CN114105976A - 选择性rock2激酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种通式(I)所示的ROCK2激酶抑制剂及其在制备预防和/或治疗与ROCK2相关障碍的疾病的药物中的用途。本发明的化合物是理想的高效选择性ROCK2激酶抑制剂，可用于治疗和/或预防肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化或非酒精性脂肪性肝炎等疾病。

Description

选择性ROCK2激酶抑制剂
本申请要求享有2020.08.28、2020.12.02、2021.01.20向中国国家知识产权局提交的，申请号为202010891846.4、202011392113.2、202110079361.X的在先申请优先权。
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种选择性ROCK2激酶抑制剂、其药物组合物、制备方法及其在制备预防和/或治疗与ROCK2信号通路相关适应症的药物的用途。
背景技术
Rho相关蛋白激酶(ROCK)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是目前功能研究最为详细的Rho下游靶效应分子。ROCK包括ROCK1和ROCK2两种亚型，这两种亚型的氨基酸序列一致性为65％，激酶结构域存在92％的高度相似性，其中ROCK1在肺、肝、脾、肾和睾丸中高度表达，ROCK2在脑和心脏中水平较高。机体主要通过Rho与GTP结合激活ROCK1/2信号通路，磷酸化ROCK1/2下游底物(如MLC、GFAP、LIMK等)，重塑细胞骨架，诱导肌动蛋白丝稳定和肌动蛋白-肌球蛋白收缩、组合肌动蛋白网和肌球蛋白纤维，调节微管动力。研究表明，ROCK1/2信号同于与糖尿病肾病、眼疾病、肿瘤、纤维化、神经损伤等疾病密切相关，具有重要的开发价值。
目前上市药物均为ROCK1/2抑制剂，以眼部疾病治疗为主，用于改善和预防蛛网膜下腔出血术后的脑血管痉挛及引起的脑缺血症状、青光眼、眼部高血压等。目前暂未有选择性ROCK2抑制剂上市，研究表明抑制ROCK2可减少STAT3磷酸化，加强STAT5磷酸化，从而下调过度活化的Th17，上调Treg细胞功能，这是ROCK2所特有的调节机制，因此存在开发自身免疫疾病的潜力。故开发选择性ROCK2抑制剂可为自身免疫疾病和纤维化疾病提供新的治疗选择。
现有的ROCK2抑制剂对于ROCK2的活性较低、抑制率较低，选择性不高，比如专利CN101208094公开的化合物82(药品研发代号KD-025)，其对ROCK2的IC50为105nM。专利WO2012040499公开了化合物201，并记载了其500nM下对于ROCK2的抑制率为0.67。且毒副作用较大。因此需要活性高、抑制率高、选择性高及毒副作用小的ROCK2抑制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的ROCK2抑制剂，其具有对ROCK2优异的抑制活性和良好的选择性，还具有优异的药物代谢动力学性质和较高的安全性等优异的性质，是理想的选择性ROCK2抑制剂。
为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：
本发明首先提供了一种具有通式(I)所示结构的化合物：
Figure BDA0003232538270000011
环A为五或六元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子，杂环中的C原子任选被0至3个C＝O取代；
环B不存在或为含有0至3个N原子的五至六元不饱和环；
L1选自-O(CRaRb)n、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
R1选自任意被取代的酰胺基或磺酰胺基，所述的磺酰胺基中的S＝O可被S＝NRc取代；优选地，R1选自
Figure BDA0003232538270000021
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m、n各自独立地选自0-3的整数。
在优选的实施方式中，
Figure BDA0003232538270000022
具有如下结构：
Figure BDA0003232538270000023
Figure BDA0003232538270000024
在优选的实施方式中，L1选自-O(CRaRb)n或C1-6亚烯基，优选-O-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH＝CH-；更优选-O-、-CH2-或-CH＝CH-；
R1选自选自
Figure BDA0003232538270000025
其中的Ra、Rb优选H、-Me、-Et、-iPr、-tBu、-CH＝CH-、环丙基或环己基；
L2选自C1-6亚烷基或-NH-，优选-CH2-、-CH2CH2-或-NH-；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶，优选吲唑或苯基-1H-吡唑；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、甲基、羟甲基、三氟甲基、乙基、异丙基、甲氧基、异丙氧基、环丙基、环戊基、环己基或C3-8杂环烷基，优选H、氟、氯、甲基、三氟甲基、乙基、异丙基、甲氧基、异丙氧基或环丙基，当环B不存在时，R3与环A相连；
m、n各自独立地选自0至3的整数。
本发明同时提供了一种具有通式(I’)所示结构的化合物：
Figure BDA0003232538270000026
其中，环B不存在或为含有0至3个N原子的五至六元不饱和环；
L1选自-O(CRaRb)n、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
R1选自任意被取代的酰胺基或磺酰胺基，所述的磺酰胺基中的S＝O可被S＝NRc取代；优选地，R1选自
Figure BDA0003232538270000031
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m、n各自独立地选自0-3的整数。
作为优选，其中：
环B不存在或为含有0至3个N原子的五至六元不饱和环；
L1选自C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
R1选自
Figure BDA0003232538270000032
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m、n各自独立地选自0-3的整数。
本发明同时提供了一种具有通式(I-1)所示结构的化合物：
Figure BDA0003232538270000033
其中，L1选自-O(CRaRb)n、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
R1选自任意被取代的酰胺基或磺酰胺基，所述的磺酰胺基中的S＝O可被S＝NRc取代；优选地，R1选自
Figure BDA0003232538270000034
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m、n各自独立地选自0-3的整数。
本发明同时提供了一种具有通式(I-2)所示结构的化合物：
Figure BDA0003232538270000041
其中，
R1选自任意被取代的酰胺基或磺酰胺基，所述的磺酰胺基中的S＝O可被S＝NRc取代；优选地，R1选自
Figure BDA0003232538270000042
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，所述烷基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代，当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m选自0-3的整数。
本发明同时提供了具有通式(I-3)及(I-3’)所示结构的化合物：
Figure BDA0003232538270000043
其中，
L1选自-O(CRaRb)n、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m、n各自独立地选自0-3的整数。
在某些更具体的实施方式中，所述的化合物具有通式(I-4)所示结构，
Figure BDA0003232538270000051
环B不存在或为并联的含有0至3个N原子的五至六元芳环；
其中的Ra、Rb分别独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，当环B不存在时，R3与嘧啶相连；
所述烷基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
m选自0-3的整数。
在某些更为具体的实施方式中，化合物还具有以下特征：
环B不存在或为苯环；
其中的Ra、Rb分别独立的选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基，当环B不存在时，R3与嘧啶相连；
m选自0-3的整数。
在某些具体的实施方式中，所述化合物具有通式(I-5)所示结构：
Figure BDA0003232538270000052
其中：
Ra选自H，Rb选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；优选为吲唑。
在某些具体的实施方式中，所述化合物具有通式(I-6)所示结构：
Figure BDA0003232538270000061
其中：
Ra选自H，Rb选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；
R3选自H、卤素、甲基、乙基、三氟甲基；优选H、卤素、甲基、乙基。
作为优选，本发明提供的新化合物包括但不限于如下化合物：
Figure BDA0003232538270000062
Figure BDA0003232538270000071
Figure BDA0003232538270000081
Figure BDA0003232538270000091
Figure BDA0003232538270000101
上述的化合物可以通过如下方法制备得到。
Figure BDA0003232538270000102
首先化合物(I-41)与R2NH2反应得到化合物(I-42)，其中X可以是卤素；环B存在或不存在，R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，当环B不存在时，R3与环A相连。R2可以选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶。
当R2为苯基-1H-吡唑基团时，为避免吡唑上的活泼氢参与后续反应，通常会在苯基-1H-吡唑上修饰(三甲基硅)乙氧基甲基(SEM)作为保护基，该保护基可在后续的反应过程中进一步脱除。
化合物(I-42)与所示的E)-(3-(3-Re-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸化合物进一步反应得到化合物(I-43)。其中Re是支链的简单烷基，可以是甲基、乙基、异丙基等。
化合物(I-43)与酸或碱反应，脱去基团Re，得到化合物(I-44)。该步反应可以与上步反应一起操作，或者在上步反应的同时脱去基团Re。
化合物(I-44)再与RaRbNH反应得到化合物(I-4)。
上述大部分化合物均含有氨基，为减少氨基上的活泼氢参与副反应，可以对氨基进行保护，例如叔丁氧羰基等。
上述步骤所得到的的化合物(I-4)是一种粗产物形态，通常情况下会使用制备柱色谱对其进一步纯化，其中制备柱色谱所采用的洗脱液环境会根据化合物的不同有所区别，例如甲酸、三氟乙酸或其他常见的酸。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含本发明提供化合物及其药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。
本发明的另一方面提供本发明化合物及药物组合物在制备治疗和/或预防ROCK2相关障碍的疾病的药物中的用途。
作为优选，所述的ROCK2相关障碍的疾病选自肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化或非酒精性脂肪性肝炎。
本发明提供的化合物结构新颖，活性强，具有良好的选择性，还具有优异的药物代谢动力学性质和较高的安全性等优异的性质。本申请所提供的的大部分化合物毒副作用较小，且具有较好的炎症因子抑制效果，是理想的选择性ROCK2激酶抑制剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。
本发明所用原料或试剂可通过常规方法制备或通过市售购得。
实施例1：(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(21)
Figure BDA0003232538270000111
第一步：2-氯-N-(1H-吲唑-5-基)喹唑啉-4-胺(1a)
Figure BDA0003232538270000121
将2,4-二氯喹唑啉(440mg，2.21mmol)，1H-吲唑-5-胺(324mg，2.43mmol)和三乙胺(0.9mL，6.63mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，反应体系在0℃下搅拌2小时。向反应体系中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，有机相依次用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经层析柱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:1)得到2-氯-N-(1H-吲唑-5-基)喹唑啉-4-胺1a(540mg，产率：83％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:296[M+H]+。
第二步：(E)3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(1b)
Figure BDA0003232538270000122
将2-氯-N-(1H-吲唑-5-基)喹唑啉-4-胺1a(100mg，0.34mmol)、(E)-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(90mg，0.41mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(30mg，0.04mmol)的二氧六环/水(10mL/5mL)的溶液中加入碳酸钾(94mg，0.68mmol)。在氮气保护下升至100℃反应过夜。将反应体系过滤。滤液减压浓缩得残余物，残余物经反相柱纯化得到(E)3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯1b(60mg，产率：43％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:436.4[M+H]+。
第三步：(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸(1c)
Figure BDA0003232538270000123
将(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯1b(60mg，0.15mmol)和氢氧化锂(14mg，0.59mmol)溶于四氢呋喃/水(10mL/5mL)的混合溶液中，在室温下反应3小时。反应液直接使用反相柱纯化得到(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸1c(33mg，产率：59％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:408.3[M+H]+。
第四步：(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(21)
Figure BDA0003232538270000131
将(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸1c(35mg，0.086mmol)，三乙胺(17mg，0.17mmol)和异丙胺(5mg，0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(65mg，0.17mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(10mL)中，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到((E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺21(7.3mg，黄色固体)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)13.11(s,1H)，10.00(s,1H)，8.63-859(m，2H)，8.37-8.33(m,2H)，8.14(s,1H)，8.02(d,J＝8.0Hz,1H)，7.89-7.88(m,2H)，7.84-7.81(m,1H)，7.65-7.61(m,3H)，7.59-7.46(m,2H)，6.73(d,J＝16.0Hz,1H)，4.01-3.95(m,1H)，1.15(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ESI)m/z:449.2[M+H]+。
实施例2：2-(3-(1-((1H-吲唑-5-基)甲基)-2,4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(7)
Figure BDA0003232538270000132
第一步：2-异氰酸苯甲酸甲酯(2a)
Figure BDA0003232538270000133
将2-氨基苯甲酸甲酯(1.51g，10mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中，依次加入三乙胺(4.2mL,30mmol)和三光气(1.2g，4mmol)。反应液在60℃下搅拌1小时。反应液过滤，滤液减压浓缩得到2-异氰酸苯甲酸甲酯2a(2g粗品，产率：100％，黄色油状)。
第二步：3-(3-(苄氧基)苯基)喹唑啉-2，4(1H,3H)-二酮(2b)
Figure BDA0003232538270000134
将2-异氰酸苯甲酸甲酯2a(1.65g，9.3mmol)溶于四氢呋喃(35mL)中，依次加入3-苄氧基苯胺(1.85g，9.3mmol)和4-二甲胺基吡啶(4.5g，37.2mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(2g，13.1mmol)并加热至80℃，搅拌1小时。反应液浓缩，残留物用柱层析(二氯甲烷/甲醇(v/v)＝50:1)纯化，并用30mL甲醇打浆得到3-(3-(苄氧基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮2b(1.5g，产率：47％，白色固体)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.58(brs,1H)，7.97(dd，J＝10.4Hz，1.6Hz，1H)，7.76-7.71(m,1H)，7.52-7.37(m,6H)，7.28-7.24(m,2H)，7.13-7.07(m,2H)，6.95-6.93(m,2H)，5.13(s,2H)。MS(ESI)m/z:345.2[M+H]+。
第三步：1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-羧酸甲酯(2c)
Figure BDA0003232538270000141
将1H-吲唑-5-羧酸甲酯(3.0mg，17.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，0℃加入NaH(1.3g，20.5mmol)，反应液在0℃下搅拌反应15分钟。再加入2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯(3.42g，20.5mmol)，升至室温反应3小时，LCMS显示反应完成，加水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(25mL×2)萃取,旋干过硅胶柱(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝10:1)得到1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-羧酸甲酯2c(2.7g，产率：51.9％，无色油状物)。MS(ESI)m/z:307.1[M+H]+。
第四步：5-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(2d)
Figure BDA0003232538270000142
将1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-羧酸甲酯2c(2.6g，8.5mmol)溶于四氢呋喃(25mL)中，0℃下加入硼氢化锂(224mg，10.2mmol)反应体系升至60℃下搅拌反应3小时。TLC显示反应完成，将水(25mL)加入反应体系中，用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，旋干过反相柱纯化(乙腈/水)得到(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲醇(2.2g，产率：93.2％，无色液体)。将(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲醇(2.2g，7.9mmol)溶于四氢呋喃中，向反应体系中加入三乙胺(1.82g，23.7mmol)，0℃下加入甲磺酰氯(1.82g，9.48mmol)。反应体系在室温下反应4小时。向反应体系中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(25mL×2)萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经反相柱纯化得5-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑2d(800mg，产率：34.2％，无色油状)。MS(ESI)m/z:297.1[M+H]+。
第五步：3-(3-(苄氧基)苯基)-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(2e)
Figure BDA0003232538270000143
将碳酸钾(739mg，5.4mmol)加入到5-(氯甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑2d(800mg，2.7mmol)和3-(3-(苄氧基)苯基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮2b(1.2g，2.97mmol)的二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，在氮气条件下加热到50℃后搅拌过夜。反应体系经反相柱纯化(乙腈/水(v/v)＝1:2)，目标组分旋干后得到目标产物3-(3-(苄氧基)苯基)-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮2e(320mg，产率：19.6％，白色固体)。MS(ESI)m/z:605.2[M+H]+。
第六步：2-(3-(2,4-二氧-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(2f)
Figure BDA0003232538270000151
将钯碳催化剂(20mg)在氮气条件下加入到3-(3-(苄氧基)苯基)-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮2e(320mg，0.53mmol)的甲醇溶液(8mL)中，反应体系加热到50℃下搅拌3小时过滤，减压浓缩得到粗品。将碳酸钾(25mg，0.178mmol)加入到上述粗品(46mg，0.089mmol)和2-溴-N-异丙基乙酰胺(15mg，0.107mmol)的二甲基甲酰胺(4mL)溶液中，在封管中加热到100℃后搅拌过夜，液质监测目标产物生成，反应体系经反相柱纯化(乙腈/水(v/v)＝3:10)，目标组分旋干后得到目标产物2-(3-(2,4-二氧-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺2f(26mg，产率：48％，黄色油状物)。MS(ESI)m/z:614.3[M+H]+。
第七步：2-(3-(1-((1H-吲唑-5-基)甲基)-2,4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(7)
反应瓶中依次加入2-(3-(2,4-二氧-1-((1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-5-基)甲基)-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺2f(26mg，0.042mmol)和三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠溶液调节至pH＝7，旋干后经Prep-HPLC制备纯化后得到目标产物2-(3-(1-((1H-吲唑-5-基)甲基)-2,4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺7(6.5mg，产率：32.5％，白色固体)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)13.54(s,1H)，8.09-8.07(m,1H)，8.01(s,1H)，7.93-7.91(m,1H)，7.77(s,1H)，7.70-7.66(m,1H)，7.54-7.52(m，1H)，7.45-7.39(m，2H)，7.29-7.28(m，1H)，7.10(s，1H)，7.09-7.03(m，2H)，5.47(s，2H)，4.46(s，2H)，3.96-3.90(m,1H)，1.10-1.08(d,J＝8Hz,6H)。MS(ESI)m/z:484.2[M+H]+。
实施例3：2-(3-(1-(4-(1H-吡唑-4-基)苄基)-2,4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(8)
Figure BDA0003232538270000152
第一步：(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)甲醇(3a)
Figure BDA0003232538270000161
反应瓶中依次加入(4-(羟甲基)苯基)硼酸(608mg，4.0mmol)、4-碘-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(1.42g，4.4mmol)、二氧六环(8mL)、水(2mL)和碳酸钾(1.10g，8.0mmol)，在氮气条件下加热到85℃，搅拌过夜。反应体系经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝6:1)得到目标产物(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)甲醇3a(522mg，产率：43％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:305.5[M+H]+。
第二步：4-(4-(溴甲基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑(3b)
Figure BDA0003232538270000162
将三苯基磷(516mg，1.97mmol)加入到(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)甲醇3a(500mg，1.64mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中，在氮气条件下搅拌1小时。向体系中加入四溴化碳(986mg，1.97mmol)，室温下搅拌过夜。反应体系经硅胶柱纯化(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝6:1，得到目标产物4-(4-(溴甲基)苯基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑3b(200mg，产率：33％，白色固体)。MS(ESI)m/z:369.3[M+H]+。
第三步：3-(3-(苄氧基)苯基)-1-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苄基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮(3c)
Figure BDA0003232538270000163
以3b为原料，参照实施例2的第五步，制得目标产物3-(3-(苄氧基)苯基)-1-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苄基)喹唑啉-2,4(1H,3H)-二酮3c(200mg，产率：58％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:631.5[M+H]+。
第四步：2-(3-(2,4-二氧-1-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苄基)-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(3d)
Figure BDA0003232538270000171
以3c为原料，参照实施例2的第六步，制得目标产物2-(3-(2,4-二氧-1-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苄基)-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺3d(100mg，产率52％，黄色固体)。MS(ESI)m/z:640.6[M+H]+。
第五步：2-(3-(1-(4-(1H-吡唑-4-基)苄基)-2，4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺(8)
以3d为原料，参照实施例2的第七步，经Prep-HPLC制备纯化后得到目标产物2-(3-(1-(4-(1H-吡唑-4-基)苄基)-2,4-二氧-1,2-二氢喹唑啉-3(4H)-基)苯氧基)-N-异丙基乙酰胺8(41.8mg，产率：55％，白色固体)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)12.91(s,1H)，8.16-8.05(m,2H)，7.93-7.86(m,2H)，7.75-7.68(m,1H)，7.59-7.54(m,2H)，7.45-7.25(m,5H)，7.10-7.00(m,3H)，5.37(s,2H)，4.46(s,2H)，3.98(m，1H)，1.08(d,J＝6.4Hz,6H)。MS(ESI)m/z:510.2[M+H]+。
实施例4：(E)-3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺(22)
Figure BDA0003232538270000172
第一步：2-氯-氮-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)喹唑啉-4-胺
Figure BDA0003232538270000173
将2，4-二氯喹唑啉(500mg,2.53mmol)，4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯胺(731mg,2.53mmol)和醋酸钾(743mg,7.59mmol)溶于四氢呋喃/水(10/5mL)中，反应体系在50℃下搅拌反应2小时。向反应体系中加入水(10mL)，混合液使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次使用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩残余物，残余物经层析柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝10:1)得到2-氯-氮-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)喹唑啉-4-胺(610mg,白色固体)，收率：55％。MS(ESI)m/z:452.1[M+H]+。
第二步：(E)-乙基3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)丙烯酸苯酯
Figure BDA0003232538270000181
将2-氯-氮-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)喹唑啉-4-胺(200mg，0.44mmol)、(E)-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(97mg，0.44mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(16mg，0.022mmol)和的二氧六环/水(6mL/3mL)的溶液中加入碳酸钾(183mg，1.33mmol)。在氮气保护下升温至100℃搅拌反应过夜，反应体系过滤。滤液减压浓缩得到残余物，残余物经反相柱纯化得到(E)-乙基3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)丙烯酸苯酯(80mg，白色固体)，收率：31％。MS(ESI)m/z:592.3[M+H]+。
第三步：(E)3-(3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯
Figure BDA0003232538270000182
将E)-乙基3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)丙烯酸苯酯(70mg，0.12mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)，在室温下搅拌反应2小时。反应液直接减压旋干得到(E)3-(3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(91mg粗产品，白色固体)。MS(ESI)m/z:462.1[M+H]+。
第四步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000183
将((E)3-(3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(91mg，0.12mmol)和氢氧化锂(10mg，0.36mmol)溶于甲醇/水(5mL/2mL)的混合溶液中，在50℃下搅拌反应2小时。反应液直接使用反相柱纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸(32mg，白色固体)，两步收率：54％。MS(ESI)m/z:434.1[M+H]+。
第五步：(E)-3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺(22)
将(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸(32mg,0.074mmol)，异丙胺(17mg,0.30mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(42mg,0.11mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(20mL)中，使用乙酸乙酯(20mL x2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到(E)-3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺22(14.1mg，黄色固体)，收率：40％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝12.88(s,1H),9.92(s,1H)，8.68(s,1H),8.61(d,J＝8.4Hz,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.13-8.08(m，3H),8.00(d,J＝8.8Hz,2H),7.90(d,J＝4.0Hz,2H),7.75-7.72(m,2H),8.67-7.49(m，4H),6.75(d,J＝15.6Hz,1H),4.01-3.95(m,1H),1.14(d,J＝6.4Hz,6H)。MS(ESI)m/z:475.3[M+H]+。
实施例5：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(23)
Figure BDA0003232538270000191
第一步：N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺
Figure BDA0003232538270000192
将2，4-二氯-5-甲基嘧啶(500mg,3mmol)，1H-吲唑-5-胺(408mg,3mmol)和碳酸钠(1.3g,12mmol)溶于乙醇(10mL)中，反应体系在80℃下搅拌反应过夜。反应液旋干，向反应体系中加入水(20mL)，混合液使用乙酸乙酯(20mL x2)分液萃取，有机相依次使用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经反相柱纯化得到N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(180mg，黄色固体)，收率：23％。MS(ESI)m/z:260.2[M+H]+。
第二步：5-((叔丁氧羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003232538270000193
将N-(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(1g,3.8mmol)，二碳酸二叔丁酯(3.3g,18.4mmol)和三乙胺(1.5g,15.4mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入4-二甲氨基吡啶，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干，经硅胶柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝5:1)得到5-((叔丁氧羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-甲酸叔丁酯(1.68g,白色固体)，收率：95％。MS(ESI)m/z:460.2[M+H]+。
第三步：(E)叔丁基5-((叔丁氧羰基)(2-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸酯
Figure BDA0003232538270000194
参照实施例4第二步的方法，使用5-((叔丁氧羰基)(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.65mmol)为原料，得到(E)叔丁基5-((叔丁氧羰基)(2-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸酯(190mg,黄色油状物)，收率：49％。MS(ESI)m/z:600.3[M+H]+。
第四步：(E)3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯
Figure BDA0003232538270000201
将(E)叔丁基5-((叔丁氧羰基)(2-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸酯(110mg,0.22mmol)溶于甲酸(5mL)中，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干投下步，得到(E)3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(88mg,黄色油状物)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.03(s，1H),8.67(s,1H),8.54(s,1H),8.30-8.25(m,3H),8.11(s,1H),7.81-7.50(m,5H),6.62(d,J＝16.0Hz，1H),4.25-4.20(m,2H),2.27(s,3H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H)。MS(ESI)m/z:400.2[M+H]+。
第五步：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000202
参照实施例4第四步的方法，以(E)3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(88mg，0.22mmol)为原料，以四氢呋喃/水(5mL/1mL)为混合溶液，得到(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(30mg，白色固体)，收率：36％。MS(ESI)m/z:372.1[M+H]+。
第六步：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺
参照实施例4第五步的方法，以(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(30mg,0.08mmol)为原料，得到(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺23(5.0mg，白色固体)，收率:15％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.03(s,1H),8.65(s,1H),8.50(s,1H),8.25-7.99(m,5H),7.70-7.41(m,5H),6.69(d,J＝15.6Hz,1H),3.99-3.94(m,1H),2.27(s,3H)，1.13(d,J＝6.8Hz,6H)。MS(ESI)m/z:413.2[M+H]+。
实施例6：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(25)
Figure BDA0003232538270000203
第一步：氮-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1氢-吲唑-5-胺
Figure BDA0003232538270000204
将2，4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(500mg,2.31mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，在零下40℃下加入1-氢-吲唑-5-胺(308mg，2.31mmol)和三乙胺(0.9mL,6.93mmol)，反应体系在零下40℃下搅拌反应2小时。向反应体系中加入水(20mL)，混合液使用乙酸乙酯(20mLx2)分液萃取，有机相依次使用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩残余物，残余物经反相柱纯化得氮-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1氢-吲唑-5-胺(310mg,白色固体)，收率：43％。MS(ESI)m/z:314.0[M+H]+。
第二步：(E)3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯
Figure BDA0003232538270000211
参照实施例4第二步，以氮-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-1氢-吲唑-5-胺3(200mg，0.64mmol)为原料，得到(E)3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(32mg，白色固体)，收率：11％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.12(s,1H),9.26(s，1H)，8.75(s,1H)，8.42(s,1H),8.20(d,J＝8.0Hz,1H),8.12(s,1H),7.94(d,J＝1.2Hz,1H)，7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.65-7.48(m，4H),6.56(d,J＝16.0Hz,1H),4.24(q,J＝6.8Hz,2H),1.31(t,J＝6.8Hz,3H)。MS(ESI)m/z:454.2[M+H]+。
第三步：(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000212
参照实施例4第四步，以(E)3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯为原料，得到(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(17mg，白色固体)，收率：71％。
第四步：(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺
参照实施例4第五步，以(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(17mg,0.040mmol)为原料，得到(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺(4.9mg，白色固体)，收率：30％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.18(brs,1H),9.26(s,1H),8.74(s,1H),8.42(s,1H),8.12(s,1H),8.07(d,J＝7.6Hz,1H)，7.93(d,J＝7.6Hz,1H),7.88(d,J＝1.6Hz,1H),7.68-7.37(m,5H),6.61(d,J＝15.2Hz,1H),3.92(overlap,1H),1.33(d,J＝6.4Hz，6H)。MS(ESI)m/z:467.2[M+H]+。
实施例7：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丁基丙烯酰胺(27)
Figure BDA0003232538270000213
参照实施例1的方法，将第四步中的异丙胺变为环丁胺，得到(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丁基丙烯酰胺(13.1mg,黄色固体)，收率：40％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.10(brs,1H),10.00(s,1H),8.64-8.57(m,2H),8.43-8.30(m,3H),8.14(s,1H),7.92-7.80(m,3H),7.68-7.60(m,3H),7.58-7.42(m,2H),6.67(d,J＝1.6Hz,1H),4.38-4.30(m,1H),2.28-2.20(m,2H),2.00-1.90(m,2H),1.75-1.65(m,2H)。MS(ESI)m/z:461.3[M+H]+。
实施例8：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(33)
Figure BDA0003232538270000221
参照实施例1的方法，将第四步中的异丙胺变为环丙胺，得到((E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-环丙基丙烯酰胺(6.7mg，黄色固体)，收率：18％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.11(s,1H),10.00(s,1H),8.63-859(m,2H),8.38-8.32(m,2H),8.22-8.21(m,1H),8.13(s,1H),7.89-7.82(m,3H),7.65-7.61(m，3H),7.53-7.46(m,2H),6.73(d,J＝15.6Hz,1H),2.81-2.78(m,1H),0.72-0.68(m,2H,0.52-0.48(m,2H)。MS(ESI)m/z:447.2[M+H]+。
实施例9：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(37)
Figure BDA0003232538270000222
第一步：N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺
Figure BDA0003232538270000223
将1H-吲唑-5-胺(50mg,0.38mmol)和2,4-二氯嘧啶(65mg,0.41mmol)以及三乙胺(76mg，0.75mmol)，加入到乙醇(4mL)中，加热80℃下搅拌16个小时。反应完成，浓缩旋干得到粗产物N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(80mg，紫色固体)，收率：86.9％。MS(ESI)m/z:246.2[M+H]+。
第二步：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000231
将N-(2-氯嘧啶-4-基)-1氢-吲唑-5-胺(80mg,0.33mmol)，E)-(3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(74mg,0.36mmol)和碳酸钾(180mg,0.94mmol)加入到dioxane/H2O(6mL,5:2)中，氮气保护下加入Pd(dppf)Cl2(12mg,0.02mmol)，反应体系在100℃下搅拌反应16个小时，加水(6mL)，乙酸乙酯(6mL x2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩旋干得到粗产品，粗产品过硅胶柱PE：EA＝10:1到1:1得到(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(30mg,无色油状物)，收率：25.8％。MS(ESI)m/z:358.1[M+H]+。
第三步：(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺
将(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(80mg,0.22mmol)加入到DMF(3mL)中，再加入异丙胺(13mg,0.26mmol)和HATU(101mg,0.26mol)，室温下搅拌30分钟，LCMS显示反应完成，加水(6mL)，乙酸乙酯(6mL x2)萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩旋干得到粗产品，粗产品通过prep-HPLC纯化得到(E)-3-(3-(4-(((1氢-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺(6mg，白色固体)，收率：6.7％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝13.02(brs,1H),9.65(s,1H),8.58(s,1H),8.37-8.31(m,2H),8.22(s,1H),8.07-8.02(m，2H),7.66-7.46(m,5H),6.76-6.70(m,2H),4.00-3.95(m,1H),1.14(d,J＝6.4Hz,6H)。MS(ESI)m/z:399.2[M+H]+。
实施例10：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(26)
Figure BDA0003232538270000232
第一步：2-氯-5-(三氟甲基)-N-(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0003232538270000233
将2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶(500mg,2.30mmol)，4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯胺(666mg,2.30mmol)和三乙胺(699mg,6.91mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，反应体系在-40℃下搅拌反应2小时。向反应体系中加入水(10mL)，混合液使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次使用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩残余物，残余物经层析柱纯化(EA：PE＝5:1)得到2-氯-5-(三氟甲基)-N-(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺(490mg,黄色液体)，收率：38％。MS(ESI)m/z:470.0[M+H]+。
第二步：(E)-乙基3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯
Figure BDA0003232538270000241
向2-氯-5-(三氟甲基)-N-(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺(490mg，1.07mmol)、(E)-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(280mg，1.27mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(78mg，0.11mmol)的二氧六环/水(8mL/4mL)的溶液中加入碳酸钾(293.8mg，2.12mmol)。在氮气保护下升温至100℃搅拌反应过夜，反应体系过滤。滤液减压浓缩得到残余物，残余物经层析柱纯化(EA:PE＝5:1)得到(E)-乙基3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯(360mg，白色固体)，收率：48.7％。MS(ESI)m/z:610.1[M+H]+。
第三步：(E)-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000242
将(E)-乙基3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯(360mg，0.59mmol)和氢氧化锂(247.86mg，5.90mmol)溶于甲醇/水(5mL/2mL)的混合溶液中，在室温下搅拌反应过夜。反应液直接使用反相柱纯化得到(E)-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(280mg，白色固体)，两步收率：81％。MS(ESI)m/z:582.0[M+H]+。
第四步：(E)-N-异丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0003232538270000243
将(E)-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(90mg,0.16mmol)，异丙胺(26.5mg,0.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(88.3mg,0.23mmol)，混合液在室温下搅拌反应过夜。滤液减压浓缩得到残余物，残余物经层析柱纯化(EA:PE＝2:1)得到(E)-N-异丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺(75.2mg，白色固体)，收率:78％。MS(ESI)m/z:623.1[M+H]+。
第五步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺
将(E)-N-异丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺(75.2mg,0.12mmol)溶于三氟乙酸(5mL)中，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干，残余物经prep-HPLC纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-异丙基丙烯酰胺(2.6mg,白色固体)，收率:5.3％。MS(ESI)m/z:493.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.16(s,1H),8.77(s,1H),8.50(s,1H),8.19(d,J＝7.6,1H),8.11(s,2H),8.10(d,J＝8.0,1H),7.73(t,J＝8.0Hz,3H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.53(t,J＝7.6Hz,1H),7.47(d,J＝16.0Hz,1H),6.71(d,J＝16.0Hz,1H),3.99-3.94(m,1H),1.13(d,J＝8.4Hz,6H)。
实施例11：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(34)
Figure BDA0003232538270000251
第一步：(E)-N-环丙基-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0003232538270000252
将实施例4得到的(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸(100mg,0.18mmol)，环丙胺(30mg，0.54mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(82mg,0.22mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(20mL)中，使用乙酸乙酯(20mL x2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经反相柱纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺2(78mg，黄色固体)，收率：72％。MS(ESI)m/z:603.1[M+H]+。
第二步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺
将(E)-3-(3-(4-((4-(1氢-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-氮-异丙基丙烯酰胺(40mg，0.066mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，在室温下搅拌反应2小时。反应液直接减压旋干得到粗品，经Prep-HPLC纯化得到目标产物(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(17.4mg，白色固体)。收率：56％。MS(ESI)m/z:473.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.69-8.67(m,1H),8.56(s,1H),8.36-8.26(m,2H),8.10(s,2H),8.03-7.90(m,4H),7.76(d,J＝8.4Hz,4H)，7.66-7.62(m，1H)，7.53(d，J＝15.6Hz,1H)，6.66(d，J＝16.0Hz,1H),2.85-2.76(m,1H),0.76-0.66(m,2H),0.53-0.45(m,2H)。
实施例12：(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(38)
Figure BDA0003232538270000261
将实施例9得到的((E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(46mg，0.08mmol)，环丙胺(11mg,0.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(58mg,0.15mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(10mL)中，使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(10mg，白色固体)，收率：20％。MS(ESI)m/z:397.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.39(brs,1H)，8.46(s，1H)，8.38(d,J＝6.8Hz,1H),8.29-8.10(m,4H),7.76(d，J＝7.2Hz，1H),7.64-7.48(m,4H),6.81(d,J＝6.8Hz，1H),6.66(d，J＝15.6Hz,1H),2.80-2.77(m,1H)，0.72-0.46(m,4H)。
实施例13：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(39)
Figure BDA0003232538270000262
第一步：2-氯-N-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶
Figure BDA0003232538270000263
将2,4-二氯嘧啶(200mg,1.01mmol)溶于乙醇(8mL)中，在25℃下加入4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯胺(322mg,1.16mmol)和三乙胺(205mg,2.03mmol)，反应体系在80℃下搅拌反应16小时。旋干得到粗产品N-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-吲唑-5-胺(240mg,紫色固体)，收率：58.9％。MS(ESI)m/z:402.1[M+H]+。
第二步：(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000271
将2-氯-N-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶(180mg，0.45mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(30mg，0.041mmol)和(E)-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(118mg,0.54mmol)的二氧六环/水(4mL/1mL)的溶液中加入碳酸钾(129mg，0.90mmol)。在氮气保护下升温至100℃搅拌反应过夜，反应体系过滤。滤液减压浓缩得到残余物，残余物经反相纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(120mg，白色固体)，收率：52.3％。MS(ESI)m/z:514.0[M+H]+。
第三步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000272
将(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(120mg,0.233mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，在25℃下加入甲酸(4mL)，反应体系在25℃下搅拌反应2小时。旋干得到粗产品(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(130mg,黄色油状)，收率：134％。MS(ESI)m/z:384.0[M+H]+。
第四步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺
将(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(65mg，0.17mmol)，环丙胺(12mg,0.20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(77mg,0.20mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(10mL)中，使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(4mg，白色固体)，收率：5.6％。MS(ESI)m/z:423.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.41(brs,1H),8.50-8.27(m,4H),8.10(s,2H),7.81-7.52(m,8H),6.88(d,J＝8.4Hz,1H),6.73-6.67(m,1H),2.88-2.80(m,1H),0.76-0.70(m,2H),0.53-0.50(s，2H)。
实施例14：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(40)
Figure BDA0003232538270000281
第一步：2-氯-5-甲基-N-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺
Figure BDA0003232538270000282
将2,4-二氯-5-甲基嘧啶(300mg,1.8mmol)，4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯胺(532mg,1.8mmol)和碳酸钠(780mg,7.4mmol)溶于DMF(10mL)中，反应体系在80℃下搅拌反应过夜。直接过滤，经反相柱纯化得到2-氯-5-甲基-N-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺3(130mg,无色油状物)，收率：17％。MS(ESI)m/z:416.1[M+H]+。
第二步：叔丁基(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基甲酸酯
Figure BDA0003232538270000283
将2-氯-5-甲基-N-(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)嘧啶-4-胺(90mg，0.2mmol)，二碳酸二叔丁酯(94mg,0.4mmol)和三乙胺(44mg,0.4mmol)和4-二甲氨基吡啶(2mg,0.02mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干，经硅胶相柱纯化(EA:PE＝5:1)得到叔丁基(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基甲酸酯5(100mg,无色油状)，收率：91％。MS(ESI)m/z:516.0[M+H]+。
第三步：(E)-乙基3-(3-(4-((叔丁氧基羰基)(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯
Figure BDA0003232538270000284
将叔丁基(2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)(4-(1-(((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基甲酸酯(100mg，0.2mmol)，(E)-(3-(3-乙氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)硼酸(43mg，0.2mmol)，[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15mg，0.02mmol)的二氧六环/水(5mL/1mL)的溶液中加入碳酸钾(52mg，0.4mmol)。在氮气保护下升温至90℃搅拌反应过夜。反应液过滤旋干，向反应体系中加入水(20mL)，混合液使用乙酸乙酯(20mLx2)分液萃取，有机相依次使用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，经硅胶相柱纯化(EA:PE＝5:1)得到(E)-乙基3-(3-(4-((叔丁氧基羰基)(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯(110mg,无色油状物)，收率：86％。MS(ESI)m/z:656.1[M+H]+。
第四步：(E)3-(3-(4-(((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯
Figure BDA0003232538270000291
将(E)-乙基3-(3-(4-((叔丁氧基羰基)(4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸酯(50mg,0.07mmol)溶于三氟乙酸(5mL)的二氯甲烷溶液(5mL)中，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干投下步，得到(E)3-(3-(4-(((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(32mg,crude,黄色油状物)。MS(ESI)m/z:426.0[M+H]+。
第五步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸
Figure BDA0003232538270000292
将(E)3-(3-(4-(((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸乙酯(32mg，0.07mmol)和氢氧化锂(16mg，0.37mmol)溶于四氢呋喃/水(5mL/1mL)的混合溶液中，室温搅拌反应3小时。反应液用稀盐酸调至PH＝6,直接使用反相柱纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(25mg，白色固体)，收率：83％。
第六步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺
将(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(30mg,0.07mmol)，异丙胺(9mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(57mg,0.15mmol)，混合液在室温下搅拌反应过夜。将反应体系分散在水(10mL)中，使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(10.0mg，黄色固体)，收率:30％。MS(ESI)m/z:437.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.37(s，1H),8.41(s,1H)，8.35(s，1H)，8.30(d,J＝4.4Hz，1H),8.16(d,J＝7.6Hz，1H),8.08(s,2H),7.77-7.70(m,5H),7.59(t,J＝7.6Hz,1H),7.48(d,J＝16.0Hz,1H),6.64(d,J＝16.0Hz,1H),2.81-2.77(m,1H),2.31(s,3H)，0.72-0.68(m,2H),0.50-0.46(m,2H)。
实施例15：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(41)
Figure BDA0003232538270000301
第一步：(E)-N-环丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺
Figure BDA0003232538270000302
将实施例10得到的(E)-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(90mg,0.16mmol)，环丙胺(26.5mg,0.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(88.3mg,0.23mmol)，混合液在室温下搅拌反应过夜。滤液减压浓缩得到残余物，残余物经层析柱纯化(乙酸乙酯：石油醚＝2:1)得到(E)-N-环丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺(65mg，白色固体)，收率:67％。MS(ESI)m/z:621.0[M+H]+。
第二步：(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺
将(E)-N-异丙基-3-(3-(5-(三氟甲基)-4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酰胺(65mg,0.11mmol)溶于三氟乙酸(5mL)中，反应体系在室温条件下搅拌反应过夜。反应液直接旋干，残余物经prep-HPLC纯化得到(E)-3-(3-(4-((4-(1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(2.7mg,白色固体)，收率:5.3％。MS(ESI)m/z:491.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝9.15(s，1H),8.77(s,1H),8.49(s,1H),8.28(d,J＝4.4,1H),8.18(d,J＝12.0,1H),8.09(s,2H),7.69(t,J＝8.4Hz,3H),7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.49(d,J＝16.0Hz,1H),6.63(d,J＝15.6Hz,1H),2.80-2.75(m,1H),0.71-0.67(m,2H)，0.49-0.45(m,2H)。
实施例16：(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-(2-氟环丙基)丙烯酰胺(42)
Figure BDA0003232538270000311
将HATU(38mg,0.10mmol)加入到实施例1得到的(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)丙烯酸(30mg,0.07mmol),2-氟环丙烷胺(10mg,0.14mmol)和DIEA(14mg,0.14mmol)的混合DMF溶液(1mL)中，反应体系在室温条件下搅拌1小时后，液质监测目标产物生成，经prep-HPLC纯化得到目标产物(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-(2-氟环丙基)丙烯酰胺(13.1mg，黄色固体)，收率：40％。MS(ESI)m/z:465.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.87(brs,1H),8.71(d,J＝8.0,1H),8.47(s,1H),8.31-8.18(m,4H)，8.04-7.97(m,2H),7.81-7.78(m,3H)，7.71-7.69(m,1H),7.63(t,J＝7.6,1H),7.52(d,J＝15.6,1H),6.61(d,J＝15.6,1H),4.83-4.66(m,1H),3.25-3.02(m,1H),1.49-1.31(m,1H),1.03-0.89(m,1H)。
实施例17：(E)-3-(3-(4-((1H-吲唑-5-基)氨基)喹唑啉-2-基)苯基)-N-(2-氟环丙基)丙烯酰胺(44)
Figure BDA0003232538270000312
将实施例13制备的(E)-3-(3-(4-((4-(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙烯酸(65mg，0.17mmol)，异丙胺(12mg,0.20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，向反应液中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(77mg,0.20mmol)，混合液在室温下搅拌反应1小时。将反应体系分散在水(10mL)中，使用乙酸乙酯(10mLx2)分液萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到残余物，残余物经prep-HPLC得到(E)-3-(3-(4-(((1H-吲唑-5-基)氨基)嘧啶-2-基)苯基)-N-环丙基丙烯酰胺(5.3mg，白色固体)，收率：7.5％。MS(ESI)m/z:425.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝10.45(brs,1H),8.49-8.43(m,2H),8.27(d,J＝10.0Hz,1H),8.15(d,J＝10.0Hz,1H)8.10(s,2H),7.81-7.64(m,7H),7.52(d,J＝20.8Hz,1H),6.88(d,J＝8.8Hz,1H),6.76(d,J＝21.2Hz,1H),4.03-3.96(m,1H),1.25-1.14(d,J＝7.6Hz,6H)。
实验例1：ROCK1/2激酶活性检测
以KD-025作阳性对照，采用Mobility shift assay进行激酶活性检测。所用的ROCK1激酶购自Carna，ROCK2激酶购自signalchem，底物LIMKtide购自GL。
将用DMSO配制的10mM受试物稀释成10μM浓度，随后3倍梯度逐级稀释，共得到10个不同浓度的待测化合物溶液，复孔检测。阳性和阴性对照孔加入250nL DMSO。用1×Kinasebuffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。在化合物孔和阳性对照孔分别加10μL 2.5倍终浓度激酶溶液，在阴性对照孔中加10μL 1×Kinase buffer。1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。加入15μL的5/3倍终浓度的ATP和LIMKtide混合溶液，起始反应。将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育相应的时间，加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。用Caliper EZ Reader II读取转化率。
抑制率％＝(阳性对照转化率读数-样品转化率读数)/(阳性对照转化率读数-阴性对照转化率读数)×100％。以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得到受试物对酶活性的IC50值。
各化合物的IC50值如下表1所示。其中A表示<50nM；B表示50-250nM；C表示>250nM；+表示抑制率大于80％；-表示抑制率小于80％。
表1.ROCK1/2激酶IC50值
Figure BDA0003232538270000321
专利CN101208094公开了了化合物KD-025，并记载其对ROCK2的IC50为105nM。此外，本申请还头对头的检测了CN101208094化合物80、CN105101996化合物164的ROCK2抑制活性。CN101208094化合物80的ROCK2及ROCK1的IC50均>250nM。CN105101996化合物164的ROCK2 IC50>250nM，ROCK1 IC50为50-250nM。本申请大部分化合物对于ROCK2的IC50均优于化合物KD-025及上述专利化合物，且化合物21、23、27、33、37、38、42的IC50具有明显优势。
专利WO2012040499公开了化合物201，并记载了其500nM下对于ROCK2的抑制率为0.67。本申请化合物对ROCK2靶点相同抑制率时，所需浓度远小于500nM，尤其是化合物21、23、27、33、37、38、39、42、44具有明显优势。
实验例2：小鼠毒性试验
实验方法：
对CD-1小鼠连续给药14天，每个化合物设置3个剂量组(100mpk、300mpk、600mpk)，观察14天内每天给药后小鼠的死亡情况及毒性反应。每个剂量组设置CD-1小鼠雌雄各2只，其中小鼠均为6-8周龄，体重18-22克。
毒性观察指标主要包括：生命体征，呼吸、营养状态，精神状态，行为活动，肌肉、反射、眼、鼻、口腔、胃肠道反应，腹部状态，尿液、被毛、皮肤粘膜、会阴状态等。
实验数据：
阳性参照物KD-025观察结果：100mpk小鼠未见异常反应；300mpk有1只小鼠观察到竖毛，其他小鼠未见异常；600mpk有1只小鼠死亡，其余小鼠观察到精神不振，弓背，竖毛。
化合物21观察结果：100mpk和300mpk所有小鼠未见异常反应；600mpk有小鼠出现竖毛，其他小鼠无异常。
化合物23观察结果：100mpk和300mpk小鼠均未见异常反应；600mpk的小鼠出现精神不振，皮肤变色等。
化合物27观察结果：100mpk小鼠均未见异常反应；300mpk小鼠出现竖毛，600mpk小鼠均无异常。
化合物33观察结果：100mpk、300mpk、600mpk所有小鼠未见异常反应。
试验结论：
化合物21、23、27、33的毒性反应明显小于阳性对照KD-025。
实验例3：细胞因子实验
实验方法：
1)收集包含PBMC(人外周血单核细胞)的白细胞层，用DPBS(磷酸盐缓冲液)洗涤，离心。
2)弃上清液，用缓冲液重悬细胞，调整浓度为5×107/mL。
3)从PBMC中进一步分离得到
Figure BDA0003232538270000331
CD4+T细胞，并调整浓度为2×106/mL。
4)将
Figure BDA0003232538270000332
CD4+T细胞(50μL/well)和anti-human CD3/CD28 beads细胞(50μL/well)加入到96孔微孔板中。
5)用完全培养液配制4*cytokines cocktail，将配制好的cytokines cocktail、化合物以及阳性对照分别加入到对应的孔中，总体积为200μL。
6)37℃，5％CO2培养箱中孵育5-6天。
7)细胞用100ng/ml PMA和1μg/ml Ionomycin刺激4小时。8)离心后收上清液，用检测IL-17的分泌。
实验数据如表2所示：
表2
化合物 21 23 27 KD-025
10uM抑制率％ 100 99 100 53
试验结论：
化合物21、23、27对IL-17的抑制活性明显高于KD-025，并呈现剂量依赖性。

Claims (10)

1.一种具有通式(I)所示结构的化合物：
Figure FDA0003232538260000011
其中，
环A为五或六元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子，杂环中的C原子任选被0至3个C＝O取代；
环B不存在或为含有0至3个N原子的五至六元不饱和环；
L1选自-O(CRaRb)n、C1-6亚烷基或C1-6亚烯基；
R1选自任意被取代的酰胺基或磺酰胺基，所述的磺酰胺基中的S＝O可被S＝NRc取代；优选地，R1选自
Figure FDA0003232538260000012
L2选自C1-6亚烷基或-NRd；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，当环B不存在时，R3与环A相连；
Ra、Rb、Rc、Rd各种独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；所述烷基、亚烷基、亚烯基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；m、n各自独立地选自0-3的整数。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于：
Figure FDA0003232538260000013
具有如下结构：
Figure FDA0003232538260000014
Figure FDA0003232538260000015
3.如权利要求2所述的化合物，其特征在于：具有通式(I-4)所示结构，
Figure FDA0003232538260000016
环B不存在或为并联的含有0至3个N原子的五至六元芳环；
其中的Ra、Rb分别独立地选自H、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑、苯基吡啶、喹啉、异喹啉、3-噻唑基吡啶、吡啶、1H-吡唑或环己基吡啶；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基，当环B不存在时，R3与嘧啶相连；
所述烷基、烷氧基、环烷基或杂环烷基任选被0-3个R4取代；
R4选自H、卤素、氰基、羟基、硝基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C3-8环烷基或C3-8杂环烷基；m选自0-3的整数。
4.如权利要求3所述的化合物，其特征在于：
环B不存在或为苯环；
其中的Ra、Rb分别独立的选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；
R3选自H、卤素、羟基、氰基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基，当环B不存在时，R3与嘧啶相连；
m选自0-3的整数。
5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，具有通式(I-5)所示结构：
Figure FDA0003232538260000021
其中：
Ra选自H，Rb选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；优选为吲唑。
6.如权利要求4所述的化合物，其特征在于，具有通式(I-6)所示结构：
Figure FDA0003232538260000022
其中：
Ra选自H，Rb选自H、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基，且任选地被0-2个F原子取代；
R2选自吲唑、苯基-1H-吡唑；
R3选自H、卤素、甲基、乙基、三氟甲基；优选H、卤素、甲基、乙基。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于：所述化合物选自：
Figure FDA0003232538260000031
Figure FDA0003232538260000041
Figure FDA0003232538260000051
Figure FDA0003232538260000061
Figure FDA0003232538260000071
8.一种药物组合物，所述药物组合物含有权利要求1～7任意一项所述的化合物及药物可接受的载体。
9.根据权利要求1～7任意一项所述的化合物或根据权利要求8所述的药物组合物在制备治疗和/或预防ROCK2相关障碍的疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述ROCK2相关障碍的疾病选自肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心脏纤维化或非酒精性脂肪性肝炎。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114573566A (zh) * 2021-03-04 2022-06-03 杭州邦顺制药有限公司 选择性rock2激酶抑制剂
CN116891460A (zh) * 2023-07-12 2023-10-17 浙江大学 一种吲唑类衍生物或其药用盐及应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101208094A (zh) * 2005-03-25 2008-06-25 表面线段公司 药代动力学改善的化合物
WO2010104851A1 (en) * 2009-03-09 2010-09-16 Surface Logix, Inc. Rho kinase inhibitors
WO2012040499A2 (en) * 2010-09-22 2012-03-29 Surface Logix, Inc. Metabolic inhibitors
WO2015157556A1 (en) * 2014-04-09 2015-10-15 Kadmon Corporation, Llc Treatment of gvhd
CN105120869A (zh) * 2012-10-05 2015-12-02 卡德门企业有限公司 眼部病症的治疗

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005272321A (ja) * 2004-03-23 2005-10-06 Ono Pharmaceut Co Ltd 含窒素複素環化合物およびその医薬用途
DE102007025718A1 (de) * 2007-06-01 2008-12-04 Merck Patent Gmbh Pyridazinonderivate
CN111825675B (zh) * 2019-04-15 2023-08-01 武汉朗来科技发展有限公司 Rock抑制剂及其制备方法和用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101208094A (zh) * 2005-03-25 2008-06-25 表面线段公司 药代动力学改善的化合物
WO2010104851A1 (en) * 2009-03-09 2010-09-16 Surface Logix, Inc. Rho kinase inhibitors
WO2012040499A2 (en) * 2010-09-22 2012-03-29 Surface Logix, Inc. Metabolic inhibitors
CN105120869A (zh) * 2012-10-05 2015-12-02 卡德门企业有限公司 眼部病症的治疗
WO2015157556A1 (en) * 2014-04-09 2015-10-15 Kadmon Corporation, Llc Treatment of gvhd

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114573566A (zh) * 2021-03-04 2022-06-03 杭州邦顺制药有限公司 选择性rock2激酶抑制剂
CN116891460A (zh) * 2023-07-12 2023-10-17 浙江大学 一种吲唑类衍生物或其药用盐及应用

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