CN114164041A - 一种提取高山被孢霉所含油脂的方法 - Google Patents

Abstract

一种提取高山被孢霉所含油脂的方法，包括以下步骤：（1）将高山被孢霉菌种发酵所得到的微生物发酵液进行过滤，得到高山被孢霉湿细胞；（2）高山被孢霉湿细胞加入到低共熔溶剂中，然后加热、反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离，得到溶液；低共熔溶剂中氢键供体化合物为磷酸或硫酸，氢键受体化合物为氯化胆碱或甜菜碱；（3）对溶液进行离心分离，收集上层油脂；（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后，收集沉淀物。本发明能有效提取出高山被孢霉细胞内所含的油脂，工艺简单，成本低廉且安全，低能耗，还可获得甲壳素、蛋白质等副产物。

Description

一种提取高山被孢霉所含油脂的方法

技术领域

本发明涉及油脂提取方法，具体涉及一种采用低共熔溶剂提取高山被孢霉所含油脂的方法。

背景技术

多不饱和脂肪酸（PUFAs）对人体的生长发育及身体健康起着至关重要的作用。人体维持各种组织的正常功能，必须保证有充足的各种脂肪酸，如果缺乏，则会引发一系列症状（例如生长发育迟缓、皮肤异常鳞屑、智力障碍等）。

ARA(AA)学名二十碳四烯酸，又名花生四烯酸，属Omega6族长链多元不饱和脂肪酸。花生四烯酸（ARA）作为一种重要的PUFAs，在婴幼儿增强记忆、思维能力，保护视力，提高智力等方面具有非常显著的作用。当婴幼儿膳食中长期缺乏ARA时，会导致婴幼儿患迟发型的败血症。ARA在血液、肝脏、肌肉和其他器官系统中作为磷脂结合的结构脂类起重要作用。高纯度的花生四烯酸是合成前列腺素，血栓烷素和白细胞三烯等二十碳衍生物的直接前体，这些生物活性物质对人体心血管系统及免疫系统具有十分重要的作用。

在婴幼儿时期ARA属于必需脂肪酸，但是在婴幼儿期，体内合成ARA的能力较低，因此对于正处于体格发育黄金期的婴幼儿来说，在食物中提供一定的ARA，会更有利于其体格的发育。ARA的缺乏对于人体组织器官的发育，尤其是大脑和神经系统发育可能产生严重不良影响。成长后人体能由必需脂肪酸亚油酸、亚麻酸转化而成ARA，因此ARA属于半必需脂肪酸。

ARA广泛分布于动物界，少量存在于某个种的甘油酯中，也能在甘油磷脂类中找到，蛋黄、深海鱼类、海草等海产品中也存在。其中，利用高山被孢霉发酵提取ARA被广泛采用。高山被孢霉来源的ARA油脂EPA含量低，异养发酵可以制备不含或者含很少量重金属和有机污染物的ARA油脂。

从高山被孢霉提取ARA油脂的特殊之处在于，细胞破壁后油脂无法直接游离于发酵液中，油脂会与细胞壁的糖类、蛋白质结合，这是一直困扰业界的问题，也是阻挠高山被孢霉非溶剂法提取ARA油脂的关键因素。高山被孢霉提取ARA油脂若使用碱酶法破壁提油，油脂游离到发酵液中容易与碱发生皂化反应，降低了提油得率。

目前使用微生物发酵生产ARA油脂的技术已经非常成熟，但是在微生物发酵生产ARA油脂的提取工艺上仍存在上述一些问题，需要进行改进。例如，公开号CN101195813A的发明专利申请说明书公开了一种使用高压均质破碎细胞壁提取油脂的工艺，该工艺需要使用到120MPa的高压多次对微生物细胞进行破碎，生产所需要的能耗巨大，不利于实现大规模生产。又如，公开号CN101985637B的发明专利说明书公开了一种使用微生物自溶提取微生物油脂的方法，该工艺需要使用到6号抽提溶剂、己烷、庚烷或石油醚，这为企业生产带来了不稳定的风险，也为有机溶剂残留危害进入食品链提供了可能。

在ARA油脂制造行业，有机溶剂经常作为萃取剂被使用，后续一般是通过真空干燥把有机溶剂从产品中蒸发出来。如果真空干燥温度、真空度和时间控制不恰当，那么有机溶剂在产品中的残留量在一定程度上会增加，从而进入后续的生产过程中，最终被消费者食用。有机溶剂最大的特点就是易挥发，继而通过呼吸道进入人的体内，从而损害中枢神经和呼吸道，甚至内脏器官。因此，若有可能，应减少使用有机溶剂，以减少看不见的危害进入食品链的可能。

低共熔溶剂（DESs）的概念于2003年由Abbott等首次提出，是一种由氢键受体（hydrogenbondacceptor,HBA）和氢键供体（hydrogenbonddonor,HBD）以一定化学计量比在一定条件下形成的低共熔混合物。DESs中氢键的相互作用导致电荷离域，从而使混合物的熔点低于各组成成分自身的熔点，因此所形成的混合物在室温下呈液态体系。这些氢键的强度直接影响溶剂的相变温度、稳定性及独特的物理化学和热力学性质。低共熔溶剂易制备，价格低廉，具有可生物降解、无毒、环境友好、难挥发、不易燃等特点，是一种很有前途的溶剂。然而，应用于化工领域的DESs组成成分通常生物相容性不佳，这限制了DESs在食品和医药工业中的应用。例如，公开号CN106939043A的专利申请说明书公开了一种使用低共熔溶剂-盐双水相提取藻蓝蛋白的方法，其所用氢键供体为葡萄糖、甘油、山梨糖醇、乙二醇、尿素、甲脲中的一种或多种，经过实验证明，在提取高山被孢霉过程中葡萄糖、山梨糖醇、尿素、甲脲等氢键供体的流动性并不佳，无法快速渗入高山被孢霉细胞壁以对细胞原生质层起到溶解分离作用，而甘油、乙二醇虽然流动性优良，但其低共熔溶剂的PH值5~7，对于高山被孢霉的油脂提取及蛋白质、甲壳素的提取尤为不利。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种提取高山被孢霉所含油脂的方法，该方法能有效提取出高山被孢霉细胞内所含的油脂（如ARA油脂），工艺简单，成本低廉且安全，低能耗，还可获得甲壳素、蛋白质等副产物。采用的技术方案如下：

一种提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵所得到的微生物发酵液进行过滤，得到高山被孢霉湿细胞；

（2）以步骤（1）得到的高山被孢霉湿细胞为原料，或以高山被孢霉湿细胞干燥后得到的高山被孢霉细胞粉为原料，加入到低共熔溶剂中，得到混合物料；然后将混合物料加热至80~120℃，在80~120℃的温度下反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离，得到溶液；

所述低共熔溶剂由氢键供体化合物和氢键受体化合物组合而成，其中氢键供体化合物为磷酸或硫酸，氢键受体化合物为氯化胆碱或甜菜碱；

所述低共熔溶剂pH值≤2.5、粘度≤100mPa·s；

（3）采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离，收集上层油脂；

（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后，收集沉淀物。

上述步骤（4）中，截流物为甲壳素，沉淀物为蛋白质。

以上低共熔溶剂提取高山被孢霉所含油脂的方法中，针对高山被孢霉的细胞结构，氢键供体选用磷酸或硫酸，在合适的酸性条件下（pH值≤2.5），有利于溶解高山被孢霉细胞壁结构，促进油脂的溶出与甲壳素的溶解，可实现分离蛋白质、油脂和甲壳素，并分别收集。

优选步骤（1）中，过滤方式采用板框过滤，板框过滤采用100~300目的过滤布。

优选步骤（2）中，高山被孢霉湿细胞的水分含量为50~70%。

优选步骤（2）中，高山被孢霉细胞粉的水分含量为5~7%。

步骤（2）中，混合物料是低共熔溶剂与高山被孢霉湿细胞的混合物，或者是低共熔溶剂与高山被孢霉细胞粉的混合物。

优选步骤（2）中，按干重计，高山被孢霉在混合物料中的重量百分比含量为20～50％。

优选步骤（2）中，反应时间为4~12小时。可采用水浴对反应物料进行加热。

优选步骤（2）中，磷酸为重量百分比浓度为30~85%的磷酸，硫酸为重量百分比浓度为10~40%的硫酸。

优选所述低共熔溶剂中，氢键供体化合物与氢键受体化合物的摩尔比为1:2~2.5:1。

优选步骤（2）中，所述低共熔溶剂是将氢键供体化合物和氢键受体化合物按摩尔比1:2~2.5:1混合后，在水浴中加热所形成的透明液体状溶剂。优选所述水浴加热温度为60~100℃。

上述步骤（2）中，所述低共熔溶剂的pH值、粘度，是指其在反应温度下的pH值、粘度。

优选步骤（3）中采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离时，离心机的转速为5000~10000rpm，时间为5~10min。

优选方案中，步骤（4）采用的洗涤溶剂为去离子水、乙醇或甲醇。

优选步骤（4）中，冷处理的温度为-20~4℃，时间为1~6小时。

优选步骤（4）中，混合溶剂经冷处理和离心分离后，还回收溶剂；回收溶剂是将分离出沉淀物的混合溶剂经旋转蒸发，分别得到洗涤溶剂和低共熔溶剂。洗涤溶剂和低共熔溶剂可重新加以利用。

优选步骤（4）中采用离心机对经冷处理的混合溶剂进行离心分离时，离心机的转速为8000~10000rpm，时间为5~8min。

本发明相对于现有技术具有如下有益效果：

（1）本发明采用酸性的低共熔溶剂，可以破坏细胞组织结构，溶解出蛋白质，与极性相反的油脂成分分离，同步实现对甲壳素脱蛋白、脱乙酰化和脱矿物质，一步分离出蛋白质、油脂和甲壳素。

（2）本发明采用的低共熔溶剂制备简单，具有无毒性、溶解性广、生物可降解性等性质，极具实际应用前景。

（3）本发明提供的工艺过程简单，条件温和，有利于提升油品质量，产物易于分离，降低能耗，具有更好的经济性和环保性。

具体实施方式

实施例一

将微生物高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵，得到微生物发酵液，具体为：采用高山被孢霉安瓿罐接种到斜面后，进行液体摇瓶培养，然后转接到一级种子罐培养后，再转接入容积50m³的发酵罐培养，其中所述液体培养基的组成为葡萄糖40g/L、酵母粉25g/L、谷氨酸钠6g/L、其余为水，调节培养基的pH值为6~8（发酵过程中全程监控pH值，使用磷酸与氨水调节pH值在6~8的范围内），0~48h维持发酵罐的温度在29.5~30℃，48~120h维持发酵罐的温度在27.5~28℃，每分钟的空气流量为发酵液体积的1.2倍，培养230h，发酵结束，得到微生物发酵液。

本实施例中，提取高山被孢霉所含油脂的方法包括以下步骤：

（1）将高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵所得到的微生物发酵液进行过滤（过滤方式采用板框过滤，板框过滤采用200目的过滤布），得到高山被孢霉湿细胞；

（2）以步骤（1）得到的高山被孢霉湿细胞干燥后得到的高山被孢霉细胞粉（干燥方式为喷雾干燥，高山被孢霉细胞粉的水分含量为6.3%）为原料，加入到低共熔溶剂中，得到混合物料（按干重计，高山被孢霉在混合物料中的重量百分比含量约为46.85％）；然后将混合物料加热至100℃，在100℃的温度下反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离（反应时间为4小时；采用水浴对反应物料进行加热），得到溶液；

所述低共熔溶剂由氢键供体化合物和氢键受体化合物组合而成，其中氢键供体化合物为硫酸（硫酸为重量百分比浓度为40%硫酸），氢键受体化合物为氯化胆碱；

将氢键供体化合物（硫酸）和氢键受体化合物（氯化胆碱）按摩尔比1:1混合后，在水浴中加热所形成的透明液体状溶剂（水浴加热温度为80℃），即为低共熔溶剂；

该低共熔溶剂在100℃的温度下pH值小于1，粘度为17mPa·s；

（3）采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离（离心机的转速为5000rpm，时间为5min），收集上层油脂；

（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物（采用的洗涤溶剂为乙醇）；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后（离心机的转速为10000rpm，时间为5min），收集沉淀物。

上述步骤（4）中，冷处理的温度为4℃，时间为2小时。

上述步骤（4）中，混合溶剂经冷处理和离心分离后，还回收溶剂；回收溶剂是将分离出沉淀物的混合溶剂经旋转蒸发，分别得到洗涤溶剂和低共熔溶剂。洗涤溶剂和低共熔溶剂可重新加以利用。

上述步骤（4）中，截流物为甲壳素，沉淀物为蛋白质。将收集的甲壳素和蛋白质干燥处理。

本实施例中，蛋白质、油脂和甲壳素的得率分别是90.2％、95.5％和92.4％；甲壳素中灰分为1.0％，氮含量为6.6％，达到工业级甲壳素要求。

实施例二

将微生物高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵，得到微生物发酵液，具体为：采用高山被孢霉安瓿罐接种到斜面后，进行液体摇瓶培养，然后转接到一级种子罐培养后，再转接入容积50m³的发酵罐培养，其中所述液体培养基的组成为葡萄糖40g/L、酵母粉25g/L、谷氨酸钠6g/L、其余为水，调节培养基的pH值为6~8（发酵过程中全程监控pH值，使用磷酸与氨水调节pH值在6~8的范围内），0~48h维持发酵罐的温度在29.5~30℃，48~120h维持发酵罐的温度在27.5~28℃，每分钟的空气流量为发酵液体积的1.2倍，培养230h，发酵结束，得到微生物发酵液。

本实施例中，提取高山被孢霉所含油脂的方法包括以下步骤：

（1）将高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵所得到的微生物发酵液进行过滤（过滤方式采用板框过滤，板框过滤采用100目的过滤布），得到高山被孢霉湿细胞；

（2）以步骤（1）得到的高山被孢霉湿细胞（高山被孢霉湿细胞的水分含量为55.6%）为原料，加入到低共熔溶剂中，得到混合物料（按干重计，高山被孢霉在混合物料中的重量百分比含量为22.2％）；然后将混合物料加热至100℃，在100℃的温度下反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离（反应时间为4小时；采用水浴对反应物料进行加热），得到溶液；

所述低共熔溶剂由氢键供体化合物和氢键受体化合物组合而成，其中氢键供体化合物为磷酸（磷酸为重量百分比浓度为85%的磷酸），氢键受体化合物为甜菜碱；

将氢键供体化合物（磷酸）和氢键受体化合物（甜菜碱）按摩尔比2:1.5混合后，在水浴中加热所形成的透明液体状溶剂（水浴加热温度为80℃），即为低共熔溶剂；

该低共熔溶剂在100℃的温度下pH值为2.3，粘度为 53mPa·s；

（3）采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离（离心机的转速为5000rpm，时间为5min），收集上层油脂；

（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物（采用的洗涤溶剂为乙醇）；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后（离心机的转速为10000rpm，时间为5min），收集沉淀物。

上述步骤（4）中，冷处理的温度为4℃，时间为2小时。

上述步骤（4）中，混合溶剂经冷处理和离心分离后，还回收溶剂；回收溶剂是将分离出沉淀物的混合溶剂经旋转蒸发，分别得到洗涤溶剂和低共熔溶剂。洗涤溶剂和低共熔溶剂可重新加以利用。

上述步骤（4）中，截流物为甲壳素，沉淀物为蛋白质。将收集的甲壳素和蛋白质干燥处理。

本实施例中，蛋白质、油脂和甲壳素得率分别是93.2％、95.2％和93.4％；甲壳素中灰分为0.3％，氮含量为6.2％，达到工业级甲壳素要求。

实施例三

将微生物高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵，得到微生物发酵液，具体为：采用高山被孢霉安瓿罐接种到斜面后，进行液体摇瓶培养，然后转接到一级种子罐培养后，再转接入容积50m³的发酵罐培养，其中所述液体培养基的组成为葡萄糖40g/L、酵母粉25g/L、谷氨酸钠6g/L、其余为水，调节培养基的pH值为6~8（发酵过程中全程监控pH值，使用磷酸与氨水调节pH值在6~8的范围内），0~48h维持发酵罐的温度在29.5~30℃，48~120h维持发酵罐的温度在27.5~28℃，每分钟的空气流量为发酵液体积的1.2倍，培养230h，发酵结束，得到微生物发酵液。

本实施例中，提取高山被孢霉所含油脂的方法包括以下步骤：

（1）将高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵所得到的微生物发酵液进行过滤（过滤方式采用板框过滤，板框过滤采用200目的过滤布），得到高山被孢霉湿细胞；

（2）以步骤（1）得到的高山被孢霉湿细胞干燥后得到的高山被孢霉细胞粉（干燥方式为喷雾干燥，高山被孢霉细胞粉的水分含量为6.3%）为原料，加入到低共熔溶剂中，得到混合物料（按干重计，高山被孢霉在混合物料中的重量百分比含量为46.85％）；然后将混合物料加热至100℃，在100℃的温度下反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离（反应时间为4小时；采用水浴对反应物料进行加热），得到溶液；

所述低共熔溶剂由氢键供体化合物和氢键受体化合物组合而成，其中氢键供体化合物为磷酸（磷酸为重量百分比浓度为85%的磷酸），氢键受体化合物为氯化胆碱；

将氢键供体化合物（磷酸）和氢键受体化合物（氯化胆碱）按摩尔比1:2混合后，在水浴中加热所形成的透明液体状溶剂（水浴加热温度为100℃），即为低共熔溶剂；

该低共熔溶剂在100℃的温度下pH值小于1，粘度为67 mPa·s；

（3）采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离（离心机的转速为5000rpm，时间为5min），收集上层油脂；

（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物（采用的洗涤溶剂为乙醇）；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后（离心机的转速为10000rpm，时间为5min），收集沉淀物。

上述步骤（4）中，冷处理的温度为-20℃，时间为2小时。

上述步骤（4）中，混合溶剂经冷处理和离心分离后，还回收溶剂；回收溶剂是将分离出沉淀物的混合溶剂经旋转蒸发，分别得到洗涤溶剂和低共熔溶剂。洗涤溶剂和低共熔溶剂可重新加以利用。

上述步骤（4）中，截流物为甲壳素，沉淀物为蛋白质。将收集的甲壳素和蛋白质干燥处理。

本实施例中，蛋白质、油脂和甲壳素得率分别是90.6％、89.3％和94.3％；甲壳素中灰分为0.8％，氮含量为6.4％，达到工业级甲壳素要求。

对比实验一

本对比实验采用的微生物发酵液、方法步骤及各步骤的工艺参数均与实施例一相同，所不同的是：本对比实验步骤（2）采用的低共熔溶剂中，氢键供体化合物为甘油，氢键受体化合物为氯化胆碱；甘油与氯化胆碱的摩尔比为1:1。该低共熔溶剂在100℃的温度下是透明液体状溶剂，其pH值为6.1，粘度＜10mPa·s。

对比实验一中，蛋白质、油脂和甲壳素的得率分别是20.3％、2.5％和8.3％。显微镜状态下干细胞溶胀，吸水溶胀，大多数仍保持细胞结构。

对比实验二

本对比实验采用的微生物发酵液、方法步骤及各步骤的工艺参数均与实施例二相同，所不同的是：本对比实验步骤（2）采用的低共熔溶剂中，氢键供体化合物为乙二醇，氢键受体化合物为甜菜碱；乙二醇与甜菜碱的摩尔比为2:1.5。该低共熔溶剂在100℃的温度下是透明液体状溶剂，其pH值为3.5，粘度为18mPa·s。

对比实验二中，蛋白质、油脂和甲壳素的得率分别是15.3％、5.2％和10.4％。显微镜状态下少部分细胞裂解、溶液中仍有较多的游离脂肪，大多数仍保持细胞结构。

对比实验三

本对比实验采用的微生物发酵液、步骤（1）~（3）的工序及工艺参数均与实施例二相同，所不同的是：本对比实验步骤（2）采用的低共熔溶剂中，氢键供体化合物为柠檬酸，氢键受体化合物为氯化胆碱；柠檬酸与氯化胆碱的摩尔比为1:1。该低共熔溶剂在100℃的温度下为透明粘稠状液体，其pH值小于1，粘度为778mPa·s。

对比实验三中，在步骤（3）中采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离时，无法分离出上下层；显微镜状态下少部分细胞裂解、大多数细胞维持正常形态，溶液中无游离的脂肪。

对比实验四

本对比实验采用的微生物发酵液、步骤（1）~（3）的工序及工艺参数均与实施例二相同，所不同的是：本对比实验步骤（2）采用的低共熔溶剂中，氢键供体化合物为苹果酸，氢键受体化合物为氯化胆碱；苹果酸与氯化胆碱的摩尔比为1:1。该低共熔溶剂在100℃的温度下为透明粘稠状液体，其pH值小于1，粘度为685mPa·s。

对比实验四中，在步骤（3）中采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离时，无法分离出上下层；显微镜状态下少部分细胞裂解、大多数细胞维持正常形态，溶液中无游离的脂肪。

实施例一~三、对比实验一~二中蛋白质、油脂和甲壳素的得率测定

1、蛋白质以GB5009.5-2016第一法凯氏定氮法，测得高山被孢霉的蛋白质含量，数值为100%。以此作为参照，对实施例1-3提取获得的蛋白质进行称量后，计算蛋白质的得率。

2、油脂以GB5009.6-2016第一法索氏抽提法，测得高山被孢霉的油脂含量，数值为100%。以此作为参照，对实施例1-3提取获得的油脂进行称量后，计算油脂的得率。

3、甲壳素以下列检测方法，测得高山被孢霉的甲壳素含量，数值为100%：干基计按质量体积比1:1加入蒸馏水，水浴100℃加热5min，再加入3倍体积的2wt%氢氧化钠溶液中，80℃加热3h，过滤，用蒸馏水洗涤至中性，烘干固形物。将0.5g固形物置于锥形瓶中，加入浓盐酸4mL，25℃浸泡24h，用蒸馏水稀释至盐酸浓度为8.5mol/L，100℃加热使消化完全，冷却后用氢氧化钠中和，定容至100mL。抽滤后摇匀，即为待测样品。

以此作为参照，对实施例1-3提取获得的甲壳素进行称量后，计算甲壳素的得率。

将本发明实施例一~三与对比实验一~四的实施效果加以对比，可以看出：本实施例一~三中蛋白质、油脂和甲壳素的得率均远远高于对比实验一~二，而对比实验三~四则无法实现高山被孢霉细胞内所含的油脂、甲壳素、蛋白质的提取。由此可见，本发明选择磷酸或硫酸作为氢键供体化合物，氯化胆碱或甜菜碱作为氢键受体化合物，所组成的低共熔溶剂（pH值≤2.5、粘度≤100mPa·s）能有效提取出高山被孢霉细胞内所含的油脂、甲壳素和蛋白质。

Claims (10)

1.一种提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将高山被孢霉菌种接种到液体培养基中发酵所得到的微生物发酵液进行过滤，得到高山被孢霉湿细胞；

（2）以步骤（1）得到的高山被孢霉湿细胞为原料，或以高山被孢霉湿细胞干燥后得到的高山被孢霉细胞粉为原料，加入到低共熔溶剂中，得到混合物料；然后将混合物料加热至80~120℃，在80~120℃的温度下反应至高山被孢霉细胞壁结构充分解离，得到溶液；

所述低共熔溶剂由氢键供体化合物和氢键受体化合物组合而成，其中氢键供体化合物为磷酸或硫酸，氢键受体化合物为氯化胆碱或甜菜碱；

所述低共熔溶剂pH值≤2.5、粘度≤100mPa·s；

（3）采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离，收集上层油脂；

（4）对步骤（3）离心分离后得到的下层部分进行过滤，并用洗涤溶剂洗涤截流物；然后分别收集截流物和混合溶剂；混合溶剂经冷处理和离心分离后，收集沉淀物。

2.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（1）中，过滤方式采用板框过滤，板框过滤采用100~300目的过滤布。

3.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：

步骤（2）中，高山被孢霉湿细胞的水分含量为50~70%；

步骤（2）中，高山被孢霉细胞粉的水分含量为5~7%；

步骤（2）中，按干重计，高山被孢霉在混合物料中的重量百分比含量为20～50％。

4.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（2）中，反应时间为4~12小时。

5.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（2）中，磷酸为重量百分比浓度为30~85%的磷酸，硫酸为重量百分比浓度为10~40%的硫酸。

6.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：所述低共熔溶剂中，氢键供体化合物与氢键受体化合物的摩尔比为1:2~2.5:1。

7.根据权利要求6所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（2）中，所述低共熔溶剂是将氢键供体化合物和氢键受体化合物按摩尔比1:2~2.5:1混合后，在水浴中加热所形成的透明液体状溶剂。

8.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（3）中采用离心机对步骤（2）得到的溶液进行离心分离时，离心机的转速为5000~10000rpm，时间为5~10min；

步骤（4）中采用离心机对经冷处理的混合溶剂进行离心分离时，离心机的转速为8000~10000rpm，时间为5~8min；

步骤（4）采用的洗涤溶剂为去离子水、乙醇或甲醇。

9.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（4）中，冷处理的温度为-20~4℃，时间为1~6小时。

10.根据权利要求1所述的提取高山被孢霉所含油脂的方法，其特征是：步骤（4）中，混合溶剂经冷处理和离心分离后，还回收溶剂；回收溶剂是将分离出沉淀物的混合溶剂经旋转蒸发，分别得到洗涤溶剂和低共熔溶剂。