CN114129711B - 度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114129711B CN114129711B CN202010915434.XA CN202010915434A CN114129711B CN 114129711 B CN114129711 B CN 114129711B CN 202010915434 A CN202010915434 A CN 202010915434A CN 114129711 B CN114129711 B CN 114129711B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- duloxetine
- mice
- dolapride
- immune activation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title abstract description 3
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 83
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 claims abstract description 54
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 40
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 20
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 19
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 17
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 14
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- ZEUITGRIYCTCEM-KRWDZBQOSA-N (S)-duloxetine Chemical compound C1([C@@H](OC=2C3=CC=CC=C3C=CC=2)CCNC)=CC=CS1 ZEUITGRIYCTCEM-KRWDZBQOSA-N 0.000 abstract description 99
- 229960002866 duloxetine Drugs 0.000 abstract description 99
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 69
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 38
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 34
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 26
- 238000011398 antitumor immunotherapy Methods 0.000 abstract description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 10
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 9
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 39
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 29
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 28
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 17
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 17
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 17
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 11
- 230000001019 normoglycemic effect Effects 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 9
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 7
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 6
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 6
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 6
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 6
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 6
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 6
- 230000001610 euglycemic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 5
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 101001044384 Mus musculus Interferon gamma Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical compound CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 1
- 201000001880 Sexual dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036186 satiety Effects 0.000 description 1
- 235000019627 satiety Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000872 sexual dysfunction Toxicity 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/26—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及肿瘤治疗领域，具体涉及度拉糖肽在制备抗肿瘤药物上的用途。本发明公开了度拉糖肽在免疫活化方面的效应，以及在抗肿瘤免疫活化方面的效应；还公开了度拉糖肽在抗肿瘤免疫治疗方面的作用。本发明的结果显示度拉糖肽能显著刺激免疫细胞增殖，其可以显著刺激干扰素γ(IFN‑γ)的释放；在多个体内动物荷瘤模型上度拉糖肽可以显著抑制肿瘤生长、显著延长荷瘤小鼠的生存期；度拉糖肽可以显著延长转移复发性肿瘤术后小鼠的生存期，由于度拉糖肽本身是上市药物、其安全性是得到基本保证的。总之，度拉糖肽可以用于制备抗肿瘤药物。
Description
技术领域
本发明涉及肿瘤治疗领域，具体来说是指度拉糖肽的免疫活化作用和抗肿瘤用途。
背景技术
肿瘤是威胁人类健康的重大疾病。传统的手术、放疗、化疗等方案在一定程度上抑制了肿瘤的进展，但难以控制肿瘤的复发、转移。随着不断出现的令人振奋的临床研究结果，抗肿瘤免疫治疗给肿瘤患者带来了希望。免疫系统具有识别并清除异己的能力，肿瘤在发生发展过程中不仅通过多种途径抑制免疫系统的先天性免疫反应，也通过限制自身“新”抗原的“展示”和启动免疫检查点等诸多方法来“麻痹”浸润的免疫效应细胞，从而达到逃避免疫识别和免疫清除的目的。如何有效的活化抗肿瘤免疫反应，解除免疫逃避，从而达到免疫清除的效果，一直是肿瘤免疫治疗领域所追求的目标。
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是人体内分泌的一种内源性多肽，它是胰高血糖素原基因经组织特异性的翻译后加工得到的30个氨基酸的肽类激素。GLP-1通过与其受体GLP-1R结合，刺激胰岛素分泌，起到降低血糖的作用。GLP-1还可以通过多种途径产生降低体重的效果，包括抑制胃肠道蠕动和胃液分泌、抑制食欲及摄食、延缓胃内容物排空等等。除此之外，GLP-1还可作用于中枢神经系统(尤其是下丘脑)，从而使人产生饱胀感并降低食欲。GLP-1还具有许多生理功能，比如降脂、降压、保护心血管系统，再比如通过作用于中枢增强学习和记忆功能、保护神经等等。目前为止，并未出现其具有免疫活化或者具有抗肿瘤免疫活化的报道。
GLP-1的半衰期极短，仅有1.5～2分钟，无法在临床上用于糖尿病和其他病症的治疗。因此，目前制药领域都是在尝试研发半衰期长的胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的人工合成激动剂，期望延长半衰期、又具有GLP-1类似的活性和功能。
度拉糖肽(度易达)是一种新型的胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂。它是礼来公司研制的一种胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)的人工合成激动剂。
目前为止还没有度拉糖肽用于肿瘤治疗或者抗肿瘤的报道，也没有其具有免疫活化或者抗肿瘤免疫活化的数据或者结果的报道。我们在筛选具有免疫活化功能的上市多肽类药物时发现其具有令人意想不到的功能——免疫活化作用，因此，我们尝试将其应用于抗肿瘤免疫活化和抗肿瘤免疫治疗。
发明内容
本发明的目的是通过体外研究揭示度拉糖肽的免疫活化活性及其在制备活化抗肿瘤免疫药物上的应用；通过多个体内动物模型，确认度拉糖肽的免疫活化作用及其在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的应用。
本发明在体外确认了度拉糖肽在制备免疫活化药物上的应用。进一步，本发明在多个体内模型上确认了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫活化药物上的应用，在体内确认了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的应用。同时，也确认了度拉糖肽的基本安全性。
本发明内容概括如下：
(1)度拉糖肽在体外显著刺激免疫细胞增殖，显著刺激干扰素γ(IFN-γ)的释放，具有明确的免疫活化作用，揭示了度拉糖肽在制备免疫活化药物上的应用。
(2)度拉糖肽在体内显著刺激干扰素γ(IFN-γ)的释放，具有明确的免疫活化作用，揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫活化药物上的应用。
(3)度拉糖肽在体内显著抑制肿瘤生长，显著延长荷瘤小鼠的生存期，具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用，揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的应用。
(4)度拉糖肽在多个体内动物肿瘤模型上显著抑制肿瘤生长、显著延长荷瘤小鼠的生存期，这些肿瘤包括：乳腺癌、结肠癌和黑色素瘤，具有广泛的作用范围，具有明确的广谱抗肿瘤免疫治疗作用，揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的广泛应用价值。
(5)度拉糖肽在体内具有明确的抑制或者延缓转移复发，以及延长肿瘤术后生存期的作用。
(6)而且，非常重要的一点是，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
总的来说，度拉糖肽可以用来制备刺激免疫细胞增殖药物，度拉糖肽可以用来制备增强干扰素γ(IFN-γ)表达药物，度拉糖肽可以用来制备免疫活化药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤免疫活化药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤免疫治疗药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤药物。度拉糖肽可以用来制备抑制或者延缓转移复发以及延长肿瘤术后生存期药物。而且，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
附图说明
图1度拉糖肽对外周血单核细胞(PBMC)的增殖刺激作用
图2度拉糖肽对外周血单核细胞(PBMC)分泌IFN-γ的刺激作用
图3小鼠黑色素瘤模型上度拉糖肽的抗肿瘤免疫治疗效果(A)Elispot结果(B)不同处理之后肿瘤体积随着时间的变化情况(C)不同处理组小鼠的生存期变化
图4小鼠乳腺癌模型上度拉糖肽的抗肿瘤免疫治疗效果(A)Elispot结果(B)不同处理之后肿瘤体积随着时间的变化情况(C)不同处理组小鼠的生存期变化
图5小鼠结肠癌模型上度拉糖肽的抗肿瘤免疫治疗效果(A)Elispot结果(B)不同处理之后肿瘤体积随着时间的变化情况(C)不同处理组小鼠的生存期变化
图6小鼠转移复发性乳腺癌模型上术后不同处理组小鼠的生存期变化
具体实施方式
实施例1在外周血单核细胞上检测多肽药物的免疫活化功能
一、实验方法
1、筛选对象的确定
我们利用DrugBank数据库检索多肽药物，排除FDA批准的用于感染性疾病治疗、血液系统疾病治疗、肿瘤治疗和免疫调节的多肽，留下的这些多肽所获批的功能与肿瘤治疗和免疫调控是没有关系的。功能集中为治疗激素失调、治疗性功能障碍、治疗糖尿病、治疗胃肠消化道疾病、治疗遗传性疾病、治疗心血管疾病、治愈骨病、治疗神经系统疾病、治疗呼吸紊乱、治疗眼障碍治疗吸收不良症。这当中包括用于糖尿病治疗的多肽药物。另外，也检索了中国上市的特有的用于糖尿病治疗的多肽药物。在汇总FDA和中国SFDA批准的用于糖尿病治疗的多肽药物之后，我们通过各种途径购买获得这些多肽用于本发明的体内外活性检测和确认。我们首先在外周血单核细胞上筛选这批多肽的免疫活化功能，筛选发现其中一种糖尿病治疗多肽——度拉糖肽具有较强的免疫活化功能。度拉糖肽由礼来制药公司出品(Eli Lilly Italia S.p.A.)，我们购自南京医药门市(生产批号：D096286)，直接按照剂量使用或者PBS稀释使用。
2、度拉糖肽对外周血单核细胞(PBMC)的增殖刺激作用的检测
无菌条件下取健康志愿者的外周血,利用肝素抗凝,然后使用淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞(PBMC),细胞重悬在含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养基当中，调整PBMC细胞浓度为3×105/ml,将PBMC接种到96孔细胞板,每孔200μl,加入度拉糖肽至终浓度为1μmol/L,用PBS作为对照，37℃5％的CO2条件下培养72h。72h之后用碧云天的增强型CCK-8试剂盒(货号C0042)检测细胞的增殖情况。
3、度拉糖肽对外周血单核细胞(PBMC)的IFN-γ刺激分泌的检测
无菌条件下取健康志愿者的外周血,利用肝素抗凝,然后使用淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞(PBMC),细胞重悬在含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养基当中，调整PBMC细胞浓度为3×105/ml,将PBMC接种到96孔细胞板,每孔200μl,加入度拉糖肽至终浓度为1μmol/L,用PBS作为对照，37℃5％的CO2条件下培养72h。72h之后离心取上清液，用Invitrogen的ELISA试剂盒(货号88-7316-76)检测细胞的IFN-γ刺激分泌情况。
二、实验结果
度拉糖肽能够显著刺激外周血单核细胞(PBMC)的增殖。图1的结果显示，PBMC在经过PBS对照和度拉糖肽处理培养72h之后，CCK-8试剂盒检测450nm处的平均吸光值A450分别为0.4598和0.7756，度拉糖肽处理组是PBS对照组的接近1.7倍，而且两组之间有极显著差异(P<0.01),度拉糖肽能够显著刺激PBMC的增殖。这样的初步结果说明度拉糖肽具有一定的免疫活化作用，这一结果也大大出乎我们的预料，这一结果暗示度拉糖肽可能具有用于抗肿瘤或者抗病毒的潜在治疗作用。
度拉糖肽能够显著刺激外周血单核细胞(PBMC)的IFN-γ的分泌。图2的结果显示，PBMC在经过PBS对照和度拉糖肽处理培养72h之后，IFN-γ的ELISA试剂盒检测PBMC细胞胞外清液当中IFN-γ的浓度，结果显示PBS对照和度拉糖肽处理组胞外IFN-γ的浓度分别为74和119pg/ml，两组之间有显著差异(P<0.05)，结果说明度拉糖肽能够显著刺激PBMC分泌IFN-γ。这样的结果既肯定了前面的增殖刺激实验，也能够说明度拉糖肽具有确定的免疫活化作用，这一结果也大大出乎我们的预料，这一结果暗示度拉糖肽具有用于抗肿瘤或者抗病毒的潜在治疗作用。
三、实验小结
本实施例的以上结果非常有趣，第一次检测到度拉糖肽在体外具有明确的免疫活化作用，而且由于细胞选用的是正常健康志愿者的外周血PBMC，所以体外的免疫活化作用并不依赖于PBMC来源者是不是2型糖尿病患者，也就是说度拉糖肽的这一活性和功能并不依赖于其已有的功能、与已有功能无关。在确认其具有明确的免疫活化的基础上，下一步我们将在多个肿瘤模型上检测其抗肿瘤免疫治疗作用，以及在体内动物模型上的免疫活化作用。
实施例2正常小鼠黑色素瘤模型上观察度拉糖肽的治疗效果
一、实验方法
我们选用的是正常健康小鼠C57BL/6，小鼠免疫健全、血糖正常，主要是想在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤(黑色素瘤模型)，然后观察治疗效果和免疫活化作用。由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以如果度拉糖肽有效的话，那么这样的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
选用6-8周龄C57BL/6小鼠，在右侧腋窝建立皮下黑色素瘤模型。每只小鼠一侧接种5×106个B16/F10黑色素瘤细胞，6天左右之后测量肿瘤大小至约200mm3，将小鼠随机分成2组，每组12只，分别是：PBS对照组(100μl PBS)和度拉糖肽皮下注射治疗组(度拉糖肽剂量为500μg/kg，注射体积100μl)，每5天皮下注射1次。度拉糖肽开始处理的当天记为给药的第0天，在给药的第0天度拉糖肽和PBS处理前测量瘤子体积、小鼠称重。按照分组，接种小鼠饲养于清洁级动物房。其中每组当中随机取6只在给药的第7天，取出瘤子，使用Abcam的小鼠Interferon gamma ELISPOT试剂盒(货号：ab64029)对肿瘤组织做ELISpot检测，检测肿瘤组织当中IFN-γ的分泌情况。每组余下的6只，继续跟踪测量肿瘤体积，体重，记录小鼠生存期(生存期起算日为荷瘤之日起)。肿瘤体积公式为V＝0.5×长×宽2。
二、实验结果
在正常小鼠黑色素瘤模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，使用Interferon gamma ELISPOT试剂盒检测IFN-γ的分泌情况，图3A结果显示PBS对照和度拉糖肽处理组IFN-γ的ELISPOT分别为170和438spots/2×105细胞，两组之间有显著差异(P<0.05),与PBS对照组比较，度拉糖肽处理组是对照组的2倍多、能够显著刺激IFN-γ的分泌。这样的结果既充分肯定了前面度拉糖肽体外免疫活化的结果，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的免疫活化作用。
图3B的结果显示，在正常小鼠黑色素瘤模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，注射处理之后的第6天和第9天的结果显示度拉糖肽处理组能够显著性抑制瘤子体积的增长(P<0.05)。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
图3C的结果显示，在正常小鼠黑色素瘤模型上，PBS对照组，在荷瘤之后的第27天就开始出现小鼠死亡，至第34天小鼠全部死亡。而度拉糖肽处理组到第31天才开始出现小鼠死亡，直到第45天小鼠全部死亡。度拉糖肽皮下注射可以显著性的延长黑色素瘤荷瘤小鼠的生存期。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，与显著抑制肿瘤生长的结果也是一致的，能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
三、实验小结
正常小鼠黑色素瘤模型的体内结果显示度拉糖肽具有明确的免疫活化作用和抗肿瘤免疫治疗作用，度拉糖肽的抗肿瘤作用是通过活化免疫来实现的，即度拉糖肽具有显著的活化抗肿瘤免疫的作用。而且，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
实施例3正常小鼠乳腺癌模型上观察度拉糖肽皮下注射的治疗效果
一、实验方法
我们选用的是正常健康BALB/c雌性小鼠，小鼠免疫健全、血糖正常，主要是想在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤(乳腺癌模型)，然后观察治疗效果和免疫活化作用。由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以如果度拉糖肽有效的话，那么这样的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
选用6-8周龄BALB/c雌性小鼠，在右侧腋下脂肪垫处建立皮下乳腺癌模型。每只小鼠一侧接种5×106个小鼠4T1乳腺癌细胞，8天左右之后测量肿瘤大小至约200mm3，将小鼠随机分成2组，每组12只，分别是：PBS对照组(100μl PBS)和度拉糖肽皮下注射治疗组(度拉糖肽剂量为500μg/kg，注射体积100μl)，每5天皮下注射1次。度拉糖肽开始处理的当天记为给药的第0天，在给药的第0天度拉糖肽和PBS处理前测量瘤子体积、小鼠称重。按照分组，接种小鼠饲养于清洁级动物房。其中每组当中随机取6只在第7天，取出瘤子，使用Abcam的小鼠Interferon gamma ELISPOT试剂盒(货号：ab64029)对肿瘤组织做ELISpot检测，检测肿瘤组织当中IFN-γ的分泌情况。每组余下的6只，继续跟踪测量肿瘤体积，体重，记录小鼠生存期(生存期起算日为荷瘤之日起)。肿瘤体积公式为V＝0.5×长×宽2。
二、实验结果
图4A的结果显示，在正常小鼠乳腺癌模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，使用Interferon gamma ELISPOT试剂盒检测IFN-γ的分泌情况，结果显示PBS对照和度拉糖肽处理组IFN-γ的ELISPOT分别为181和392spots/2×105细胞，两组之间有极显著差异(P<0.01),与PBS对照组比较，度拉糖肽处理组是对照组的2倍多、能够显著刺激IFN-γ的分泌。这样的结果既肯定了前面度拉糖肽体外免疫活化的结果，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的免疫活化作用。
图4B的结果显示，在正常小鼠乳腺癌模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，与对照组相比，第6天和第9天的结果显示度拉糖肽处理组能够显著性抑制瘤子体积的增长(P<0.05)。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
图4C的结果显示，在正常小鼠乳腺癌模型上，PBS对照组，在荷瘤之后的第25天就开始出现小鼠死亡，至第34天小鼠全部死亡。而度拉糖肽处理组到第32天才开始出现小鼠死亡，直到第47天小鼠全部死亡。度拉糖肽皮下注射可以显著性的延长黑色素瘤荷瘤小鼠的生存期。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，与显著抑制肿瘤生长的结果也是一致的，能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
三、实验小结
正常小鼠乳腺癌模型的体内结果显示度拉糖肽具有明确的免疫活化作用和抗肿瘤免疫治疗作用，度拉糖肽的抗肿瘤作用是通过活化免疫来实现的，即度拉糖肽具有显著的活化抗肿瘤免疫的作用。而且，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
实施例4正常小鼠结肠癌模型上观察度拉糖肽的治疗效果
一、实验方法
我们选用的是正常健康BALB/c雌性小鼠，小鼠免疫健全、血糖正常，主要是想在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤(结肠癌模型)，然后观察治疗效果和免疫活化作用。由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以如果度拉糖肽有效的话，那么这样的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
选用6-8周龄BALB/c雌性小鼠，在右侧腋下脂肪垫处建立皮下结肠癌模型。每只小鼠一侧接种5×105个小鼠CT26结肠癌细胞，10天左右之后测量肿瘤大小至约200mm3，将小鼠随机分成2组，每组12只，分别是：PBS对照组(100μl PBS)和度拉糖肽皮下注射治疗组(度拉糖肽剂量为500μg/kg，注射体积100μl)，每5天皮下注射1次。按照分组，接种小鼠饲养于清洁级动物房。其中每组当中的6只在第7天，取出瘤子，使用Abcam的小鼠Interferon gammaELISPOT试剂盒(货号：ab64029)对肿瘤组织做ELISpot检测，检测肿瘤组织当中IFN-γ的分泌情况。每组余下的6只，继续跟踪测量肿瘤体积，体重，记录小鼠生存期，度拉糖肽开始处理的当天记为第0天，在第0天度拉糖肽和PBS处理前测量瘤子体积、称重。肿瘤体积公式为V＝0.5×长×宽2。
二、实验结果
图5A的结果显示，在正常小鼠结肠癌模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，使用Interferon gamma ELISPOT试剂盒检测IFN-γ的分泌情况，结果显示PBS对照和度拉糖肽处理组IFN-γ的ELISPOT分别为197和320spots/2×105细胞，两组之间有显著差异(P<0.05),与PBS对照组比较，度拉糖肽处理组是对照组的1.6倍多、能够显著刺激IFN-γ的分泌。这样的结果既肯定了前面度拉糖肽体外免疫活化的结果，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的免疫活化作用。
图5B的结果显示，在正常小鼠结肠癌模型上，PBS对照和度拉糖肽皮下注射处理之后，与对照组相比，第6天和第9天的结果显示度拉糖肽处理组能够抑制瘤子体积的增长，第6天可以显著抑制肿瘤体积(P<0.05)。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，也能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
图5C的结果显示，在正常小鼠结肠癌模型上，PBS对照组，在荷瘤之后的第23天开始出现小鼠死亡，至第34天小鼠全部死亡。而度拉糖肽处理组到第29天才开始出现小鼠死亡，直到第43天小鼠全部死亡。度拉糖肽皮下注射可以显著性的延长结肠癌荷瘤小鼠的生存期。这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，与显著抑制肿瘤生长的结果也是一致的，能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用。
三、实验小结
正常小鼠结肠癌模型的体内结果显示度拉糖肽具有明确的免疫活化作用和抗肿瘤作用，度拉糖肽的抗肿瘤作用是通过活化免疫来实现的，即度拉糖肽具有显著的活化抗肿瘤免疫的作用。而且，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
实施例5小鼠转移复发性乳腺癌模型上观察度拉糖肽对术后生存期的影响
一、实验方法与材料
1、实验材料：
2、4T1细胞培养
小鼠乳腺癌4T1细胞的培养基为含10％胎牛血清、100U/ml盘尼西林和100μg/ml链霉素的RPMI-1640完全培养基，细胞在温度为37℃、CO2浓度为5％的恒温培养箱中持续培养。
人HCC细胞株BEL-7402、HuH-7、PLC/PRF/5、SMMC-7721均购于上海中国科学院细胞库。细胞株MHCC97H由复旦大学附属中山医院贾凡教授赠送。这五种HCC细胞的培养基均为添加了10％胎牛血清的DMEM完全培养基。细胞在温度为37℃、CO2浓度为5％的恒温培养箱中持续培养。
3、小鼠饲养
实验动物为：6周龄雌性SPF级BALB/c小鼠，重约20g。饲养于SPF级动物房中，环境温度为22℃～25℃、相对湿度为40％～60％，昼夜光周期为12:12小时，用高压灭菌水和商业老鼠饲料喂养。
4、乳腺原位转移瘤模型构建与手术
取对数生长期的4T1细胞，胰酶消化后用PBS制备成浓度为2×106/ml的细胞悬液；取0.1ml的4T1细胞悬液接种于小鼠左侧第四对乳腺脂肪垫，构建小鼠乳腺原位瘤模型。接种完成后，逐日观察小鼠状态、接种部位有无感染以及肿瘤生长情况；用游标卡尺测量肿瘤长径和短径，根据公式(长×宽2)/2计算肿瘤体积并记录，绘制曲线。同时称量及记录小鼠体重。
待接种4T1细胞后11天，乳腺原位瘤直径达到5mm左右。在异氟烷气体麻醉下完全切除小鼠乳腺肿瘤组织，清除粘连的乳腺脂肪垫，缝合切开的皮肤。手术完成后，逐日观察小鼠状态、乳腺原位瘤是否复发以及小鼠生存期。
给药方式：将小鼠随机分成2组，每组6只，分别是：PBS对照组(100μl PBS)和度拉糖肽皮下注射治疗组(度拉糖肽剂量为500μg/kg，注射体积100μl)，每5天皮下注射1次。按照分组，接种小鼠饲养于清洁级动物房。第一次给药是在荷瘤之后的第9天(也是术前2天)，之后每5天皮下注射1次，合计注射4次。
二、实验结果
图6的结果显示，在小鼠转移复发性乳腺癌模型上，荷瘤之后的第11天做乳腺癌移除手术，在荷瘤之后的第9天(也是术前2天)，之后每5天皮下注射1次，合计注射4次。PBS对照组，在荷瘤之后的第33天开始出现小鼠死亡，至第44天小鼠全部死亡。而度拉糖肽处理组到第37天才开始出现小鼠死亡，直到第57天小鼠全部死亡。度拉糖肽皮下注射可以显著性的延长转移复发性乳腺癌荷瘤小鼠术后的生存期。
三、实验小结
这样的结果与前面度拉糖肽体内外免疫活化功能的结果是一致的，与显著抑制肿瘤生长的结果也是一致的，能够直接说明度拉糖肽在体内具有明确的延长转移复发性肿瘤术后生存期的作用。
具体实施方式部分的总结：
(1)度拉糖肽在体外能够显著刺激免疫细胞增殖，显著刺激干扰素γ(IFN-γ)的分泌释放，具有明确的免疫活化作用，揭示了度拉糖肽在制备免疫活化药物上的应用。
(2)度拉糖肽在体内能够显著刺激干扰素γ(IFN-γ)的释放，具有明确的免疫活化作用，揭示了度拉糖肽在制备免疫活化药物上的应用，进一步的揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫活化药物上的应用。
(3)度拉糖肽在体内能够显著抑制肿瘤生长，显著延长荷瘤小鼠的生存期，具有明确的抗肿瘤免疫治疗作用，揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的应用。
(4)度拉糖肽在多个体内动物肿瘤模型上能够显著抑制肿瘤生长、显著延长荷瘤小鼠的生存期，这些肿瘤包括：乳腺癌、结肠癌和黑色素瘤，具有广泛的作用范围，具有明确的广谱抗肿瘤免疫治疗作用，揭示了度拉糖肽在制备抗肿瘤免疫治疗药物上的广泛应用价值。
(5)非常重要的一点是，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
(6)度拉糖肽在体内具有明确的延长转移复发性肿瘤术后生存期的作用。总的来说，度拉糖肽可以用来制备刺激免疫细胞增殖药物，度拉糖肽可以用来制备增强干扰素γ(IFN-γ)表达药物，度拉糖肽可以用来制备免疫活化药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤免疫活化药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤免疫治疗药物，度拉糖肽可以用来制备抗肿瘤药物，度拉糖肽可以用来制备延长转移复发性肿瘤术后生存期的药物。而且，由于是在免疫健全、血糖正常的小鼠上荷瘤，所以度拉糖肽的功能并不依赖于其已有功能——降血糖。
Claims (4)
1.度拉糖肽用于制备免疫活化药物，其特征为所述免疫活化包括刺激免疫细胞扩增或者促进干扰素γ的表达分泌；所述免疫活化为抗肿瘤免疫活化，所述肿瘤为乳腺癌、结肠癌或黑色素瘤。
2.度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征为所述肿瘤为乳腺癌、结肠癌或黑色素瘤。
3.度拉糖肽在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用，其特征为所述肿瘤为乳腺癌、结肠癌或黑色素瘤。
4.度拉糖肽在制备延长肿瘤术后生存期药物中的应用，其特征为所述肿瘤为转移复发性乳腺癌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010915434.XA CN114129711B (zh) | 2020-09-03 | 2020-09-03 | 度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010915434.XA CN114129711B (zh) | 2020-09-03 | 2020-09-03 | 度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114129711A CN114129711A (zh) | 2022-03-04 |
| CN114129711B true CN114129711B (zh) | 2024-02-09 |
Family
ID=80438087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010915434.XA Active CN114129711B (zh) | 2020-09-03 | 2020-09-03 | 度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114129711B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114656523B (zh) * | 2022-03-14 | 2022-12-23 | 南京市第一医院 | 靶向siglec-10蛋白的多肽及免疫调控应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108066762A (zh) * | 2016-11-07 | 2018-05-25 | 赫兰 | Glp-1受体激动剂及双胍类药物的用途 |
| CN111606999A (zh) * | 2019-02-26 | 2020-09-01 | 南京大学 | 兼具激活免疫共刺激信号通路和阻断免疫检查点的复制型溶瘤腺病毒及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3375452A1 (en) * | 2017-03-16 | 2018-09-19 | Evangelos Andreakos | Use of lambda interferons in the treatment of disorders and related diseases |
-
2020
- 2020-09-03 CN CN202010915434.XA patent/CN114129711B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108066762A (zh) * | 2016-11-07 | 2018-05-25 | 赫兰 | Glp-1受体激动剂及双胍类药物的用途 |
| CN111606999A (zh) * | 2019-02-26 | 2020-09-01 | 南京大学 | 兼具激活免疫共刺激信号通路和阻断免疫检查点的复制型溶瘤腺病毒及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GLP-1 Receptor Agonists and Cancers;Aqsa Iqbal等;Acta Scientific Cancer Biology;第2卷(第3期);第21-27页 * |
| Risk of Malignant Neoplasia with Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Agonist Treatment in Patients with Type 2 Diabetes:A Meta-Analysis;Yufang Liu等;Journal of Diabetes Research;Article ID 1534365（1-10页） * |
| 肿瘤生物治疗进展;魏继武;医学研究生学报;第29卷(第9期);第897-901页 * |
| 胰高糖素样肽-1受体激动剂对人甲状腺髓样癌细胞生长和能量代谢的影响;王红等;《中国癌症杂志》;第26卷(第6期);第487-491页 * |
| 胰高血糖素样肽-1 与癌症相关性的研究进展;张一馨等;癌症进展;第13卷(第3期);第269-271页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114129711A (zh) | 2022-03-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7095028B2 (ja) | 薬学的組成物及び方法 | |
| CN103751771B (zh) | 免疫诱导剂 | |
| CN101072875B (zh) | 新型癌抗原肽及其用途 | |
| JP2007516966A5 (zh) | ||
| EP2839291B1 (en) | Multivalent breast cancer vaccine | |
| CN113248628B (zh) | 一种乳源多肽衍生物及其在制备肥胖症防治药物、保健品和食品添加物中的应用 | |
| WO2016034081A1 (en) | Methods and compositions for treating c-met associated cancers | |
| CN114129711B (zh) | 度拉糖肽在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN112386678A (zh) | 多肽或其衍生物的应用 | |
| CN114177276B (zh) | 贝那鲁肽在制备肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| CN110538316B (zh) | 5-fu和胰高血糖素联合用于制备治疗结直肠癌的药物的用途和药物组合物 | |
| CN107805282A (zh) | 一种靶向疗法和免疫疗法联合的多肽 | |
| CN112121152B (zh) | 利司那肽在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN110038114B (zh) | 一种多肽在制备预防或治疗代谢综合征药物中的用途 | |
| EA028081B1 (ru) | Композиция для лечения рака простаты, способ лечения индивидуума с раком простаты и способ индукции иммунотерапевтического ответа у данного индивидуума | |
| CN111744004B (zh) | 阿必鲁肽在制备抗肿瘤免疫活化及肿瘤免疫治疗药物中的应用 | |
| CN112587656A (zh) | 聚乙二醇洛塞那肽在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| US10646553B2 (en) | Use of recombinant human calcineurin B subunit | |
| CA2832376A1 (en) | Drug containing recombinant mistletoe lectins for treating malignant melanoma | |
| CN110448681B (zh) | 一种用于恶性肿瘤免疫治疗的联合药物 | |
| CN113181351A (zh) | 一种个体化肿瘤治疗性疫苗及其制备方法 | |
| RU2721282C2 (ru) | Способ лечения рассеянного склероза (варианты) | |
| RU2794024C1 (ru) | Набор лекарственных препаратов для проведения курсовой третичной профилактики онкологических заболеваний для иммуномодулирующего воздействия при комбинированной терапии и способ третичной профилактики онкологических заболеваний с использованием комбинированной терапии с помощью набора лекарственных препаратов для иммуномодулирующего воздействия | |
| CN102532268B (zh) | 具有抗乳腺癌活性的寡肽及其应用 | |
| CN108299553B (zh) | 胃泌酸调节素修饰物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |