CN114159551A - 一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法 - Google Patents

一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医用材料技术领域，公开了一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法。所述双层载药微针贴片包括含有聚合物基质材料的尖端，以及含有抗菌抗炎类药物的背衬层，所述尖端和所述背衬层一体连接，组成双层载药的贴片微针，通过背衬层和针尖尖端部分具有不同溶解速度的可溶性微针贴片，分别参与调解创面愈合的验证和增殖阶段，在炎症期实现抗菌、抗炎，在增殖期诱导血管生成、促进上皮细胞分化，从而加速创面愈合的过程。

Description

一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备 方法
技术领域
本发明涉及生物医用材料技术领域，具体涉及一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法。
背景技术
伤口愈合的过程一般主要包括以下四个阶段：止血阶段，炎症阶段，增殖阶段，重塑阶段。但是慢性伤口愈合过程十分缓慢，部分原因是在创面部位出现感染和缺乏功能生长因子导致。目前创面修复主要以清创止血、镇静止痛、手术缝合等方式为主，而这些现有的修复方法无法对创面愈合的不同阶段进行调节，只能干预某一特定的阶段，达不到理想的加速创面愈合的效果。
微针疗法是一种微创、无痛和高效的透皮疗法，可以在皮肤内形成大量的微孔道，因此广泛应用于透皮给药。微针是为最小的小型化针，可以穿透表皮达到真皮层，但不会触及血管和神经元，因此可以以微创无痛的方式将各类大小分子药物递送到皮肤。在创面修复中，微针疗法通过透皮给药能够提高药物的利用度，以及敷料与创面的接触面积，从而更好地发挥修复效果。但微针的结构设计多为一体式结构，一般只在针尖装载药物，药物装载率低且无法实现多功能治疗的效果。因此迫切需要开发出一种提高药物装载率，并且可以对创面愈合的不同阶段进行调节的微针贴片，用于加速慢性创面愈合。
发明内容
基于上述现有微针疗法的缺陷，本发明提出一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法，制备衬底和针尖部分具有不同溶解速度的可溶性微针贴片，分别参与调节创面愈合的炎症和增殖阶段，在炎症期实现抗菌，抗炎，在增殖期诱导血管生成、促进上皮细胞分化，从而加速创面愈合的过程。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，包括含有聚合物基质材料的尖端，以及含有抗菌抗炎类药物的背衬层，所述尖端和所述背衬层一体连接，组成双层载药的贴片微针。
优选的，所述聚合物基质材料采用溶解速度较快的水溶性生物相容性高分子材料，具体是羧甲基壳聚糖、明胶、胶原、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠中的一种或几种的混合物，用以获得较慢的促进组织修复和增殖类药物的释放速度，如人重组表皮生长因子的释放速度，使得针尖部位装载需要缓慢释放、能够长期对病理环境进行调解的药物。
优选的，所述尖端还含有促进组织修复和增殖类药物，以促进创伤面的组织修复和增殖。
优选的，所述促进组织修复和增殖类药物包括重组人表皮生长因子(rh-EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、表皮生长因子(EGF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激生长因子(GM-CSF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)中的一种。上述多种生长因子均具有促进创伤或创面的组织修复和增殖的效果。
羧甲基壳聚糖作为生物相容性良好的溶解型材料，用以获得重组人表皮生长因子一定的释放速率；羧甲基壳聚糖易溶于水，同时还具有更突出的抗真菌活性和一定的愈合因子，即羧甲基壳聚糖表现出抗菌效果、无刺激性和良好的流动性，可通过调节与中性粒细胞和巨噬细胞相互作用对创伤的愈合产生作用。羧甲基壳聚糖的上述特性为重组人表皮生长因子(rh-EGF)提供了稳定的平台，以恒定的方式释放rh-EGF。明胶的加入可以更好地增加微针的力学性能，同时明胶与羧甲基壳聚糖的混合会使针尖的融化时间增长，实现药物更长时间的释放，微针针尖的融化可以将包封在其中的重组人表皮生长因子释放出来，对创面愈合的增值阶段进行调节。其他聚合物基质具有和羧甲基壳聚糖相近的技术效果。
优选的，所述抗菌抗炎类药物包括盐酸四环素、环丙沙星(喹诺酮类)、地塞米松、姜黄素、虫草素、庆大霉素中的一种，以使背衬层的抗菌抗炎类药物长时间的释放，起到长效消炎抗菌的效果。
优选的，所述背衬层含有缓释基质材料，缓释基质材料采用溶解速度较慢的水溶性及生物相容性高分子材料，以获得速度较快的药物溶解速率，使得背衬层能够装载需要快速释放的药物，以对早期的病理环境进行调节和改变。
优选的，所述缓释基质材料是透明质酸、聚乙烯醇、聚乳酸中的一种或多种的混合物。透明质酸作为一种具有优良凝胶特性、生物相容性和保水能力的天然多糖，能够促进血管生成和皮肤再生，在本申请的技术方案中，透明质酸作为伤口敷料和药物缓释剂。透明质酸的分子量为10～100Kda。
本发明还提供一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，按照以下步骤进行：
S1、尖端溶液制备：将聚合物基质材料加入去离子水中充分溶解混合，制得尖端缓释物质混合液；再用超纯水将促进组织修复和增殖类药物溶解，并加入到尖端缓释物质混合液中混合均匀，制得尖端溶液；其中，促进组织修复和增殖类药物的份数以微克计，聚合物基质材料以克计，去离子水和超纯水以毫升计；
S2、背衬层溶液制备:将和2～8份抗菌抗炎类药物加入到4体积去离子水中混合均匀，制得背衬层溶液；其中，抗菌抗炎类药物以微克计，透明质酸以克计，去离子水以毫升计；
S3、尖端固化：将所述尖端溶液加入到微针PDMS模板中，并使用高速离心机以2000～5000r/min的转速离心3～8min，使尖端溶液充分填充微针PDMS模板的空腔，然后用刮板刮去多余的尖端溶液，只留下微针PDMS模板空腔中的溶液，接着在室温进行固化尖端1min，得到固化的尖端；
S4、背衬层固化：在固化后的尖端溶液上部加入背衬层溶液，以完全覆盖尖端，同样在2000～5000r/min的转速下离心3～8min以除去气泡，并在35～40℃下干燥72h，优选37℃进行干燥；最后脱模得到用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片。
优选的，所述步骤S1中的聚合物基质材料为1～10份明胶和5～50份其他组份；所述步骤S2中的缓释基质材料为8～40份。
优选的，所述步骤S1中的聚合物基质材料包括5～50份羧甲基壳聚糖和1～10份明胶。
优选的，所述步骤S2中的缓释基质材料包括8～40份透明质酸。
相比现有技术，本发明具有以下优点：
1、本发明的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，通过背衬层和针尖尖端部分具有不同溶解速度的可溶性微针贴片，分别参与调解创面愈合的验证和增殖阶段，在炎症期实现抗菌、抗炎，在增殖期诱导血管生成、促进上皮细胞分化，从而加速创面愈合的过程；
2、本发明的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，将微针的尖端和背衬层一体连接，使得微针能够同时以不同速度释放促进组织修复和增殖类药物以及抗菌抗炎类药物，实现对创面愈合的不同阶段进行调节，促进慢性创面加速愈合。
附图说明
图1是本发明实施例中微针PDMS模板具图。
图2a、b、c、d、e、f为本发明实施例制备的微针贴片的微针放大图。
图3a为微针的力-位移曲线。
图3b为活体SD大鼠背部皮肤插入微针贴片图。
图3c为离体猪皮插入微针贴片图。
图3d为图3c的放大图。
图4为本发明微针尖端和背衬层的药物在实验中的释放速率图。
图5为本发明实施例的微针贴片与空白组和对照组的炎症因子表达水平的对比图。
图6a为本发明实施例的微针贴片与空白组和对照组在大鼠皮肤创伤愈合时的对比实验效果图。
图6b为本发明实施例的微针贴片与空白组和对照组在大鼠皮肤创伤愈合时的伤口愈合率对比数据图。
图7为双层载药微针制备过程示意图。
图8为微针装载药物并对创面作用的原理图。
附图标号说明：
图中，1、PDMS模具；10、形成针尖的尖端溶液；11、针尖；2、形成针尖尖端的空腔；3、衬底层；4、可溶性双层载药微针贴片；5、刮板。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例和实验过程中用到的药品/试剂/仪器/设备如下表1和表2所示：
表1：实验用药品及试剂出产厂家/生产单位统计表
Figure BDA0003374688930000061
表2：实验用药品及试剂出产厂家/生产单位统计表
Figure BDA0003374688930000062
Figure BDA0003374688930000071
实施例：本实施例提供一种于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，包括含有重组人表皮生长因子的尖端，以及含有盐酸四环素的背衬层，所述尖端和所述背衬层一体连接，组成双层载药的贴片微针。
具体的，所述含有人重组表皮生长因子的尖端还含有聚合物基质材料，在本实施例中，所述聚合物基质材料是羧甲基壳聚糖、明胶，羧甲基壳聚糖作为生物相容性良好的溶解型材料，用以获得人重组表皮生长因子一定的释放速率；羧甲基壳聚糖易溶于水，同时还具有更突出的抗真菌活性和一定的愈合因子，即羧甲基壳聚糖表现出抗菌效果、无刺激性和良好的流动性，可通过调节与中性粒细胞和巨噬细胞相互作用对创伤的愈合产生作用。羧甲基壳聚糖的上述特性为重组人表皮生长因子(rh-EGF)提供了稳定的平台，以恒定的方式释放rh-EGF。明胶的加入可以更好地增加微针的力学性能，同时明胶与羧甲基壳聚糖的混合会使针尖的融化时间增长，实现药物更长时间的释放，微针针尖的融化可以将包封在其中的重组人表皮生长因子释放出来，对创面愈合的增殖阶段进行调节。通过羧甲基壳聚糖和明胶的混合使用以获得较慢的重组人表皮生长因子释放速度，使得针尖部位装载需要缓慢释放、能够长期对病理环境进行调解的药物，重组人表皮生长因子。
具体的，所述背衬层还含有缓释基质材料，在本实施例中，所述缓释基质材料是透明质酸。透明质酸作为一种具有优良凝胶特性、生物相容性和保水能力的天然多糖，能够促进血管生成和皮肤再生，在本申请的技术方案中，透明质酸作为伤口敷料和药物缓释剂。以获得速度较快的药物溶解速率，使得背衬层能够装载需要快速释放的药物，以对早期的病理环境进行调节和改变。
上述用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，如附图7所示，按照以下步骤进行：
S1、尖端溶液制备：将聚合物基质材料，即0.3g羧甲基壳聚糖和0.18g明胶，加入3ml去离子水中充分溶解混合，制得尖端缓释物质混合液；再用1ml超纯水将40微克重组人表皮生长因子溶解，并加入到尖端缓释物质混合液中混合均匀，制得形成针尖的尖端溶液10；
S2、背衬层溶液制备:将缓释基质材料，即0.2g透明质酸，和4毫克盐酸四环素加入到4ml去离子水中混合均匀，制得背衬层溶液；
S3、尖端固化：用移液枪将300微升所述尖端溶液10加入到微针PDMS模板1中，微针PDMS模板如附图1和7所示，其上设有形成针尖尖端的空腔2，并使用高速离心机以3000r/min的转速离心5min，使尖端溶液10充分填充微针PDMS模板的空腔2，然后用刮板5刮去多余的尖端溶液10，只留下微针PDMS模板空腔中的溶液，接着在室温进行固化尖端1min；
S4、背衬层固化：在固化后的尖端溶液10上部加入280微升背衬层溶液，以完全覆盖尖端，同样在3000r/min的转速下离心5min以除去气泡，并在37℃下干燥72h；最后脱模得到用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片4。
微针的形态及机械性能表征
1、微针形态
分别使用SEM扫描电镜和光学显微镜观察微针贴片微针的形态。如附图2a至2d的SEM扫描电镜图，以及附图2e和2f的体质显微镜图所示，微针贴片的针尖高780μm，每个微针从变长为500μm的四棱锥形逐渐变细到尖端为10μm，衬底为1.57×1.57cm的正方形。
2、机械性能表征
使用万能力学试验机对微针的机械性能进行测试。
实验过程：取单片微针(10×10个针尖)并固定在不锈钢板上得到力-位移曲线。微针阵列和顶部不锈钢板之间的初始距离设定为1.5毫米。顶部不锈钢板向微针阵列移动的速度设定为0.5mm/s。在测试中，从微针针尖接触不锈钢板开始，每隔0.1秒，试验机记录瞬时力和位移。通过力-位移曲线表征微针承受力的情况。
实验结果：由于成功插入皮肤屏障的失效力约为0.098N/针，根据图3a的力-位移曲线表明该双层微针的最大失效力为0.77N每针，说明本申请微针贴片的微针强度足以用于透皮给药而不断裂。且本申请的微针力-位移曲线基本呈线性，图像显示过程中没有不连续性，意味着本申请微针贴片的微针没有断裂，当压缩到位移680μm左右时，曲线发生了屈服，这表明微针即使在极端载荷下也不会断裂或者破碎，而是弯曲。避免了纯无机微针，如硅化微针在类似测试中显示断裂的现象，更加安全可靠。
此外，为了评价微针贴片的体外插入能力，将微针贴片应用于活体大鼠背部皮肤和离体猪皮上进行实验。
实验过程：为了探索体内插入微针后的皮肤状况，将微针贴片施加在活体大鼠上3分钟。在插入微针贴片之前，用电动剃须刀去除SD大鼠背部的毛发，裸露的皮肤用75％酒精清洗，晾干。在微针贴片贴片3分钟后，用数码相机拍摄观察皮肤，探讨插入率。此外，为进一步验证微针插入皮肤的能力，将微针插入厚度约为3-4毫米的离体猪腹部皮肤，以验证微针是否足够坚硬以刺穿角质层。由于猪皮在解剖学、生理学以及透皮吸收方面与人类皮肤相似，在生物医学研究的几个领域中，猪皮被认为是模仿人类皮肤的优秀动物模型，因此在本申请中选择了猪皮模拟人类皮肤。
实验结果：如图3b所示，在大鼠背部皮肤施用微针贴片3分钟后，所有的微针都已被插入皮肤，并形成均匀完整的孔洞。在使用离体猪腹部皮肤验证微针刺穿皮肤能力的实验当中，从附图3c和图3d中可以观察到微针可以轻松的插入到猪皮中，并留下均匀完整的孔洞。上述大鼠和离体猪腹部皮肤的实验表明，本申请微针贴片的微针具有良好的机械性能，足以刺穿皮肤。
双层载药微针的药物释放情况
微针贴片的微针尖端和背衬层可以分别实现快速和缓慢释放药物，参与创面愈合的不同阶段。本部分内容意在说明本申请的微针尖端和背衬层药物的释放速率，其中抗菌药物和促生长因子需要不同的释放速率。。
实验过程:由于重组人表皮生长因子价格较为昂贵，为表征双层载药微针在体外的药物释放行为，本实施例中采用牛血清白蛋白作为模型药物来替代重组人表皮生长因子进行微针的药物释放速率实验。以10％的牛血清白蛋白(BSA)为模型药物替代重组人表皮生长因子装载在微针的背衬层中，并将微针浸泡在10mLPBS(磷酸盐溶液)溶液当中，放入37℃、100rpm的振荡培养箱。在预定的时间间隔，取出2mL释放介质并补充2mL新鲜缓冲液，测量释放介质在280nm处的吸光度，使用预定的校准曲线计算BSA的释放量。使用上述方法在PBS中进行TH(盐酸四环素)从微针的体外释放，使用紫外分光光度计在360nm处测释放介质的吸光度。并计算药物的累积释放量。
实验结果：衬底层和针尖所采用的原材料溶解速度不同使微针可实现双重药物释放行为。附图4显示了微针中TH和模型药物BSA的释放曲线。使用PBS溶液对微针进行溶解，在衬底部位的抗菌药物TH具有更快的释放速率，在20min内药物释放已经达到90％以上，微针尖端的模型药物牛血清白蛋白(BSA)的释放速率相对更慢些，在100min时仍然在持续释放。这与明胶和羧甲基壳聚糖混合物的溶解速度更慢有关。实验结果表明，双层载药微针具有不同速率的药物释放行为，这将对微针调节伤口愈合的不同阶段具有十分重要的意义。
微针对早期炎症的调节作用
促细胞炎症因子表达水平是基于SD大鼠进行评价的。
实验过程：用大鼠酶联免疫试剂盒(Biosharp，中国)测定不同时间点的炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。用组织研磨机将邻近伤口的皮下组织(0.5g)研磨成碎片，悬浮在生理盐水(3毫升)中，并用匀浆器匀浆。匀浆以5000转/分钟离心10分钟，上清液在-80℃冷冻直至分析。
实验结果：促炎细胞因子，包括IL-1β、IL-6和TNF-α，在皮肤创伤的炎症阶段上调。IL-1β由中性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞和角质形成细胞分泌。IL-6由肌成纤维细胞、单核细胞/巨噬细胞、淋巴细胞、上皮细胞和角质形成细胞产生。创伤后IL-6表达增加，在慢性创伤中持续存在。巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞、肥大细胞和嗜酸性粒细胞分泌TNF-α，可抑制皮肤伤口中角质形成细胞的再上皮化过程。促炎细胞因子能够促进一氧化氮、花生四烯酸和组胺的产生，激活补体系统，导致炎症增加。然后我们检查了伤口周围组织的炎症反应，并在不同时间点测量了炎症因子的表达。如附图5所示，在第三天时，双层载药微针组的IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均明显低于空白微针组和对照组，这可能与TH的快速释放有直接的关联(如附图4所示)。在创面修复的初期，各组炎症因子的表达均下降。
综上所述，我们可以看到载药微针组的炎性细胞因子水平在三组中最低，这表明多动能双层载药微针贴片可以显著降低皮肤伤口中的IL-1β、IL-6和TNF-α，在炎症期实现抗菌、抗炎，加速创面愈合。
SD大鼠创面愈合实验效果
实验过程：动物实验在雄性SD大鼠(8周龄，210–250g)，雄性SD大鼠的护理是根据国家批准的卫生研究院指南进行的。诱发糖尿病型I,大鼠禁食12h后腹腔注射注射链脲佐菌素(STZ，60mg/kg)。大鼠血浆正常条件下葡萄糖≥16.7mM被认为是在STZ注射后1周成为糖尿病大鼠。手术前，STZ诱导的糖尿病大鼠用10％氯醛麻醉水合物(3.5毫升/公斤)。将实验组包含的27只SD大鼠剃须、杀菌后，在每个老鼠背部制作三个全直径为10毫米的伤口。分别使用生理盐水、空白微针和载药微针来覆盖三个伤口，每组9只大鼠。使用前，微针经紫外线照射消毒。在第0、3、7、14天，分别对伤口区域进行消毒并拍摄愈合照片。在第3、7和14天，处死三只大鼠，伤口样本被取出，固定并嵌入石蜡，将计算得到的伤口愈合率记录到表1中。
表3：对照组、空白微针组、双层载药微针组伤口愈合率对比表
Figure BDA0003374688930000121
实验结果：为了研究双层微针在糖尿病皮肤伤口愈合过程中的愈合效果，将双层微针和空白微针应用于全层糖尿病伤口。空白对照组接受10％的盐水。图6a和图6b以及表3显示了三组大鼠在手术后0、3、7和14天的糖尿病伤口大小的变化。对大鼠伤口闭合的总体观察表明，所有实验组的伤口大小在第7天和第14天显着减小，而阴性对照的伤口大小在实验期间缓慢减小。其中，双层微针的应用导致伤口完全闭合，并在第14天获得一定的毛发生长。与空白微针相比，双层微针在糖尿病伤口上具有显着改善的愈合特性，对照组和空白微针组14天的愈合率达到84.2％至85.3％，而使用本申请载药微针贴片的载药微针组伤口愈合率达到了95.8％，相比对照组和空白微针组的愈合率提高约10％，表明双层微针可通过药物释放快速促进伤口愈合。
本发明的工作过程为：如附图8所示，本实施例用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，通过背衬层和针尖尖端部分具有不同溶解速度的可溶性微针贴片，分别参与调解创面愈合的验证和增殖阶段，在炎症期实现抗菌、抗炎，在增殖期诱导血管生成、促进上皮细胞分化，从而加速创面愈合的过程。
综上，本发明的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片及其制备方法，将微针的尖端和背衬层一体连接，使得微针能够同时以不同速度释放人重组表皮活性因子和盐酸四环素，实现对创面愈合的不同阶段进行调节，促进慢性创面加速愈合。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：包括含有聚合物基质材料的尖端，以及含有抗菌抗炎类药物的背衬层，所述尖端和所述背衬层一体连接。
2.根据权利要求1所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述聚合物基质材料是羧甲基壳聚糖、明胶、胶原、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸钠中的一种或几种的混合物。
3.根据权利要求1或2所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述尖端还含有促进组织修复和增殖类药物。
4.根据权利要求3所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述促进组织修复和增殖类药物包括重组人表皮生长因子(rh-EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、表皮生长因子(EGF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激生长因子(GM-CSF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)中的一种。
5.根据权利要求1或2或4所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述背衬层还含有缓释基质材料。
6.根据权利要求5所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述缓释基质材料是透明质酸、聚乙烯醇、聚乳酸中的一种或多种的混合物，所述透明质酸的分子量为10～100Kda。
7.用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，其特征在于，按照以下步骤进行：
S1、尖端溶液制备：将聚合物基质材料加入去离子水中充分溶解混合，制得尖端缓释物质混合液；再用超纯水将促进组织修复和增殖类药物溶解，并加入到尖端缓释物质混合液中混合均匀，制得尖端溶液；
S2、背衬层溶液制备:将和2～8份抗菌抗炎类药物加入到去离子水中混合均匀，制得背衬层溶液；
S3、尖端固化：将所述尖端溶液加入到微针PDMS模板中，并使用高速离心机以2000～5000r/min的转速离心3～8min，使尖端溶液充分填充微针PDMS模板的空腔，然后用刮板刮去多余的尖端溶液，只留下微针PDMS模板空腔中的溶液，接着在室温进行固化尖端1min；
S4、背衬层固化：在固化后的尖端溶液上部加入背衬层溶液，以完全覆盖尖端，同样在2000～5000r/min的转速下离心3～8min，并在35～40℃下干燥；最后脱模得到用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片。
8.根据权利要求7所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的聚合物基质材料为1～10份明胶和5～50份其他组份；所述步骤S2中的缓释基质材料为8～40份。
9.根据权利要求7所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片，其特征在于：所述步骤S1中的聚合物基质材料包括5～50份羧甲基壳聚糖和1～10份明胶。
10.根据权利要求7所述的用于慢性创面修复的可溶性双层载药微针贴片的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中的缓释基质材料包括8～40份透明质酸。
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