CN114166970A - 沉香舒郁片的质量控制方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种沉香舒郁片的质量控制方法及其应用，涉及药物分析技术领域。所述沉香舒郁片的质量控制方法对沉香舒郁片供试品溶液以及对照品溶液的高效液相指纹图谱进行比较，进而对沉香舒郁片的主要有效活性物质进行检测。其中，所述对照品溶液包括沉香四醇对照品溶液、柚皮苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液、新橙皮苷对照品溶液、厚朴酚对照品溶液、和厚朴酚对照品溶液、木香烃内酯对照品溶液以及去氢木香内酯对照品溶液中的至少一种。本发明的上述方法建立了沉香舒郁片的指纹图谱技术标准，通过指纹图谱中共有峰的有无特征，能够有效全面的监控沉香舒郁片的质量，具有稳定性佳、重复性好，可操作性强的特点。

Description

沉香舒郁片的质量控制方法及其应用
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其是涉及一种沉香舒郁片的质量控制方法及其应用。
背景技术
沉香舒郁片具有化瘀止痛、舒气开胃的功效，对于治疗郁闷不舒、胃不疼痛、食欲不振、消化不良、胸腹胀满、吐酸水等症具有很好的疗效。
然而沉香舒郁片涉及多位药材中的多种活性成分，组成复杂，传统的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法无法全面控制产品质量。近年来，指纹图谱技术已经成为中药复方质量控制与评价的重要手段，目前尚无利用高效液相指纹图对沉香舒郁片进行质量控制的报道，因此，建立沉香舒郁片的指纹图谱对其产品质量进行全面控制具有重要意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种沉香舒郁片的质量控制方法，所述质量控制方法建立了沉香舒郁片的指纹图谱技术标准，通过指纹图谱中共有峰的有无特征，能够有效全面的监控沉香舒郁片的质量，具有稳定性佳、重复性好，可操作性强的特点。
本发明的第二目的在于提供一种沉香舒郁片的质量控制方法的应用，所述沉香舒郁片的质量控制方法可以广泛应用于沉香舒郁片的质量鉴别中。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供的一种沉香舒郁片的质量控制方法，所述方法包括以下步骤：
提供沉香舒郁片供试品溶液和对照品溶液，随后利用高效液相色谱法分析得到沉香舒郁片供试品溶液和对照品溶液的指纹图谱，然后比较指纹图谱，得到沉香舒郁片的质量报告；
所述对照品溶液包括沉香四醇对照品溶液、柚皮苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液、新橙皮苷对照品溶液、厚朴酚对照品溶液、和厚朴酚对照品溶液、木香烃内酯对照品溶液以及去氢木香内酯对照品溶液中的至少一种。
进一步的，所述高效液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱为键合相色谱柱；流动相包括A和B，其中A为乙腈，B为甲酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；流动相的梯度洗脱程序如下：
0～22min，A：15～20％、B：85～80％；
22.1～32min，A：20～29％、B：80～71％；
32.1～48min，A：29～50％、B：71～50％；
48.1～55min，A：50～55％、B：50～45％；
55.1～70min，A：55～88％、B：45～12％；
其中，上述比例为体积比。
进一步的，所述高效液相色谱的进样量为15～25μl，优选为20μl。
进一步的，所述键合相色谱柱为十八烷基硅烷键合色谱柱，优选为YMC-Pack ODS-A，5μm，12nm，4.6×250mm，YMC。
进一步的，所述高效液相色谱的柱温为25～35℃，优选为35℃。
进一步的，所述高效液相色谱的检测波长为210～320nm，优选为252nm。
进一步的，所述沉香舒郁片供试品溶液主要由沉香舒郁片粉碎后经甲醇加热回流提取制得；
优选地，所述加热回流提取的温度为80～85℃，时间为10～60min；
更优选地，所述加热回流提取的温度为85℃，时间为20min；
优选地，所述甲醇为质量浓度70％的甲醇。
进一步的，所述对照品溶液主要由沉香四醇、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、木香烃内酯或去氢木香内酯溶解于甲醇中制得。
更进一步的，所述沉香四醇对照品溶液的浓度为42.07μg/ml、柚皮苷对照品溶液的浓度为0.35836g/ml、橙皮苷对照品溶液的浓度为0.39978mg/ml、新橙皮苷对照品溶液的浓度为81.26μg/ml、厚朴酚对照品溶液的浓度为40.96μg/ml、和厚朴酚对照品溶液的浓度为20.00μg/ml、木香烃内酯对照品溶液的浓度为0.083357mg/ml、去氢木香内酯对照品溶液的浓度为0.083341mg/ml。
本发明提供的一种上述沉香舒郁片的质量控制方法在鉴别沉香舒郁片质量中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的沉香舒郁片的质量控制方法，所述方法通过对沉香舒郁片供试品溶液以及对照品溶液的高效液相指纹图谱进行比较，进而对沉香舒郁片的主要有效活性物质进行检测，进而有效的表征沉香舒郁片的质量，其中，所述对照品溶液包括沉香四醇对照品溶液、柚皮苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液、新橙皮苷对照品溶液、厚朴酚对照品溶液、和厚朴酚对照品溶液、木香烃内酯对照品溶液以及去氢木香内酯对照品溶液中的至少一种。本发明的上述方法建立了沉香舒郁片的指纹图谱技术标准，通过指纹图谱中共有峰的有无特征，能够有效全面的监控沉香舒郁片的质量，具有稳定性佳、重复性好，可操作性强的特点。
本发明提供的沉香舒郁片的质量控制方法可以广泛应用于沉香舒郁片的质量鉴别中。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一种实施例2提供的不同梯度洗脱条件下沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图2为本发明一种实施例2提供的不同柱温条件下沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图3为本发明一种实施例2提供的210nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图4为本发明一种实施例2提供的230nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图5为本发明一种实施例2提供的252nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图6为本发明一种实施例2提供的280nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图7为本发明一种实施例2提供的320nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图8为本发明一种实施例3提供的沉香舒郁片高效液相色谱测定色谱图；
图9为本发明一种实施例4提供的沉香四醇对照品色谱图；
图10为本发明一种实施例4提供的柚皮苷对照品色谱图；
图11为本发明一种实施例4提供的橙皮苷对照品色谱图；
图12为本发明一种实施例4提供的新橙皮苷对照品色谱图；
图13为本发明一种实施例4提供的木香烃内酯和去氢木香内酯对照品色谱图；
图14为本发明一种实施例4提供的厚朴酚与和厚朴酚对照品色谱图；
图15为本发明一种实施例8提供的不同流速下沉香舒郁片的叠加色谱图；
图16为本发明一种实施例8提供的沉香舒郁片指纹图谱不同酸度色谱条件对比图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本申请所采用的试剂材料均为普通市售品，皆可市售购得，具体如下：
(1)、仪器设备：
AL204IC电子天平，梅特勒公司；
MS303电子天平，梅特勒公司；
KQ-400VDE超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；
Waters e2695高效液相色谱仪，美国Waters公司。
(2)、试剂试药：
沉香舒郁片(批号400009、400010、FJ40007、FJ40008、GA40009、GA40010、FF40004)，由天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂提供；
沉香四醇对照品(批号111980-201602)，含量以98.3％计，购自中国食品药品检定研究院；
柚皮苷对照品(批号110722-201815)，含量以91.7％计，购自中国食品药品检定研究院；
橙皮苷对照品(批号110721-201617)，购自中国食品药品检定研究院；
新橙皮苷对照品(批号111857-201703)，含量以98.3％计，购自中国食品药品检定研究院；
和厚朴酚对照品(批号110730-201614)，含量以99.3％计，购自中国食品药品检定研究院；
厚朴酚对照品(批号110729-201714)，含量以100.0％计，购自中国食品药品检定研究院；
木香烃内酯(批号111524-201911)，含量以99.9％计，购自中国食品药品检定研究院；
去氢木香内酯(批号111525-201912)，含量以99.5％计，购自中国食品药品检定研究院；
沉香对照药材(批号121222-201203)，购自中国食品药品检定研究院；
木香对照药材(批号120921-201309)，购自中国食品药品检定研究院；
陈皮对照药材(批号120969-201510)，购自中国食品药品检定研究院；
甘草对照药材(批号120904-201620)，购自中国食品药品检定研究院；
厚朴对照药材(批号121285-201303)，购自中国食品药品检定研究院；
柴胡对照药材(批号120992-201509)，购自中国食品药品检定研究院；
青皮对照药材(批号121155-201704)，购自中国食品药品检定研究院；
砂仁对照药材(批号120985-201406)，购自中国食品药品检定研究院；
枳壳对照药材(批号120981-201104)，购自中国食品药品检定研究院；
延胡索对照药材(批号120928-201609)，购自中国食品药品检定研究院；
姜黄对照药材(批号121188-201605)，购自中国食品药品检定研究院；
香附对照药材(批号121059-201808)，购自中国食品药品检定研究院；
豆蔻药材(批号Y2004083)，由天津中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂提供；
甲醇、乙腈为色谱纯，甲酸、乙醇为分析纯，水为纯化水。
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1沉香舒郁片供试品溶液制备条件的确定：
(1)、提取溶剂种类的选择
取沉香舒郁片(批号400009)，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，称取6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇、70％甲醇、50％甲醇、无水乙醇、70％乙醇和50％乙醇各25ml，称定重量，超声处理30min(40kHz、500W)，放冷，再称定重量，分别用各自溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表1为沉香舒郁片不同提取溶剂各峰峰面积对比，具体如下：
Figure BDA0003387845110000051
Figure BDA0003387845110000061
由上述结果可知，以甲醇、无水乙醇和70％乙醇作为提取溶剂时4号峰峰面积小于其他溶剂；50％甲醇为提取溶剂时，18号峰峰面积要明显小于其他溶剂；70％甲醇和50％乙醇各色谱峰峰面积除4号峰外，其他峰面积RAD均小于2.0％，对于4号峰70％甲醇为提取溶剂提取率较高，所以选择70％甲醇作为提取溶剂。
(2)、提取方式的选择：
取沉香舒郁片(批号400009)，粉碎成细粉，分别取粉末约0.5g，精密称定，平行称取3份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇各25ml，称定重量，分别采用85℃水浴回流、超声处理(40kHz、500W)、超声处理(20kHz、500W)的方式各30min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
表2为不同提取方式沉香舒郁片各峰峰面积对比，具体如下：
Figure BDA0003387845110000071
由上述可知，不同提取方式中除4号峰外其他各色谱峰峰面积无明显差异，4号峰回流提取的方式提取率较高，所以选取加热回流的提取方式。
因此，由上述(1)、(2)得到，本申请沉香舒郁片供试品溶液的制备方法如下：
取沉香舒郁片，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
实施例2色谱条件的确定：
(1)、流动相的选择，本申请流动相的选择通过以下方法得到：
将沉香舒郁片供试品溶液，按如下梯度洗脱条件Ⅰ～VI进样测定，在YMC-PackODS-A(5μm，12nm，4.6×250mm，YMC)色谱柱上分离，检测波长为252nm，柱温为30℃，流速为每分钟1.0ml，优化梯度洗脱条件，梯度洗脱程序如下：
梯度洗脱条件Ⅰ
Figure BDA0003387845110000081
梯度洗脱条件Ⅱ
Figure BDA0003387845110000082
梯度洗脱条件Ⅲ
Figure BDA0003387845110000083
梯度洗脱条件Ⅳ
Figure BDA0003387845110000084
梯度洗脱条件V
Figure BDA0003387845110000085
Figure BDA0003387845110000091
梯度洗脱条件VI
Figure BDA0003387845110000092
图1为上述梯度洗脱条件Ⅰ～VI的沉香舒郁片供试品色谱图色谱图。
如图1所示。按梯度条件IV进行洗脱，色谱图的峰数量、色谱峰的分离度要优于其他色谱条件，故选择梯度洗脱条件IV。
(2)、柱温的选择，本申请柱温的选择通过以下方法得到：
将沉香舒郁片供试品溶液，在YMC-Pack ODS-A(5μm，12nm，4.6×250mm，YMC)色谱柱上分离，按梯度洗脱条件IV，检测波长为252nm，流速为每分钟1.0ml，分别采用25℃、30℃、35℃的柱温进行测定，选择最优柱温条件。
图2为不同柱温条件下沉香舒郁片供试品色谱图色谱图。
由图2可知，随着柱温的提高，各色谱峰前移，且会影响部分色谱峰的分离度，综合分析，柱温为35℃时上图标识中色谱峰分离度较好。所以，选定柱温为35℃。
(3)、检测波长的选择，本申请检测波长的选择通过以下方法得到：
提取210nm、230nm、252nm、280nm和320nm波长下的色谱图进行对比，色谱图见图3～7。
图3为波长210nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图4为波长230nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图5为波长252nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图6为波长280nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
图7为波长320nm时沉香舒郁片供试品色谱图色谱图；
由图3～7可知，以252nm作为检测波长时，色谱图上化合物的信息较为丰富，基线平稳。因此选择252nm作为检测波长，来进行数据统计分析。
因此，由上述(1)～(3)得到，本申请的色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-Pack ODS-A，5μm，12nm，4.6×250mm，YMC)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为252nm；柱温为35℃；流速为每分钟1.0ml。
Figure BDA0003387845110000101
实施例3
一种沉香舒郁片高效液相色谱测定方法，具体如下：
色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(YMC-Pack ODS-A，5μm，12nm，4.6×250mm，YMC)；以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为252nm；柱温为35℃；流速为每分钟1.0ml。
Figure BDA0003387845110000102
供试品溶液的制备：取沉香舒郁片，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
图8为本实施例沉香舒郁片高效液相色谱测定色谱图。其中峰1s：沉香四醇、峰3：柚皮苷、峰4：橙皮苷、峰5：新橙皮苷、峰14：和厚朴酚、峰15：木香烃内酯、峰17：去氢木香内酯、峰18：厚朴酚。
实施例4色谱峰的指认
分别使用甲醇作为溶剂配制沉香四醇对照品溶液(浓度42.07μg/ml)、柚皮苷对照品溶液(浓度0.35836g/ml)、橙皮苷对照品溶液(浓度0.39978mg/ml)、新橙皮苷对照品溶液(浓度81.26μg/ml)、木香烃内酯对照品溶液(浓度0.083357mg/ml)、去氢木香内酯对照品溶液(浓度0.083341mg/ml)、厚朴酚对照品溶液(浓度40.96μg/ml)、和厚朴酚对照品溶液(浓度20.00μg/ml)。
将上述各对照品溶液按照实施例3的色谱条件进样测定；
图9为沉香四醇对照品色谱图；
图10为柚皮苷对照品色谱图；
图11为橙皮苷对照品色谱图；
图12为新橙皮苷对照品色谱图；
图13为木香烃内酯和去氢木香内酯对照品色谱图；
图14为厚朴酚与和厚朴酚对照品色谱图；
将本实施例中各对照品色谱图与实施例3得到的沉香舒郁片高效液相色谱图进行比照，沉香舒郁片中均存在以上对照品色谱峰，其中沉香四醇峰保留时间和峰面积均适中，且分离度较好，所以选取沉香四醇峰为参照物峰。
实施例5精密度试验：
取沉香舒郁片(批号400009)，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述“2.2.1.2.5”色谱条件进行测定，连续测定6次，以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间(各峰相对保留时间＝各色谱峰保留时间/沉香四醇峰保留时间)和相对峰面积(各峰相对峰面积＝各色谱峰峰面积/沉香四醇峰面积)，结果见表3、表4：
表3：沉香舒郁片指纹图谱精密度试验(相对保留时间)：
Figure BDA0003387845110000111
Figure BDA0003387845110000121
表4：沉香舒郁片指纹图谱精密度试验(相对峰面积)：
Figure BDA0003387845110000122
由上述结果可知，沉香舒郁片供试品溶液主要色谱峰相对保留时间的RSD<3.0％，各峰相对峰面积的RSD<3.0％，说明精密度试验符合要求。
实施例6重复性试验：
取沉香舒郁片(批号400009)，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，平行6份，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述实施例3色谱条件进行测定，以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表5、表6。
表5：沉香舒郁片指纹图谱重复性试验(相对保留时间)：
Figure BDA0003387845110000123
Figure BDA0003387845110000131
表6：沉香舒郁片指纹图谱重复性试验(相对峰面积)：
Figure BDA0003387845110000132
由上述结果可知，沉香舒郁片供试品溶液主要色谱峰相对保留时间的RSD<3.0％，各峰相对峰面积的RSD<3.0％，说明重现性试验符合要求。
实施例7稳定性试验：
取沉香舒郁片(批号400009)，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述实施例3色谱条件条件分别于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时测定，以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表7～10。
表7：沉香舒郁片指纹图谱稳定性试验(相对保留时间0～12h)：
Figure BDA0003387845110000141
表8：沉香舒郁片指纹图谱稳定性试验(相对保留时间14～24h)：
Figure BDA0003387845110000142
表9：沉香舒郁片指纹图谱稳定性试验(相对峰面积0～12h)：
Figure BDA0003387845110000143
Figure BDA0003387845110000151
表10：沉香舒郁片指纹图谱稳定性试验(相对峰面积14～24h)：
Figure BDA0003387845110000152
由上述分析可知，沉香舒郁片供试品溶液主要色谱峰相对保留时间的RSD<3.0％，各峰相对峰面积的RSD<3.0％，说明供试品溶液在24小时内基本稳定。
实施例8耐用性试验
(1)、柱温耐用性试验：取沉香舒郁片(批号400009)供试品溶液，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述“2.2.1.2.5”色谱条件分别于柱温25℃、30℃、35℃、40℃下进行测定，以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，具体如表11、表12所示：
表11：沉香舒郁片指纹图谱耐用性试验-柱温考察(相对保留时间)：
Figure BDA0003387845110000161
表12、耐用性柱温试验相似度结果：
Figure BDA0003387845110000162
由上述分析可知，四个柱温下的沉香舒郁片液相指纹图谱相似度均<0.90，因此可表明沉香舒郁片相指纹图谱的检测方法对柱温的耐用性不好，所以柱温限定在35℃。
(2)、流速耐用性试验：
取沉香舒郁片(批号400009)供试品溶液，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述“2.2.1.2.5”色谱条件分别于流速0.8ml/min、流速0.9ml/min、流速1.0ml/min、流速1.1ml/min、流速1.2ml/min下进行测定，各流速的叠加图如图15所示。
图15为本实施例提供的不同流速下沉香舒郁片的叠加色谱图。
由以上色谱图可知，流速为0.8ml/min，红虚线框处分离度未达到要求，其他流速各色谱峰差异不明显。
以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表13、14。
表13、沉香舒郁片指纹图谱考察耐用性试验-流速考察(相对保留时间)：
Figure BDA0003387845110000171
表14、耐用性流速试验相似度结果：
Figure BDA0003387845110000172
由上述分析可知，以上五个流速的沉香舒郁片液相指纹图谱相似度均＞0.90，除流速为0.8ml/min峰分离度不符合要求外，其他流速各色谱峰无明显差异，说明沉香舒郁片液相指纹图谱的检测方法流速在0.9ml/min～1.2ml/min耐用性较好。
(3)、流动相酸量耐用性试验：
取沉香舒郁片(批号400009)供试品溶液，粉碎成细粉，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，加热回流提取(85℃水浴)20min，放冷，再称定重量，分别用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按上述“2.2.1.2.5”色谱条件分别于0.05％甲酸水、0.1％甲酸水、0.15％甲酸水、0.2％甲酸水下进行测定，对比图如图16所示。
图16为沉香舒郁片指纹图谱不同酸度色谱条件对比图。由图16可知，不同流动相酸度条件下，除虚线框中色谱峰分离度不符合要求外，其他条件各色谱峰差异不明显。
以1号峰(沉香四醇)的保留时间和峰面积为参照，计算各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果见表15～16。
表15、沉香舒郁片指纹图谱考察耐用性试验-酸度考察(相对保留时间)：
Figure BDA0003387845110000181
表16、耐用性酸度试验相似度结果：
Figure BDA0003387845110000182
以上不同流动相酸度沉香舒郁片液相指纹图谱相似度均＞0.90，除0.05％甲酸个别峰分离度不符合要求外，其他流动相酸度各色谱峰无明显差异，说明沉香舒郁片液相指纹图谱的检测方法流动相甲酸浓度在0.1％～0.2％之间耐用性较好。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
提供沉香舒郁片供试品溶液和对照品溶液，随后利用高效液相色谱法分析得到沉香舒郁片供试品溶液和对照品溶液的指纹图谱，然后比较指纹图谱，得到沉香舒郁片的质量报告；
所述对照品溶液包括沉香四醇对照品溶液、柚皮苷对照品溶液、橙皮苷对照品溶液、新橙皮苷对照品溶液、厚朴酚对照品溶液、和厚朴酚对照品溶液、木香烃内酯对照品溶液以及去氢木香内酯对照品溶液中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱为键合相色谱柱；流动相包括A和B，其中A为乙腈，B为甲酸溶液；流动相的流速为1.0ml/min；流动相的梯度洗脱程序如下：
0～22min，A：15～20％、B：85～80％；
22.1～32min，A：20～29％、B：80～71％；
32.1～48min，A：29～50％、B：71～50％；
48.1～55min，A：50～55％、B：50～45％；
55.1～70min，A：55～88％、B：45～12％；
其中，上述比例为体积比。
3.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述高效液相色谱的进样量为15～25μl，优选为20μl。
4.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述键合相色谱柱为十八烷基硅烷键合色谱柱，优选为YMC-Pack ODS-A，5μm，12nm，4.6×250mm，YMC。
5.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述高效液相色谱的柱温为25～35℃，优选为35℃。
6.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测波长为210～320nm，优选为252nm。
7.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述沉香舒郁片供试品溶液主要由沉香舒郁片粉碎后经甲醇加热回流提取制得；
优选地，所述加热回流提取的温度为80～85℃，时间为10～60min；
更优选地，所述加热回流提取的温度为85℃，时间为20min；
优选地，所述甲醇为质量浓度70％的甲醇。
8.根据权利要求1所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述对照品溶液主要由沉香四醇、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、木香烃内酯或去氢木香内酯溶解于甲醇中制得。
9.根据权利要求8所述的沉香舒郁片的质量控制方法，其特征在于，所述沉香四醇对照品溶液的浓度为42.07μg/ml、柚皮苷对照品溶液的浓度为0.35836g/ml、橙皮苷对照品溶液的浓度为0.39978mg/ml、新橙皮苷对照品溶液的浓度为81.26μg/ml、厚朴酚对照品溶液的浓度为40.96μg/ml、和厚朴酚对照品溶液的浓度为20.00μg/ml、木香烃内酯对照品溶液的浓度为0.083357mg/ml、去氢木香内酯对照品溶液的浓度为0.083341mg/ml。
10.一种根据权利要求1～9任一项所述的沉香舒郁片的质量控制方法在鉴别沉香舒郁片质量中的应用。
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