CN114137223A - 一种快速测定igf-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒及其制备使用方法 - Google Patents

一种快速测定igf-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒及其制备使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种快速测定IGF‑1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1为含促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF‑1抗体的胶乳微球溶液；其中，试剂R2的具体成分为：5～10mmol/LIGF‑1抗体胶乳微球，10～100mmol/LTris‑HCl缓冲液，2～5g/LBSA，0.1～1g/L防腐剂。本发明还提供上述试剂盒的制备使用方法。本发明的优点在于：(1)可直接使用全自动生化仪进行检测，不仅操方便，还省时节约；(2)还具有灵敏度高和特异性好等优点，且采用本发明试剂盒对IGF‑1进行定量检测，准确度偏差≤10％。

Description

一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒及其 制备使用方法
技术领域
本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒及其制备使用方法。
背景技术
胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors，简称IGFs)是一类多功能细胞增殖调控因子，其在细胞的分化、增殖、个体的生长发育中具有重要的促进作用。IGF在组织或血液中均与胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)相结合，以复合物的形式存在。
IGFBP-1、IGFBP-2这两者占血清中可提取的胰岛素样生长因子总量的90％以上，并且它们在促组织细胞生长发育中起主要作用。机体多种组织器官可以合成分泌IGF-1，但最主要的器官是肝脏，约合成血液中80％的IGF-1。血液循环中，IGF-1具有促进细胞增生和分化，促进细胞生长，抑制细胞凋亡，同时具有类似胰岛素代谢活性及免疫调节作用。因此，IGF-1是反应生长激素生物功能的灵敏指标，TGF-1的检测对疾病的进程和疗效判断提供了重要的依据。
目前，检测IGF-1的方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)。酶联免疫吸附法(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术，该方法检测操作繁琐、自动化程度低、耗时长，不利于快速检测。
胶乳增强免疫比浊法是将待测物质相对应的抗体包被在胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。此方法操作步骤简便，几分钟就能获得测试结果，也避免了许多人为操作带来的误差和外界环境因素的干扰，能较准确真实的反映被测物质的含量。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒及其制备使用方法。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1为含10～50g/L促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF-1抗体的胶乳微球溶液；其中，试剂R2的具体成分为：5～10mmol/L IGF-1抗体胶乳微球，10～100mmol/L Tris-HCl缓冲液，2～5g/LBSA，0.1～1g/L防腐剂。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R1的具体成分为：10～100mmol/L、pH 7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液，9-135g/L氯化钠，10-50g/L促凝剂，0.1～1g/L防腐剂。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R1中，促凝剂为PEG6000，防腐剂为Proclin300和叠氮钠中的一种或两种。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R2中，IGF-1抗体胶乳微球的制备方法为：①取120nm的羧基微球1mL，并加入3～5mL BufferA缓冲体系混匀；②加入250-500μL的10mg/mL EDC进行活化反应，水浴震荡10～30min；③采用BufferB缓冲体系对3～5mg抗体稀释，待抗体稀释4～6倍后滴加至步骤②获得的胶乳液中，并震荡偶联反应2～3h，使微球表面的疏水位点能更好的与IGF-1抗体以共价键形式紧密结合；④加入封闭液封闭20～60min，从而封闭微球表面的多余疏水位点使反应终止，进而减少非特异性反应，把IGF-1抗体与120nm空白羧基微球偶联形IGF-1抗体胶乳微球；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀。
此处，胶乳微球标记IGF-1抗体采用120nm空白羧基微球标记，具有放大反应信号、信号受背景干扰小、检测灵敏度高、结果重复性好的优点。
同时，本发明中IGF-1抗体胶乳微球标记物还经过多个预处理，即上述的BufferA缓冲体系处理、EDC活化以及BufferB缓冲体系处理等步骤过程。预处理过程的设计可有效提高本发明试剂盒的灵敏度。
另外，本发明在采用离心法制得沉淀后，以超声重悬方式去除游离的抗体，可使试剂R2中的抗体微球更加均一，从而提高检测结果的准确度。
作为本发明的优选方式之一，所述BufferA缓冲体系包括10～100mmol/LMES和0.04％-0.4％Tween 20，pH 5.0～6.0。BufferB缓冲体系包括10～100mmol/LMES和0.04％-0.4％Tween 20，pH 6.0～7.5。其中，Tween 20能够提高EDC活化效率，进而促进微球与抗体的偶联。
封闭液包括0.1～0.5％稳定成分、0.01～0.05％防腐成分以及一定浓度的硼酸硼砂缓冲液；其中，稳定成分为按照质量比1:2混合的BSA、Casein混合液，可以对未结合抗体的微球表面进行封闭，维持免疫胶乳的稳定，同时也具有终止微球继续发生非特异性反应的作用；防腐成分为Proclin300或叠氮钠，可有效制细菌等繁殖。
作为本发明的优选方式之一，一定浓度的硼酸硼砂缓冲液具体为含50mmol/L硼酸与10mmol/L的硼砂缓冲液，pH 8.0～9.0。
作为本发明的优选方式之一，所述试剂R2中，Tris-HCl缓冲液、BSA与防腐剂构成Buffer C；所述Buffer C中的防腐剂为Proclin300和叠氮钠中的一种或两种，Tris-HCl缓冲液的pH为7.0～8.0；Buffer C能长期保存胶乳微球，效期可达12个月。
一种上述快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
按照试剂R1的组分含量，将各组分于同一容器中混合；混合均匀后，经0.45μm滤膜过滤、37℃老化7天，制得试剂R1；
(2)制备IGF-1抗体胶乳微球
①取120nm的羧基微球1mL，并加入3～5mL BufferA缓冲体系混匀；②加入250-500μL的10mg/mL EDC进行活化反应，恒温37℃水浴震荡10～30min；③将3～5mg IGF-1抗体用Buffer B缓冲体系稀释稀释4～6倍后，滴加至步骤②获得的胶乳液中，并37℃恒温震荡偶联反应2～3h；④加入封闭液，于37℃恒温封闭20～60min；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀，得目标所需的IGF-1抗体胶乳微球；
(3)配制试剂R2
按照试剂R2的组分含量，将Tris-HCl缓冲液、BSA、防腐剂以及步骤(2)制得的IGF-1抗体胶乳微球于同一容器中混合；混合均匀后，37℃老化7天，即得试剂R2。
一种上述快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下具体步骤：
(1)吸取10μL样本，加入250μL试剂R1，37℃孵育5min；
(2)再加入125μL试剂R2进行混合，并使其充分反应；
(3)lmin后读取吸光值Al，3min后读取吸光值A2，计算ΔA；
(4)根据吸光度变化值ΔA计算出样本中IGF-1含量。
作为本发明的优选方式之一，所述步骤(3)中，采用全自动生化分析仪，于主波长450nm处测定吸光值；
作为本发明的优选方式之一，因为IGF-1受年龄、性别等影响较大，所述步骤(4)中，依据定标值，根据ΔA测算样本中IGF-1含量；所述定标方法为：5点定标，采用全自动生化分析仪进行检测，设置校准品浓度分别为：1200ug/L、600ug/L、300ug/L、150ug/L、0ug/L。
本发明相比现有技术的优点在于：
(1)本发明试剂盒检测血清中IGF-1含量，提高了检测灵敏度；并且，可用于全自动生化分析仪，方便且省时节约；同时，在试剂制作上也简单方便，适用于大规模生产；
(2)本发明可在全自动生化分析仪上使用，成本低廉，且自动化高，节省检测时间；在高稳定性和高精密度情况下，相比同类产品具有更高的灵敏度和特异性，提升了IGF-1检测的应用价值；
(3)本发明所提供的检测试剂盒将IGF-1通过免疫比浊法进行检测，准确度偏差≤10％，通过一次加样操作就能检测出样本中IGF-1的含量，简化了操作过程，兼具灵敏性和特异性，快速准确评估相关临床症状。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例的一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，并且，试剂R1为含10g/L促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF-1抗体的胶乳微球溶液。
具体地，试剂R1包括：10mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，9g/L氯化钠，10g/LPEG6000，0.1g/L Proclin300，其溶剂为纯化水。试剂R2包括：5mmol/LIGF-1抗体胶乳微球，10mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，2g/L BSA，0.1～1g/L Proclin300，其溶剂为纯化水。
其中，关于试剂R2中IGF-1抗体胶乳微球的制备：①取120nm的羧基微球1mL，并加入3mL BufferA缓冲体系混匀；②加入250μL的10mg/mL EDC进行活化反应，水浴震荡10min；③采用BufferB缓冲体系对3mg抗体稀释，待抗体稀释4倍后滴加至步骤②获得的胶乳液中，并震荡偶联反应2h，使微球表面的疏水位点能更好的与IGF-1抗体以共价键形式紧密结合；④加入封闭液封闭20min，从而封闭微球表面的多余疏水位点使反应终止，进而减少非特异性反应，把IGF-1抗体与120nm空白羧基微球偶联形IGF-1抗体胶乳微球；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀。
此处，胶乳微球标记IGF-1抗体采用120nm空白羧基微球标记，具有放大反应信号、信号受背景干扰小、检测灵敏度高、结果重复性好的优点。
同时，本实施例中IGF-1抗体胶乳微球标记物经过多个预处理，即上述的BufferA缓冲体系处理、EDC活化以及BufferB缓冲体系处理等步骤过程。预处理过程的设计可有效提高本发明试剂盒的灵敏度。
另外，本发明在采用离心法制得沉淀后，以超声重悬方式去除游离的抗体，可使试剂R2中的抗体微球更加均一，从而提高检测结果的准确度。
进一步地，本实施例中，Buffer A缓冲体系包括10mmol/L MES和0.04％Tween 20，pH 5.0～6.0。Buffer B缓冲体系包括10mmol/L MES和0.04％Tween 20，pH 6.0～7.5。其中，Tween 20能够提高EDC活化效率，进而促进微球与抗体的偶联。
封闭液包括0.1％稳定成分、0.01％防腐成分以及硼酸硼砂缓冲液(含50mmol/L硼酸与10mmol/L的硼砂缓冲液，pH 8.0～9.0)。其中，稳定成分为按照质量比1:2混合的BSA、Casein混合液，可以对未结合抗体的微球表面进行封闭，维持免疫胶乳的稳定，同时也具有终止微球继续发生非特异性反应的作用；防腐成分为Proclin300或叠氮钠，可有效制细菌等繁殖。
实施例2
本实施例的一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，并且，试剂R1为含50g/L促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF-1抗体的胶乳微球溶液。
具体地，试剂R1包括：100mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，135g/L氯化钠，50g/LPEG6000，1g/L叠氮钠，其溶剂为纯化水。试剂R2包括：10mmol/LIGF-1抗体胶乳微球，100mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，5g/L BSA，1g/L叠氮钠，其溶剂为纯化水。
其中，关于试剂R2中IGF-1抗体胶乳微球的制备：①取120nm的羧基微球1mL，并加入5mL BufferA缓冲体系混匀；②加入500μL的10mg/mL EDC进行活化反应，水浴震荡30min；③采用BufferB缓冲体系对5mg抗体稀释，待抗体稀释6倍后滴加至步骤②获得的胶乳液中，并震荡偶联反应3h，使微球表面的疏水位点能更好的与IGF-1抗体以共价键形式紧密结合；④加入封闭液封闭60min，从而封闭微球表面的多余疏水位点使反应终止，进而减少非特异性反应，把IGF-1抗体与120nm空白羧基微球偶联形IGF-1抗体胶乳微球；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀。
此处，胶乳微球标记IGF-1抗体采用120nm空白羧基微球标记，具有放大反应信号、信号受背景干扰小、检测灵敏度高、结果重复性好的优点。
同时，本实施例中IGF-1抗体胶乳微球标记物经过多个预处理，即上述的BufferA缓冲体系处理、EDC活化以及BufferB缓冲体系处理等步骤过程。预处理过程的设计可有效提高本发明试剂盒的灵敏度。
另外，本发明在采用离心法制得沉淀后，以超声重悬方式去除游离的抗体，可使试剂R2中的抗体微球更加均一，从而提高检测结果的准确度。
进一步地，本实施例中，BufferA缓冲体系包括100mmol/L MES和0.4％Tween 20，pH 5.0～6.0。BufferB缓冲体系包括100mmol/L MES和0.4％Tween 20，pH 6.0～7.5。其中，Tween 20能够提高EDC活化效率，进而促进微球与抗体的偶联。
封闭液包括0.5％稳定成分、0.05％防腐成分以及硼酸硼砂缓冲液(含50mmol/L硼酸与10mmol/L的硼砂缓冲液，pH 8.0～9.0)。其中，稳定成分为按照质量比1:2混合的BSA、Casein混合液，可以对未结合抗体的微球表面进行封闭，维持免疫胶乳的稳定，同时也具有终止微球继续发生非特异性反应的作用；防腐成分为Proclin300或叠氮钠，可有效制细菌等繁殖。
实施例3
本实施例的一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，并且，试剂R1为含20g/L促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF-1抗体的胶乳微球溶液。
具体地，试剂R1包括：50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，90g/L氯化钠，20g/L PEG6000，0.5g/L Proclin300，其溶剂为纯化水。试剂R2包括：8mmol/L IGF-1抗体胶乳微球，50mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0～8.0)，4g/L BSA，0.5g/L Proclin300，其溶剂为纯化水。
其中，关于试剂R2中IGF-1抗体胶乳微球的制备：①取120nm的羧基微球1mL，并加入4mL BufferA缓冲体系混匀；②加入350μL的10mg/mL EDC进行活化反应，水浴震荡20min；③采用BufferB缓冲体系对4mg抗体稀释，待抗体稀释5倍后滴加至步骤②获得的胶乳液中，并震荡偶联反应2.5h，使微球表面的疏水位点能更好的与IGF-1抗体以共价键形式紧密结合；④加入封闭液封闭40min，从而封闭微球表面的多余疏水位点使反应终止，进而减少非特异性反应，把IGF-1抗体与120nm空白羧基微球偶联形IGF-1抗体胶乳微球；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀。
此处，胶乳微球标记IGF-1抗体采用120nm空白羧基微球标记，具有放大反应信号、信号受背景干扰小、检测灵敏度高、结果重复性好的优点。
同时，本实施例中IGF-1抗体胶乳微球标记物经过多个预处理，即上述的BufferA缓冲体系处理、EDC活化以及BufferB缓冲体系处理等步骤过程。预处理过程的设计可有效提高本发明试剂盒的灵敏度。
另外，本发明在采用离心法制得沉淀后，以超声重悬方式去除游离的抗体，可使试剂R2中的抗体微球更加均一，从而提高检测结果的准确度。
进一步地，本实施例中，BufferA缓冲体系包括50mmol/L MES和0.2％Tween 20，pH5.0～6.0。BufferB缓冲体系包括50mmol/LMES和0.2％Tween 20，pH 6.0～7.5。其中，Tween20能够提高EDC活化效率，进而促进微球与抗体的偶联。
封闭液包括0.3％稳定成分、0.03％防腐成分以及硼酸硼砂缓冲液(含50mmol/L硼酸与10mmol/L的硼砂缓冲液，pH 8.0～9.0)。其中，稳定成分为按照质量比1:2混合的BSA、Casein混合液，可以对未结合抗体的微球表面进行封闭，维持免疫胶乳的稳定，同时也具有终止微球继续发生非特异性反应的作用；防腐成分为Proclin300或叠氮钠，可有效制细菌等繁殖。
实施例4
本实施例的一种上述实施例中快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
按照试剂R1的组分含量，将各组分于同一容器中混合；混合均匀后，经0.45μm滤膜过滤、37℃老化7天，制得试剂R1；
(2)配制试剂R2
按照试剂R2的组分含量，将Tris-HCl缓冲液、BSA、防腐剂以及制得的IGF-1抗体胶乳微球于同一容器中混合；混合均匀后，37℃老化7天，即得试剂R2。
实施例5
本实施例的一种上述快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的使用方法。
分析方法:两点终点法；
反应方向：上升反应；
校准方式:Logit-Log(4P)；
测定波长:采用全自动生化分析仪，主波长450nm；
测定温度：37℃；
样本:试剂R1：试剂R2＝10:250:125(μL)；
IGFBP-1校准品：
采用0.2％BSATris-HCL缓冲液作为空白样本，空白样本应不含被测物加入质量比为0.1％的叠氮钠以及3％的蔗糖，再加入IGF-1至1200ug/L。
测试步骤：
(1)吸取10μL样本，加入250μL试剂R1，37℃孵育5min；
(2)再加入125μL试剂R2进行混合，并使其充分反应；
(3)lmin后读取吸光值Al，3min后读取吸光值A2，计算ΔA；
(4)根据吸光度变化值ΔA计算出样本中IGF-1含量。
其中，依据定标值，根据ΔA测算样本中IGF-1含量；所述定标方法为：5点定标，采用全自动生化分析仪进行检测，设置校准品浓度分别为：1200ug/L、600ug/L、300ug/L、150ug/L、0ug/L。
实施例6
本实施例用以评价上述IGF-1测定试剂盒的使用效果。
1.线性相关性验证：
利用上述实施例3配方配制试剂，与国家食品药品监督管理总局认可的某上市公司的IGF-1检测试剂盒进行对照检测，检测100份临床血清样本，检测结果如下表1，获得了本发明试剂盒与上市某公司在售在售IGF-1检测试剂盒(基于ELISA法的试剂盒)的相关性曲线；通过检测结果显示，两试剂盒的线性相关系数r>0.990，说明两者具有较大的相关性。
表1本发明试剂盒(测试样品)与某上市公司在售IGF-1检测试剂盒(作为对照)线性相关性比对值
Figure BDA0003375357240000111
Figure BDA0003375357240000121
Figure BDA0003375357240000131
2.线性范围验证：
配制1200ug/L、600ug/L、300ug/L、150ug/L、0ug/L不同浓度IGF-1校准品，使用本发明试剂盒测定各测试品浓度，以稀释浓度为自变量，以测定结果为因变量求出线性回归方程，计算测定结果的相对偏差。测定与计算结果如表2所示，由表2可知，测定结果与稀释浓度之间的线性回归相关系数r>0.990，说明线性关系良好，线性范围可达1200ug/L。
表2本发明试剂盒线性范围验证
Figure BDA0003375357240000132
Figure BDA0003375357240000141
3.准确度验证：
取具有溯源性高值血清质控和低值血清质控各一份，使用本发明试剂盒检测6次，取均值，与质控靶值进行比对。结果如表3所示，表明检测值较靶值相对偏差较小，准确度较高。
表3本发明试剂盒的准确度验证结果统计表
Figure BDA0003375357240000142
4.灵敏度及特异度验证：
采用溶血法来检测筛选50份阳性血清、50份阴性血清，选择市售采用ELISA法测定IGF-1试剂盒与本发明试剂盒同步检测此100份血清样本，再按照各试剂盒判定标准，设不在参考标准内样本为阳性，在参考标准内样本为阴性，以溶血法测定样本为金标准计算各试剂盒的灵敏度和特异度，结果见表4。结果表明，较ELISA法测定IGF-1试剂盒而言，本发明试剂盒保证了灵敏度的同时有更高的特异度。本发明的突出优点是灵敏度高，且与ELISA制备的试剂盒相比，本发明试剂盒具有更高的特异度，大大地提高临床检测的准确性，满足临床检测的需求。
表4本发明试剂盒与市售试剂盒的灵敏度、特异度比较
Figure BDA0003375357240000143
Figure BDA0003375357240000151
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1为含10～50g/L促凝剂的缓冲溶液，试剂R2为固定化IGF-1抗体的胶乳微球溶液；其中，试剂R2的具体成分为：5～10mmol/L IGF-1抗体胶乳微球，10～100mmol/LTris-HCl缓冲液，2～5g/L BSA，0.1～1g/L防腐剂。
2.根据权利要求1所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的具体成分为：10～100mmol/L、pH 7.0～8.0的Tris-HCl缓冲液，9-135g/L氯化钠，10-50g/L促凝剂，0.1～1g/L防腐剂。
3.根据权利要求2所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，促凝剂为PEG6000，防腐剂为Proclin300和叠氮钠中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，IGF-1抗体胶乳微球的制备方法为：①取120nm的羧基微球1mL，并加入3～5mL Buffer A缓冲体系混匀；②加入250-500μL的10mg/mL EDC进行活化反应，水浴震荡10～30min；③采用BufferB缓冲体系对3～5mg抗体稀释，待抗体稀释4～6倍后滴加至步骤②获得的胶乳液中，并震荡偶联反应2～3h；④加入封闭液封闭20～60min；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀。
5.根据权利要求4所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述BufferA缓冲体系包括10～100mmol/L MES和0.04％-0.4％Tween 20，pH 5.0～6.0；
Buffer B缓冲体系包括10～100mmol/L MES和0.04％-0.4％Tween 20，pH 6.0～7.5；
封闭液包括0.1～0.5％稳定成分、0.01～0.05％防腐成分以及一定浓度的硼酸硼砂缓冲液。
6.根据权利要求5所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述封闭液中，稳定成分为按照质量比1:2混合的BSA、Casein混合液；防腐成分为Proclin300或叠氮钠；一定浓度的硼酸硼砂缓冲液为含50mmol/L硼酸与10mmol/L的硼砂缓冲液，pH 8.0～9.0。
7.根据权利要求1所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中，防腐剂为Proclin300和叠氮钠中的一种或两种，Tris-HCl缓冲液的pH为7.0～8.0。
8.一种如权利要求1～7任一所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制试剂R1
按照试剂R1的组分含量，将各组分于同一容器中混合；混合均匀后，经0.45μm滤膜过滤、37℃老化7天，制得试剂R1；
(2)制备IGF-1抗体胶乳微球
①取120nm的羧基微球1mL，并加入3～5mL BufferA缓冲体系混匀；②加入250-500μL的10mg/mL EDC进行活化反应，恒温37℃水浴震荡10～30min；③将3～5mg IGF-1抗体用Buffer B缓冲体系稀释稀释4～6倍后，滴加至步骤②获得的胶乳液中，并37℃恒温震荡偶联反应2～3h；④加入封闭液，于37℃恒温封闭20～60min；⑤离心分离获取胶乳微球，并采用超声的方法将偶联抗体的胶乳微球分散均匀，得目标所需的IGF-1抗体胶乳微球；
(3)配制试剂R2
按照试剂R2的组分含量，将Tris-HCl缓冲液、BSA、防腐剂以及步骤(2)制得的IGF-1抗体胶乳微球于同一容器中混合；混合均匀后，37℃老化7天，即得试剂R2。
9.一种如权利要求1～7任一所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下具体步骤：
(1)吸取10μL样本，加入250μL试剂R1，37℃孵育5min；
(2)再加入125μL试剂R2进行混合，并使其充分反应；
(3)lmin后读取吸光值Al，3min后读取吸光值A2，计算ΔA；
(4)根据吸光度变化值ΔA计算出样本中IGF-1含量。
10.根据权利要求9所述的快速测定IGF-1的胶乳增强免疫比浊法测定试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)中，采用全自动生化分析仪，于主波长450nm处测定吸光值；所述步骤(4)中，依据定标值，根据ΔA测算样本中IGF-1含量；所述定标方法为：5点定标，采用全自动生化分析仪进行检测，设置校准品浓度分别为：1200ug/L、600ug/L、300ug/L、150ug/L、0ug/L。
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