CN114158499B - 一种采用鲜活蚝肉作为亲本的牡蛎繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用鲜活离体蚝肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法。本发明通过亲本选择、获取蚝肉、雌雄鉴定、受精孵化、子代培育等技术环节，实现了牡蛎苗种高效扩繁。本发明打破了传统上认为牡蛎苗种生产必须现场开壳取肉获得配子的模式，首次通过壳肉剥离、利用体腔液在低温条件下进行蚝肉保鲜保活，活化鲜活蚝肉、激活配子等激素环节，创造了一种新型牡蛎苗种生产模式，从而实现牡蛎苗种在远距离条件下的高效扩繁，为其亲本选择、国外引种、异地苗种生产等提供了技术保障。本发明具有成本低、效率高、简便易行等优点。
Description
技术领域：
本发明属于海洋农业中贝类遗传繁育技术领域，具体涉及一种采用鲜活离体蚝肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法。
背景技术：
牡蛎属于软体动物门，双壳纲，珍珠贝目，牡蛎科，是一种重要的海洋生物资源，其肉味鲜美、富含多种人体必需氨基酸，是世界上和我国最重要的大宗养殖贝类。就全球而言，牡蛎主要养殖国家包括中国、韩国、法国、澳大利亚、美国、日本等。根据FAO统计，中国牡蛎养殖产量位居世界第一(年产约540多万吨，占世界总产量85％)，产量最高、养殖面积最大，年产值达数百亿元。
不同于鱼类和虾蟹产业，牡蛎养殖是利用海区自然生产力、不需要人工投喂的节能、节粮和环境友好型的养殖种类，在没有严重自然灾害(如台风、严重致死病害流行等)情况下，投入产出比高、获得利润大；而且牡蛎能够吸收海水中CO2和间接消耗营养盐，是在稳定海洋生态系统、缓解水域富化、固化消减CO2方面具有重要积极效应的海洋产业。牡蛎生长速度快、滤藻滤水量更高，可以更有效地清除海水中的有机悬浮颗粒，减少氨氮浓度、净化近岸水质，这无疑会减少赤潮的发生和减缓赤潮的危害，在合适密度的情况下，对环境有积极的改良作用，是一种优良的环境改良剂。也就是说，牡蛎养殖是一种环境友好型的产业，为此，有必要从源头上进行牡蛎苗种扩繁技术手段的优化、改良，以确保牡蛎产业对苗种的需求，维护其产业的可持续健康发展。
发明内容：
本发明的目的是提供一种成本低、效率高、简便易行的采用鲜活离体蚝肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法。
本发明的采用鲜活离体蚝肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法，包括亲本选择、收集精子和卵子并进行受精孵化、子代培育，其特征在于：
在亲本选择后，亲本离水后剥离鲜活蚝蛎肉，将鲜活蚝肉浸泡在牡蛎体腔液中，放置于4-8℃的冷藏环境中，放置时间≤3d；
然后将蚝肉从冷藏环境中取出来，放置于20-25℃海水中，进行活化，活化时间1-2h，进一步优选是1-1.5h，之后进行雌雄鉴别，然后从蚝肉中分别收集卵子和精子，进行受精孵化、子代培育。
优选，所述的采用鲜活离体蚝肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法包括以下步骤：
a、亲本选择：在牡蛎成熟季节，选择性腺饱满、成熟度高的个体作为繁育亲本；
b、获取蚝肉：亲本离水后剥离鲜活蚝蛎肉，将鲜活蚝肉浸泡在牡蛎体腔液中，放置于4-8℃的冷藏环境中，放置时间≤3d；
c、雌雄鉴定：将蚝肉从冷藏环境中取出来，放置于20-25℃海水中，进行活化，活化时间1-2h，之后进行雌雄鉴别，放弃精卵共存的雌雄同体个体；
d、受精孵化：雌雄分开后，分离精卵，之后进行受精，获得受精卵；
e、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，孵化密度控制在≤80个/mL，受精卵孵化得到D形幼虫，经培养获得牡蛎苗种。
D形幼虫采用300目筛绢网选优，之后按照常规方法培养子代，即可获得大量牡蛎健康苗种。
优选，所述的亲本离水后剥离鲜活蚝蛎肉是亲本离水24h内采用蚝刀，剥离鲜活蚝蛎肉。
优选，所述的雌雄鉴别是用取性腺组织放置于滴好海水的载玻片上，利用光学显微镜鉴定，雌性呈圆形，分散开，雄性呈烟雾状，精子剧烈跳动。
优选，所述的分离精卵，其卵子收集方法是将雌性蚝肉采用手搓等方式获得卵液，卵液用100目筛绢网过滤，500目筛绢网洗卵，洗干净的卵液放置于提前准备好的海水中进行激活，激活时间30-60min，激活期间，一直搅动卵液，防止卵子聚集底层。
优选，所述的分离精卵，其精子收集方法是在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子；之后在海水激活精子5-10min，选取精子活性比例高的个体作为父本；受精前，检查卵子是否被精子污染，弃掉被污染个体卵液，使用尚未受精且激活好的卵子，最后，将精子倒入卵液中受精，每个卵子周围最好有5-8个精子。
优选，步骤a所述的亲本可以为香港牡蛎、葡萄牙牡蛎、太平洋牡蛎等巨蛎属牡蛎，也可以是牡蛎属的密鳞牡蛎、欧洲牡蛎等。
本发明打破了传统上认为牡蛎苗种生产必须现场开壳取肉获得配子的模式，首次通过壳肉剥离、利用体腔液在低温条件下进行蚝肉保鲜保活，活化鲜活蚝肉、激活配子等激素环节，创造了一种新型牡蛎苗种生产模式，从而实现牡蛎苗种在远距离条件下的高效扩繁，为其亲本选择、国外引种、异地苗种生产等提供了技术保障。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
a、亲本选择：2020年5月10日，在福建省诏安县梅岭镇检查了葡萄牙牡蛎性腺发育程度，单个个体重量在100-150g；开壳后，发现性腺饱满，具有成熟期的纹路，处于成熟期，将其作为亲本群体；
b、获取蚝肉：亲本群体拿到码头后，亲本离水24h内采用蚝刀等工具，开壳取肉剥离鲜活蚝蛎肉，挑选牡蛎肉完整的个体放置于牡蛎体腔液中，之后按照2500g/袋打包装，放置于4℃冰箱中保存；
c、雌雄鉴定：2020年5月12日，将蚝肉从冰箱中拿出来，放置于25℃海水中，进行活化；活化时间1.5h，之后进行雌雄鉴别，利用牙签取一点性腺组织放置于滴好海水的载玻片上，利用光学显微镜鉴定，雌性呈圆形，分散开，雄性呈烟雾状，精子剧烈跳动，放弃精卵共存的雌雄同体个体；共选择出600个雌性个体，20个雄性个体；
d、受精孵化：将雌性蚝肉采用手搓等方式获得卵液，卵液用100目筛绢网过滤，滤液用500目筛绢网洗卵，洗干净的卵液放置于提前准备好的60L海水中进行激活，激活时间40min，激活期间，一直搅动卵液，防止卵子聚集底层，共获得卵子约120亿个；在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子；之后在海水激活精子10min，选取精子活性比例高的个体作为父，将精液倒入卵液中受精，每个卵子周围最有5-8个精子；受精期间，一直搅拌，确保精卵充分接触，提高受精率，受精率接近100％；
e、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，利用2个75m3水泥池进行孵化，孵化密度控制在80个/mL，受精卵在温度25℃、盐度30ppt环境条件下，经过24h左右到达D形幼虫。D形幼虫采用300目筛绢网选优，获得了116亿个幼虫，之后按照常规方法培养子代，30d后，获得苗种34.8亿个。
实施例2
a、亲本选择：2020年6月9日，在辽宁省大连市石城岛检查了长牡蛎性腺发育程度，单个个体重量在150-200g；开壳后，发现性腺饱满，具有成熟期的纹路，处于成熟期，将其作为亲本群体；
b、获取蚝肉：亲本群体拿到码头上后，亲本离水24h内采用蚝刀等工具，开壳取肉剥离鲜活蚝蛎肉，挑选牡蛎肉完整的个体放置于牡蛎体腔液中，之后按照2500g/袋打包装，放置于4℃冰箱中保存；
c、雌雄鉴定：2020年6月12日，将蚝肉从冰箱中拿出来，放置于20℃海水中，进行活化；活化时间1h，之后进行雌雄鉴别，利用牙签取一点性腺组织放置于滴好海水的载玻片上，利用光学显微镜鉴定，雌性呈圆形，分散开，雄性呈烟雾状，精子剧烈跳动，放弃精卵共存的雌雄同体个体；共选择出300个雌性个体，15个雄性个体；
d、受精孵化：将雌性蚝肉采用手搓等方式获得卵液，卵液用100目筛绢网过滤，滤液用500目筛绢网洗卵，洗干净的卵液放置于提前准备好的60L海水中进行激活，激活时间40min，激活期间，一直搅动卵液，防止卵子聚集底层，共获得卵子约90亿个；在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子；之后在海水激活精子8min，选取精子活性比例高的个体作为父，将精液倒入卵液中受精，每个卵子周围最有5-8个精子；受精期间，一直搅拌，确保精卵充分接触，提高受精率，受精率接近100％；
e、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，利用5个30m3水泥池进行孵化，孵化密度控制在60个/mL，受精卵在温度23℃、盐度30ppt环境条件下，经过24h左右到达D形幼虫。D形幼虫采用300目筛绢网选优，获得了85.5亿幼虫，之后按照常规方法培养子代，30d后，获得苗种27.36亿个。
实施例3
a、亲本选择：2021年5月6日，在广东省台山县深井镇检查了香港牡蛎性腺发育程度，单个个体重量在150-250g；开壳后，发现性腺饱满，具有成熟期的纹路，处于成熟期，将其作为亲本群体；
b、获取蚝肉：亲本群体拿到码头上后，亲本离水24h内采用蚝刀等工具，开壳取肉剥离鲜活蚝蛎肉，挑选牡蛎肉完整的个体放置于牡蛎体腔液中，之后按照2500g/袋打包装，放置于8℃冰箱中保存；
c、雌雄鉴定：2021年5月7日，将蚝肉从冰箱中拿出来，放置于25℃海水中，进行活化；活化时间1h，之后进行雌雄鉴别，利用牙签取一点性腺组织放置于滴好海水的载玻片上，利用光学显微镜鉴定，雌性呈圆形，分散开，雄性呈烟雾状，精子剧烈跳动，放弃精卵共存的雌雄同体个体；共选择出200个雌性个体，12个雄性个体；
d、受精孵化：将雌性蚝肉采用手搓等方式获得卵液，卵液用100目筛绢网过滤，滤液用500目筛绢网洗卵，洗干净的卵液放置于提前准备好的80L海水中进行激活，激活时间30min，激活期间，一直搅动卵液，防止卵子聚集底层，共获得卵子约100亿个；在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子；之后在海水激活精子8min，选取精子活性比例高的个体作为父，将精液倒入卵液中受精，每个卵子周围最有5-8个精子；受精期间，一直搅拌，确保精卵充分接触，提高受精率，受精率接近100％；
e、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，利用4个50m3水泥池进行孵化，孵化密度控制在50个/mL，受精卵在温度28℃、盐度15ppt环境条件下，经过24h左右到达D形幼虫。D形幼虫采用300目筛绢网选优，获得了96亿幼虫，之后按照常规方法培养子代，30d后，获得苗种28.8亿个。
Claims (4)
1.一种采用鲜活离体牡蛎肉作为亲本的牡蛎苗种高效扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本选择：在牡蛎成熟季节，选择性腺饱满、成熟度高的个体作为繁育亲本；
b、获取牡蛎肉：亲本离水后开壳取肉剥离鲜活牡蛎肉，挑选牡蛎肉完整的个体放置于牡蛎体腔液中，之后打包，放置于4-8℃的冷藏环境中，放置时间≤3d；
c、雌雄鉴定：将牡蛎肉从冷藏环境中取出来，放置于20-25℃海水中，进行活化，活化时间1-2h，之后进行雌雄鉴别，放弃精卵共存的雌雄同体个体；
d、受精孵化：雌雄分开后，分离精卵，之后进行受精，获得受精卵；
e、子代培育：采用充气方式孵化受精卵，孵化密度控制在≤80个/mL，受精卵孵化得到D形幼虫，经培养获得牡蛎苗种；
所述的亲本为香港牡蛎、葡萄牙牡蛎或太平洋牡蛎；
所述的雌雄鉴别是用取性腺组织放置于滴好海水的载玻片上，利用光学显微镜鉴定，雌性呈圆形，分散开，雄性呈烟雾状，精子剧烈跳动；
所述的分离精卵，其卵子收集方法是将雌性牡蛎肉采用手搓方式获得卵液，卵液用100目筛绢网过滤，500目筛绢网洗卵，洗干净的卵液放置于提前准备好的海水中进行激活，激活时间30-60min，激活期间，一直搅动卵液，防止卵子聚集底层。
2.根据权利要求1所述的牡蛎苗种高效扩繁方法，其特征在于，所述的亲本离水后剥离鲜活牡蛎肉是亲本离水24h内采用蚝刀，剥离鲜活牡蛎肉。
3.根据权利要求1所述的牡蛎苗种高效扩繁方法，其特征在于，所述的分离精卵，其精子收集方法是在卵子激活成功后，通过镜检选择精子活力好的个体性腺，经过400目筛绢网过滤，去除卵子及大的组织块，滤液即为精子；之后在海水激活精子5-10min，选取精子活性比例高的个体作为父本；受精前，检查卵子是否被精子污染，弃掉被污染个体卵液，使用尚未受精且激活好的卵子，将精子倒入卵液中受精，每个卵子周围有5-8个精子。
4.根据权利要求1所述的牡蛎苗种高效扩繁方法，其特征在于，所述的活化时间为1-1.5h。
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2021
- 2021-11-22 CN CN202111388695.1A patent/CN114158499B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102100197A (zh) * | 2010-12-20 | 2011-06-22 | 山东海益宝水产股份有限公司 | 一种三倍体单体牡蛎培育方法 |
| CN104381158A (zh) * | 2014-09-28 | 2015-03-04 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种采用卵生型手段繁育幼生型牡蛎的方法 |
| CN108834966A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-11-20 | 厦门大学 | 一种低铜福建牡蛎选育系的制种方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 长牡蛎(Crassostrea gigas)亲贝培育的代用饵料;王昭萍等;《海洋科学》;19960215(第01期);第10-12页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114158499A (zh) | 2022-03-11 |
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