鼠共40只，分为正常对照组、模型组、空白霜剂组、游离普通霜剂组、纳米复合霜剂组，每组8只。除正常对照组外，模型组小鼠耳每天一次均匀涂抹4nmol卡泊三醇溶液，空白霜剂组、游离普通霜剂组、纳米复合霜剂组以卡泊三醇诱导炎症模型同时，每天予两次涂抹测试样品于鼠耳，造模均为右耳。末次涂抹后，观察耳组织的炎症状况。

耳肿胀率检测：剪下双耳，用打孔器(直径8mm)在剪下的双耳中央处打孔，立即称定耳片质量(mg)，计算耳肿胀率。

耳肿胀率(％)＝(右耳质量-左耳质量)/右耳质量×100％

相关炎症因子检测：取各组小鼠右耳组织，制备匀浆。参照试剂盒说明书的操作步骤，分别检测各组小鼠耳组织提取液中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及胸腺基质淋巴生成素(TSLP)的含量。

病理学检测：取小鼠耳廓固定后，从耳根至耳尖切开，取半只耳廓，垂直于切面石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜下在耳廓全长的中点左右各取同倍率视野拍照。

实验结果见图6～9和表7，图6为纳米组合物对特应性皮炎小鼠耳组织形态学的影响；图7为纳米组合物对炎症因子IFN-γ含量的影响；图8为纳米组合物对炎症因子IL-4含量的影响；图9为纳米组合物对炎症因子TSLP含量的影响；表7为特应性皮炎小鼠耳肿胀率、耳厚度和表皮厚度结果。

表7特应性皮炎小鼠耳肿胀率、耳厚度和表皮厚度结果

分组	耳肿胀率(％)	耳厚度(μm)	表皮厚度(μm)
				正常对照组	7.77±1.33	155.17±16.16	5.23±0.48
模型组	56.79±4.53<sup>&amp;&amp;</sup>	251.56±18.53<sup>&amp;&amp;</sup>	21.56±5.43<sup>&amp;&amp;</sup>
				空白霜剂组	49.40±9.74	215.92±35.17	19.20±3.13
游离普通霜剂组	40.44±6.45<sup>#</sup>	196.19±16.00<sup>##</sup>	15.35±4.54<sup>##</sup>
				纳米复合霜剂组	27.52±5.23<sup>##*</sup>	164.18±23.89<sup>##**</sup>	13.07±2.55<sup>##*</sup>

与正常对照组相比，^&&P<0.01；与模型组对比，^##P<0.01，^#P<0.05；与游离普通霜剂组对比，^**P<0.01，^*P<0.05。

如图6所示，采用卡泊三醇涂抹鼠耳后出现红肿脱屑，表皮增厚，如表7 所示，与正常对照组比较，模型组小鼠耳肿胀率、耳厚度和表皮厚度显著增加(^&&P<0.01)，表明造模成功。在表7和图6中，与模型组比较，游离普通霜剂组和纳米复合霜剂组耳肿胀率、耳厚度和表皮厚度较模型组明显下降 (^##P<0.01，^#P<0.05)，表明本发明复合神经酰胺纳米组合物能有效减轻皮肤炎症，修复皮肤损伤。其中纳米复合霜剂组的耳肿胀率、耳厚度和表皮厚度显著小于游离普通霜剂组(^**P<0.01，^*P<0.05)，说明神经酰胺等活性物经纳米包载后对皮肤炎症修复效果更佳。

由图7～9可知，小鼠耳组织提取液中，与正常对照组比较，模型组小鼠的相关炎症因子含量均显著增加(^&&P<0.01)，表明造模成功。与模型组相比，游离普通霜剂组和纳米复合霜剂组的炎症因子含量都明显降低(^##P< 0.01，^#P<0.05)，表明本发明复合神经酰胺纳米组合物能有效减轻皮肤炎症。其中，与游离普通霜剂组比较，纳米复合霜剂组的IL-4和TSLP含量的降低具有显著性差异(^*P<0.05)，说明神经酰胺等活性物经纳米包载后具有更优异的消除皮肤炎症效果。

以上结果表明，本发明复合神经酰胺纳米组合物能够减轻特应性皮炎小鼠的炎症反应，降低相关炎症因子的含量，且效果明显优于游离普通霜剂。

实施例22：

皮肤即时含水量的测定。

取实施例14、实施例16和对比例9分别制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂进行皮肤保湿功效评价测试，测试仪器为德国CK公司生产的皮肤水份含量测试仪CM825。

选取20名皮肤健康、无化妆品过敏史、年龄为18～50岁的志愿者作为受试者，选择受试者左、右手臂内侧距手掌基部5cm处为试验部位，试验面积为3×3cm²，试验部位分别涂抹等量的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂，另设不涂抹任何膏霜的空白对照部位。试验前，受试者统一清洁双手前臂内侧，在温度(22±2)℃，相对湿度(50±10)％中静坐20min，测试涂抹样品前各试验部位皮肤水含量起始值及使用霜剂0.5h、1h、2h、4h、6h、8h时各试验部位皮肤水含量测试值，每次平行测定5次，取平均值。由下式计算样品皮肤含水量变化率，实验结果见图10，图10为实施例14、实施例16 和对比例9分别制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用8h后皮肤含水量变化率，皮肤含水量增加率计算公式为：

皮肤含水量增加率＝(使用后含水量－使用前含水量)/使用前含水量 *100％

由图10可知，使用空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂后皮肤含水量均高于空白对照组，使用样品0.5h和1h后，纳米复合霜剂涂抹部位的皮肤含水量显著高于同浓度活性成分的游离普通霜剂(^**P<0.01或^*P<0.05)。 2h、4h、6h和8h后，纳米复合霜剂涂抹部位的皮肤含水量平均值仍高于游离普通霜剂，表明本发明提供的复合神经酰胺纳米组合物中活性成分经纳米包载后能快速穿透皮肤表层，并且能在较长时间维持在有效浓度，具有优异的即时保湿效果和长效保湿效果。

实施例23：

皮肤7天和14天水分含量和经表皮水分流失测试。

取实施例14、实施例16和对比例9分别制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂进行皮肤保湿功效评价测试，测试仪器为德国CK公司生产的皮肤水分含量测试仪CM825和皮肤水分流失测试仪TM300。

选取20名皮肤健康、无化妆品过敏史、年龄为18～50岁的志愿者作为受试者，选择受试者左、右手臂内侧距手掌基部5cm处为试验部位，试验面积为3×3cm²，试验部位分别早晚各1次涂抹等量的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂，另设不涂抹任何膏霜的空白对照部位。在使用前、使用后第7 天和第14天分别进行测试。测试前，受试者用洁净水清洗测试部位并擦干后暴露测试部位，需要在温度(22±2)℃，相对湿度(50±10)％环境下静坐20min。使用CM825皮肤水分测试探头测定试验部位的角质层含水量，取5次测量平均值作为测试值，计算7天和14天皮肤含水量变化率，计算公式同实施例22。使用Tewameter TM300经皮水分流失测试仪测量受试者使用样品前和使用7 天、14天后皮肤经皮水分流失(Transepidermal water loss，TEWL)值，由下式计算样品经皮失水值减少率：

经皮失水值减少率＝(使用前经皮水分流失值－使用后经皮水分流失值) /使用前经皮水分流失值*100％

实验结果见图11和图12，图11为实施例14、实施例16和对比例9制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用14天皮肤含水量变化率；图12为实施例14、实施例16和对比例9制得的空白霜剂、纳米复合霜剂和游离普通霜剂使用14天经皮失水值减少率。

由图11可知，志愿者使用7天后，空白霜剂、游离普通霜剂和纳米复合霜剂涂抹部位的皮肤含水量分别提高了27.33％、33.16％、60.76％；志愿者使用14天后，3个部位皮肤含水量分别提高了33.10％、48.59％、70.23％，纳米复合霜剂涂抹部位的皮肤含水量增加率显著高于同浓度活性成分的游离普通霜剂(^*P<0.05)，表明活性成分经纳米包载后能更快提高皮肤的水合能力，长期使用本发明复合神经酰胺纳米组合物能显著提升皮肤的含水量，减少水分通过皮肤角质层流失，增加角质层持水能力，使皮肤恢复屏障功能，同时有效提高皮肤水合能力。

由图12可知，志愿者使用7天后，空白霜剂、游离普通霜剂和纳米复合霜剂涂抹部位的经皮失水值分别减少了8.43％、12.61％、24.00％，志愿者使用14天后，经皮失水值分别减少了11.15％、18.13％、33.17％，纳米复合霜剂涂抹部位的经皮失水值减少率显著高于同浓度活性成分的游离普通霜剂 (^*P<0.05)，表明活性成分经纳米包载后透皮性能和滞留性能都显著提升，保湿修复效果显著增强，长期使用本发明复合神经酰胺纳米组合物能有效修复角质屏障，减少皮肤水分散失，提升皮肤锁水能力。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (7)

1.一种复合神经酰胺纳米组合物，其特征在于，由以下质量份数的组分制备得到：

0.1～10份神经酰胺NP；

0.01～5份神经酰胺NS/神经酰胺NG；

0.01～2份神经酰胺AP；

0.0001～0.1份神经酰胺EOP；

0～1份神经酰胺AS；

0.01～2份植物鞘氨醇；

0.001～10份岩兰草提取物；

0.1～5份胆甾醇；

0.5～20份磷脂；

1～20份液体脂质；

1～20份乳化剂；

5～40份助乳化剂；

0.1～5份促渗剂；

余量的水；

所述磷脂包括质量比为2:1的大豆卵磷脂和氢化卵磷脂；

所述液体脂质包括质量比为2:1的亚油酸甘油酯和甘油三(乙基己酸)酯；

所述乳化剂包括质量比为1:1的癸基葡糖苷和聚甘油-10肉豆蔻酸酯；

所述助乳化剂包括质量比为1:1的二乙二醇单乙基醚和PPG-26-丁醇聚醚-26。

2.根据权利要求1所述的复合神经酰胺纳米组合物，其特征在于，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：

6～8份神经酰胺NP；

0.5～1份神经酰胺NS/神经酰胺NG；

0.1～0.5份神经酰胺AP；

0.001～0.005份神经酰胺EOP；

0.2～0.6份神经酰胺AS；

0.1～0.4份植物鞘氨醇；

0.01～1份岩兰草提取物；

0.2～1份胆甾醇；

12～18份磷脂；

12～16份液体脂质；

12～16份乳化剂；

25～30份助乳化剂；

2～4份促渗剂；

余量的水。

3.根据权利要求2所述的复合神经酰胺纳米组合物，其特征在于，所述复合神经酰胺纳米组合物包括以下质量份数的组分：

8份神经酰胺NP；

1份神经酰胺NS/神经酰胺NG；

0.2份神经酰胺AP；

0.002份神经酰胺EOP；

0.5份神经酰胺AS；

0.2份植物鞘氨醇；

0.8份岩兰草提取物；

0.5份胆甾醇；

15份磷脂；

15份液体脂质；

14份乳化剂；

30份助乳化剂；

3.5份促渗剂；

余量的水。

4.根据权利要求1～3任意一项所述复合神经酰胺纳米组合物，其特征在于，所述复合神经酰胺纳米组合物的粒径为10～200nm，多分散系数为0.1～0.3。

5.一种权利要求1～4任意一项所述的复合神经酰胺纳米组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将神经酰胺NP、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺AP、神经酰胺EOP、神经酰胺AS、植物鞘氨醇、磷脂、胆甾醇、液体脂质、乳化剂、助乳化剂和油溶性促渗剂混合后，得到油相；

将岩兰草提取物、水溶性促渗剂和水混合后，得到水相；

将所述油相与所述水相混合乳化后微米化处理，得到微米级分散体；

将所述微米级分散体进行纳米化处理，得到复合神经酰胺纳米组合物。

6.一种化妆品组合物，其特征在于，包括权利要求1～4任意一项所述复合神经酰胺纳米组合物和化妆品辅料。

7.一种权利要求1～4任意一项所述的复合神经酰胺纳米组合物在制备保湿和修复功效的化妆品中的应用。

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