CN114144063B - 害虫防治套盒和方法 - Google Patents

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Abstract

提供了一种害虫防治套盒来控制昆虫未成熟的幼虫阶段或蛹的种群。该害虫防治套盒包含一定量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，该润湿剂组合物包含：溶剂；和表面活性剂。害虫防治套盒的目的在于提供天然存在的昆虫病原线虫，用于不成熟的昆虫幼虫的生物控制，所述昆虫可以作为植物的害虫，无论这些是用于包括农业、林业和园艺的专业植物保护，还是用于家庭花园使用。本发明的新的害虫防治产品旨在证明对草坪和植物全年的安全和可持续的保护。

Description

害虫防治套盒和方法
发明领域
本发明涉及生物杀虫剂，特别是涉及用于专业植保、园艺、林业和农业应用或家庭花园中的生物杀虫剂(生物防治剂)。
发明背景
通常，杀虫剂是阻止、破坏、杀灭或另外阻碍害虫的化学剂或生物剂。目标害虫可以包括破坏财产、引起滋扰或传播疾病或是疾病载体的昆虫、植物病原体、杂草、软体动物、鸟类、哺乳动物、鱼类和微生物。尽管杀虫剂具有益处，但许多也具有缺点，如对人类和其他物种潜在的毒性，以及对环境的不利影响。
化学杀虫剂可以在暴露的人种群中引起急性和延迟的健康影响。化学杀虫剂暴露可以引起各种不利健康影响，范围从简单的皮肤和眼睛刺激到更严重的影响，如影响神经系统、模仿导致生殖问题的激素以及还引起癌症。
化学杀虫剂使用引起了各种环境问题。研究表明超过98％的喷洒杀虫剂和95％的除草剂到达了其目标物种以外的目的地，包括非目标物种、空气、水和土壤。
生物杀虫剂是有毒化学杀虫剂的天然替代品-用于控制攻击所有种类的粮食和其他作物的昆虫害虫的植物、细菌、真菌和矿物质。生物杀虫剂是比较安全的，并且通常对使用者和消费者是无毒的，快速分解并且可以针对特定的害虫以避免伤害有益昆虫。
尽管在生物杀虫剂领域中进行了研究，但仍有待找到一种有效的、多用途的解决方案，其可用于各种应用中，是使用者友好的并且可以针对特定应用定制。因此，尽管生物杀虫剂有许多优点，但与化学杀虫剂相比，生物杀虫剂的吸收相对低。
因此希望提供一种更容易的化学杀虫剂的替代品，其可灵活用于多种应用并且是使用者友好的，以有助于采用。
发明概述
根据本发明的第一个方面，提供了一种害虫防治套盒，所述害虫防治套盒包括：(a)一定量的昆虫病原线虫；和(b)润湿组合物，该润湿组合物包括一种或多种表面活性剂。
优选，预先确定昆虫病原线虫的含量。术语“含量”将由本领域技术人员理解为表示“生物体的数量”。将理解为套盒可以包括一种或多种线虫品系的混合物，各自具有各自的含量。根据套盒所需的应用，一种或多种线虫品系的含量可以相同或不同。
本发明的润湿剂组合物优选是本发明运作的关键。本发明润湿剂中优于已知润湿剂改进的关键因素优选包括提高的与昆虫病原线虫品系的相容性(包括提高的线虫生活力)、提高的润湿能力和提高的昆虫病原线虫品系的功效。
特别地，使用本发明的害虫防治套盒通常在使用害虫防治套盒后至少90％的昆虫病原线虫存活至少24小时；和/或在施用害虫防治套盒后至少24小时，优选至少48小时，甚至更优选至少72小时，害虫死亡率通常是至少90％；和/或与不存在润湿剂组合物情况下的对照昆虫病原线虫相比，昆虫病原线虫的散布通常提高了。
优选，润湿剂组合物进一步包括溶剂。优选，溶剂包括乙二醇醚。优选，乙二醇醚是二丙二醇甲醚。优选，溶剂优选以选自未被混合润湿剂组合物的1％至25％的溶剂浓度存在。最优选，溶剂是以未混合润湿剂组合物的5％至10％的溶剂浓度存在的二丙二醇甲醚。在最优选的实施方案中，二丙二醇甲醚的浓度为1升中50至100mL。
优选，一种或多种表面活性剂包括选自聚氧化亚烷基二醇表面活性剂的表面活性剂。示例可以包括聚乙二醇。一种或多种表面活性剂可以包括非离子型表面活性剂。其他实施方案可以包括一种或多种选自阴离子型表面活性的表面活性剂。在一些实施方案中，一种或多种表面活性剂可以包括磷酸酯盐。优选，磷酸酯盐是钾盐。优选，表面活性剂是芳基醚磷酸酯钾盐。优选，表面活性剂以选自未混合润湿剂组合物的0.5％至10％的表面活性剂浓度存在。最优选，表面活性剂是以选自未混合润湿剂组合物的1％至3％的表面活性剂浓度存在的芳基醚磷酸酯钾盐。在最优选的实施方案中，芳基醚磷酸酯钾盐的浓度选自1升中10mL至30mL。优选，润湿剂组合物包括一种或多种反向嵌段共聚物表面活性剂。
本发明的任何表面活性剂可以与在害虫防治套盒中的本发明的任何溶剂组合，使用如本文公开的溶剂和/或表面活性剂的任何浓度。特别优选的是包括乙二醇醚溶剂(例如，二丙二醇甲醚)和聚氧化亚烷基二醇表面活性剂(例如，聚乙二醇)的润湿剂组合物，其中表面活性剂可以作为磷酸酯盐(特别是钾盐，例如，芳基醚磷酸酯钾盐)存在。
研究已经发现了脂肪醇乙氧基化物(目前的土壤改良剂组合物中常用的表面活性剂)自然干燥并且这些化学物质相对磷酸酯盐潜在提高的生物利用率可以增强干燥特性，由此固定线虫。例如，小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)已经显示出受到干燥威胁时进入脱水生活中。研究已经发现了这样的常见土壤改良剂可以对线虫具有固定作用并且甚至可以是杀线虫剂。因此重要的是在与线虫物种组合前应当总是检查润湿剂和/或土壤改良剂，因为它们负责在3-6小时内杀灭线虫-因此消除了所述线虫的功效。
许多润湿剂意在分解水油界面并且允许除去油。最少相容的润湿剂倾向于包括嵌段共聚物，其倾向于是水溶性的。本发明的润湿剂优选包括反向嵌段共聚物，其是油溶性的。优选具有反向三嵌段共聚物的润湿剂呈现出提高的线虫生活力。
润湿剂组合物优选进一步包括一种或多种润湿化合物。优选，一种或多种润湿化合物选自环氧烷。优选，一种或多种润湿化合物包括选自聚羟乙基烷氧基环氧烷。
润湿剂组合物优选进一步包括土壤渗透剂。一种或多种土壤渗透剂优选还有助于线虫移动。
优选，以液体或粉末形式提供润湿剂组合物。优选，粉末是无水的。
优选，安排液体或粉末润湿剂组合物与水混合，以提供具有选自2.22％v/v至2.86％v/v的混合浓度(基于用于1公顷的700-900L水中的20L润湿剂组合物的田间应用计算的)的工作润湿剂。优选，安排工作润湿剂与水以一定的工作润湿剂：水的混合比例混合以提供最终的润湿剂组合物，其中混合比例选自1∶2.22至1∶2.86。最优选，混合比例选自1∶35至1∶90。最优选，混合比例选自1∶70至1∶90。
所述的润湿剂组合物优选提高含有昆虫病原线虫品系的功效。润湿剂组合物还优选降低施用最终润湿剂组合物的土壤内的拒水性，优选在植物、作物和其他园艺实体的根区附近提供足够的水分保持，线虫可在此处定位目标并且比伴随其他已知润湿剂组合物的那些存活更长时间。这一点尤为重要，因为线虫通常需要水/液体膜才能移动。如果由于许多其他润湿剂的干燥性质而无法获得水/液体，那么线虫的寿命就会受到影响。
优选害虫防治套盒进一步包括培训包，该培训包被安排来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制幼虫种群。
优选昆虫病原线虫的量包括5亿至50亿条感染性线虫(通常是感染性幼年(IJ)线虫)。在整个土地面积上，昆虫病原线虫的量优选包括每公顷25亿至50亿条感染性线虫。感染性线虫的量优选取决于害虫情况、密度和施用面积。
优选昆虫病原线虫选自异小杆线虫(Heterorhabditis)属和/或斯氏线虫(Steinemema)属。优选昆虫病原线虫选自：嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)、Heterorhabditis downesi、夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)、小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)和/或Steinernema kraussei。
优选害虫防治套盒用于控制幼虫、蛹和/或成虫的种群。更优选，昆虫选自大蚊属(Tipula spp.)、Tipula oleracea、欧洲蝼蛄(Gryllotalpa Gryllotalpa)、地夜蛾属(Agrotis spp.)、黑葡萄耳喙象(Otiorhynchus sulcatus)、耳喙象属(Otiorhynchusspp.)、Hoplia philanthus、庭院丽金龟(Phyllopertha horticola)、马铃薯鳃金龟(Amphimallon solstitialis)、欧洲鳃金龟(Melolontha melolontha)、褐绒金龟(Sericabrunnea)、苹果小卷蛾(Cydia pomonella)、梨小卷蛾(Cydia molesta)、栗小卷蛾(Cydiasplendana)、水蝇科(Ephydridae)、夜蛾属(Spodoptera spp.)、Chrysodeixis chalcites、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)和Duponchelia fovealis、松树皮象(Hylobiusabietis)、西花蓟马(Frankliniella occidentalis)、斑潜蝇(Chromatomyiasyngenesiae)、Phytomyza vitalbaek、星天牛(Anoplophora chinensisk)、云杉八齿小蠹(Ips typographus)、Synanthedon myopaeformis、蔗扁蛾(Opogona sacchari)、蔗根象(Diaprepes abbreviates)、梨小食心虫(Grapholita molesta)、李小食心虫(Grapholitafunebrana)、Chrysoteuchia topiaria、Rhabdopterus picipes、Capnodis tenebrionis、Curculio nucum、梨豹蠹蛾(Zeuzera pyrina)、Thaumetopoea processionea、Paysandisiaarchon、桃透赤蛾(Synanthedon exitiosa)、红棕象甲(Rhynchophorus ferrugineus)、Diabrotica virgifera、毛蚊科(Bibionidae)和/或鼠妇(Porcellio scaber)。
优选昆虫病原线虫在高于12℃的温度下是活跃的。更优选，昆虫病原线虫在高于10℃的温度下是活跃的。更优选，昆虫病原线虫在高于8℃的温度下是活跃的。
优选昆虫病原线虫具有70％至100％的杀灭率。更优选，杀灭率为80％至100％。最优选，杀灭率为90％至100％。
优选害虫防治套盒用于控制选自大蚊属(Tipula spp.)、Tipula oleracea、欧洲蝼蛄(Gryllotalpa Gryllotalpa)和/或地夜蛾属(Agrotis spp)的幼虫和/或蛹虫的种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括小卷蛾斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)和/或夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。更优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃或12℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为70％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制草坪、运动和便利设施应用中的幼虫种群。本发明内容中的草坪、运动和便利设施应用是指在高尔夫球场、足球场、橄榄球场以及所有运动和休闲草坪上的使用。
优选，害虫防治套盒用于控制选自Hoplia philanthus、庭院丽金龟(Phyllopertha horticola)、马铃薯鳃金龟(Amphimallon solstitialis)、欧洲鳃金龟(Melolontha melolontha)和/或褐绒金龟(Serica brunnea)的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)或嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)和夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)的组合。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃或12℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为80％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制草坪、运动和便利设施应用中的幼虫种群。本发明内容中的草坪、运动和便利设施应用是指在高尔夫球场、足球场、橄榄球场以及所有运动和休闲草坪上的使用。
优选，害虫防治套盒用于控制选自西花蓟马(Frankliniella occidentalis)、斑潜蝇(Chromatomyia syngenesiae)、Phytomyza vitalbae、斑潜蝇属(Liriomyza spp.)、番茄斑潜蝇(Tuta absoluta)、负泥虫属(Crioceris spp.)、Synanthedon myopaeformis、苹果小卷蛾(Cydia pomonella)、梨小食心虫(Grapholita molesta)、李小食心虫(Grapholita和nebrana)、Thaumetopoea processionea、Tipula oleracea和/或毛蚊科(Bibionidae)的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为80％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制园艺应用中的幼虫种群。本发明内容中的园艺应用是指在软的水果、观赏植物和花卉上的使用。
优选，害虫防治套盒用于控制选自黑葡萄耳喙象(Otiorhynchus sulcatus)、长脚金龟属(Hoplia spp.)、庭院丽金龟(Phyllopertha horticola)、马铃薯鳃金龟(Amphimallon solstitialis)和/或欧洲鳃金龟(Melolontha melolontha)的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)和/或夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为90％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制园艺应用中的幼虫种群。本发明内容中的园艺应用是指在软的水果、观赏植物和花卉上的使用。
优选害虫防治套盒用于控制选自黑葡萄耳喙象(Otiorhynchus sulcatus)、松树皮象(Hylobius abietis)、星天牛(Anoplophora chinensis)、云杉八齿小蠹(Ipstypographus)、蔗根象(Diaprepes abbreviates)、Rhabdopterus picipes、Curculionucum和/或Diabrotica virgifera的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括Heterorhabditis downesi和/或嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃或12℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为90％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制园艺应用中的幼虫种群。本发明内容中的园艺应用是指在软的水果、观赏植物和花卉上的使用。
优选害虫防治套盒用于控制选自苹果小卷蛾(Cydia pomonella)、梨小卷蛾(Cydia molesta)、栗小卷蛾(Cydia splendana)、水蝇科(Ephydridae)、夜蛾属(Spodoptera spp)、Chrysodeixis chalcites、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、Duponchelia 和vealis、松树皮象(Hylobius abietis)、星天牛(Anoplophorachinensis)、云杉八齿小蠹(Ips typographus)、蔗扁蛾(Opogona sacchari)、Chrysoteuchia topiaria、Capnodis tenebrionis、梨豹蠹蛾(Zeuzera pyrina)、Paysandisia archon、桃透赤蛾(Synanthedon exitiosa)、红棕象甲(Rhynchophorusferrugineus)、地夜蛾属(Agrotis spp.)和/或鼠妇(Porcellio scaber)的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括小卷蛾斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于14℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为90％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制树木和森林应用中的幼虫种群。本发明内容中的树木和森林应用是指在包括树木和林业的全区域上的使用。
优选害虫防治套盒用于控制选自Lycoriella spp.，and/or Bradysia spp的幼虫和/或蛹虫种群。优选，在这样的实施方案中，昆虫病原线虫包括夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。更优选，这样的实施方案中，昆虫病原线虫的量在高于8℃下是活跃的。最优选，在这样的实施方案中，杀灭率为90％至100％。优选，在这样的实施方案中，安排培训包来培训使用者使用(适当)量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制蘑菇栽培应用中的幼虫种群。本发明内容中的蘑菇栽培应用是指在用于蘑菇栽培的区域上的使用。
根据本发明的第二个方面，提供了一种控制幼虫种群的方法，该方法包括步骤：
a)提供根据本发明的第一个方面的害虫防治套盒；
b)将一定量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物与一定体积的水混合，以产生一定体积的活性生物杀虫剂；和
c)将该体积的活性生物杀虫剂施用于土壤区域或一种或多种植物的叶面受侵染部分。
根据本发明的第三个部分，提供了一种控制幼虫种群的方法，该方法包括步骤：
a)提供一定量的昆虫病原线虫；
b)提供包含一种或多种表面活性剂的润湿剂组合物；和
c)提供培训包，该培训包包括安排的步骤来培训使用者提供所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制幼虫种群。
优选，所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物适用于根据本发明第一个方面的害虫防治套盒。
根据本发明的第四个方面，提供了一种害虫防治套盒，该害虫防治套盒包括：
a)一定量的昆虫病原线虫；
b)包含一种或多种表面活性剂的润湿剂组合物；和
c)包括教学方法的培训包，该方法包括步骤：使用所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物来控制幼虫种群。
优选，所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物适用于根据本发明第一个方面的害虫防治套盒。
优选培训包方法针对该方法的特定应用。更优选，该应用包括选自以下组中的一种：草皮、运动和休闲应用；园艺应用；树木和森林应用；蘑菇栽培应用。本发明内容中的草皮、运动和休闲应用是指在高尔夫球场、足球场、橄榄球场和所有运动和休闲草皮上的使用。本发明内容中的园艺应用是指在软的水果、观赏植物和花卉上的使用。本发明内容中的树木和森林应用是指在包括树木和林业的区域上的使用。本发明内容中的蘑菇栽培应用是指在用于蘑菇栽培的区域上的使用。
详述
昆虫寄生线虫，也称为昆虫病原线虫，是土栖蛔虫，已商业化用于控制农业、园艺和林业害虫或家庭和花园，并取得了一些显著成功。然而，这些线虫有效定位并杀灭目标昆虫宿主的能力会受到环境条件的严重影响，土壤水分是影响田间线虫存活、持久性和传染力的最重要因素之一。昆虫病原线虫利用土壤中的水分移动并防止它们干燥，但土壤中的拒水性或疏水性已成为可以阻碍线虫成功应用的问题。
各种商业产品，如土壤表面活性剂、土壤改良剂、润湿剂或土壤渗透剂，已经用于改善土壤拒水性的影响，以降低亲水性和不可润湿性疏水阶段之间的界面张力。这些润湿剂有助于提高水在土壤剖面上的运动，通过改善拒水性来提高用水效率以及改善水的均匀分布。
因此，本发明详述了包含昆虫病原线虫加润湿剂组合物的害虫防治套盒，并且优选连同培训包以培训使用者控制破坏感兴趣商品的目标害虫种群。
通常，本发明的害虫防治套盒不包含化学杀虫剂。优选地，本发明的害虫套盒不包含化学杀虫剂并且不旨在与化学杀虫剂组合使用(无论本发明的害虫防治套盒和化学杀虫剂是同时施用还是按序施用)。如以下实施例所示，本发明人已证明常规润湿剂不适用于与昆虫病原线虫一起使用。特别地，与本发明的害虫防治套盒中使用的润湿剂相比，常规润湿剂已显示出降低昆虫病原线虫的存活，并降低昆虫病原线虫的杀虫活性。因此，与本领域已知的解决方案相比，本发明的害虫防治套盒提供了令人惊讶的优势。
根据本发明的昆虫病原线虫的存活可以至少与在不存在本发明的润湿剂的情况下相同昆虫病原线虫的参照种群的存活相当。与在常规润湿剂存在下相同昆虫病原线虫的参照种群的存活相比，根据本发明的昆虫病原线虫的存活通常得到改善。通常，本发明的害虫防治试剂盒中包含的至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多的昆虫病原线虫在所述害虫防治套盒施用后存活至少24小时、至少48小时、至少72小时或更长时间。昆虫病原线虫的存活可能根据特定物种而不同(此处描述了示例性物种)。然而，优选，对于包含在本发明的害虫防治套盒中的任何给定的昆虫病原线虫，在施用后至少90％将存活至少24小时。昆虫病原线虫的存活可以使用任何合适的方法来确定，示例性方法是本领域的标准方法。作为非限制性实例，昆虫病原线虫的存活可以使用相容性测定来确定，如以下实施例1中描述的标准方法。
根据本发明的昆虫病原线虫的杀虫活性可以至少与不存在本发明的润湿剂的情况下相同昆虫病原线虫的参照种群的杀虫活性相当。与在常规润湿剂的存在下相同昆虫病原线虫的参照种群的杀虫活性相比，根据本发明的昆虫病原线虫的杀虫活性通常得到提高。可以以任何合适的方式来量化杀虫活性。作为非限制性实例，昆虫病原线虫的杀虫活性可以根据在/到给定时间点杀灭的待处理害虫的百分比来量化(本文可互换地称为害虫死亡率)。通常，待处理害虫的害虫死亡率在施用所述害虫防治套盒后至少24小时、至少48小时、至少72小时或更长时间内为至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高。害虫死亡率可根据具体害虫种和/或昆虫病原线虫的具体种(本文中描述了示例性害虫和昆虫病原线虫种)而变化。然而，优选，对于任何给定的昆虫病原线虫和害虫，施用后至少24小时，更优选施用后至少48小时，甚至更优选施用后至少72小时，害虫死亡率为至少90％。可以使用任何合适的方法来确定害虫死亡率，示例性方法是本领域的标准方法。作为非限制性实例，害虫死亡率可以使用致病性测定来确定，如在以下实施例中使用的那些。
与不存在本发明的润湿剂的情况下相同昆虫病原线虫的参照种群的散布相比，根据本发明的昆虫病原线虫的散布可以被改变。散布可以是垂直散布和/或水平散布。除非另有说明，本文提及“散布”的引用包括水平和垂直散布。
通常，使用根据本发明的润湿剂的昆虫病原线虫的垂直散布至少与不存在本发明的润湿剂的情况下相同昆虫病原线虫的参照种群的散布相当。
使用根据本发明的润湿剂的昆虫病原线虫的水平散布至少与不存在本发明的润湿剂的情况下相同昆虫病原线虫的参照种群的散布相当，并且与该参照种群的散布相比通常得到提高。根据本发明的昆虫病原线虫的水平散布与不存在本发明的润湿剂的情况下相同的昆虫病原线虫的参照种群的水平散布相比可增加至少10％、至少20％、至少30％、至少50％、至少75％或更多。
昆虫病原线虫的散布可以使用任何合适的方法来确定，示例性方法是本领域的标准方法。作为非限制性实例，昆虫病原线虫的垂直散布可以使用沙柱分析来确定。作为进一步的非限制性实例，昆虫病原线虫的水平散布可以通过量化跨越沙氏葡萄糖琼脂(SDA)平板的散布来确定。同样，使用SDA板的合适方法是本领域已知的。
昆虫病原线虫的散布可根据特定物种(本文中描述了示例性物种)而变化。然而，优选，对于包含在本发明的害虫防治套盒中的任何给定昆虫病原线虫，与不存在润湿剂组合物的情况下的对照昆虫病原线虫相比，水平散布增加了，更优选与不存在润湿剂组合物的情况下的对照昆虫病原线虫相比，水平散布增加至少20％。
优选，如本文所述的，本发明的害虫防治套盒提供了增加的昆虫病原线虫存活和增加的害虫死亡率。在一些特别优选的实施方案中，如本文所述的，本发明的害虫防治套盒提供增加的昆虫病原线虫存活、增加的害虫死亡率和增加的散布(特别是水平散布)。不受理论束缚，认为本发明的害虫防治套盒的有利特性由本发明的润湿剂提供，特别是由润湿剂中包含的溶剂和/或表面活性剂(或其组合)提供。
附图简述
图1是根据本发明第一个和第四个方面的害虫防治套盒的组件图。
图2显示了单独施用或与润湿剂组合物(作为害虫防治套盒-C)一起施用的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)对控制威尔士金龟子、Hoplia philanthus幼虫的功效(％)。试验于2017年5月至2018年10月在英国伦敦沃特福德的格罗夫高尔夫俱乐部进行。处理由以下组成：单独施用25亿嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)/ha，与润湿剂组合物(10L/ha)一起施用25亿嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)/ha和毒死蜱(Equity)2L ai/ha。所有处理均使用常规喷杆喷雾器，然后土壤注入器施用。在施用后第2、4、6和8周采集土壤样品以评估幼虫种群。
图3显示了线虫在高尔夫球场上用于控制长脚蝇(1eatheriackets)幼虫的应用。
图4显示了线虫在高尔夫球场上的应用，通过打孔来控制长脚蝇幼虫。
图5显示了在现场试验实施例1至6之前和期间进行的准备和过程。
图6显示了单独施用或与润湿剂组合物(作为害虫防治套盒-L)一起施用的线虫(春季为夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)和秋季为小卷蛾斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae))控制长脚蝇幼虫的功效(％)。试验于2018年4月至2018年9月在苏格兰金泰尔马尔的Machrihanish高尔夫俱乐部进行。处理由以下组成：单独施用的线虫(春季为夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)和秋季为小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae))25亿/ha，以每周间隔施用两次，含润湿剂组合物(10L/ha)的害虫防治套盒-L 25亿/ha，以每周间隔施用两次，和毒死蜱(Equity)2L a.i./ha。所有处理均在土壤通气之前使用常规喷杆喷雾器进行，其包括形成直径为0.5厘米的小孔。在施用后6周采集土壤样品以评估幼虫种群。
图7显示了试验地点，国王卡普尔，赫里福德郡，英格兰，UK。
图8显示了嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)单独或与润湿剂组合物一起(作为害虫防治套盒-H)在田间生长的草莓中控制黑藤象鼻虫(黑葡萄耳喙象(Otiorhynchus sulcatus))的功效(％)。处理由以下组成：作为预混物施用的金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)，与或未与润湿剂组合物一起作为喷淋施用的Steinernemakraussei，单独或与润湿剂组合物一起(作用害虫防治套盒-H)的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)和毒死蜱(Equity)。试验于2016-17年7月至10月期间在英国赫里福德郡国王卡普尔的多隧道下的沙土中进行。每株草莓植物都感染了30个黑藤象鼻虫卵，并且在接种后13周对植物进行破坏性评估。显示相同字母的条没有显著差异(P＞0.05)；Tukey’s检验)。每个处理重复4次，15株/处理。
图9显示了杀虫剂、益虫和害虫控制套盒-F夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)在田间种植的草莓中控制西花蓟马(Frankliniella occidentalis)的比较功效结果。处理由以下组成：杀虫剂(Tracer-商标)、有益的掠食性螨虫、黄瓜新小绥螨(Neoseiuluscucumeris)、单独或与润湿剂组合物一起(作为害虫防治套盒-F)的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。试验于2015-17年7月至10月期间在英国赫里福德郡国王卡普尔的多隧道下的沙质土壤中进行。草莓作物感染了西花蓟马(5-20只成虫/花)，在处理后第28、29、30、31、32、33和35周对每朵花/植株上的蓟马数量进行计数。每个处理重复4次，15株/处理。
图10显示了杀虫剂和害虫防治套盒-S(夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae))在温室条件下控制尖眼蕈蚊幼虫的比较功效结果。处理由以下组成：呋喃丹(Carbofuran)、七氟苯脲(Teflubenzuron)、单独或与润湿剂组合物一起(作为害虫防治套盒-S)的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。试验于2016-17年在英国蘑菇生产农场进行。蘑菇自然感染了尖眼蕈蚊幼虫，并在处理后的第1周和第3周计数。每个处理重复4次，15株/处理。
图11显示了单独的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)、单独的Heterorhabditis downesi和单独的小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)或与润湿剂组合物一起(作为害虫防治套盒-T)用于控制西加云杉中的松树象鼻虫幼虫的功效。处理由以下组成：单独的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)、单独的Heterorhabditis downesi、单独的小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)和小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)+润湿剂组合物(作为害虫防治套盒-T)。线虫在500毫升水中以350万/桩的方式作为喷淋施用。试验于2016-17年6月至8月期间在威尔士Ceredigion的Tywi North森林的西加云杉树桩上进行。每个树桩在处理进行4周后进行了破坏性评估。每个处理重复5次，5个桩/处理。
图12提供了描述根据本发明的第二个和第三个方面控制幼虫种群的方法的流程图。
参照图1，提供了根据本发明的第一个和第四个方面的害虫防治套盒10的组件视图。害虫防治套盒10包括一定量的昆虫病原线虫12、润湿剂组合物14和培训包16。在所示的实施方案中，一定量的昆虫病原线虫包括每公顷待处理土地25亿个生物体量的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。将生物体安排在低于8℃的温度下储存，低于该温度时，夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)仍然基本上是不稳定的。高于8℃，夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)变得活跃并具有传染性。润湿剂组合物14包括液体，其包含10％的二丙二醇甲醚、3％的聚乙二醇表面活性剂和土壤渗透剂。培训包16被布置为允许使用者进行根据第二个和第三个方面的控制昆虫种群的方法。
定义
除非本文另有定义，否则与本发明关联使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应明确；然而，在任何潜在歧义的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外部定义。应当理解，本发明不限于本文所述的特定方法学、方案和试剂等，且因此可以变化。本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求来限定。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，而复数术语应包括单数。在本申请中，除非另有说明，否则“或”的使用表示“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及诸如“包括(includs)”和“包括(included)”之类的其他形式的使用不是限制性的。
本公开实施方案的描述并非旨在详尽无遗或将本公开限于所公开的精确形式。虽然本文出于说明性目的描述了本公开的特定实施方案和实施例，但是如相关领域的技术人员将认识到的，在本公开范围内的各种等效修改是可能的。例如，虽然方法步骤或功能以给定的顺序呈现，但替代实施方案可以以不同的顺序执行功能，或者可以基本上同时执行功能。本文提供的本公开的教导可以适当地应用于其他程序或方法。可以组合本文描述的各种实施方案以提供更多实施方案。如果需要，可以修改本公开的方面以采用上述参考文献和申请的组合物、功能和概念，以提供本公开的更进一步的实施方案。此外，出于生物功能等效性的考虑，可以在不影响生物或化学作用的种类或量的情况下对蛋白质结构进行一些改变。可以根据详细描述对本公开做出这些和其他改变。所有这些修改都旨在包括在所附权利要求的范围内。
提供本文讨论的出版物仅为了它们在本申请的申请日之前的公开。本文中的任何内容均不得解释为承认此类出版物构成所附权利要求的现有技术。
实施例
现在将仅通过示例并参考附图来描述特定实施方案。
实施例1-NemaSpreader与市售润湿剂的比较研究
润湿剂作为一类化合物很容易在市场上买到，其中一些(例如H2Pro)甚至被宣传为适用于与昆虫病原线虫一起使用。研究了暴露于不同润湿剂后不同线虫种的存活。这些润湿剂包括可商购的润湿剂和根据本发明的润湿剂
所用润湿剂的终浓度与制造商针对田间应用的建议所规定的浓度相同。将15ml量的线虫溶液加入含有15ml每种润湿剂的组织培养瓶(50ml容量)中，因此制成的总体积为30ml，包含约93,750IJ(相当于田间应用的800升水中的2.5×109IJ/ha)。为了对照，向线虫溶液中加入15ml蒸馏水代替润湿剂。每个处理重复3次。将组织培养瓶在20±2℃下避光保存。
在3、6和24h时通过从每个悬液中取出3×20μl等分试样来评估线虫的生存力，并使用双目显微镜(Olympus)对活线虫进行计数。如果观察到以下标准，则确定线虫为死亡：(i)缺乏运动，(ii)线虫内分解和/或形成气泡的初始迹象，(iii)对物理刺激缺乏反应。整个测定重复两次。
如下表1中所示，根据本发明第一个方面所需的润湿剂与选自以下的线虫种相容：嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)；Heterorhabditisdownesi；夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)；小卷蛾斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)；Steinernema kraussei。暴露于所述润湿剂24小时后的线虫存活不低于90％。相比之下，在暴露后24小时，在分析的常规润湿剂范围内，测试线虫种的存活显著降低。
因此，与传统知识相反，润湿剂的选择会对线虫的存活/生存力产生重大影响，而特定润湿剂的选择是含有昆虫病原线虫的产品和套盒的害虫防治功效的关键。
此外，在进一步的比较研究中，评估了在暴露后24h对抗更大的蜡螟大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫的暴露后致病性。将暴露于来自相容性试验的测试佐剂的线虫洗涤三次以从线虫体中去除任何残留的润湿剂。将来自每个处理的1毫升线虫溶液放入1.5毫升微量离心管中，并以3,000rpm旋转7分钟。丢弃含有任何过量润湿剂的上清液，并使用1ml蒸馏水重悬浮线虫。对于每种处理类型，将该过程重复3次。再次对每次重悬浮的线虫进行计数以确定存在的浓度，并对于每次处理，调整体积以获得900μl水中500条线虫的浓度。
将五只大蜡螟幼虫放入内衬滤纸的90mm直径培养皿中。然后将900μl线虫悬液均匀分布在滤纸上，然后用ParafilmTM密封盖子。测试了两个对照条件；用未暴露于任何润湿剂的线虫攻击的大蜡螟，以及空白对照，其中大蜡螟幼虫暴露于仅用蒸馏水处理过的滤纸。培养皿在黑暗中储存在25±1℃。每天记录死亡率，直到所有昆虫都死亡。将所有感染线虫的尸体转移到衬有湿滤纸的培养皿中，并在25±1℃下保持3天，然后解剖尸体并在光学显微镜下观察以验证线虫的存在。每个处理重复3次，每次重复5只幼虫，并进行两次。
暴露于润湿剂后72小时后，所述线虫的暴露后致病性(昆虫死亡率)未降至90％以下(数据未显示)。
此外，还测试了所述线虫通过使用润湿剂的测试介质(沙柱)的垂直散布(将30mL润湿剂加入hi-ball玻璃杯(威尔金森，英国)中的350g沙子中，使用润湿剂达到了垂直散布超过80％的hi-ball玻璃杯深度(数据未显示)。水平散布也使用SDA板进行了评估。在距Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA)平板上的9cm直径培养皿上的板中心点1.0厘米和3.5厘米处绘制两个同心圆。将20μl线虫润湿剂的等分试样(与相容性测定的浓度相同)加入培养皿的中心点。然后将培养皿用Parafilm密封并在黑暗中在21±2℃下储存2小时，然后线虫迁移到每个区域；对(i)距培养板中心0-1.0cm；(ii)1.0-3.5cm，和(iii)3.5-4.5cm的线虫进行计数，以评估它们远离放置点的移动。与空白对照相比，对于使用根据本发明的润湿剂测试的所有线虫种，观察到向区域II的散布有可观察到的增加。
因此，本发明的润湿剂在相容性、暴露后致病性和传播研究中优于替代产品(包括第一个替代产品-包含醇类、C6-12、乙氧基化5-10％，丙烷-1，2-二醇、丙氧基化1-3％；以及第二个替代产品，包含19.4％乙醇乙氧基化物(非离子表面活性剂)；专有混合物+乙醇、C11-15-二级、乙氧基化15-20％+橙色，甜的，ext.丙二醇5-10％)。
因此，润湿剂的选择很重要，因为它会影响害虫防治产品/套盒的其他方面(如线虫的致病性和散布)，从而影响杀虫功效。以下实施例描述了根据本发明第一个方面的本发明的害虫防治套盒的田间研究，其根据第二个方面的方法来进行。
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实施例2-高尔夫球场中的金龟子幼虫的防治
田间试验在格罗夫高尔夫俱乐部，沃特福德和阿什里奇高尔夫俱乐部，伯克姆斯特德，英国的含有威尔士金龟子Hoplia philanthus(90％)，花园金龟子庭院丽金龟(Phyllopertha horticola)(3％)，夏季金龟子马铃薯鳃金龟(Amphimallonsolstitialis)(1％)，五月甲虫欧洲鳃金龟(Melolontha)(4％)和线虫金针虫(Agriotes)种(3％)的自然侵染的发球台、果岭和球道上进行。土壤由含88.0％沙、5.6％粉砂、6.4％粘土和5.8％有机质的砂壤土组成。通过用大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫引诱土壤样品未检测到天然线虫。
处理前一周，通过用铲子或高尔夫球洞切割器(直径10厘米)取三个16×16×10至15厘米的土塞，测定了发球台、果岭和球道中处理前的幼虫密度(见图4)。将活幼虫计数并表示为每平方米的幼虫数。然后将幼虫放回土塞中，土塞也放回原处。
在2017-18年的春季和秋季(7cm深的土壤温度为14.5-18℃；空气温度14-20℃；晴天)，在格罗夫高尔夫俱乐部，使用土壤喷射器安装拖拉机接着喷杆喷雾器来施用含和不含根据本发明的第一个方面的润湿剂组合物(液体预混形式：二丙二醇甲醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)，以处理10ha的发球台、果岭和球道。同时使用喷杆喷雾器施用参照化学产品毒死蜱。
处理包括：
1.以每周间隔施用两次单独的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)，25亿/公顷；
2.以每周间隔施用两次根据本发明的第一个方面的害虫防治套盒，其包含25亿/公顷的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)+5升最终混合的润湿剂组合物(稀释至500升水中的液体形式；1％v/v)(害虫防治套盒-C)；
3.仅施用一次毒死蜱(每公顷2升活性成分)；和
4.未经处理的对照。
在线虫或毒死蜱施用后2、4、6和8周时测定了处理后的幼虫密度。
结果
总体而言，与单独施用化学品或线虫相比，根据第一个方面的组合害虫防治产品(嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)与润湿剂组合物-害虫防治试剂盒-C)在处理后2、4、6和8周时提供了更好的控制。组合害虫防治产品提供了97％的控制。单独的线虫提供了70％的控制，化学品提供了62％的控制。我们注意到在自然环境中对幼虫的渐进控制(见图2)
实施例3-高尔夫球场中长脚蝇幼虫的防治
长脚蝇(大蚊属(Tipula spp.))是鹤蝇的幼虫阶段，且是非常难以控制的土栖害虫。幼虫以多种植物的根部为食，如谷类作物和高尔夫球场、运动场和草坪中的各种草。从8月中旬开始，成年昆虫从它们的蛹和土壤中孵化出来。雌性在潮湿的土壤表面下交配和产卵，两周后幼虫开始孵化。幼虫夜间以植物的叶子为食，而白天以根为食。
田间试验在英国苏格兰Machrihanish高尔夫俱乐部的含有大蚊种的幼虫(100％)的自然侵染的果岭上进行。土壤由含85％沙、4.5％粉砂、5％粘土和5.5％有机质的砂壤土组成。通过用大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫引诱土壤样品未检测到天然线虫。
处理前一周，通过用高尔夫球洞切割器(直径10厘米)取六个土塞，测定了果岭中处理前的大蚊属幼虫密度。将活幼虫计数并表示为每平方米的幼虫数。然后将幼虫放回土塞中，土塞也放回原处。
与图3中所述的相同，使用喷杆喷雾器，以等比例施用含和不含根据本发明的第一个方面(液体预混形式：二丙二醇甲醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)的润湿剂(液体预混形式：二丙二醇甲醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)和小卷蛾斯氏线虫(Steinernemacarpocapsae)(害虫防治套盒-L)。为了将线虫递送至表面下靶标，24小时前，通过土壤注入器(图4)在果岭中冲出小孔(0.5-1.0厘米直径×5-7厘米深度)，以帮助线虫悬液到达草或茅草层下方。
在2018年4月和2018年9月底处理了两公顷的果岭。同时使用喷杆喷雾器施用了参照化学品毒死蜱。
处理包括：
1.以每周间隔施用两次夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)(春季)或小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)(秋季)，25亿/公顷；
2.根据本发明的第一个方面的包含25亿夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)或小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)的害虫防治套盒(害虫防治套盒-L)；
3.以每周间隔施用两次每公顷(25亿每个种)+10L最终混合的润湿剂组合物(稀释至1％v/v的液体形式)；
4.仅施用一次的毒死蜱(每公顷2升活性成分)；和
5.未经处理的对照。
在线虫或毒死蜱施用后4或8周测定了处理后的幼虫密度。
结果
对于田间条件下的长脚蝇幼虫防治，根据本发明的第一个方面的害虫防治套盒的功效与单独的线虫和单独的化学品相当。害虫防治套盒的性能在秋季期间更佳(85％)；然而，春季期间的有效性有限(20％)。与毒死蜱、夜蛾斯氏线虫(Steinernemafeltiae)或小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)的其他处理相比时，夜蛾斯氏线虫(Steinernemafeltiae)和小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)的联合施用获得了次佳功效(75％)。
实施例4-软的水果(田间种植的草莓)中的葡萄象鼻虫的防治
从2016年7月至10月，在英国英格兰赫里福德国王卡普尔Pennoxstone Court的商业草莓农场的多隧道中进行了试验(图7)。该地点的土壤是砂壤土。该场地在前一年期间未进行过杀虫剂处理。使用“蜡螟(Galleria)诱饵方法”确定在试验地点未检测到天然的线虫种群。这种方法需要在土壤中孵化大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫，如果存在这些幼虫，这些幼虫很容易死于线虫。这种方法提供了一种研究天然和引入的线虫种群的便捷方法。
作物品种：Centenary(塞)和Symphony(裸根)
土壤类型：砂壤土
测试块大小：1.5×0.9m，地块之间有0.3m缓冲
重复：4×15株/处理
地块大小为1.5m×0.9m，使用0.3m缓冲，并按完整的随机区块设计排列，每个处理重复4次(EPPO标准PP1/181)。草莓植株于2016年7月7日种植，葡萄象鼻虫卵于2016年7月14日和8月22日接种。处理当天，天气部分多云，空气和土壤(7厘米深度)温度分别为25℃和20℃。每个处理重复4次，每个重复15株植物。
施用了以下处理：
1.计划前以每公顷120kg施用的G生物杀虫剂；
2.以每株植物30,000条施用的Steinernema kraussei；
3.以每株植物30,000条施用的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)；
4.以每公顷2.0升使用的毒死蜱；
5.根据本发明第一个方面的害虫防治套盒，包含用润湿剂组合物(液体形式：二丙二醇甲醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)施用的Steinernemakraussei；
6.根据本发明第一个方面的害虫防治套盒，包含用以上润湿剂组合物(稀释至1％v/v的液体形式)施用的嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)(害虫防治套盒-H)；和
7.未经处理的对照
测试系统
第一次卵接种于2016年7月14日完成，在植物的每一侧接种10个卵(每株植物总共20个卵)。8月22日进行第二次卵接种，每株植物10个卵。这样做是为了确保接种时土壤是湿润的。植物基部周围的地壳被打碎，并在植物的每一侧开两个洞(土壤中2-3cm深)。接种后立即用土壤将孔松散地封闭，每株植物灌溉大约100mL的水，以防止虫卵干燥。
处理的施用
首先将颗粒状配方产品混合在1.0升土壤中，然后剧烈摇晃5钟以去除米粒上的孢子。然后将这种混合物铺在土壤表面上，然后混合到顶部5厘米的土壤中。该比率是根据制造商针对葡萄象鼻虫防治的推荐比率，其范围为30至122kg/ha的产品＝4.5×1013至1.35×1014CFU/ha(英国批准的比率高达61kg/ha作物，不处理路径和非作物区域)。预混后种植草莓，且每株灌水200mL。
线虫产品的施用
使用施加线虫，它提供恒定的注入比以及均匀和成比例的注入，增加了简单或自动化系统的灵活性，因此线虫可以轻松地施加到植物根部附近。
破坏性评估
2016年10月12日至16日对植物进行了破坏性评估，并对活幼虫的数量进行了计数。发现大多数幼虫靠近植物根部，但远离土壤中的植物也有发现。然后将处理过的地块回收的幼虫转移到实验室，并放在培养皿(直径9cm)中的潮湿滤纸上，并在25℃下孵育(100％r.h.3-5天)。通过检查尸体的真菌孢子形成或在显微镜下解剖以确认线虫的存在来确认死因。
环境因素
在试验期间，所有植物都通过毛细管定期灌溉。植物暴露于与当地商业种植植物相同的生物(害虫压力、植物病害等)和非生物(光强度、温度、水可用性等)因素。试验于2016年6月至10月期间进行。使用数据记录器记录试验期间的土壤和空气温度。
结果
与其他处理(60-82％)相比，与润湿剂组合物一起施用时，包含嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)的害虫防治套盒导致最高的死亡率(98％)。与润湿剂组合物一起施用时，Steinernema kraussei也提供了良好的防治(85.5％)。所有其他处理是相似的并且提供了葡萄象鼻虫幼虫的60-68％的抑制(参见图8)。
实施例5-草莓作物中的西花蓟马的防控
西部蓟马(Frankliniella occidentalis)是全球范围内的主要害虫。它们通过其摄食习性和有害植物病毒(包括番茄植物中的斑点枯萎病毒)的传播，对多种具有重要经济意义的作物造成损害。幼虫和成虫几乎以任何开花植物为食，包括辣椒、黄瓜、生菜、土豆、西红柿、草莓、一些核果和各种观赏植物。这导致畸形水果，通常被称为猫面，这是消费者无法接受的。这种害虫已对许多现有的杀虫剂和大多数针对叶片抑制阶段的生物防治剂产生抗药性。然而，施用根据本发明的第一个方面的包含夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)的害虫防治套盒(害虫防治套盒-F)，以靶向昆虫的土壤栖息阶段(蛹前和蛹)并随后阻止种群增长。
包含夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)的害虫防治套盒对蛹前和蛹有效，但对抗幼虫(L2)效果较差。田间试验于2015-16年夏季在英国英格兰赫里福德郡国王卡普尔的Pennoxstone Court商业草莓农场进行。为了标准化不同的实验，尽可能遵循EPPO杀虫剂功效评估指南，PP 1/85(3)“户外作物上的蓟马”。观察了至少20平方米的地块大小，每个处理重复四次。使用滴灌进行以下处理：
1.未经处理的对照；
2.已知化学杀虫剂：施用于叶面上的150mL/ha；
3.施用于叶面上的有益捕食性螨虫和小虫；
4.单独施用的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)；和
5.根据本发明的第一个方面的害虫防治套盒(害虫防治套盒-F)，包括用在1L/100L水中稀释至1％v/v润湿剂组合物(液体预混形式：二丙二醇甲基醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)以推荐剂量的四分之一(每公顷62.5万)施用的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)。
所有处理均使用1000L水/ha进行。从6月初(第24周)开始，以每周间隔处理植物，最多六次。通过配置黄色粘性陷阱来监测西花蓟马种群-以每周间隔使用手持放大镜对附着在黄色粘性陷阱上的活蓟马成虫的数量进行计数。
结果
与其他有益的或杀虫剂相比，使用或不使用润湿剂组合物的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)处理使每朵花上的蓟马种群数量少于两个。在对照中注意到最高数量的蓟马种群，并且在28至35周的观察过程中发现每朵花6至12个个体(图9)。
实施例6-蘑菇中的尖眼蕈蚊幼虫的防治
真菌蚊蚋，也称为尖眼蕈蚊，在生长介质上和周围发现，是温室和多隧道观赏作物的主要害虫。尖眼蕈蚊幼虫通过以幼苗、插条和幼年植物的根和茎组织为食，直接对多种具有重要经济意义的盆栽植物造成损害。它们还通过由尖眼蕈蚊幼虫造成的伤口通过真菌病传播而间接造成损害。已知易受尖眼蕈蚊侵袭的盆栽植物包括一品红、杜鹃花、仙客来、长寿花、藻百年、非洲菊、秋海棠等。各种幼苗和幼根插条(蔬菜、观赏植物和幼苗)都非常易感染尖眼蕈蚊幼虫。最重要的使用领域之一是盆栽草药(例如罗勒)。随着在盆栽土壤中堆肥的使用越来越多，尖眼蕈蚊正成为主要问题。进行了田间试验以评估以下用于防治蘑菇生产中的尖眼蕈蚊幼虫的处理：
1.未经处理的对照；
2.根据推荐用量施用的化学杀虫剂克百威；
3.根据推荐用量施用的化学杀虫剂七氟苯脲；
4.单独施用的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)；和
5.根据第一个方面的害虫防治套盒(害虫防治套盒-F)，包括以25亿/公顷施用的夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)+在1L/100L水中稀释至1％v/v润湿剂组合物(液体形式：二丙二醇甲基醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)。
收获蘑菇长达4周，并计算死幼虫和活幼虫的数量。
结果
总体而言，所有处理均实现了52％至89％的尖眼蕈蚊幼虫控制。施用后3周后，害虫防治套盒实现了显著功效(89％)。在施用的第一周对幼虫的防治在氟苯脲中最高(71％)，其次是在第3周的害虫防治套盒(68％)(图10)。
实施例7-森林中的松树象鼻虫的防治
大型松树象鼻虫松树皮象(Hylobius abietis)是欧洲和英国管理森林中最重要的重新造林害虫之一。由松树皮象(Hylobius abietis)引起的损坏成本估计在欧盟成本为1.5亿欧元(不使用杀虫剂)，而仅在英国每年就有257万欧元。
在2016-17年6月至8月期间，在威尔士中部的Tywi North Forest进行了田间试验以测试根据本发明的各种害虫防治套盒对西加云杉，北美云杉(Picea sitchensis)树桩中的松树象鼻虫的晚龄幼虫和蛹的功效。这些地块由树桩组成，并以完整的随机块设计排列，每个树桩间隔充分以避免交叉污染(EPPO标准PP1/181)。如下施用处理。每个处理重复5次，每个重复5个树桩。在施用处理的当天，天气部分多云，第一组和第二组处理的平均树桩温度分别为13.0℃和13.3℃。选择自然感染大型松树象鼻虫幼虫的西加云杉树桩。2016年4月6日，在试验开始前，对每个地块的两个树桩进行了破坏性评估，以确定天然松树象鼻虫的侵扰。每个树桩回收了大约10只松树象鼻虫幼虫，没有记录到线虫的自然感染。
使用和不使用润湿剂(液体形式：二丙二醇甲醚5-10％、聚氧化亚烷基二醇表面活性剂和土壤渗透剂)进行以下处理。提供润湿剂的处理构成了根据本发明的害虫防治套盒。用500mL含有润湿剂组合物的水和350万条线虫的浸水施用来处理每个树桩。
1.未经处理的对照；
2.以350万条/桩喷淋嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)；
3.以350万条/桩喷淋Heterorhabditis downesi；
4.以350万条/桩喷淋小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)；和
5.以350万条/桩喷淋小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)+在1L/100L水中稀释至1％v/v润湿剂组合物(液体形式)(害虫防治套盒-T)。
破坏性评估
施用线虫后4周对处理过的树桩进行破坏性评估。破坏性评估是通过小心地去除树桩的所有树皮直至向下30厘米。必要时，这包括在土壤表面以下。对于每个树桩，记录了在树皮和树皮/木材界面中发现的松树皮象(Hylobius abietis)总数。还记录了生命阶段(幼虫、蛹或成虫)；生物体是否是死的还是活的；线虫的死因或关于树桩的任何其他相关信息。在评估每个树桩的同时，还记录了树桩的直径(范围为20-55cm)。收集活的幼虫、蛹和成虫，并保存在装有未经处理土壤的塑料盒中，然后带到实验室。这些幼虫、蛹和成虫用水和乙醇清洗，以去除任何可能导致死亡的表面微生物。然后将幼虫放在潮湿的滤纸上，每盘有5只幼虫，并在室温下放置。以24小时间隔记录死亡率以及死因和任何其他相关信息。一周后，在显微镜下解剖没有表现出典型症状的死昆虫以检查线虫的存在。在可能的情况下提供其他信息，如线虫数量(如果它们还活着)；记录脂质含量和来自其他线虫的任何合并感染。
试验于2016-17年6月至8月期间进行。将经过处理的树桩暴露于自然环境中，不受任何干扰。使用数据记录器记录试验期间的树桩温度。试验期间记录了每日平均最高、最低和平均树桩温度。
结果
总体而言，松树象鼻虫的控制在不同处理之间存在显著差异(P＜0.001)。害虫防治套盒(包括小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)；死亡率95％)和Heterorhabditis downesi处理(死亡率96.5％)在处理后4周提供了对松树象鼻虫幼虫的最佳防治。小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)处理略好于嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)(图11)。
所有针对金龟子、长脚蝇、大型松树象鼻虫、黑葡萄象鼻虫、西花蓟马和尖眼蕈蚊的案例研究表明，应用害虫防治套盒时，效果比其他治疗方法高20-30％。
参照图12，根据第二个和第三个方面显示了控制昆虫幼虫或蛹种群的方法20，该方法包括以下步骤：
a)提供根据图1的害虫防治套盒22；
b)将一定量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物与一定体积的水混合以产生一定体积的活化生物杀虫剂24；
c)将一定体积的活化生物杀虫剂施用于地面区域26。
应当理解，上述实施方案仅作为示例给出，并且在不脱离所附权利要求限定的本发明范围的情况下可以对其进行各种修改。
本发明还可以参照以下的来理解：
表2.根据第一个方面的示例害虫防治套盒产品的活性成分，其在每种情况下都包括根据第一个方面的润湿剂组合物。
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罐混合的准备
·从5-10℃的冷藏库中取出线虫，并将线虫在室温下放置30分钟以适应环境。
·将害虫防治套盒配制的包装与桶中的10升水混合，制成均匀的悬液。
·冲洗包装，因为线虫经常附着在包装上。搅拌原液直至所有块状物溶解。
·将所需水量的四分之三与所需量的润湿剂组合物一起加入罐中，润湿剂组合物按1L/100L水添加。
·运行搅拌器，通过筛子加入所需量的害虫防治套盒。
·加入剩余的水并边保持搅拌边施加线虫以避免线虫沉淀直至加入全部混合物。
·施用后每平方米用1-2升水灌溉，以洗掉草或土壤上的线虫。
·一旦害虫防治套盒与水和润湿剂组合物混合，在一次施用中使用整个喷雾溶液。不要在罐中存放超过4小时。
应用注意事项
·不要冻结。产品应储存在5至10℃以保持最大功效。
·取下喷雾设备喷嘴上的所有过滤器以避免堵塞。
·使用直径至少为0.8mm的喷嘴。
·不要超过5巴的泵压。
·在清晨或傍晚光线不足的情况下涂抹。不要在明亮的阳光下使用，因为线虫容易受到紫外线和干燥的影响。
·施用时润湿土壤表面，且如果可能，施用前先浇水会更有增加的益处。
·在土壤温度范围在8-30℃之间的时候施用线虫，每天至少3-6小时，施用后持续至少两周。
·在使用害虫防治套盒前，用清水清洗罐和设备。
害虫防治套盒在园艺作物中的应用范围
表3.施用率
作物/底物 推荐率
土壤 每平方公顷50万(感染性幼线虫)IJs
花盆、容器、种植袋 每升盆栽生长介质10,000IJs
草莓 每株植物25,000IJs
树莓 每株植物(含生长介质的10-20L盆)30,000IJs
蓝莓 每株植物75,000IJs
灌溉设备
·通过微灌(单独的spaghetii管)、滴灌或手持或电动校准灌溉设备施用害虫防治套盒。
·在施用线虫之前进行灌溉，以润湿土壤或生长介质表面。
·将害虫防治套盒溶解在水中，并将其加入干净的饲养箱中。
·在施用过程中不断搅拌溶液以防止线虫沉降。
·使用干净的水冲洗饲养箱并在施用后注入系统中。
植物浸渍法
·将一包5亿条感染性线虫加入800升水中(足以用拳头大小的根球处理约4,000株植物)并彻底混合溶液。
·通过引入压缩空气保持害虫防治套盒溶液的搅拌。
喷淋施用于容器
·将一包5亿条感染性线虫加入1,000升水中，然后均匀施用于盆栽封介质表面。
·如喷淋混合表中列出的，针对较小或较大的花盆相应地调整体积。
草莓植物的浸渍
·将一包5亿条感染性线虫加入80升含有润湿剂组合物的水中(足以处理大约40,000株植物)，并彻底混合溶液。
·一株草莓需要大约2mL线虫溶液。
喷淋施用
·在每株植物的基部周围喷淋200mL或在根区直接注入。
·将一包5亿条感染性线虫在4,000升含有润湿剂组合物的水中稀释，可处理20,000株植物。
统计分析
使用以下等式将存活幼虫的数量转化为百分比功效，并使用方差分析(ANOVA)进行分析。分析了未转换的数据，因为反正弦平方根转换没有提高百分比数据的正态性。使用Tukey’s平均分离检验比较处理间的差异(P＜0.05)。使用SPSS统计软件包v22(IBM，2013.IBM SPSS Statistics for Windows，版本22.0.Armonk，NY：IBM Corp.)进行统计分析。
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Claims (21)

1.一种害虫防治套盒，该害虫防治套盒包含：
a)预定量的昆虫病原线虫；和
b)润湿剂组合物，该润湿剂组合物包含二丙二醇甲醚；
其中所述润湿剂组合物还包含表面活性剂，所述表面活性剂包含聚氧化亚烷基二醇。
2.如权利要求1中要求的害虫防治套盒，其中二丙二醇甲醚以选自未被混合的润湿剂组合物的1％至25％的溶剂浓度存在。
3.如权利要求1中要求的害虫防治套盒，其中二丙二醇甲醚以选自未被混合的润湿剂组合物的5％至10％的溶剂浓度存在。
4.如权利要求1中要求的害虫防治套盒，其中表面活性剂以选自未被混合的润湿剂组合物的0.5％至10％v/v的表面活性剂浓度存在。
5.如权利要求1-4中任一项要求的害虫防治套盒，其中润湿剂组合物包含一种或多种反向嵌段共聚物表面活性剂。
6.如权利要求1-4中任一项要求的害虫防治套盒，其中所述润湿剂组合物还包含一种或多种选自环氧烷的润湿化合物。
7.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中润湿剂组合物包含一种或多种选自聚羟乙基烷氧基环氧烷的润湿化合物。
8.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中润湿剂组合物进一步包含一种或多种土壤渗透剂。
9.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中润湿剂组合物以液体或粉末形式提供。
10.如权利要求9中要求的害虫防治套盒，其中安排液体润湿剂组合物与水混合，以提供具有选自1％v/v至2.86％v/v的混合浓度的工作润湿剂。
11.如权利要求10中要求的害虫防治套盒，其中安排工作润湿剂与水以一定的工作润湿剂:水的混合比例混合以提供最终的润湿剂组合物，其中混合比例选自1:35至1:90。
12.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中所述的害虫防治套盒进一步包含培训包，该培训包被安排来培训使用者使用所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制昆虫幼虫种群。
13.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中昆虫病原线虫的量包括每公顷待处理的土地50万至50亿条昆虫病原线虫。
14.如权利要求13中要求的害虫防治套盒，其中昆虫病原线虫的量包括每公顷待处理的土地25亿至50亿条昆虫病原线虫。
15.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中昆虫病原线虫选自嗜菌异小杆线虫(Heterorhabditis bacteriophora)、Heterorhabditis downesi、夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)、小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae)和/或Steinernemakraussei。
16.如权利要求1-4中任一项中要求的害虫防治套盒，其中幼虫昆虫选自：大蚊属(Tipula spp.)、Tipula oleracea、欧洲蝼蛄(Gryllotalpa Gryllotalpa)、地夜蛾属(Agrotis spp.)、黑葡萄耳喙象(Otiorhynchus sulcatus)、耳喙象属(Otiorhynchusspp.)、Hoplia philanthus、庭院丽金龟(Phyllopertha horticola)、马铃薯鳃金龟(Amphimallon solstitialis)、欧洲鳃金龟(Melolontha melolontha)、褐绒金龟(Sericabrunnea)、苹果小卷蛾(Cydia pomonella)、梨小卷蛾(Cydia molesta)、栗小卷蛾(Cydiasplendana)、水蝇科(Ephydridae)、夜蛾属(Spodoptera spp.)、Chrysodeixis chalcites、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、Duponchelia fovealis、松树皮象(Hylobius abietis)、西花蓟马(Frankliniella occidentalis)、斑潜蝇(Chromatomyia syngenesiae)、Phytomyza vitalbaek、星天牛(Anoplophora chinensis)、云杉八齿小蠹(Ipstypographus)、Synanthedon myopaeformis、蔗扁蛾(Opogona sacchari)、蔗根象(Diaprepes abbreviates)、梨小食心虫(Grapholita molesta)、李小食心虫(Grapholitafunebrana)、Chrysoteuchia topiaria、Rhabdopterus picipes、Capnodis tenebrionis、Curculio nucum、梨豹蠹蛾(Zeuzera pyrina)、Thaumetopoea processionea、Paysandisiaarchon、桃透赤蛾(Synanthedon exitiosa)、红棕象甲(Rhynchophorus ferrugineus)、Diabrotica virgifera、毛蚊科(Bibionidae)和/或鼠妇(Porcellio scaber)。
17.一种控制昆虫幼虫或蛹种群的方法，该方法包括步骤：
a)提供如之前任一项权利要求中要求的害虫防治套盒，其包含预定量的昆虫病原线虫和润湿组合物；
b)将所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物与一定体积的水混合，以产生一定体积的活化杀虫剂；和
c)将该体积的活化杀虫剂施用于地面区域。
18.一种控制昆虫幼虫或蛹种群的方法，该方法包括以下步骤：
a)提供一定量的昆虫病原线虫；
b)提供包含二丙二醇甲醚和一种或多种表面活性剂的润湿剂组合物，所述表面活性剂包含聚氧化亚烷基二醇；和
c)提供培训包，该培训包培训使用者使用所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制昆虫幼虫的种群。
19.一种害虫防治套盒，该套盒包含：
a)一定量的昆虫病原线虫；
b)润湿剂组合物，其包含二丙二醇甲醚和表面活性剂，所述表面活性剂包含聚氧化亚烷基二醇，并且其中所述润湿剂组合物是如权利要求1至11中任一项所定义的润湿剂组合物；和
c)包括教导方法的培训包，该方法包括步骤：使用所述量的昆虫病原线虫和润湿剂组合物，以控制昆虫幼虫的种群。
20.二丙二醇甲醚和包含聚氧化亚烷基二醇的表面活性剂在润湿剂组合物中用于改善昆虫病原线虫的活力和/或功效的用途。
21.一种组合物，其可由权利要求1至16中任一项要求的害虫防治套盒，通过将所述预定量的昆虫病原线虫和所述润湿剂组合物与一定体积的水混合以产生一定体积的活性杀虫剂获得。
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