CN114134086A - 一株暹罗芽孢杆菌yw17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物防治技术领域，特别是涉及一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用。所述菌株的保藏编号为CGMCC No.23121。本发明提供的YW17菌株能产生抗菌蛋白，不仅对引起土传病害的尖孢镰刀菌有抑制作用，抑菌率达到49.7％，具有环保、高效和安全的优势。进一步的，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，促进植物生长。

Description

一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/ 或促进植物生长中的应用

技术领域

本发明涉及微生物防治技术领域，特别是涉及一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治中和/或促进植物生长的应用。

背景技术

人参是我国传统名贵中药材，随着野生资源的匮乏，栽培人参已成为市场的主流，规模化种植是目前人参原料生产的主体。为解决生态保护和药材生产的供需矛盾，缓解参地需求压力，人参栽培已从伐林栽参转为农田栽参。

一般农田栽参面临养分低、有益微生物少等问题，如何重建土壤微生态系统，促进微生物群落正向演替，防治土传病害，是农田栽参亟待解决的科学和技术问题。土传真菌存在广泛，寄主植物范围广，导致防治土传病原真菌引起的植物病害困难重重。传统上的土壤灭菌和应用合成杀菌剂，因药物的毒性与残留，易引起环境污染，且易导致病原菌抗药性持续增加，影响土壤微生态平衡和土壤肥力。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用。本发提供的暹罗芽孢杆菌YW17菌株不仅能防治土传病害，而且不会对环境造成污染，具有环保、高效和安全的优势。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)YW17菌株，保藏编号为CGMCCNo.23121。

优选的，所述菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明提供了一种生防菌剂，所述生防菌剂包括上述的暹罗芽孢杆菌YW17菌株。

优选的，每g或每mL所述生防菌剂中的活菌数≥1×10⁸CFU。

本发明还提供了上述生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：

将上述的菌株接种于LB培养基中，培养40～60h，得到所述的生防菌剂。

优选的，所述培养的温度为28～37℃。

本发明还提供了上述的菌株或上述的生防菌剂或利用上述制备方法制备得到的生防菌剂在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用。

优选的，所述土传病害包括与尖孢镰刀菌相关的土传病害。

优选的，所述植物包括人参。

本发明还提供了一种防治土传病害和/或促进植物生长的方法，包括将生防菌剂施入植物生长区域，所述生防菌剂包括上述的生防菌剂或利用上述制备方法制备得到的生防菌剂；每平方米植物生长区域施入生防菌剂的活菌数为10⁷～10⁹CFU数量级。

有益效果：

本发明提供了一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)YW17菌株，所述YW17菌株能产生抗菌蛋白，不仅对引起土传病害的尖孢镰刀菌有抑制作用(实施例中抑菌率达到49.7％)，具有环保、高效和安全的优势。

进一步的，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，促进植物生长。

生物保藏说明

暹罗芽孢杆菌YW17菌株，拉丁名为Bacillus siamensis，于2021年08月05日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO.23121。

附图说明

图1为部分菌株对尖孢镰刀菌的抑菌效果图；

图2为YW17菌株对尖孢镰刀菌的抑菌效果图；

图3为YW17菌株的系统进化树；

图4为不同提取的抑菌活性物质对尖孢镰刀菌的抑菌效果图；

图5为空白对照组对尖孢镰刀菌的抑菌效果图；

图6为采用硫酸铵沉淀提取的抗菌蛋白对尖孢镰刀菌的抑菌效果图；

图7为空白对照组和采用硫酸铵沉淀提取的抗菌蛋白对尖孢镰刀菌的抑菌直径柱状图；

图8为YW17菌株产IAA浓度含量柱状图。

图9为各处理地上部分地下部分生物学性状堆积柱状图。

图10为各处理植株生长状况图。

具体实施方式

本发明提供了一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)YW17菌株，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.23121。

本发明所述YW17菌株优选具有以下性质：

(1)在LB培养基上培养，3～15h处于对数生长期，18h后进入稳定期；

(2)菌落呈圆形，乳白色，边缘不规则，表面褶皱边缘翘起，中间内陷，不透明，干燥；

(3)液体静止培养时能够形成生物膜；

(4)经革兰氏染色后呈紫色，为革兰氏阳性菌，呈杆状；

(5)YW17菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示：ATACTGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGAGCCAGCCG。

本发明提供的YW17菌株能产生抗菌蛋白，不仅对引起土传病害的尖孢镰刀菌有抑制作用，抑菌率达到49.7％，而且不会对环境造成污染，具有环保、高效和安全的优势；另外，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，促进植物生长。

本发明还提供了一种生防菌剂，所述生防菌剂包括上述的菌株。

在本发明中，每g或每mL所述生防菌剂中的活菌数优选为≥1×10⁸CFU。

本发明还提供了上述生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：

将上述的菌株接种于LB培养基中，培养40～60h，得到所述的生防菌剂。

如无特殊说明，本发明对所述LB培养基的各组分来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。

在本发明中，所述培养的温度优选为28～37℃，进一步优选为29～33℃，更优选为30℃；所述培养的时间优选为45～50h，更优选为48h。

本发明还提供了上述的生防菌剂或上述制备方法制备得到的生防菌剂在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用。在本发明中，所述土传病害优选包括与尖孢镰刀菌相关的土传病害；所述植物优选包括人参。本发明提供的YW17菌株能产生抗菌蛋白，对引起土传病害的尖孢镰刀菌等病原菌的抑菌率达到49.7％，对与尖孢镰刀菌相关的土传病害有显著的防治作用；另外，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，促进植物生长。

本发明还提供了一种防治土传病害和/或促进植物生长的方法，包括将生防菌剂施入植物生长区域，所述生防菌剂包括上述的生防菌剂或利用上述制备方法制备得到的生防菌剂；每平方米植物生长区域施入生防菌剂的活菌数为10⁷～10⁹CFU数量级。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

暹罗芽孢杆菌YW17的分离

分离培养基配方为：胰蛋白胨10g/L、NaCl 10g/L和酵母浸粉5g/L；调节pH7.0后高温高压灭菌，得到分离培养基。

将樟子松林地(敦化市秋梨沟镇松树林(128°07′E，43°27′N))根际土壤按10^-1至10^-6浓度梯度稀释，取50μL不同浓度的土壤稀释液80℃水浴加热30min(杀死大部分非芽孢杆菌)，然后均匀的涂布在LB培养基上，每一稀释度重复三次，于30℃倒置培养48h后观察平板上的菌株生长情况，菌落形态和颜色。挑取单菌落于LB培养基上进一步划线纯化，得到44株不同的芽孢杆菌。

实施例2

芽孢杆菌与尖孢镰刀菌对峙效果

以根腐病病原菌尖孢镰刀菌(菌株登录号：LC656545，https://www.ddbj.nig.ac.jp/index-e.html)为靶标菌，将1×10⁶孢子数/mL的孢子悬液涂于PDA平板，28℃培养7d；再用5mm打孔器在培养7d的PDA平板边缘打菌块，放在一个新的PDA平板中心；将实施例1分离到的不同芽孢杆菌于LB平板活化后，用牙签挑取菌种点接在据平板中央3cm处的4个角点上，观察抑菌圈的大小(部分菌株的抑菌效果见图1)，抑菌效果最好的记为YW17，抑菌率为49.7％(见图2)。

实施例3

暹罗芽孢杆菌YW17生物学鉴定

以菌株YW17基因组DNA为模板，扩增16S rDNA(16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示)后进行测序，具体的扩增方法为：纯化好的单菌落平板用移液枪刮取直径2mm菌落5个，至含100μl超纯水的1.5mL离心管中，吸打混匀；95℃金属浴加热处理15min，立即放入-20℃冰箱冷冻处理2min，随后14000rpm离心3min，所得上清液即为模板，用于PCR扩增；扩增引物为细菌通用引物27F(序列如SEQ ID NO：2所示：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)和1492R(序列如SEQ IDNO：3所示：GGTTACCTTGTTACGACTT)；扩增体系为：25μLPCR的反应体系，2.5μL 10×PCRBuffer，2μL dNTP’s，1.5μLMgCl₂，0.5μL的正反引物，0.2μLtaq聚合酶，17.8μL H₂O和DNA模板1μL；PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，循环30次；72℃再延伸10min。PCR产物使用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测是否成功扩增；序列经Ezbiocloud数据库比对，结果表明菌株YW17与暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)的近缘种相似率达99.2％，利用MEGA7.0软件构建系统进化树(见图3)，发现其与暹罗芽孢杆菌聚类到一起，据此定名为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)，菌株编号YW17。

实施例4

暹罗芽孢杆菌YW17产抗菌蛋白能力

采用三种不同的方法提取抑菌活性物质：硫酸铵沉淀主要用来提取蛋白类抗菌物质，酸沉淀法主要用于脂肽类抗菌物质的提取，有机溶剂萃取法主要用于小分子类抗菌物质的提取；

将暹罗芽孢杆菌YW17挑单菌落于LB培养基过夜培养制作成种子液，将活菌数为10⁸CFU/mL的种子液按1％比例(V/V)接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃，200rpm振荡培养3d，取上清液后用不同方法提取；蛋白类抗菌物质用60％硫酸铵过夜沉淀后，溶于中性PBS缓冲液；酯肽类抗菌物质用盐酸沉淀后，再用甲醇抽提浓缩；小分子抗菌物质用乙酸乙酯萃取后浓缩；

采用平板扩散法对不同提取物质进行验证。具体步骤是：将2mL 10⁷CFU/mL尖孢镰刀菌孢子悬浮液加入融化冷却到60℃的200mLPDA培养基中，混匀倒板；待培养基凝固后在平板打孔6mm，每孔加入100μL不同的无菌发酵提取液(硫酸铵沉淀提取液、酸沉淀法提取液和乙酸乙酯萃取液，以无菌培养基作为CK)；28℃培养36h后观察抑菌情况，实验结果见图4和表1。

表1不同提取的抑菌活性物质对尖孢镰刀菌的抑菌效果

由图4和表1可知，暹罗芽孢杆菌YW17主要分泌抗菌蛋白，从而抑制了尖孢镰刀菌孢子的萌发。

实施例5

进一步采用平板扩散法对硫酸铵沉淀物质进行验证，具体过程参见实施例4，实验结果见图5～图7。

由图5～图7可知，实施例4采用硫酸铵沉淀提取的抗菌蛋白的抑菌直径为18.88mm。

实施例6

暹罗芽孢杆菌YW17促生功能

本发明利用Salkowski比色法评定暹罗芽孢杆菌YW17的产IAA(吲哚乙酸)能力，评测菌株潜在的促生能力。

将活菌数为10⁸CFU/mL的暹罗芽孢杆菌YW17种子液按1％比例(V/V)接种入加入含色氨酸(100mg·mL^-1)的LB液体培养基中，设置三次重复，对照组为同体积的无菌水加入色氨酸LB液体培养基；30℃、180rpm振荡培养48h；培养后将菌悬液10000rpm离心10min，取1mL上清液加入2mL Salkowski比色液，避光静置反应35min，测OD₅₃₀，并测相应菌悬液OD₆₀₀。

标准曲线的绘制采用分析纯的IAA梯度稀释制备；标准曲线y＝0.0293x-0.0037，R2＝0.9963利用吸光值线性公式换算YW17菌株产IAA浓度含量为11.9807μg/mL(见图8)。

由图8和计算结果可知，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，即YW17菌株能促进植物生长。

实施例7

暹罗芽孢杆菌YW17人参根际接种实验

暹罗芽孢杆菌YW17发酵液的制备方法：将YW17制备种子液后，将活菌数为10⁸CFU/mL的暹罗芽孢杆菌YW17种子液按1％比例(V/V)接种于LB液体培养基中，30℃、180rpm培养48h发酵，浓度为10⁸CFU/mL。

尖孢镰刀菌孢子液的制备方法：无菌接种环挑取试管斜面保存的尖孢镰刀菌株于PDA平板上活化，28℃静置培养7d，然后取5个直径5mm大小的菌块接种于200mLPDB培养基中，28℃，180rpm，摇床培养5d，用纱布过滤得到孢子液，用血球计数板计算孢子数。

采用三年生人参苗进行盆栽试验，实验共设置4个处理，每个处理3个重复，分别如下：CK(不接菌)、F(尖孢镰刀菌孢子液)、S(暹罗芽孢杆菌YW17)、F+S(尖孢镰刀菌孢子液+YW17)。

将三年生人参苗移栽至装有1.5kg土壤的花盆中，花盆装土后上部面积为0.028m²，移栽一周后在需要接种拮抗细菌的人参苗根部浇灌YW17菌液0.1mL,用水稀释100倍，即稀释至10ml浇灌(接种比率为3.57×10⁸CFU/m²土)；在需要接种尖孢镰刀菌的人参苗根部浇灌孢子液(保证接种时土壤中病原菌的浓度为3.57×10⁸CFU/m²土)。连续培养3个月，进行植株生物学性状解析，结果见图9、图10和表2。

表2不同处理组人参地上和地下长度(单位：cm)

组别	CK	F	S	F+S
					地上	34.27±3.44	26.34±2.764	39.334±1.53	36.17±2.57
地下	16.2±0.30	10.83±2.42	17.0±1.0	16.337±3.79

由图9、图10和表2可知，接种暹罗芽孢杆菌YW17的处理可以显著抑制尖孢镰刀菌引起的根腐病害，且该处理的总长显著高于其它处理。

实施例8

田间实验

一、菌剂制作

1、将单菌落接种至50mL LB培养基中，200rpm振荡30℃培养24h得到一级种子液，取5mL接种入500mLLB培养基中，200rpm振荡30℃培养24h得到二级种子液；

2、将500mL菌液接种入20L微生物培养罐中(内含14LLB培养基)，通气量290L/h，搅拌速度200rpm/min，温度30℃，溶氧量98％，培养时间48h，芽孢形成率达90％以上，发酵完毕得到菌液；菌液活菌数为5.7×10⁸CFU/mL。

二、微生物菌剂大田试验的应用

1、供试菌液：上述制备的活菌数为5.7×10⁸CFU/mL的菌液，使用前用水稀释100倍；

2、供试作物与防治对象：三年生人参，防治对象：人参根腐病；

3、试验地点：黑龙江省牡丹江市人参种植区；

4、大田试验

①试验设计及安排

小区设置:宽1.5m，长2m；

处理：

1)空白对照(等体积未接菌的培养基稀释100倍后，取500mL)；

2)微生物稀释菌液500mL；

3)微生物稀释菌液5L；

重复：3次；

共计9个小区，随机排列，施用方式为灌根。

②试验调查及计算方法

由于根腐病发生于7～8月高温高湿季节，于8月中旬调查每组发病率。

每组分别统计人参总数和发病棵数，计算发病率，生防率和产量，具体公式如下:

发病率＝发病棵数/总数×100％；

生防率＝(对照组发病率-试验组发病率)/对照组发病率×100％。

③试验结果

本发明制备的微生物菌剂不同施加量对人参根腐病的发病率与生防率的影响结果如下表3。

表3不同施用量的菌剂对人参根腐病的防治效果

处理组	总数	发病数	发病率	生防率
					空白对照	101	9	8.91％	0
接菌处理(500mL)	97	3	3.09％	65.3％
					接菌处理(5L)	99	2	2.02％	77.3％

由表3可知，利用本发明提供的YW17菌株制备的微生物菌剂对人参根腐病有较好的防治效果，随着施用量的增加，效果更为显著。

综上所述，本发明提供的YW17菌株能产生抗菌蛋白，不仅对引起土传病害的尖孢镰刀菌有抑制作用，而且不会对环境造成污染，具有环保、高效和安全的优势；另外，本发明提供的YW17菌株能分泌吲哚乙酸，促进植物生长。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

序列表

<110> 东北林业大学

<120> 一株暹罗芽孢杆菌YW17菌株、生防菌剂及在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1419

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atactgcagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga tgttagcggc ggacgggtga 60

gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc cgggaaaccg gggctaatac 120

cggatggttg tctgaaccgc atggttcaga cataaaaggt ggcttcggct accacttaca 180

gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg cgacgatgcg 240

tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg 300

ggaggcagca gtagggaatc ttccgcaatg gacgaaagtc tgacggagca acgccgcgtg 360

agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg gaagaacaag tgccgttcaa 420

atagggcggc accttgacgg tacctaacca gaaagccacg gctaactacg tgccagcagc 480

cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag ggctcgcagg 540

cggtttctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg gggagggtca ttggaaactg 600

gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg tagcggtgaa atgcgtagag 660

atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct gtaactgacg ctgaggagcg 720

aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg 780

ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta acgcattaag cactccgcct 840

ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg 900

gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcga agaaccttac caggtcttga catcctctga 960

caatcctaga gataggacgt ccccttcggg ggcagagtga caggtggtgc atggttgtcg 1020

tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgatcttag 1080

ttgccagcat tcagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg 1140

ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggaca 1200

gaacaaaggg cagcgaaacc gcgaggttaa gccaatccca caaatctgtt ctcagttcgg 1260

atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagc tggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg 1320

ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta 1380

acacccgaag tcggtgaggt aacctttatg agccagccg 1419

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (10)

1.一株暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)YW17菌株，保藏编号为CGMCC No.23121。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株的16S rDNA的核苷酸序列如SEQID NO：1所示。

3.一种生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂包括权利要求1或2所述的暹罗芽孢杆菌YW17菌株。

4.根据权利要求3所述的生防菌剂，其特征在于，每g或每mL所述生防菌剂中的活菌数≥1×10⁸CFU。

5.权利要求3或4所述生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求1或2所述的菌株接种于LB培养基中，培养40～60h，得到所述的生防菌剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述培养的温度为28～37℃。

7.权利要求1或2所述的菌株或权利要求3或4所述的生防菌剂或利用权利要求5或6所述制备方法制备得到的生防菌剂在土传病害防治和/或促进植物生长中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述土传病害包括与尖孢镰刀菌相关的土传病害。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述植物包括人参。

10.一种防治土传病害和/或促进植物生长的方法，其特征在于，包括将生防菌剂施入植物生长区域，所述生防菌剂包括权利要求3或4所述的生防菌剂或利用权利要求5或6所述制备方法制备得到的生防菌剂；每平方米植物生长区域施入生防菌剂的活菌数为10⁷～10⁹CFU数量级。

Images