WO2020135507A1 - 一种多取代苯氨基嘧啶衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种多取代苯氨基嘧啶衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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WO2020135507A1
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alkyl
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fluoro
water
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楼金芳
盛荣
张冯敏
冯恩光
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杭州百新生物医药科技有限公司
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    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the invention belongs to the technical field of medicine, and relates to a polysubstituted anilinopyrimidine derivative, a preparation method thereof and an inhibitory effect on kinase.
  • the derivative is related to a pharmaceutically acceptable salt, ester or solvate, is a kinase inhibitor, and has uses for treating and various cancers, and has great clinical application prospects.
  • Cyclin-dependent kinases are a class of serine/threonine (Thr) kinases, which are important signal transduction molecules in the cell and CDK-cyclin formed by cyclin Complex, involved in cell growth, proliferation, dormancy or apoptosis.
  • CDK4/6 cyclin-dependent kinase 4/6
  • cyclin D cyclin D
  • Out of control of the cell cycle is an important factor in the occurrence and development of cancer
  • CDK4/6 is a key factor in the out of control of the cell cycle.
  • the combination of CDK9 and cyclin T has been shown to be related to cell transcriptional regulation. CDK9 inhibitors are considered to be useful in the treatment of various cancers.
  • Cancer targeted therapy is an effective treatment plan. It has strong specificity, low toxic and side effects, and basically does not damage normal tissues. It can more effectively provide further reference for the selection of clinical treatment plans.
  • breakthroughs have been made in the research and application of targeted drugs.
  • the research and development of new therapeutic target drugs has become a hot spot for people to lead cancer treatment into an era of personalization and precision. Bring the gospel to more cancer patients.
  • the development of CDK-based small molecule inhibitors for targeted anti-cancer therapy has more potential advantages and can reduce the risk of secondary tumor development.
  • the existing CDK small molecule inhibitors are mostly CDK4/6 inhibitors.
  • the approved CDK4/6 inhibitors are: Palbociclib (Pfizer, approved by FDA in February 2015, CFDA in September 2018 (Approved), Ribociclib (Novartis, approved by FDA in March 2017, not yet approved by CFDA), Abemaciclib (Lilly, approved by FDA in October 2017, not yet approved by CFDA).
  • no CDK9 inhibitor has ever been approved for marketing.
  • the patent document with the publication number CN105294683A discloses the compound of structural formula 2, which is characterized in that: it is connected to the amino group in the aminopyrimidine, it is a ring B, and the ring B is a para-substituted (disubstituted) benzene ring or nitrogen-containing Aromatic heterocycle.
  • Ring B is selected from:
  • Y is H or selected from the following structures: (Double bond or triple bond structure with unsaturated bond).
  • this patent is an improvement of the third-generation EGFR inhibitor AZD9291. Its activity test data shows that it is effective for EGFR and wild-type EGFR, and it is not known whether it is effective for CDK4, CDK6 or CDK9.
  • the technical problem to be solved by the present invention is to provide a novel polysubstituted anilinopyrimidine derivative, or a pharmaceutically acceptable salt or solvent compound thereof, capable of inhibiting the kinase activity of CDK4, CDK6 and CDK9, and having significant resistance Tumor activity.
  • a polysubstituted anilinopyrimidine derivative is a compound represented by formula I or a pharmaceutically acceptable salt or solvent compound thereof:
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, -CF 3 , -CHF 2 , C 1 -C 6 alkyl or C 3 -C 8 cycloalkyl;
  • R 3 and R 4 are each independently selected from H , F, Cl, Br, -CF 3 , -CHF 2 or C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 5 is selected from H, F, Cl, Br, -CF 3 , -CHF 2 , C 1 -C 6 alkane Oxygen, C 1 -C 6 alkylamine or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 6 is selected from H, -COR 9 , -(CH 2 ) m R 9 , C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 7 is selected from H, F, Cl, C 1 -C 6 alkyl or -(CH 2 ) n R 8 ;
  • R 6 is selected from H, —CH 2 CHF 2 , —CH 2 CF 3 , C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl, or 3-8 membered heterocyclic ring
  • R 8 is selected from CF 3 , CHF 2 , C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocyclic group.
  • R 7 when X is a single bond, R 7 is selected from F or Cl; when X is -NHCO-, R 7 is selected from C 1 -C 6 alkyl.
  • R 7 when X is a single bond, R 7 is selected from F or Cl; or, when X is -NHCO-, R 7 is selected from C 1 -C 6 alkyl; or, when X is -O-, R 7 is selected from C 1 -C 6 alkyl or -(CH 2 ) n R 8 , R 8 is selected from CF 3 , CHF 2 , C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered hetero Ring base.
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, C 1 -C 6 alkyl; R 3 and R 4 are each independently selected from F, -CF 3 or C 1 -C 6 alkoxy; R 5 is selected From H, C 1 -C 6 alkoxy; R 6 is selected from C 1 -C 6 alkyl; R 7 is selected from C 1 -C 6 alkyl or -(CH 2 ) n R 8 ; R 8 is selected from CF 3 ; W is selected from C 1 -C 6 alkyl or -CO-; n is 1 or 2.
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, -CF 3 , -CHF 2 , C 1 -C 6 alkyl or C 3 -C 8 cycloalkyl;
  • R 3 and R 4 are each independently selected from H , F, Cl, Br, -CF 3 , -CHF 2 or C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 5 is selected from H, F, Cl, Br, -CF 3 , -CHF 2 , C 1 -C 6 alkane Oxygen, C 1 -C 6 alkylamine or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 6 is selected from H, -COR 9 , -(CH 2 ) m R 9 , C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 7 is selected from H, F, Cl, C 1 -C 6 alkyl or -(CH 2 ) n R 8 , and R 5
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, -CF 3 , C 1 -C 6 alkyl or C 3 -C 8 cycloalkyl;
  • R 3 and R 4 are each independently selected from H, F,- CF 3 or C 1 -C 6 alkoxy;
  • R 5 is selected from H, Cl, -CF 3 , C 1 -C 6 alkoxy, C 1 -C 6 alkylamine or 3-8 membered heterocyclic group ;
  • R 6 is selected from -(CH 2 ) m R 9 , C 1 -C 6 alkyl or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 7 is selected from C 1 -C 6 alkyl or -(CH 2 ) n R 8 R 8 is selected from CF 3 , CHF 2 or 3-8 membered heterocyclic group;
  • R 9 is selected from CF 3 ;
  • W is selected from a single bond, C 1 -C 6 alkyl or -CO-;
  • R 1 and R 2 are each independently selected from H, C 1 -C 6 alkyl; R 3 and R 4 are each independently selected from H or F; R 5 is selected from H, F or Cl; R 6 is selected from H, -COR 9 , -(CH 2 ) m R 9 , C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl, or 3-8 membered heterocyclic group; R 7 is selected from H, F, or Cl, And R 5 and R 7 are not H at the same time; R 9 is selected from CF 3 , -OH, C 1 -C 6 alkyl, C 2 -C 6 alkenyl, C 3 -C 8 cycloalkyl or 3-8 member Heterocyclic group; W is selected from a single bond, C 1 -C 6 alkyl or -CO-; m is 1, 2 or 3.
  • the 3-8 membered heterocyclic group is selected from one or more N, O, S heteroatoms, substituted or unsubstituted 3-8 membered heterocyclic ring, wherein the substituent on the heterocyclic group is selected from C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkoxy, -OH, -NH 2 , -CO or -NHCO.
  • a polysubstituted anilinopyrimidine derivative selected from the following structural compounds numbered T-1 to T-60, or a pharmaceutically acceptable salt or solvent compound thereof:
  • the "compound” in the present invention includes all stereoisomers, geometric isomers, tautomers and isotopes.
  • the "compound” described in the present invention may be asymmetric, for example, having one or more stereoisomers. Unless otherwise stated, all stereoisomers include, for example, enantiomers and diastereomers.
  • the compounds containing asymmetric carbon atoms in the present invention can be isolated in optically active pure form or racemic form. Optically active pure forms can be resolved from racemic mixtures or synthesized by using chiral raw materials or chiral reagents.
  • the "compound” described in the present invention also includes tautomeric forms.
  • the tautomeric form is derived from the exchange of a single bond with an adjacent double bond and together with the migration of a proton.
  • the solvent compound is selected from hydrate, ethanolate, methanolate, acetoneate, etherate or isopropanolate.
  • the invention also includes all isotope atoms, whether in the intermediate or the final compound.
  • Isotopes of atoms include those with the same atomic number but different mass numbers.
  • hydrogen isotopes include deuterium and tritium.
  • alkyl refers to a linear or branched saturated hydrocarbon group composed of carbon atoms and hydrogen atoms, such as C 1 -C 6 alkyl, including but not limited to methyl, ethyl, propyl (including n-propyl And isopropyl), butyl (containing n-butyl, isobutyl, sec-butyl or tert-butyl), pentyl (containing n-pentyl, isopentyl, neopentyl), n-hexyl, 2- Methylhexyl.
  • cycloalkyl refers to a monocyclic or bicyclic alkyl composed of carbon atoms and hydrogen atoms, such as C 3 -C 8 cycloalkyl, including but not limited to cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl , Cycloheptyl and cyclooctyl.
  • alkoxy refers to a linear or branched alkyl group connected by an oxygen atom, such as C 1 -C 6 alkoxy, including but not limited to methoxy, ethoxy, n-propoxy (including n-propoxy) Propoxy and isopropoxy), butoxy (containing n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy or tert-butoxy), pentoxy (containing n-pentoxy, isopentoxy , Neopentyloxy), n-hexyloxy, 2-methylhexyloxy, etc.
  • alkylamino refers to an open chain alkyl group containing a nitrogen atom, such as C 1 -C 6 alkoxy group, including, but not limited to, methylamino, ethylamino, isopropylamino, dimethylamino, A Ethylethylamino, diethylamino, etc.
  • heterocyclic group refers to a monocyclic or bicyclic alkane containing at least one N, O, or S heteroatom, such as a 3-8 membered heterocyclic group, including but not limited to piperidine, piperazine, tetrahydropyrrole, Tetrahydrofuran and morpholine etc.
  • the present invention also provides a method for preparing the polysubstituted anilinopyrimidine-containing derivative as described above.
  • the steps are as follows: under the protection of nitrogen, intermediate A, intermediate B, alkaline reagent and palladium are added to the reaction solvent respectively Through the coupling reaction of the catalyst, a polysubstituted phenylaminopyrimidine derivative having the structure of formula I is obtained.
  • the reaction formula is as follows:
  • the reaction solvent is one of 1,4-dioxane, DMF or DMSO
  • the alkaline reagent is one of sodium carbonate, sodium bicarbonate, potassium acetate, cesium carbonate or potassium phosphate
  • palladium catalyst It is one of palladium acetate, tris(dibenzylideneacetone) dipalladium or bistriphenylphosphine palladium chloride.
  • the preparation method of intermediate A is: under the protection of nitrogen, dissolve compound C, pinacol biborate, alkali reagent and palladium catalyst in the reaction solvent to obtain compound [C]; after purification [C], in nitrogen Under protection, compound D, coupled with the corresponding base and palladium catalyst, is coupled to obtain intermediate A.
  • the reaction formula is as follows:
  • the reaction solvent is one of 1,4-dioxane, DMF or DMSO
  • the alkaline reagent is one of sodium carbonate, sodium bicarbonate, potassium acetate or potassium phosphate
  • the palladium catalyst is palladium acetate
  • intermediate B compound E is reduced under the action of Fe and ammonium chloride to obtain intermediate B.
  • the reaction formula is as follows:
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compound as described above or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof as an active ingredient, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • the "pharmaceutical composition” described in the present invention refers to a formulation of one or more compounds of the present invention or a salt thereof and a carrier generally used in the art for delivering a biologically active compound to an organism such as a human.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to facilitate the administration and delivery of organisms.
  • pharmaceutically acceptable carrier refers to a substance that is co-administered with the active ingredient and is conducive to the administration of the active ingredient, including but not limited to acceptable use for humans or animals (eg, livestock) approved by the Food and Drug Administration Any glidants, sweeteners, diluents, preservatives, dyes/colorants, flavor enhancers, surfactants, wetting agents, dispersants, disintegrants, suspending agents, stabilizers, isotonic Agent, solvent or emulsifier.
  • glidants including but not limited to calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars and various types of starch, cellulose derivatives, gelatin, vegetable oil, and polyethylene glycol.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules, powders, granules, ointments, emulsions, suspensions, solutions, suppositories, injections, Inhalants, gels, microspheres, aerosols, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be manufactured by methods well known in the art, such as conventional mixing method, dissolution method, granulation method, sugar-coated pill method, grinding method, emulsification method, freeze-drying method and the like.
  • the route of administration of the compound of the present invention or its pharmaceutically acceptable salt or pharmaceutical composition includes, but is not limited to oral, rectal, transmucosal, enteral, or topical, transdermal, inhalation, parenteral , Sublingual, intravaginal, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, and intravenous administration.
  • the preferred route of administration is oral administration.
  • the pharmaceutical composition can be formulated by mixing the active compound with a pharmaceutically acceptable carrier well known in the art.
  • a pharmaceutically acceptable carrier well known in the art.
  • These carriers enable the compounds of the present invention to be formulated into tablets, pills, lozenges, dragees, capsules, liquids, gels, slurries, suspensions, etc. for oral administration to patients.
  • tablets can be obtained by combining the active ingredient with one or more solid carriers, granulating the resulting mixture if necessary, and adding small amounts of excipients if necessary Processed into mixtures or granules to form tablets or cores.
  • the tablet core can be combined with a coating material that is optionally suitable for enteric coating, and processed into a coating formulation form that is more conducive to absorption by an organism (eg, human).
  • the present invention also provides a use of the compound or pharmaceutical composition as described above in the preparation of a medicament for preventing or treating a disease mediated by cyclin-dependent kinase (CDK) activity.
  • CDK cyclin-dependent kinase
  • the pharmaceutical use is for the prevention or treatment of diseases related to changes in the activity of CDK4, CDK6 or CDK9.
  • the pharmaceutical use is for preventing or treating cancer
  • the cancer includes but is not limited to breast cancer, lung cancer, intestinal cancer, small cell lung cancer, melanoma, glioma, lymphoma, prostate cancer, rectal cancer, Pancreatic cancer, liver cancer, stomach cancer, bladder cancer, ovarian cancer, mantle cell lymphoma, acute myeloid leukemia or chronic myeloid leukemia.
  • the polysubstituted anilinopyrimidine derivatives developed by the present invention based on the target science, rationally design the compound structure, and obtain a series of novel structural compounds through group substitution and modification; and combine in vitro and in vivo
  • the evaluation of the experiment optimized the selection of a series of compounds with anti-tumor activity, which can be effective against CDK4, CDK6 and CDK9.
  • Some compounds showed good activity in cancers such as lung cancer, colorectal cancer, and acute myeloid leukemia.
  • the CDK inhibitor that is better than Abemaciclib has great clinical application value for cancer prevention or treatment, and has considerable market potential.
  • Example 1 Compound T-1: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1 -Isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 Synthesis of N’-(4-bromo-2-6-difluorophenyl)-N-isopropylacetamidine (A1-2)
  • the filter cake was poured into 200 mL of water, 100 mL of ethyl acetate was added, and the layers were stirred.
  • the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (100 mL ⁇ 2), and the organic phases were combined
  • the organic phase was washed with saturated brine (100 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a solid, that is, compound A1-2 (12.0 g, 85.7%).
  • Step 4 Synthesis of 1-isopropyl-2-methyl-4-fluoro-6-(2-chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)-1H-benzo[d]imidazole (A1)
  • 2,4-Dichloro5-fluoropyrimidine (1.6g, 9.8mmol) and sodium carbonate (2.2g, 20.4mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL) and added under nitrogen protection Bistriphenylphosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.25mmol), warmed to 80°C, stirred and added dropwise 1,4-Compound A1-4 (2.6g, 8.2mmol) Dioxane solution (20 mL). Maintain the reaction at 80°C for 4 hours until the reaction is complete. The reaction solution is cooled to room temperature and poured into 60 mL of water.
  • Step 1 Synthesis of 2-oxoethyl-4-nitrobenzoyl ethyl ester (B1-2)
  • Step 3 Synthesis of (2-oxoethyl-4-nitrophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B1-4)
  • Step 4 Synthesis of (2-oxoethyl-4-aminophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B1-5)
  • Step 5 Synthesis of 3-(3-butene-1-oxy)-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-aniline (B1)
  • Step 1 (2-Trifluoroethoxy-4-nitrophenyl)-4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B2-2) synthesis
  • 2-Trifluoroethoxy-4-nitro-benzoic acid B2-1 (5g, 18.9mmol) was dissolved in 100mL toluene, 2.9mL dichlorosulfoxide (40mmol) was added, reacted at 100°C for 3 hours, and the solvent was dried. ,Add 20mL of dichloromethane to dissolve. Under -10°C, add dropwise a solution of N-ethylpiperazine (2.3g, 20mmol) and triethylamine (2.0g, 20mmol) in dichloromethane.
  • Step 3 Synthesis of (2-(2,2,2-trifluoroethoxy)-4-aminophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B2-3):
  • Step 4 Synthesis of 3-(3-butene-1-oxy)-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-aniline (B2)
  • Example 3 Compound T-3: N-(3-(2-(4-ethylpiperazin)-1-yl)ethoxy)-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl )Phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 3 ((4-ethylpiperazin-1-yl)(2-(2-(4-ethylpiperazin-1-yl)ethoxy))-4-aminophenyl)methanone (B3 -4) Synthesis:
  • Step 4 Synthesis of 3-(2-(4-ethylpiperazin-1-yl)ethoxy)-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-aniline (B3)
  • Step 1 Synthesis of N'-(4-bromo-2-fluorophenyl)-N-isopropylacetoimide (A4-2)
  • Step 4 Synthesis of 1-isopropyl-2-methyl-6-(2-chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)-1H-benzo[d]imidazole (A4)
  • 2,4-Dichloro5-fluoropyrimidine (1.6g, 9.6mmol), sodium carbonate (2.1g, 20mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), added under nitrogen protection with stirring Bistriphenylphosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol), after heating to 80°C, the 1,4-dichlorobenzene compound A4-4 (2.4g, 8.0mmol) was added dropwise Oxygen hexacyclic solution (20mL), react at 80°C for 4 hours until the reaction is complete.
  • Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 Bistriphenylphosphine palladium dichloride
  • Example 5 Compound T-5: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-4-(4-fluoro-1-isopropyl -2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • 2,4-Dichloropyrimidine (1.43g, 9.6mmol) and sodium carbonate (2.1g, 20mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), and bistriphenylbenzene was added with stirring under nitrogen protection Phosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol), after heating to 80°C, 1,4-dioxane of compound A1-4 (2.6g, 8.0mmol) was added dropwise The solution (20mL) was reacted at 80°C for 4 hours until the reaction was complete.
  • Phosphine palladium dichloride Phosphine palladium dichloride
  • 2,4-Dichloropyrimidine 63, 1.43g, 9.6mmol
  • sodium carbonate 2.1g, 20mmol
  • 1,4-dioxane/water 30mL/6mL
  • the double Triphenylphosphine palladium dichloride Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol
  • 1,4-dioxane of compound A4-4 2.4g, 8.0mmol
  • Six-ring solution (20 mL), react at 80°C for 4 hours until the reaction is complete. After cooling the reaction solution to room temperature, pour into 60 mL of water and extract with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3).
  • Example 7 Compound T-7: N-(2-chloro-3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(4 -Fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 Synthesis of 2-oxoethyl-4-nitro-5-chloro-benzoyl ethyl ester (B7-2)
  • Step 3 Synthesis of (2-oxoethyl-4-nitro-5chloro-phenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B7-4)
  • Step 4 Synthesis of (2-oxoethyl-4-amino-5-chloro-phenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B7-5)
  • Example 8 Compound T-8: N-(4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-3-methoxyphenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro- 1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 3 Synthesis of (2-oxomethyl-4-nitrophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B8-4)
  • Step 4 Synthesis of (2-oxomethyl-4-aminophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B8-5)
  • Example 9 Compound T-9: N-(3-ethoxy-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro- 1-isopropyl-2-(trifluoromethyl)-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 Synthesis of N'-(4-bromo-2,6-difluorophenyl)-2,2,2-trifluoro-N-isopropylacetoimide (A9-2)
  • Step 3 Synthesis of 4-fluoro-1-isopropyl-6-boronic acid pinacol ester-2-(trifluoromethyl)-1H-benzo[d]imidazole (A9-4)
  • Step 4 Synthesis of 1-isopropyl-2-(trifluoromethyl)-6-(2-chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)-1H-benzo[d]imidazole (A9)
  • 2,4-Dichloro5-fluoropyrimidine (1.6g, 9.6mmol), sodium carbonate (2.1g, 20mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), added under nitrogen protection with stirring Bistriphenylphosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol), after the system was heated to 80°C, 1,4-Compound A9-4 (3.0g, 8.0mmol) was added dropwise Dioxane solution (20mL), react at 80°C for 4 hours until the reaction is complete.
  • Example 10 Compound T-10: 4-(1-cyclopropyl-4-fluoro-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-N-(3-ethoxy-4 -((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoropyrimidine-2-amine
  • a white solid that is, the target compound T-10 can be obtained.
  • Step 1 Synthesis of N'-(4-bromo-2,6-difluorophenyl)-N-cyclopropylacetylimidazole (A10-2)
  • the filter cake was poured into 200 mL of water, ethyl acetate (150 mL) was added, mixed well and separated, and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (100 mL ⁇ 2).
  • the organic phases were combined, and the organic phase was washed with saturated brine (100 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated to obtain a solid, that is, compound A10-2 (12.1 g, 87%).
  • Step 3 Synthesis of 4-fluoro-1-cyclopropyl-6-boronic acid pinacol ester-2-methyl-1H-benzo[d]imidazole (A10-4)
  • 2,4-Dichloro5-fluoropyrimidine (1.6g, 9.6mmol), sodium carbonate (2.1g, 20mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), added under nitrogen protection with stirring Bistriphenylphosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol), after heating to 80°C, the 1,4-dichlorobenzene of compound A10-4 (2.5g, 8.0mmol) was added dropwise Oxygen ring solution (20mL). The reaction was carried out at 80°C for 4 hours until the reaction was complete.
  • Example 11 Compound T-11: N-(3-ethoxy-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-4-(4-fluoro-1-isopropyl Yl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-5-methoxypyrimidin-2-amine
  • 2,4-Dichloro-5-methoxypyrimidine (1.7g, 9.6mmol), sodium carbonate (2.1g, 20mmol) dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), nitrogen protection Palladium dichloride bistriphenylphosphine (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 0.17g, 0.24mmol) was added with stirring. After warming to 80°C, 1 of compound A1-4 (2.6g, 8.0mmol) was added dropwise. 4-Dioxane solution (20mL). The reaction was carried out at 80°C for 4 hours until the reaction was complete.
  • Example 12 Compound T-12: N-(3-ethoxy-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-4-(4-fluoro-1-isopropyl Yl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)-5-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 (2-(difluoromethoxy)-5-methoxy-4-nitrophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B13-2) synthesis
  • Example 14 Compound T-14: N-(5-ethoxy-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-2-(trifluoromethyl)phenyl)-5- Fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 Synthesis of ethyl 2-ethoxy-4-nitro-5-(trifluoromethyl)benzoate (B14-2)
  • Step 3 Synthesis of (2-ethoxy-4-nitro-5-(trifluoromethyl)phenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B14-4)
  • Step 4 Synthesis of (4-amino-2-ethoxy-5-(trifluoromethyl)phenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B14-5)
  • Step 5 Synthesis of 5-ethoxy-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-2-(trifluoromethyl)aniline (B14)
  • Example 15 Compound T-15: (2-ethoxy-4-((5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazole- 6-yl)pyrimidin-2-yl)amino)phenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone
  • Example 16 Compound T-16: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl Yl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Example 17 Compound T-17: N-(3-ethoxy-4-((4-(2,2,2-trifluoroethyl)piperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5 -Fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 Synthesis of (2-ethoxy-4-nitrophenyl) (4-(2,2,2-trifluoroethyl)piperazin-1-yl)methanone (B17-2)
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-ethoxyphenyl) (4-(2,2,2-trifluoroethyl)piperazin-1-yl)methanone (B17-3)
  • Example 18 Compound T-18: N-(3-ethoxy-4-(4-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro- 4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Example 19 Compound T-19: N-(3-ethylamino-4-(4-(ethyl-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro -1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 (2-(ethylamine)-4-nitrophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B19-2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-(ethylamino)phenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B19-3)
  • Example 20 Compound T-20: N-(-3-ethylthio-4-(4-(ethyl-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro-4-(4 -Fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 (4-ethylpiperazin-1-yl)(2-(ethylthio)-4-nitrophenyl)methanone (B20-2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-(ethylthio)phenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B20-3)
  • Example 21 Compound T-21: N-(-3-fluoro-4-(4-(ethyl-4-yl)piperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro -1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-fluorophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B21-3)
  • Example 22 Compound T-22: N-(-3-fluoro-4-(4-(ethyl-4-yl)-5-fluoro-piperazin-1-yl)phenyl)-5-fluoro-4 -(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 1 (2,5-difluoro-4-nitrophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B22-2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2,5-difluorophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B22-3)
  • Step 4 Synthesis of (4-amino-5-chloro-2-methoxyphenyl) (4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B23-5)
  • Example 24 Compound T-24: 4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-N-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl Yl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-yl)-5-methoxy-N 2 -toluene-1,2-diamine
  • Step 1 Synthesis of 2-methoxy-4-nitro-5-Boc-methylamino-benzoic acid methyl ester (B24-2)
  • Step 3 Synthesis of (4-ethylpiperazin-1-yl)(2-methoxy-4-nitro-5-Boc-methylamino-phenyl)methanone (B24-4)
  • Step 4 Synthesis of (4-amino-2-methoxy-5-methylaminophenyl) (4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B24-5)
  • Example 25 Compound T-25: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl- 7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • reaction solution After cooling the reaction solution to room temperature, it was poured into 40 mL of water and extracted with ethyl acetate (40 mL ⁇ 3). The organic phases were combined. The organic phase was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and filtered. After concentration, it was separated and purified with a silica gel column to obtain intermediate A26 (1.59 g, 90%).
  • Example 27 Compound T-27: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl- 3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 2 Compound T-27: N-(3-ethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl- 3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 4 Synthesis of 2-methyl-3-isopropenyl-5-(2-chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)-7-fluoro-2H-indazole (A27)
  • Example 28 Compound T-28: N-(3-trifluoroethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl Yl-3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Example 29 Compound T-29: N-(3-trifluoroethoxy-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl Yl-7-trifluoromethyl-2H-indazol-5-yl)pyrimidin-2-amine
  • intermediate A29 The synthetic route and synthetic steps of intermediate A29 are the same as those of intermediate A25, using 3-trifluoromethyl-2-fluoro-benzaldehyde instead of 2,3-difluorobenzaldehyde to obtain 2-methyl-5-(2 -Chloro-5-fluoropyrimidin-4-yl)-7-trifluoromethyl-2H-indazole.
  • 2,4-Dichloro-5-methoxy-pyrimidine (2.4g, 13.5mmol), sodium carbonate (2.4g, 22.5mmol) were dissolved in 1,4-dioxane/water (30mL/6mL), Under nitrogen protection, bistriphenylphosphine palladium dichloride (Pd(PPh 3 ) 2 Cl 2 , 189 mg, 0.27 mmol) was added. After the system was heated to 80° C., compound A25-6 (2.5 g, 9 mmol) was added dropwise. 4-Dioxane solution (10mL). Stir at 80°C for 4 hours until the reaction is complete.
  • reaction solution After cooling the reaction solution to room temperature, pour it into 50 mL of water and extract with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3). Combine the organic phases, wash the organic phase with saturated brine and dry over anhydrous sodium sulfate. Filtration, concentration and separation and purification using a silica gel column to obtain intermediate A30 (2.1 g, 80%).
  • Step 1 Synthesis of 2-oxoethyl-4-nitrobenzoyl ethyl ester (B31-2)
  • Step 3 Synthesis of (2-oxoethyl-4-nitrophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B31-4)
  • Step 4 Synthesis of (2-oxoethyl-4-aminophenyl)-(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B31-5)
  • Step 5 Synthesis of 3-(3-butene-1-oxy)-4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-aniline (B31)
  • Example 33 Compound T-33: N-(3-propionylamino-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl- 7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • the compound B33-3 (2.5g) obtained in the previous step was dissolved in 20mL of dichloromethane, N-ethylpiperazine (1.9g, 16.5mmol) and triethylamine (2g, 20mmol) were added and reacted at room temperature for 3 After the reaction was completed by TLC, the reaction solution was poured into 80 mL of water, extracted with methylene chloride (20 mL ⁇ 2), dried and spin-dried to obtain a yellow oil, which was separated and purified through column to obtain N-(2-(4-ethylpiper Azin-1-yl)methyl-5-nitrophenyl)propionamide B33-4 (2.4 g, 90% (two steps)).
  • Example 35 Compound T-35: N-(3-fluoro-4-(4-H-piperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • the -Boc protecting group is removed by TFA/DCM to obtain a white solid, namely the target compound T-35.
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-fluorophenyl) (4-Bocylpiperazin-1-yl)methanone (B35-3)
  • Compound B35-2 (3.11g, 8.8mmol) was dissolved in 30mL ethanol/water (3:1) solution, added Fe (3.4g, 62mmol) and NH 4 Cl (0.85g, 15.8mmol), and reacted at 80°C for 2 hours To completion, filter the reaction solution, wash the filter residue with ethanol, spin-dry the solvent, add 30mL of water to dissolve, adjust the pH to weakly alkaline with saturated potassium carbonate solution, extract with ethyl acetate (30mL ⁇ 3), combine organic phases, wash with saturated brine , Dry and spin dry to give a yellow oil, compound B35-3 (2.53g, 89%).
  • Example 36 Compound T-36: N-(3-fluoro-4-(4-methylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 1 (2-fluoro-4-nitrophenyl)(4-methylpiperazin-1-yl)methanone (B36-2) synthesis
  • Compound B36-2 (2.35g, 8.8mmol) was dissolved in 30mL ethanol/water (3:1) solution, added Fe (3.4g, 62mmol) and NH 4 Cl (0.85g, 15.8mmol), and reacted at 80°C for 2 hours To completion, filter the reaction solution, wash the filter residue with ethanol, spin-dry the solvent, add 30mL of water to dissolve, adjust the pH to weakly alkaline with saturated potassium carbonate solution, extract with ethyl acetate (30mL ⁇ 3), combine organic phases, wash with saturated brine , Dry and spin to give a yellow oil, compound B36-3 (1.86g, 89%).
  • Example 37 Compound T-37: N-(3-fluoro-4-(4-trifluoroethyl-piperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl -3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 1 (2-fluoro-4-nitrophenyl) (4-(2,2,2-trifluoroethyl)piperazin-1-yl)methanone (B37-2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-fluorophenyl)(N-(-trifluoroethyl)piperazin-1-yl)methanone (B37-3)
  • Example 38 Compound T-38: N-(3-fluoro-4-(4-cyclopropyl-piperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl- 3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 1 (2-fluoro-4-nitrophenyl) (4-cyclopropylpiperazin-1-yl) ketone (B38-2) synthesis
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-fluorophenyl)(4-cyclopropylpiperazin-1-yl)methanone (B38-3)
  • Example 39 Compound T-39: N-(3-fluoro-4-(4-tetrahydropyran-piperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl -3-isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 1 Synthesis of (2-fluoro-4-nitrophenyl)(4-(tetrahydro-2H-furan-4-yl)piperazin-1-yl)methanone (B39-2)
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-fluorophenyl) (4-(tetrahydro-2H-furan-4-yl)piperazin-1-yl)methanone (B39-3)
  • Example 40 Compound T-40: N-(3-chloro-4-(4-methylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Example 41 Compound T-41: N-(4-((4-ethylpiperazin-1-yl)methyl)-3-chlorophenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1- Isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-chlorophenyl)(4-ethylpiperazin-1-yl)methanone (B41-3)
  • Step 2 Synthesis of (4-amino-2-chlorophenyl)(4-(cyclopropylmethyl)piperazin-1-yl)methanone (B42-3)
  • Example 43 Compound T-43: N-(2-chloro-4-((4-methylpiperazin-1-yl)methyl)phenyl)-5-fluoro-4-(4-fluoro-1-iso Propyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-6-yl)pyrimidin-2-amine
  • Example 45 Compound T-45: N-(3-chloro-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)ethyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Example 46 Compound T-46: N-(3-chloro-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)isopropyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3 -Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 1 Synthesis of 1-(4-ethylpiperazin-1-yl)-2-(2-fluoro-4-nitrophenyl)ethanone (B48-2)
  • Step 2 Synthesis of (2-(4-amino-2-fluorophenyl)-1-(4-ethylpiperazin-1-yl)ethanone (B48-3)
  • Step 1 N-(3-fluoro-4-(4-Boc-piperazin-1-yl)formyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3-isopropyl-7 -Fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine (T49-1) synthesis
  • Step 2 N-(3-fluoro-4-(4-H-piperazin-1-yl)formyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3-isopropyl-7 -Fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine (T49)
  • Example 50 Compound T-50: N-(3-fluoro-4-(4-methylpiperazin-1-yl)formyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • intermediate A1 and intermediate B36-3 are the same as those in Example 1 and Example 36, and are not repeated here.
  • Example 51 Compound T-51: N-(3-fluoro-4-(4-ethylpiperazin-1-yl)formyl)phenyl)-5-fluoro-4-(2-methyl-3- Isopropyl-7-fluoro-2H-indazol-5-yl)pyrimidine-2-amine
  • Step 2 Synthesis of methyl 2-fluoro-4-nitrophenyl-4-methylbenzenesulfonate (B52-3)

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Abstract

本发明公开了一种具有通式Ⅰ结构的多取代苯氨基嘧啶衍生物及其制备方法和用途，该类衍生物及其药学上可接受的盐或溶剂化合物是激酶CDK4、CDK6和/或CDK9抑制剂，可更广泛地用于癌症的治疗，具有巨大的临床应用价值。

Description

一种多取代苯氨基嘧啶衍生物及其制备方法和用途 技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种多取代苯氨基嘧啶衍生物及其制备方法和对激酶的抑制作用。具体而言，该衍生物涉及药学上可接受的盐、酯或溶剂化物，系激酶抑制剂，具有治疗与多种癌症的用途，临床应用前景巨大。
背景技术
周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDKs)是一类丝氨酸(Ser)/苏氨酸(Thr)激酶，作为细胞内重要的信号转导分子，和周期素(cyclin)形成的CDK-cyclin复合物，参与细胞的生长、增殖、休眠或者进入凋亡。其中CDK4/6(cyclin-dependent kinase 4/6)通过与细胞周期素D(cyclin D)结合，从而调节细胞由G 1期向S期转换。细胞周期失控是癌症发生、发展的一个重要因素，CDK4/6是细胞周期失控的关键因素。而CDK9与cyclin T结合则被证明与细胞转录调控有关，CDK9的抑制剂被认为可用于多种癌症的治疗。
癌症靶向治疗是一种有效的治疗方案，其特异性强、毒副作用小，基本上不损伤正常组织，可更为有效地为临床治疗方案的选择提供进一步的参考。伴随药理学和分子生物学研究的深入，靶向药物的研究和应用取得了突破性进展，新治疗靶点药物的研发已成为人们关注的热点，引领癌症治疗步入个性化、精准化时代，为更多的癌症患者带来福音。相比许多现有的抗肿瘤药物，开发CDK类小分子抑制剂应用于靶向抗癌治疗具有更多的潜在性优点，能够降低继发的肿瘤发展的风险。
现有已公开的CDK类小分子抑制剂，多为CDK4/6抑制剂，例如已获批上市的CDK4/6抑制剂为：Palbociclib(辉瑞，2015年2月FDA获批，2018年9月CFDA获批)、Ribociclib(诺华，2017年3月FDA获批，尚未在CFDA获批)、Abemaciclib(礼来，2017年10月FDA获批，尚未在CFDA获批)。但，未曾有CDK9抑制剂的获批上市。
经检索，关于Abemaciclib以及围绕Abemaciclib进行结构修饰、改进的专利文献，具体如下：
公开号为WO 2010075074A1(中国同族为CN 102264725A)的专利文献中公开了结构式1的化合物，其结构特点在于：与氨基嘧啶中的氨基相连的，系带取代基R 4的含氮芳杂环。
公开号为CN 105294683A的专利文献中公开了结构式2的化合物，其结构特点在于：与氨基嘧啶中的氨基相连的，系B环，B环为对位取代(二取代)的苯环或含氮芳杂环。
Figure PCTCN2019128325-appb-000001
其中环B选自：
Figure PCTCN2019128325-appb-000002
公开号为WO 2016014904A1(中国同族为CN 106687454A)的专利文献中公开了结构式3和结构式4的化合物，其结构特点在于：与氨基嘧啶中的氨基相连的，系嘧啶。
Figure PCTCN2019128325-appb-000003
前述几篇专利文献中，均涉及CDK4、CDK6的活性抑制效果数据，未曾表明对CDK9存在活性抑制的效果。
此外，还检索到一篇涉及苯氨基嘧啶类衍生物的专利，即公开号为WO 2018019204A1(中国同族为CN 108602802A)的专利文献中公开了结构式5的化合物，其结构特点在于：与氨基嘧啶中的氨基相连的，系带取代基Y和R 2的苯环。
Figure PCTCN2019128325-appb-000004
其中Y为H或选自以下结构：
Figure PCTCN2019128325-appb-000005
Figure PCTCN2019128325-appb-000006
(带不饱和键双键或三键结构)。但，该专利系针对第三代EGFR抑制剂AZD9291的改进，其活性测试数据表明对EGFR及野生型EGFR有效，对CDK4、CDK6或CDK9是否有效无法知悉。
综上所述，如何开发出一种新CDK抑制剂，对CDK4、CDK6或CDK9的活性抑制效果更优于Abemaciclib，甚至在肺癌等特定肿瘤疾病上仍有效，并以此为基础上研制出具有自主知识产权的中国创新药，是本领域技术人员急需解决的技术难题。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于，提供了一种结构全新的多取代苯氨基嘧啶衍生物，或其药学上可接受的盐或溶剂化合物，能够抑制CDK4、CDK6和CDK9激酶活性，具有显著的抗肿瘤活性。
为解决上述技术问题，本发明采取了以下技术方案：
一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，为式Ⅰ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000007
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；Y和Z各自独立地选自N或C，且Y或Z中任一为N，另一则为C；n为0、1或2；m为1、2或3。
优选的，前述式Ⅰ中，当R 6选自H、-CH 2CHF 2、-CH 2CF 3、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基时；R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
更优选的，前述式Ⅰ中，当X是单键时，R 7选自F或Cl；当X是-NHCO-时，R 7选自C 1-C 6烷基。
一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，为式Ⅱ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000008
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；R 6选自H、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；n为0、1或2；m为1、2或3。
优选的，前述式Ⅱ中，当X为单键时，R 7选自F或Cl；或，当X为-NHCO-时，R 7选自C 1-C 6烷基；或，当X为-O-时，R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
更优选的，为式Ⅱa所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000009
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、C 1-C 6烷基；R 3和R 4各自独立地选自F、-CF 3或C 1-C 6烷氧基；R 5选自H、C 1-C 6烷氧基；R 6选自C 1-C 6烷基；R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；R 8选自CF 3；W选自C 1-C 6烷基或-CO-；n为1或2。
一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，为式Ⅲ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000010
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，且R 5和R 7不同时为H；R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；n为0、1或2；m为1、2或3。
优选的，前述式Ⅲ中，当X为单键时，R 7选自H、F或Cl；或，当X为-NH-时，R 7选自C 1-C 6烷基；或，当X为-S-时，R 7选自C 1-C 6烷基；或，当X为-O-时，R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
更优选的，为式Ⅲa所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000011
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；R 3和R 4各自独立地选自H、F、-CF 3或C 1-C 6烷氧基；R 5选自H、Cl、-CF 3、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；R 6选自-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基或3-8元杂环基；R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8； R 8选自CF 3、CHF 2或3-8元杂环基；R 9选自CF 3；W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；n为1或2；m为1、2或3。
更优选的，为式Ⅲb所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000012
其中，R 1和R 2各自独立地选自H、C 1-C 6烷基；R 3和R 4各自独立地选自H或F；R 5选自H、F或Cl；R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；R 7选自H、F或Cl，且R 5和R 7不同时为H；R 9选自CF 3、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；m为1、2或3。
优选的，前述式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅱa、式Ⅲ、式Ⅲa、式Ⅲb中，3-8元杂环基为选自一个或多个N、O、S杂原子的、取代或未取代的3-8元杂环，其中杂环基上的取代基团选自C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、-OH、-NH 2、-CO或-NHCO。
一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，选自编号为T-1～T-60的如下结构的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
Figure PCTCN2019128325-appb-000013
Figure PCTCN2019128325-appb-000014
本发明所述的“化合物”，包括所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。
本发明所述的“化合物”，可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本发明中含有不对称碳原子的化合物，可以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
本发明所述的“化合物”，还包括互变异构体形式。互变异构体形式来源于一个单键与 相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。
本发明所述的“化合物”，其溶剂化合物选自水合物、乙醇合物、甲醇合物、丙酮合物、乙醚合物或异丙醇合物。
本发明还包括所有同位素的原子，无论是在中间体或最后的化合物。同位素的原子包括具有相同的原子数、但不同质量数的。例如，氢的同位素包括氘和氚。
含有前述通式结构的化合物，本文中所用的术语具有如下含义：
术语“烷基”，指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的饱和烃基团，如C 1-C 6烷基，包括但不限于甲基、乙基、丙基(含正丙基和异丙基)、丁基(含正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基)、戊基(含正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基己基。
术语“环烷基”，指由碳原子和氢原子组成单环或双环烷基，如C 3-C 8环烷基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基等。
术语“烷氧基”，指通过氧原子相连的直链或支链烷基，如C 1-C 6烷氧基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基(含正丙氧基和异丙氧基)、丁氧基(含正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基)、戊氧基(含正戊氧基、异戊氧基、新戊氧基)、正己氧基、2-甲基己氧基等。
术语“烷胺基”，指含有氮原子的开链烷基，如C 1-C 6烷胺基，包括但不限于甲胺基、乙胺基、异丙胺基、二甲基胺基、甲基乙基胺基、二乙基胺基等。
术语“杂环基”，指含有至少1个N、O、或S杂原子的单环或双环烷烃，如3-8元杂环基，包括但不限于哌啶，哌嗪，四氢吡咯，四氢呋喃和吗啉等。
本发明还提供了一种如前所述的含多取代苯氨基嘧啶衍生物的制备方法，步骤如下：氮气保护下，在反应溶剂中，分别加入中间体A、中间体B、碱试剂和钯催化剂，通过偶联反应，得到具有式Ⅰ结构的含多取代苯氨基嘧啶衍生物。反应式如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000015
上述反应式中，反应溶剂为1,4-二氧六环、DMF或DMSO中的一种，碱试剂为碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钾、碳酸铯或磷酸钾中的一种；钯催化剂为醋酸钯、三(二亚苄基丙酮)二钯或双三苯基膦氯化钯中的一种。
其中，中间体A的制备方法为：氮气保护下，将化合物C、联硼酸频那醇酯、碱试剂和钯催化剂溶于反应溶剂，反应得到化合物[C]；纯化[C]后，在氮气保护下与化合物D，在相应碱和钯催化剂作用下，偶联得到中间体A。反应式如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000016
上述反应式中，反应溶剂为1,4-二氧六环、DMF或DMSO中的一种，碱试剂为碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钾或磷酸钾中的一种；钯催化剂为醋酸钯、双三苯基膦氯化钯或四三苯基膦钯中的一种。
其中，中间体B的制备方法为：化合物E在Fe和氯化铵作用下还原得到中间体B。反应式如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000017
本发明还提供了一种药物组合物，包含如前所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物作为活性成份，以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明所述的“药物组合物”，指一种或多种本发明的化合物或其盐与在本领域中通常接受的用于将生物活性化合物输送至有机体(例如人)的载体的制剂。药物组合物的目的是有利于对有机体给药输送。
术语“药学上可接受的载体”，指与活性成份共同给药的、且有利于活性成份给药的物质，包括但不限于药监局许可的可接受的用于人或动物(例如家畜)的任何助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、崩解剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。例如，包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
本发明所述的药物组合物，可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等等。
本发明所述的药物组合物，可以采用本领域熟知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的给药途径，包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。优选的给药途径是口服给药。
对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体混合，来配 制该药物组合物。这些载体能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，以用于对患者的口服给药。例如，用于口服给药的药物组合物，可采用如下方式获得片剂：将活性成分与一种或多种固体载体合并，如果需要将所得混合物制粒，并且如果需要加入少量的赋形剂加工成混合物或颗粒，以形成片剂或片芯。片芯可与任选适合肠溶的包衣材料结合，加工成更有利于有机体(例如人)吸收的包衣制剂形式。
本发明还提供了一种如前所述的化合物或药物组合物在制备预防或治疗细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)活性介导的疾病的药物中的用途。
优选的，制药用途为用于预防或治疗与CDK4、CDK6或CDK9活性改变相关的疾病。
更优选的，制药用途为用于预防或治疗癌症，所述的癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌、肠癌、小细胞肺癌、黑色素癌、胶质瘤、淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、套细胞淋巴癌、急性髓性白血病或慢性髓性白血病。
与现有技术相比，本发明研发的多取代苯氨基嘧啶衍生物，基于靶标科学、合理地设计化合物结构，通过基团的取代修饰，获得了一系列结构新颖的化合物；并结合体外、体内实验的评价，优化筛选出一系列具有抗肿瘤活性的化合物，能对CDK4、CDK6和CDK9均有效，部分化合物在肺癌、结直肠癌、急性髓系白血病等癌症中表现出较好的活性，系更优于Abemaciclib的CDK抑制剂，对癌症的预防或治疗具有极大的临床应用价值，市场潜力可观。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1 化合物T-1：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000018
化合物T-1的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000019
中间体A1(100mg,0.31mmol)、中间体B1(87mg,0.34mmol)、碳酸铯(201.9mg,0.62mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos,34.7mg,0.06mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氮气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd 2(dba) 3,54.9mg,0.06mmol)，90℃反应3小时至反应完全，反应液冷却至室温倒入50mL水中，乙酸乙酯萃取三次(30mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥过滤，旋干后固体用硅胶柱纯化(DCM:CH 3OH＝20:1)，得到黄色固体，即目标化合物T-1(140mg,82.2％)。
MS(m/z)：550.4[M+H] +。
1HNMR(400MHz,CDCl 3)δ8.52(d,J＝3.9Hz,1H),8.25(s,1H),8.14(s,1H),8.07-8,05(m,1H),7.86(d,J＝11.7Hz,1H),7.15(d,J＝7.7Hz,1H),6.98(s,1H),4.77-4.70(m,1H),4.21-4.16(m,2H),3.75(s,2H),2.80-2.58(m,13H),1.72(d,J＝6.9Hz,6H),1.44(t,J＝6.7Hz,3H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体A1的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000020
步骤1：N’-(4-溴-2-6-二氟苯基)-N-异丙基乙脒(A1-2)的合成
4-溴-2,6-二氟苯胺(A1-1，10g,48mmol)、异丙基乙酰胺(24.3g，240mmol)、三氯氧磷(POCl 3,14.7g,96mmol)溶于二氧六环(200mL)中，常温搅拌0.5小时后缓慢滴加三乙胺(4.9g,48mmol)的二氧六环溶液(20mL)，滴加完毕后体系移至油浴锅中90℃加热反应3小时至反应完全。将反应液冷却至室温后，过滤，二氧六环洗涤滤饼，滤饼倒入200mL水中，加乙酸乙酯100mL搅拌分层，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到固体，即化合物A1-2(12.0g,85.7％)。
MS(m/z)：292.1[M+H] +。
步骤2：1-异丙基-2-甲基-4-氟-6-溴-1H-苯并[d]咪唑(A1-3)的合成
化合物A1-2(11.6g,40mmol)溶于N,N-二甲基酰胺(DMF,200mL)中，加入叔丁醇钾(22.4g,200mmol)，加热至150℃搅拌至反应完全。将反应液冷却至室温后倒入400mL水中，用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物A1-3(9.5g,88％)。
MS(m/z)：271.1[M+H] +。
步骤3：1-异丙基-2-甲基-4-氟-6-硼酸频那醇酯-1H-苯并[d]咪唑(A1-4)的合成
化合物A1-3(6.90g,25.5mmol)、联硼酸频那醇酯(B 2(pin) 2,9.69g,38.2mmol)、三环 己基膦(PCy 3,1.21g,4.3mmol)、醋酸钾(7.49g,76.4mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)中，氮气保护下，加入醋酸钯(Pd(OAc) 2,0.57g,2.5mmol)，升温至80℃反应2小时至反应完全。将反应液冷却至室温后倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取后合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A1-4(7.2g,89％)。
MS(m/z)：319.2[M+H] +。
步骤4：1-异丙基-2-甲基-4-氟-6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A1)的合成
2,4-二氯5-氟嘧啶(1.6g,9.8mmol)、碳酸钠(2.2g,20.4mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.25mmol),升温至80℃搅拌并滴加化合物A1-4(2.6g,8.2mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)。保持80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取后合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A1(2.0g,76％)。
MS(m/z)：323.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.97(d,J＝3.6Hz,1H),8.16(s,1H),7.62(d,J＝12.0Hz,1H),4.86(p,J＝6.8Hz,1H),2.65(s,3H),1.60(d,J＝6.8Hz,6H).
中间体B1的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000021
步骤1:2-氧乙基-4-硝基苯甲乙酯(B1-2)合成
4-硝基水杨酸B1-1(1.8g,10mmol)和碳酸钾(4.1g,29.5mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(3.8g,25mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取后合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B1-2(2.1g,89％)。
MS(m/z)：240.1[M+H] +。
步骤2：2-氧乙基-4-硝基苯甲酸(B1-3)的合成
化合物B1-2(2.1g,8.8mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)，室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，搅拌下用稀盐酸调节pH＝3-4，析出大量固体，过滤并用10mL水淋洗滤饼，滤饼经真空干燥后得到黄色固体，即化合物B1-3(1.6g,86％)。
MS(m/z)：212.1[M+H] +。
步骤3：(2-氧乙基-4-硝基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B1-4)的合成
化合物B1-3(1.6g,7.6mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，冷却至室温后加入含乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B1-4(1.9g，81.6％)。
MS(m/z)：308.1[M+H] +。
步骤4：(2-氧乙基-4-氨基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B1-5)的合成
化合物B1-4(1.9g,6.2mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.4g,43.3mmol)和NH 4Cl(0.59g,11.1mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液冷却后过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取后合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B1-5(1.5g,87.5％)。
MS(m/z)：278.2[M+H] +。
步骤5：3-(3-丁烯-1-氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B1)的合成
化合物B1-5(1.5g,5.4mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃搅拌并缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，搅拌下缓慢加水(50mL)淬灭反应，再加入5mL 15％NaOH溶液搅拌5分钟后过滤，旋干溶剂，加乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B1(0.6g，42％)。
MS(m/z)：264.2[M+H] +。
实施例2 化合物T-2：N-(3-(2,2,2-三氟乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000022
化合物T-2的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000023
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-2。
MS(m/z)：604.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.37(d,J＝3.8Hz,1H)，8.12(s,1H),7.80(d,J＝11.6Hz,1H),7.56(d,J＝1.7Hz,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),7.25(s,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,1H),4.75-4.71(m,1H),4.46-4.40(m,2H),3.58(s,2H),2.69(s,3H),2.57-2.39(m,10H),1.69(d,J＝7.0Hz,6H),1.08(t,J＝7.1Hz,3H).
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B2的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000024
步骤1:(2-三氟乙氧基-4-硝基苯基)-4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B2-2)合成
2-三氟乙氧基-4-硝基-苯甲酸B2-1(5g,18.9mmol)溶于100mL甲苯中，加入2.9mL二氯亚砜(40mmol)，100℃反应3小时，旋干溶剂，加20mL二氯甲烷溶解，-10℃条件下，滴加入溶有N-乙基哌嗪(2.3g,20mmol)、三乙胺(2.0g,20mmol)的二氯甲烷溶液，滴毕后搅拌1小时，旋干溶剂，EA溶解，饱和碳酸氢钠洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B2-2(3.5g,51％)。
MS(m/z)：362.1[M+H] +。
步骤3：(2-(2,2,2-三氟乙氧基)-4-氨基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B2-3)的合成：
化合物B2-2(3.5g,9.7mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.8g,67.8mmol)和NH 4Cl(0.93g,17.4mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液冷却后过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加50mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B2-3(3.0g,93.5％)。
MS(m/z)：332.2[M+H] +。
步骤4：3-(3-丁烯-1-氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B2)的合成
化合物B2-3(3.0g,9mmol)溶于50mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.86g,22.6mmol)，加料完成后，升温至70℃回流5小时，将反应液置于冰浴中，搅拌下缓慢加水(50mL)淬灭反应，再加5mL 15％NaOH溶液搅拌析出白色固体，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓 缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B2(2.4g，84％)。
MS(m/z)：318.2[M+H] +。
实施例3 化合物T-3：N-(3-(2-(4-乙基哌嗪)-1-基)乙氧基)-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000025
化合物T-3的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000026
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-3。
MS(m/z)：662.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.37(d,J＝3.8Hz,1H),8.12(s,1H),7.85(d,J＝11.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.29-7.28(m,2H),7.01(d,J＝9.9Hz,1H),4.77-4.70(m,1H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(s,2H),2.93-2.70(m,25H),1.70(d,J＝7.0Hz,6H),1.25-1.23(m,6H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B3的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000027
步骤1:(4-乙基哌嗪-1-基)(2-(2-溴乙氧基)-4-硝基苯基)甲酮(B3-2)合成
(4-乙基哌嗪-1-基)(2-羟基-4-硝基苯基)甲酮(B3-1,2.8g,10mmol)、碳酸钾(2.8g,20mmol)溶于50mL DMF中，搅拌下加入1，2-二溴乙烷(2.8g,15mmol)，50℃反应3小时至反应完全，旋干溶剂后加入EA溶解，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色油状物，即化合物B3-2(3.5g,91％)。
MS(m/z)：386.1[M+H] +。
步骤2：(4-乙基哌嗪-1-基)(2-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙氧基))-4-硝基苯基)甲酮(B3-3)的合成：
化合物B3-2(3.5g,9.1mmol)、碳酸钾(1.9g,13.6mmol)溶于50mL DMF中，加入N-乙基哌嗪(1.2g,10.9mmol)，70℃反应至反应完全，旋干溶剂，EA溶解，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩硅胶柱纯化，得到黄色油状物，即化合物B3-3(3.6g,95％)。
MS(m/z)：420.3[M+H] +。
步骤3：((4-乙基哌嗪-1-基)(2-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙氧基))-4-氨基苯基)甲酮(B3-4)的合成：
化合物B3-3(3.4g,8.1mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.2g,56.7mmol)和NH 4Cl(0.78g,14.6mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加50mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B3-4(2.5g,79.2％)。
MS(m/z)：390.4[M+H] +。
步骤4：3-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B3)的合成
化合物B3-4(2.5g,6.4mmol)溶于30mL无水THF中，-10℃搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.57g,15.1mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，搅拌下缓慢加水(50mL)淬灭反应，再加5mL 15％NaOH溶液搅拌析出白色固体，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即化合物B3(1.8g，75％)。
MS(m/z)：376.3[M+H] +。
实施例4 化合物T-4：N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000028
化合物T-4的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000029
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-4。
MS(m/z):532.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.48(d,J＝11.8Hz,1H),8.20(s,1H),8.04-8,00(d,J＝7.4Hz,1H),7.82(d,J＝11.4Hz,1H),7.11(d,J＝7.4Hz,1H),6.84(s,1H),6.8(s,1H)4.74-4.66(m,1H),4.24-4.20(m,2H),3.75(s,2H),2.64-2.58(m,13H),162(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A4的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000030
步骤1：N'-(4-溴-2-氟苯基)-N-异丙基乙酰亚胺(A4-2)的合成
4-溴-2-氟苯胺A4-1(9.1g,48mmol)、异丙基乙酰胺(24.2g，240mmol)、三氯氧磷(POCl 3,14.7g,96mmol)溶于二氧六环(200mL)中，常温搅拌0.5小时后滴加三乙胺(4.9g,48mmol)的二氧六环溶液(20mL)，滴毕后体系加热至90℃反应3小时至反应完全。将反应液冷却至室温后过滤，二氧六环洗涤滤饼，滤饼倒入200mL水中，加乙酸乙酯(100mL)充分搅拌分层，水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到固体，即化合物A4-2(11.3g,86.4％)。
MS(m/z)：273.1[M+H] +。
步骤2：6-溴-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(A4-3)的合成
化合物A4-2(11.3g,41.4mmol)溶于N,N-二甲基酰胺(DMF,200mL)中，加入叔丁醇钾(22.4g,200mmol)，加热至150℃，反应16小时至反应完全。将反应液冷却至室温后倒入400mL水中，乙酸乙酯(100mL×3)萃取后合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物A4-3(8.9g,85％)。
MS(m/z)：253.0[M+H] +。
步骤3：1-异丙基-2-甲基-6-硼酸频那醇酯-1H-苯并[d]咪唑(A4-4)的合成
化合物A4-3(6.30g,25mmol)、联硼酸频那醇酯(B 2(pin) 2,9.68g,38.1mmol)、三环己 基膦(PCy 3,1.21g,4.3mmol)、醋酸钾(7.48g,76.2mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)中，氮气保护下加入醋酸钯(Pd(OAc) 2,0.56g,2.5mmol)，升温至80℃反应2小时至反应完全。将反应液冷却至室温后倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A4-4(6.68g,89.4％)。
MS(m/z)：301.2[M+H] +。
步骤4：1-异丙基-2-甲基-6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A4)的合成
2,4-二氯5-氟嘧啶(1.6g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A4-4(2.4g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)，80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A4(1.7g,70％)。
MS(m/z)：305.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1中B1合成方法，此处不赘述。
实施例5 化合物T-5：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000031
化合物T-5的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000032
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-5。
MS(m/z)：532.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(s,1H),8.24(s,1H),8.08(d,J＝11.6Hz，1H),8.04-8,00(d,J＝10.4Hz，1H),7.11(d,J＝7.2Hz,1H),6.84(d,J＝7.0Hz,1H),6.8(s,1H)4.64-4.70(m,1H),4.34-4.28(m,2H),3.75(s,2H),2.88-2.80(m,13H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A5的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000033
步骤1：1-异丙基-2-甲基-4-氟-6-(2-氯-嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A5)的合成
2,4-二氯嘧啶(1.43g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A1-4(2.6g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)，80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A5(1.89g,76％)。
MS(m/z)：305.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1中B1合成方法，此处不赘述。
实施例6 化合物T-6：N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-(1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000034
化合物T-6的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000035
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-6。
MS(m/z)：514.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(d,J＝12.8Hz,1H),8.15(d,J＝10.8Hz,1H),8.02(d,J＝11.6Hz,1H),7.71(s,J＝7.8Hz,1H),7.26(s,1H),7.22(d,J＝7.6Hz,1H),6.82(d,J＝0.8Hz,1H),6.56(s,1H),4.74-4.68(m,1H),4.20-4.14(m,2H),3.75(s,2H),2.80-2.74(m,13H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A6的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000036
步骤1：1-异丙基-2-甲基-6-(2-氯-嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A6)的合成
2,4-二氯嘧啶(63，1.43g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A4-4(2.4g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)，80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A6(1.7g,74％)。
MS(m/z)：287.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1中B1合成方法，此处不赘述。
实施例7 化合物T-7：N-(2-氯-3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000037
化合物T-7的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000038
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-7。
MS(m/z)：584.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(d,J＝3.8Hz,1H),8.12(s,1H),7.85(d,J＝11.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.29-7.28(m,2H),7.01(d,J＝9.9Hz,1H),4.77-4.70(m,1H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(s,2H),2.93-2.70(m,25H),1.70(d,J＝7.0Hz,6H),1.25-1.23(m,6H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B7的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000039
步骤1:2-氧乙基-4-硝基-5-氯-苯甲乙酯(B7-2)合成
4-硝基-5-氯-水杨酸B7-1(2.3g，10.6mmol)和碳酸钾(4.4g,31.7mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(4.1g,26.4mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B7-2(2.4g,82.9％)。
MS(m/z)：274.1[M+H] +。
步骤2：2-氧乙基-4-硝基-5-氯-苯甲酸(B7-3)的合成
化合物B7-2(2.4g,8.8mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液旋干，用20mL水溶解，稀盐酸调节pH至3-4，过滤得到黄色固体，即化合物B7-3(1.85g,86％)。
MS(m/z)：246.1[M+H] +。
步骤3：(2-氧乙基-4-硝基-5氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B7-4)的合成
化合物B7-3(1.85g,7.5mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.25g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取后干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B7-4(2.1g，81.6％)。
MS(m/z)：342.1[M+H] +。
步骤4：(2-氧乙基-4-氨基-5-氯-苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B7-5)的合成
化合物B7-4(2.1g,6.1mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.4g,43mmol)和NH 4Cl(0.59g,11.1mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B7-5(1.7g,88.7％)。
MS(m/z)：312.2[M+H] +。
步骤5：2-氯-3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B7)的合成
化合物B7-5(1.7g,5.5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.6mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，搅拌下缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱 分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B7(0.67g，41.3％)。
MS(m/z)：298.2[M+H] +。
实施例8 化合物T-8：N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-甲氧基苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000040
化合物T-8的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000041
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-8。
MS(m/z)：536.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),7.92(s,1H),7.34(s,1H),7.22(d,J＝11.8Hz,1H),6.84(s,1H),6.68(d,J＝7.8Hz,1H),4.70-4.64(m,1H),4.22-4.16(s,3H),,2.56-2.50(m,13H),162(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B8的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000042
步骤1:2-氧甲基-4-硝基苯甲酸甲酯(B8-2)合成
4-硝基水杨酸B8-1(1.8g,9.8mmol)和碳酸钾(4.1g,29.5mmol)溶于20mL DMF中， 搅拌10min后缓慢加入碘甲烷(3.49g,24.6mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B8-2(2.03g,97.8％)。
MS(m/z)：212.1[M+H] +。
步骤2：2-氧甲基-4-硝基苯甲酸(B8-3)的合成
化合物B8-2(2.03g,9mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)，室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，稀盐酸调节pH至3-4析出大量固体，过滤得到黄色固体，即化合物B8-3(1.5g,79.2％)。
MS(m/z)：198.1[M+H] +。
步骤3：(2-氧甲基-4-硝基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B8-4)的合成
化合物B8-3(1.5g,7.6mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.25g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.96g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取后干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B8-4(1.79g，80％)。
MS(m/z)：294.1[M+H] +。
步骤4：(2-氧甲基-4-氨基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B8-5)的合成
化合物B8-4(1.79g,6.1mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.4g,42.7mmol)和NH 4Cl(0.59g,10.98mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B8-5(1.45g,90％)。
MS(m/z)：264.2[M+H] +。
步骤5：(3-甲氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B8)的合成
化合物B8-5(1.45g,5.5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.8mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，搅拌下缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤后浓缩除溶剂，加入乙酸乙酯(40mL)搅拌分层，有机相用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B8(0.55g，40％)。
MS(m/z)：250.2[M+H] +。
实施例9 化合物T-9：N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000043
化合物T-9的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000044
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-9。
MS(m/z)：604.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(s,1H),7.95(s,1H),7.69(s,1H),7.37(d,J＝11.8Hz 1H),7.22(s,1H),6.86(d,J＝7.8Hz,1H),4.70-4.66(m,2H),4.16-4.20(s,3H),,2.56-2.50(m,10H),162(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A9的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000045
步骤1：N'-(4-溴-2,6-二氟苯基)-2,2,2-三氟-N-异丙基乙酰亚胺(A9-2)的合成
4-溴-2,6-二氟苯胺A1-1(10g,48mmol)、2,2,2-三氟-N-异丙基乙酰胺(37.3g，240mmol)、三氯氧磷(POCl 3,14.7g,96mmol)溶于二氧六环(200mL)中，常温搅拌0.5小时后滴加三乙胺(4.9g,48mmol)的二氧六环溶液(20mL)，滴毕体系加热至90℃反应3小时至反应完全，将反应液冷却至室温后过滤，二氧六环洗涤滤饼，滤饼倒入200mL水中，加乙酸乙酯(100mL)充分搅拌分层，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到固体，即化合物A9-2(14.1g,85％)。
MS(m/z)：345.0[M+H] +。
步骤2：6-溴-4-氟-1-异丙基-2-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑(A9-3)的合成
化合物A9-2(13.8g,40mmol)溶于N,N-二甲基酰胺(DMF,200mL)中，加入叔丁醇钾(22.4g,200mmol)，加热至150℃搅拌16小时至反应完全，将反应液冷却至室温后倒入400mL水中，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后得到化合物A9-3(11.2g,86％)。
MS(m/z)：325.0[M+H] +。
步骤3：4-氟-1-异丙基-6-硼酸频那醇酯-2-(三氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑(A9-4)的合成
化合物A9-3(8.1g,25mmol)、联硼酸频那醇酯(B 2(pin) 2,9.68g,38.1mmol)、三环己基膦(PCy 3,1.21g,4.3mmol)、醋酸钾(7.48g,76.2mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)中，氮气保护搅拌下加入醋酸钯(Pd(OAc) 2,0.56g,2.5mmol)，升温至80℃反应2小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A9-4(7.4g,80％)。
MS(m/z)：373.1[M+H] +。
步骤4：1-异丙基-2-(三氟甲基)-6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A9)的合成
2,4-二氯5-氟嘧啶(1.6g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，体系升温至80℃后滴加化合物A9-4(3.0g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)，80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A9(1.81g,60％)。
MS(m/z)：377.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例10 化合物T-10：4-(1-环丙基-4-氟-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000046
化合物T-10的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000047
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-10。
MS(m/z)：548.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H),8.00(s,1H),7.75(s,1H),7.34(d,J＝11.8Hz,1H),7.23(s,1H),6.97(d,J＝7.8Hz,1H),4.70-4.64(m,2H),4.20-4.16(s,2H),,2.70-2.64(m,14H),1.41(t,J＝6.8Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)，0.88-0.83(m,4H)。
中间体A10的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000048
步骤1：N'-(4-溴-2,6-二氟苯基)-N-环丙基乙酰咪唑(A10-2)的合成
4-溴-2,6-二氟苯胺A1-1(10g,48mmol)、N-环丙酰胺(23.8g，240mmol)、三氯氧磷(POCl 3,14.7g,96mmol)溶于二氧六环(200mL)中，常温搅拌0.5小时后滴加三乙胺(4.9g,48mmol)的二氧六环溶液(20mL)，加毕体系加热至90℃反应3小时至反应完全。将反应液冷却至室温后过滤，二氧六环洗涤滤饼，滤饼倒入200mL水中，加乙酸乙酯(150mL)，充分混合后分液，水相用乙酸乙酯(100mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到固体，即化合物A10-2(12.1g,87％)。
MS(m/z)：289.0[M+H] +。
步骤2：6-溴-1-环丙基-4-氟-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(A10-3)的合成
化合物A10-2(11.6g,40mmol)溶于N,N-二甲基酰胺(DMF,200mL)中，加入叔丁醇钾(22.4g,200mmol)，加热至150℃反应16小时至完全。将反应液冷却至室温后倒入400mL水中，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物A10-3(8.6g,80％)。
MS(m/z)：269.0[M+H] +。
步骤3：4-氟-1-环丙基-6-硼酸频那醇酯-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(A10-4)的合成
化合物A10-3(6.7g,25mmol)、联硼酸频那醇酯(B 2(pin) 2,9.68g,38.1mmol)、三环己基膦(PCy 3,1.21g,4.3mmol)、醋酸钾(7.48g,76.2mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)中，氮气保护搅拌下加入醋酸钯(Pd(OAc) 2,0.56g,2.5mmol)，升温至80℃反应2小时至反应完全。将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A10-4(6.3g,80％)。
MS(m/z)：317.2[M+H] +。
步骤4：1-环丙基-2-甲基-6-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-1H-苯并[d]咪唑(A10)的合成
2,4-二氯5-氟嘧啶(1.6g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A10-4(2.5g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)。80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A10(1.4g,55％)。
MS(m/z)：321.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例11 化合物T-11：N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-5-甲氧基嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000049
化合物T-11的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000050
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-11。
MS(m/z)：562.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),7.81(s,1H),7.23(s,1H),7.11(d,J＝11.8Hz,1H),6.98(s,1H),6.72(d,J＝7.6,Hz 1H),4.60-4.54(m,1H),4.06-4.12(s,3H),3.78(s,3H),2.64-2.52(m,13H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A11的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000051
步骤1：6-(2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(A11)的合成
2,4-二氯-5-甲氧基嘧啶(1.7g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A1-4(2.6g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)。80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A11(1.71g,70％)。
MS(m/z)：335.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例12 化合物T-12：N-(3-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000052
化合物T-12的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000053
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-12。
MS(m/z)：600.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.80(s,1H),7.92(s,1H),7.58(s,1H),7.42(d,J＝11.6Hz,1H),6.84(s,1H),6.68(d,J＝7.6Hz,1H),4.70-4.64(m,1H),4.20-4.16(s,3H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.41(t,J＝6.6Hz,3H),1.11(t,J＝7.2Hz,3H).
中间体A12的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000054
步骤1：6-(2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑(A12)的合成
2,4-二氯-5-(三氟甲基)嘧啶(2.1g,9.6mmol)、碳酸钠(2.1g,20mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,0.17g,0.24mmol)，升温至80℃后滴加化合物A1-4(2.6g,8.0mmol)的1,4-二氧六环溶液(20mL)。80℃反应4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入60mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝300:1-200:1)，得到中间体A12(2.17g,73％)。
MS(m/z)：373.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例13 化合物T-13：N-(5-(二氟甲氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000055
化合物T-13的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000056
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-13。
MS(m/z)：602.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝3.7Hz,1H)，8.12(s,1H),7.80-7.77(m,2H),7.40-7.34(m,3H),6.79(s,1H),4.76-4.73(m,1H),3.65(s,2H),2.90-2.70(m,13H),1.70(d,J＝7.0Hz,6H),1.39(m,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B13的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000057
步骤1:(2-(二氟甲氧基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B13-2) 合成
化合物B13-1(2g,7.6mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取并干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B13-2(2.24g，82％)。
MS(m/z)：360.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-(二氟甲氧基)-5-甲氧基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B13-3)的合成
化合物B13-2(2.24g,6.2mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B13-3(1.84g,90％)。
MS(m/z)：330.2[M+H] +。
步骤3：5-(二氟甲氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苯胺(B13)的合成
化合物B13-3(1.84g,5.58mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，加乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B13(0.88g，50％)。
MS(m/z)：316.2[M+H] +。
实施例14 化合物T-14：N-(5-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000058
化合物T-14的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000059
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-14。
MS(m/z)：618.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H)，7.89(s,1H),7.58(s,1H),7.31(s,1H),6.82(s,1H),4.77-4.70(m,1H),4.21-4.16(m,2H),3.75(s,2H),2.80-2.58(m,13H),1.72(d,J＝6.8Hz,6H),1.44(t,J＝6.6Hz,3H),1.16(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B14的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000060
步骤1:2-乙氧基-4-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸乙酯(B14-2)合成
化合物B14-1(2.5g，10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(3.9g,25mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B14-2(2.7g,88％)。
MS(m/z)：308.1[M+H] +。
步骤2：2-乙氧基-4-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(B14-3)的合成
化合物B14-2(2.7g,8.8mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)后室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，搅拌下用稀盐酸调节pH至3-4，析出大量固体，过滤并用水淋洗滤饼，干燥得到黄色固体，即化合物B14-3(1.97g,80％)。
MS(m/z)：280.1[M+H] +。
步骤3：(2-乙氧基-4-硝基-5-(三氟甲基)苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B14-4)的合成
化合物B14-3(1.97g,7.0mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B14-4(2.13g，81％)。
MS(m/z)：376.2[M+H] +。
步骤4：(4-氨基-2-乙氧基-5-(三氟甲基)苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B14-5)的合成
化合物B14-4(2.13g,5.67mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL ×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B14-5(1.66g,85％)。
MS(m/z)：346.2[M+H] +。
步骤5：5-乙氧基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-2-(三氟甲基)苯胺(B14)的合成
化合物B14-5(1.66g,4.82mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B14(0.74g，46％)。
MS(m/z)：332.2[M+H] +。
实施例15 化合物T-15：(2-乙氧基-4-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮
Figure PCTCN2019128325-appb-000061
化合物T-15的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000062
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-15。
MS(m/z)：564.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H)，7.91(s,1H),7.76(s,1H),7.62(d,J＝11.8Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),6.98(s,1H),4.77-4.70(m,1H),4.21-4.16(m,2H),3.75(s,2H),3.66-3.61(m,4H),2.80-2.58(m,9H),1.72(d,J＝6.8Hz,6H),1.44(t,J＝6.6Hz,3H),1.16(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1和中间体B1-5的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例16 化合物T-16：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000063
化合物T-16的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000064
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-16。
MS(m/z)：536.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(s,1H)，7.91(s,1H),7.76(s,1H),7.67(d,J＝11.6Hz,1H),7.35(d,J＝7.6Hz,1H),6.98(s,1H),4.77-4.70(m,1H),4.28-4.22(m,2H),3.75(m,2H),2.80-2.58(m,11H),1.72(d,J＝6.8Hz,6H),1.44(t,J＝6.6Hz,3H),1.16(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B16的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000065
步骤1:1-溴-2-乙氧基-4-硝基苯(B16-2)合成
化合物B16-1(2.2g,10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(3.9g,25mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B16-2(2.19g,89％)。
MS(m/z)：246.0[M+H] +。
步骤2：1-(2-乙氧基-4-硝基苯基)-4-乙基哌嗪(B16-3)的合成
化合物B16-2(2.19g,8.9mmol)溶于20ml DMF中，加入N-乙基哌嗪(1.15g,10mmol)并加入三乙胺(1.52g,15mmol)，在65℃条件下反应8小时至反应完全后向反应液中缓慢加入50ml水，加入乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到褐色固体B16-3(1.68g,66.0％)
MS(m/z)：280.2[M+H] +。
步骤3：3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯胺(B16)的合成
化合物B16-3(1.68g,6.0mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B16(1.21g,81％)。
MS(m/z)：250.2[M+H] +。
实施例17 化合物T-17：N-(3-乙氧基-4-((4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000066
化合物T-17的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000067
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-17。
MS(m/z)：604.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝3.9Hz,1H)，8.25(s,1H),8.14(s,1H),8.07-8,05(m,1H),7.86(d,J＝11.6Hz,1H),7.15(d,J＝7.6Hz,1H),6.98(s,1H),4.77-4.70(m,1H),4.21-4.16(m,2H),3.75(s,2H),3.00(s,2H),2.80-2.58(m,11H),1.72(d,J＝6.8Hz,6H),1.44(t,J＝6.6Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B17的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000068
步骤1：(2-乙氧基-4-硝基苯基)(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B17-2)的合成
化合物B1-3(1.6g,7.6mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-三氟乙基哌嗪(1.4g,8.3mmol)的DMF溶液(5mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B17-2(2.2g，80％)。
MS(m/z)：362.2[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-乙氧基苯基)(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B17-3)的合成
化合物B17-2(2.2g,6.1mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B17-3(1.79g,90％)。
MS(m/z)：332.2[M+H] +。
步骤3：3-乙氧基-4-((4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B17)的合成
化合物B17-3(1.79g,5.4mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B17(0.6g，35％)。
MS(m/z)：318.2[M+H] +。
实施例18 化合物T-18：N-(3-乙氧基-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000069
化合物T-18的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000070
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-18。
MS(m/z)：592.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),7.98(s,1H),7.71(s,1H),7.37(d,J＝11.6, 1H),6.81(d,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),4.16(s,1H),3.78-3.72(m,2H),3.72-3.64(m,4H),2.89-2.84(m,11H),2.78-2.72(m,1H),1.72(d,J＝6.8Hz,4H),1.44(t,J＝6.6Hz,6H),1.16(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B18的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000071
步骤1:1-溴-2-乙氧基-4-硝基苯(B18-2)合成
化合物B18-1(2.2g,10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(3.9g,25mmol)，40℃反应8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B18-2(2.19g,89％)。
MS(m/z)：246.0[M+H] +。
步骤2：1-(2-乙氧基-4-硝基苯基)-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪(B18-3)的合成
化合物B18-2(2.19g,8.9mmol)溶于20ml DMF中，加入N-(4-四氢吡喃)哌嗪(3.4g,20mmol)，并加入三乙胺(1.52g,15mmol)，在65℃条件下反应10小时至反应完全后向反应液中缓慢加入50ml水，加入乙酸乙酯(20ml×3)萃取，合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到褐色固体B18-3(1.79g,60.0％)
MS(m/z)：336.2[M+H] +。
步骤3：3-乙氧基-4-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯胺(B18)的合成
化合物B18-3(1.79g,5.34mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B18(1.25g,77％)。
MS(m/z)：306.2[M+H] +。
实施例19 化合物T-19：N-(3-乙氨基-4-(4-(乙基-4-基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000072
化合物T-19的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000073
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-19。
MS(m/z)：549.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B19的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000074
步骤1:(2-(乙基胺)-4-硝基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B19-2)合成
2-(乙胺基)-4-硝基苯甲酸B19-1(2.1g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B19-2(2.7g，88％)。
MS(m/z)：307.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-(乙胺基)苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B19-3)的合成
化合物B19-2(2.7g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B19-3(2.2g,90％)。
MS(m/z)：277.2[M+H] +。
步骤3：N-乙基-6-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯-1,3-二胺(B19)的合成
化合物B19-3(1.4g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B19(0.59g，45％)。
MS(m/z)：263.2[M+H] +。
实施例20 化合物T-20：N-(-3-乙硫基-4-(4-(乙基-4-基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000075
化合物T-20的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000076
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-20。
MS(m/z)：566.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B20的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000077
步骤1:(4-乙基哌嗪-1-基)(2-(乙硫基)-4-硝基苯基)甲酮(B20-2)合成
2-(乙硫基)-4-硝基苯甲酸B20-1(2.27g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B20-2(2.9g，90％)。
MS(m/z)：324.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-(乙硫基)苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B20-3)的合成
化合物B20-2(2.84g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B20-3(2.3g,89％)。
MS(m/z)：294.2[M+H] +。
步骤3：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(乙硫基)胺(B20)的合成
化合物B20-3(1.47g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于 冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B20(0.63g，45％)。
MS(m/z)：280.2[M+H] +。
实施例21 化合物T-21：N-(-3-氟-4-(4-(乙基-4-基)哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000078
化合物T-21的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000079
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-21。
MS(m/z)：524.3[M+H] +。
1HNMR(400MHz,CDCl3):8.37(d,J＝3.8Hz,1H)，8.12(s,1H),7.85(d,J＝11.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.29-7.28(m,2H),7.01(d,J＝9.9Hz,1H),4.77-4.70(m,1H),4.20(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(s,2H),2.93-2.70(m,25H),1.70(d,J＝7.0Hz,6H),1.24-1.22(m,6H).
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B21的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000080
步骤1:(4-乙基哌嗪-1-基)(2-氟-4-硝基苯基)甲酮(B21-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B21-1(1.85g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B21-2(2.53g，90％)。
MS(m/z)：282.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B21-3)的合成
化合物B21-2(2.47g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B21-3(2.3g,89％)。
MS(m/z)：252.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-氟苯胺(B21)的合成
化合物B21-3(1.26g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B21(0.53g，45％)。
MS(m/z)：238.2[M+H] +。
实施例22 化合物T-22：N-(-3-氟-4-(4-(乙基-4-基)-5-氟-哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000081
化合物T-22的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000082
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-22。
MS(m/z)：542.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B22的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000083
步骤1:(2,5-二氟-4-硝基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B22-2)合成
2,5-二氟-4-硝基苯甲酸B22-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B22-2(2.75g，92％)。
MS(m/z)：300.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2,5-二氟苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B22-3)的合成
化合物B22-2(2.63g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B22-3(2.1g,89％)。
MS(m/z)：270.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-2,5-二氟苯胺(B22)的合成
化合物B22-3(1.35g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B22(0.61g，48％)。
MS(m/z)：256.2[M+H] +。
实施例23 化合物T-23：N-(2-氯-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-5-甲氧基苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000084
化合物T-23的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000085
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-23。
MS(m/z)：570.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B23的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000086
步骤1:5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯甲酸乙酯(B23-2)合成
5-氯-2-羟基-4-硝基苯甲酸B23-1(2.2g,10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘甲烷(3.55g,25mmol)，40℃搅拌8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B23-2(2.34g,90％)。
MS(m/z)：246.0[M+H] +。
步骤2：5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯甲酸(B23-3)的合成
化合物B23-2(2.34g,9mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)后室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，用稀盐酸调节pH至3-4，析出大量固体，过滤并用水淋洗滤饼，干燥后得到黄色固体，即化合物B23-3(1.83g,88％)。
MS(m/z)：232.0[M+H] +。
步骤3：(5-氯-2-甲氧基-4-硝基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B23-4)的合成
化合物B23-3(1.83g,7.9mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B23-4(1.95g，75％)。
MS(m/z)：328.1[M+H] +。
步骤4：(4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B23-5)的合成
化合物B23-4(1.95g,5.9mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，用饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B23-5(1.59g,90％)。
MS(m/z)：298.1[M+H] +。
步骤5：2-氯-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-5-甲氧基苯胺(B23)的合成
化合物B23-5(1.59g,5.35mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液 置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B23(0.83g，55％)。
MS(m/z)：284.2[M+H] +。
实施例24 化合物T-24：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-N-(5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)-5-甲氧基-N 2-甲苯-1,2-二胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000087
化合物T-24的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000088
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-24。
MS(m/z)：565.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B24的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000089
步骤1:2-甲氧基-4-硝基-5-Boc-甲胺基-苯甲酸甲酯(B24-2)合成
将化合物B24-1(3.1g,10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘甲烷(3.55g,25mmol)，40℃搅拌8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化 合物B24-2(3.02g,89％)。
MS(m/z)：341.1[M+H] +。
步骤2：2-甲氧基-4-硝基-5-Boc-甲胺基-苯甲酸(B24-3)的合成
化合物B24-2(3g,8.9mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)后室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，稀盐酸调节pH至3-4，析出大量固体，过滤并用水淋洗滤饼，干燥得到黄色固体，即化合物B24-3(2.45g,85％)。
MS(m/z)：327.1[M+H] +。
步骤3：(4-乙基哌嗪-1-基)(2-甲氧基-4-硝基-5-Boc-甲胺基-苯基)甲酮(B24-4)的合成
化合物B24-3(2.45g,7.57mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含N-乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B24-4(2.55g，80％)。
MS(m/z)：423.2[M+H] +。
步骤4：(4-氨基-2-甲氧基-5-甲胺基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B24-5)的合成
化合物B24-4(2.55g,6.05mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B24-5(1.59g,90％)。
MS(m/z)：293.2[M+H] +。
步骤5：5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲氧基-N-甲苯-1,2-二胺(B24)的合成
化合物B24-5(1.59g,5.45mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:CH 3OH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B24(0.68g，45％)。
MS(m/z)：279.2[M+H] +。
实施例25 化合物T-25：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000090
化合物T-25的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000091
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-25。
MS(m/z)：508.3[M+H] +。
中间体A25的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000092
步骤1：2,3-二氟-5-溴苯甲醛(A25-2)的合成
2,3-二氟-苯甲醛A25-1(14.2g,100mmol)溶于54mL浓硫酸(18.4mol/L,1mol)中，分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(NBS,21.3g,120mmol)，室温搅拌15小时至反应完全，将反应液倒入200mL水中，石油醚(50mL×3)萃取，合并有机相，饱和碳酸氢钠，饱和食盐水各洗涤一次，干燥浓缩过柱，得到无色液体，即化合物A25-2(10.3g,47％)。
MS(m/z)：221.0[M+H] +。
步骤2：(E)-5-溴-2,3-二氟苯甲醛-氧-甲基肟(A25-3)的合成
化合物A25-2(7.2g，32mmol)、甲氧基胺(3.2g,38mmol)、碳酸钾(5.3g,38mmol)溶于150mL THF中，40℃搅拌4小时至反应完全。旋干溶剂，得到白色固体，即化合物A25-3不纯化，直接用于下一步。
步骤3：5-溴-7-氟-2H-吲唑(A25-4)的合成
化合物A25-3(7.0g,28mmol)、水合肼(10.1g,2mol)溶于250mL二氧六环中，90℃搅拌16小时至反应完全，旋干溶剂，得到白色固体，DCM洗涤，得到白色固体，即化合物A25-4(3.7g,62％)。
MS(m/z)：215.0[M+H] +。
步骤4：2-甲基-5-溴-7-氟-2H-吲唑(A25-5)的合成
化合物A25-4(3.2g,15mmol)、碳酸钾(2.5g,18mmol)溶于50mL DMF中，搅拌下加入碘甲烷(2.5g,18mmol)，室温反应5小时至完全。将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯(80mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化得到黄色固体，即化合物A25-5(2.2g,64％)。
MS(m/z)：229.2[M+H] +。
步骤5：2-甲基-5-硼酸频那醇酯-7-氟2H-吲唑(A25-6)的合成
化合物A25-5(2.2g,9.6mmol)、联硼酸频那醇酯(3.7g,14.4mmol)、三环己基膦(0.54g,1.92mmol)、醋酸钾(1.4g,14.4mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，氮气保护下加入醋酸钯(Pd(AcO) 2,224mg,1mmol)，升温至80℃搅拌2小时至完全。将反应液冷却至室温后，倒入50mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A25-6(2.5g,94％)。
MS(m/z)：277.1[M+H] +。
步骤6：2-甲基-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2H-吲唑(A25)的合成
2,4-二氯-5-氟嘧啶(2.3g,13.5mmol)，碳酸钠(2.4g,22.5mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护搅拌下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,189mg,0.27mmol)，升温至80℃后滴加化合物A25-6(2.5g,9mmol)的1,4-二氧六环溶液(10mL)。80℃搅拌4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入50mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到中间体A25(2.2g,87％)。
MS(m/z)：281.0[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例26 化合物T-26：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000093
化合物T-26的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000094
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-26。
MS(m/z)：536.4[M+H] +。
中间体A26的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000095
步骤1：2-异丙基-5-溴-7-氟-2H-吲唑(A26-2)的合成
5-溴-7-氟-2H-吲唑A25-4(3.2g,15mmol)、碳酸钾(2.5g,18mmol)溶于50mL DMF中，搅拌下加入2-碘丙烷(3.1g,18mmol)，室温反应5小时至完全。将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯(60mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化得到黄色固体，即化合物A26-2(1.34g,30％)。
MS(m/z)：257.2[M+H] +。
步骤5：2-异丙基-5-硼酸频那醇酯-7-氟2H-吲唑(A26-3)的合成
化合物A26-2(1.34g,4.5mmol)、联硼酸频那醇酯(1.74g,6.77mmol)、三环己基膦(0.25g,0.9mmol)、醋酸钾(0.66g,6.77mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氮气保护下加入醋酸钯(Pd(AcO) 2,105mg,0.47mmol)，升温至80℃搅拌2小时至反应完全。将反应液冷却至室温后，倒入30mL水中，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到固体，即化合物A26-3(1.15g,85％)。
MS(m/z)：305.1[M+H] +。
步骤6：2-异丙基-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2H-吲唑(A26)的合成
2,4-二氯-5-氟嘧啶(0.97g,5.7mmol)，碳酸钠(1g,9.45mmol)溶于1,4-二氧六环/水(20mL/4mL)中，氮气保护下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,80mg,0.11mmol)，升温至80℃后滴加化合物A26-3(1.16g,3.8mmol)的1,4-二氧六环溶液(8mL)。80℃反应4小时至完全，将反应液冷却至室温后，倒入40mL水中，乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到中间体A26(1.59g,90％)。
MS(m/z)：309.0[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例27 化合物T-27：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000096
化合物T-27的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000097
步骤1：化合物T27-1：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙烯基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T27-1。
MS(m/z)：548.3[M+H] +。
步骤2：化合物T-27：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
圆底烧瓶中将化合物T27-1(500mg,91mmol)在室温下溶于甲醇/四氢呋喃＝2：1(20mL)，加入Pd/C(300mg)后体系抽真空并用氢气置换三次。将反应混合物在室温下和1atm氢气压力下搅拌12小时至反应完成后将反应液经硅藻土过滤，滤饼用THF(20mL)和甲醇(20mL)洗涤。滤液减压浓缩，过柱分离得到目标化合物T-27(426mg，85％)。
MS(m/z)：550.3[M+H] +。
中间体A27的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000098
Figure PCTCN2019128325-appb-000099
步骤1：2-甲基-3-碘-5-溴-7-氟-2H-吲唑(A27-2)的合成
将2-甲基-5-溴-7-氟-2H-吲唑A25-5(2g,5.3mmol)溶于二氯甲烷(12mL)中，反应温度控制在30℃，加入吡啶(0.62g,16mmol)、双(三氟乙酰氧基)碘苯(2.6g,12.7mmol)，反应搅拌1小时，再加入碘(1.6g,12.7mmol)，继续在30℃反应搅拌12小时至反应完全，将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯(80mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化得到黄色固体，即化合物A27-2(1.4g,74％)。
MS(m/z)：354.8[M+H] +。
步骤2：2-甲基-3-异丙烯基-5-溴-7-氟-2H-吲唑(A27-3)的合成
将2-甲基-3-碘-5-溴-7-氟-2H-吲唑A27-2(600mg,1.7mmol)，异丙烯基硼酸频那醇酯(550mg,2.02mmol)，Pd(dppf)Cl 2(82mg,0.1mmol)，碳酸钾(840mg,6.06mmol)，溶于二氧六环(20mL)和水(1mL)混合溶液中，氮气置换三遍，反应混合物升温到90℃搅拌12小时至反应完全，将反应液倒入100mL水中，乙酸乙酯(80mL×3)萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化得到灰色固体，即化合物A27-3(210mg,0.78mmol,43％)。
MS(m/z)：269.1[M+H] +。
步骤3：2-甲基-3-异丙烯基-5-硼酸频那醇酯-7-氟2H-吲唑(A27-4)的合成
2-甲基-3-异丙烯基-5-溴-7-氟-2H-吲唑A27-3(200mg,0.74mmol)、联硼酸频那醇酯(5,57mg,0.45mmol)、Pd(dppf)Cl2(60mg,0.074mmol)，醋酸钾(110mg,1.12mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氮气置换三次，氮气保护下升温至80℃搅拌2小时至反应完全，降温后过滤去除催化剂和无机盐，得到2-甲基-3-异丙烯基-5-硼酸频那醇酯-7-氟2H-吲唑A27-4的二氧六环溶液，直接用于下一步。
MS(m/z)：317.1[M+H] +。
步骤4：2-甲基-3-异丙烯基-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2H-吲唑(A27)的合成
将2,4-二氯-5-氟嘧啶(94mg,0.74mmol)，碳酸钾(300mg,2.24mmol)溶于上一步得到二氧六环溶液中，氮气置换三次后，在氮气保护下加入Pd(dppf)Cl 2(60mg,0.074mmol),升温至90℃搅拌12小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入50mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到中间体A27(140mg,0.44mmol，60％(两步))。
MS(m/z)：321.0[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例28 化合物T-28：N-(3-三氟乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000100
化合物T-28的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000101
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-28。
MS(m/z)：562.1[M+H] +。
实施例29 化合物T-29：N-(3-三氟乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-三氟甲基-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000102
化合物T-29的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000103
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-29。
MS(m/z)：558.1[M+H] +。
中间体A29的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000104
中间体A29的合成路线与合成步骤，同中间体A25一样，用3-三氟甲基-2-氟-苯甲醛代替2,3-二氟苯甲醛，得到2-甲基-5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-三氟甲基-2H-吲唑。
MS(m/z)：331.1[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例30 化合物T-30：N-(3-三氟乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-甲氧基-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000105
化合物T-30的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000106
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-30。
MS(m/z)：520.4[M+H] +。
中间体A30的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000107
步骤1：2-甲基-5-(2-氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基)-7-氟-2H-吲唑(A30)的合成
2,4-二氯-5-甲氧基-嘧啶(2.4g,13.5mmol)，碳酸钠(2.4g,22.5mmol)溶于1,4-二氧六环/水(30mL/6mL)中，氮气保护下加入双三苯基膦二氯化钯(Pd(PPh 3) 2Cl 2,189mg,0.27mmol)，体系升温至80℃后滴加化合物A25-6(2.5g,9mmol)的1,4-二氧六环溶液(10mL)。80℃搅拌4小时至反应完全，将反应液冷却至室温后，倒入50mL水中，乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩后用硅胶柱分离纯化，得到中间体A30(2.1g,80％)。
MS(m/z)：293.4[M+H] +。
中间体B1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
实施例31 化合物T-31：N-(3-乙氧基-6-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000108
化合物T-31的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000109
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-31。
MS(m/z)：552.1[M+H] +。
中间体B31的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000110
Figure PCTCN2019128325-appb-000111
步骤1:2-氧乙基-4-硝基苯甲乙酯(B31-2)合成
4-硝基5-羟基-水杨酸B31-1(2.27g,10mmol)溶于20mL DMF中，搅拌10min后缓慢加入碘乙烷(3.9g,25mmol)，40℃搅拌8小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，即化合物B31-2(2.27g,80％)。
MS(m/z)：284.1[M+H] +。
步骤2：2-氧乙基-4-硝基苯甲酸(B31-3)的合成
化合物B31-2(2.2g,8mmol)溶于40mL乙醇/水(1:1)溶液中，加入KOH(0.74g,13.2mmol)，室温搅拌3小时至反应完全。将反应液旋干，用20mL水溶解，稀盐酸调节pH至3-4，析出大量固体，过滤并用水淋洗滤饼，干燥得到黄色固体，即化合物B31-3(1.76g,86％)。
MS(m/z)：256.1[M+H] +。
步骤3：(2-氧乙基-4-硝基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B31-4)的合成
化合物B31-3(1.76g,6.9mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.2g,7.7mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，体系冷却至室温后加入含乙基哌嗪(0.95g,8.3mmol)的DMF溶液(3mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B31-4(1.82g，75％)。
MS(m/z)：352.1[M+H] +。
步骤4：(2-氧乙基-4-氨基苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B31-5)的合成
化合物B31-4(1.8g,5.1mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时至完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B31-5(1.48g,90％)。
MS(m/z)：322.1[M+H] +。
步骤5：3-(3-丁烯-1-氧基)-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-苯胺(B31)的合成
化合物B31-5(1.48g,4.6mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.5g,13.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B31(0.57g，42％)。
MS(m/z)：308.2[M+H] +。
实施例32 化合物T-32：N-(3-乙氧基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000112
化合物T-32的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000113
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-32。
MS(m/z)：522.1[M+H] +。
实施例33 化合物T-33：N-(3-丙酰氨基-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000114
化合物T-33的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000115
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-33。
MS(m/z)：549.1[M+H] +。
中间体B33的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000116
步骤1:2-乙酰氨基-4-硝基苯甲醇(B33-2)合成
将2-氨基-4-硝基苯甲醇(B33-1,1.68g,10mmol)，丙酸(1.11g,15mmol)，三乙胺(3g,30mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，冰浴下加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI,2.9g,15mmol)和催化量的4-二甲氨基吡啶(DMAP)。室温下搅拌12小时至反应完全，将反应液倒入50mL水中，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体，过硅胶柱纯化得到2-乙酰氨基-4-硝基苯甲醇B33-2(1.7g,7.6mmol,76％)。
MS(m/z)：225.1[M+H] +。
步骤2：2-乙酰氨基-4-硝基苯甲磺酸酯(B33-3)的合成
将2-乙酰氨基-4-硝基苯甲醇B33-2(1.6g,7.14mml)，三乙胺(1.08g,10.7mmol)溶于无水二氯甲烷中(20mL)，冰浴下分批加入甲烷磺酰氯(980mg,8.6mmol)。室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入20mL水中，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干得到黄色固体B33-3(2.5g),直接用于下一步反应中。
MS(m/z)：303.1[M+H] +。
步骤3：N-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基-5-硝基苯基)丙酰氨(B33-4)的合成
将上一步得到的化合物B33-3(2.5g)溶于20mL二氯甲烷中，加入N-乙基哌嗪(1.9g,16.5mmol)，三乙胺(2g,20mmol)，在室温下反应3小时，TLC检测反应结束后，将反应液倒入80mL水中，二氯甲烷萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，过柱分离纯化得到N-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基-5-硝基苯基)丙酰氨B33-4(2.4g，90％(两步))。
MS(m/z)：321.2[M+H] +。
步骤4：N-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基-5-氨基苯基)丙酰氨(B33)的合成
将上一步得到的化合物B33-4(2g,6.4mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即N-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基-5-氨基苯基)丙酰氨B33(1.6g,5.5mmol,90％)。
MS(m/z)：291.2[M+H] +。
中间体A25的合成路线与合成步骤，同实施例25，此处不赘述。
实施例34 化合物T-34：N-(3-氟-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000117
化合物T-34的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000118
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即化合物T-34。
MS(m/z)：482.1[M+H] +。
中间体A-25和B-21的合成路线与合成步骤，同前面T-21和T-25，此处不赘述。
实施例35 化合物T-35：N-(3-氟-4-(4-H-哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000119
化合物T-35的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000120
参考实施例1之T-1的合成方法，再经TFA/DCM脱去-Boc保护基，得到白色固体，即目标化合物T-35。
MS(m/z)：496.5[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B35的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000121
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-Boc基哌嗪-1-基)甲酮(B35-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B35-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-Boc基哌嗪(2.05g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B35-2(3.25g，92％)。
MS(m/z)：354.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-Boc基哌嗪-1-基)甲酮(B35-3)的合成
化合物B35-2(3.11g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时至完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B35-3(2.53g,89％)。
MS(m/z)：324.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-Boc基哌嗪-1-基)甲基)-2-氟苯胺(B35)的合成
化合物B35-3(1.62g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B35(0.88g，57％)。
MS(m/z)：310.2[M+H] +。
实施例36 化合物T-36：N-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000122
化合物T-36的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000123
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-36。
MS(m/z)：510.6[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B36的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000124
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B36-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B35-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-甲基哌嗪(1.1g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B36-2(2.35g，88％)。
MS(m/z)：268.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B36-3)的合成
化合物B36-2(2.35g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时至完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B36-3(1.86g,89％)。
MS(m/z)：238.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-氟苯胺(B36)的合成
化合物B36-3(1.19g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B36(0.7g，63％)。
MS(m/z)：224.2[M+H] +。
实施例37 化合物T-37：N-(3-氟-4-(4-三氟乙基-哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000125
化合物T-37的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000126
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-37。
MS(m/z)：578.6[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B37的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000127
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-(2,2,2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B37-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B35-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-三氟乙基哌嗪(1.85g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B37-2(3.12g，93％)。
MS(m/z)：336.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(N-(-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B37-3)的合成
化合物B37-2(2.96g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B37-3(2.47g,92％)。
MS(m/z)：306.1[M+H] +。
步骤3：4-((N-(三氟乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-氟苯胺(B37)的合成
化合物B37-3(1.53g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙 酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B37(0.77g，53％)。
MS(m/z)：292.2[M+H] +。
实施例38 化合物T-38：N-(3-氟-4-(4-环丙基-哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000128
化合物T-38的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000129
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-38。
MS(m/z)：536.6[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B38的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000130
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-环丙基哌嗪-1-基)甲酮(B38-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B35-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-环丙基哌嗪(1.39g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温搅拌3小时至反应完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B38-2(2.72g，93％)。
MS(m/z)：294.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-环丙基哌嗪-1-基)甲酮(B38-3)的合成
化合物B38-2(2.58g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣， 旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B38-3(2.11g,91％)。
MS(m/z)：264.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-环丙基哌嗪-1-基)甲基)-2-氟苯胺(B38)的合成
化合物B38-3(1.32g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B38(0.68g，55％)。
MS(m/z)：250.2[M+H] +。
实施例39 化合物T-39：N-(3-氟-4-(4-四氢吡喃-哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000131
化合物T-39的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000132
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-39。
MS(m/z)：580.7[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B39的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000133
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-(四氢-2H-呋喃-4-基)哌嗪-1-基)甲酮(B39-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B35-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30 mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-(四氢-2H-呋喃-4-基)哌嗪(1.87g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B39-2(3.14g，93％)。
MS(m/z)：338.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-(四氢-2H-呋喃-4-基)哌嗪-1-基)甲酮(B39-3)的合成
化合物B39-2(2.97g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时至完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B39-3(2.35g,87％)。
MS(m/z)：308.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-(四氢-2H-呋喃-4-基)哌嗪-1-基)甲基)-2-氟苯胺(B39)的合成
化合物B39-3(1.54g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B39(0.81g，55％)。
MS(m/z)：294.2[M+H] +。
实施例40 化合物T-40：N-(3-氯-4-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000134
化合物T-40的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000135
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-40。
MS(m/z)：526.0[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B40的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000136
步骤1:(2-氯-4-硝基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B40-2)合成
2-氯-4-硝基苯甲酸B40-1(2.01g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-甲基哌嗪(1.1g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B40-2(2.63g，93％)。
MS(m/z)：284.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氯苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B40-3)的合成
化合物B40-2(2.49g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B40-3(1.89g,85％)。
MS(m/z)：254.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-氯苯胺(B40)的合成
化合物B40-3(1.27g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B40(0.54g，45％)。
MS(m/z)：240.2[M+H] +。
实施例41 化合物T-41：N-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-氯苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000137
化合物T-41的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000138
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-41。
MS(m/z)：540.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B41的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000139
步骤1:(4-乙基哌嗪-1-基)(2-氯-4-硝基苯基)甲酮(B41-2)合成
2-氯-4-硝基苯甲酸B41-1(2.0g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mLDMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B41-2(2.67g，90％)。
MS(m/z)：298.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氯苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B41-3)的合成
化合物B41-2(2.62g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃搅拌2小时至反应完全，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，饱和碳酸钾溶液调节pH至弱碱性，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B41-3(2.0g,85％)。
MS(m/z)：268.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-氯苯胺(B41)的合成
化合物B41-3(1.34g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中搅拌下缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加毕后体系升温至70℃回流5小时至反应完全，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭反应，加5mL 15％NaOH溶液，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯(40mL)溶解，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(DCM:MeOH＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B41(0.51g，40％)。
MS(m/z)：254.1[M+H] +。
实施42 化合物T-42：N-(3-氯-4-((4-(环丙基甲基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000140
化合物T-42的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000141
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-42。
MS(m/z)：566.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B42的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000142
步骤1:(2-氯-4-硝基苯基)(4-(环丙基甲基)哌嗪-1-基)甲酮(B42-2)合成
2-氯-4-硝基苯甲酸B42-1(2.0g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mLDMF中，70℃反应至原料消失，放置室温后加入含1-(环丙基甲基)哌嗪(1.54g,11mmol)的DMF溶液(4mL)，室温反应3小时至完全，将反应液倒入80mL水中，EA(20mL×2)萃取，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B42-2(2.98g，92％)。
MS(m/z)：324.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氯苯基)(4-(环丙基甲基)哌嗪-1-基)甲酮(B42-3)的合成
化合物B42-2(2.58g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B42-3(2.1g,83％)。
MS(m/z)：294.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-(环丙基甲基)哌嗪-1-基)甲基)-3-氯苯胺(B42)的合成
化合物B42-3(1.47g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4 (0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B42(0.67g，48％)。
MS(m/z)：280.2[M+H] +。
实施43 化合物T-43：N-(2-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000143
化合物T-43的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000144
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-43。
MS(m/z)：526.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B43的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000145
步骤1:(3-氯-4-硝基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B43-2)合成
3-氯-4-硝基苯甲酸B43-1(2.0g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mLDMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入N-甲基哌嗪(1.1g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，乙酸乙酯萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B43-2(2.8g，90％)。
MS(m/z)：284.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-3-氯苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(B43-3)的合成
化合物B43-2(2.5g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B43-3(1.79g,80％)。
MS(m/z)：254.1[M+H] +。
步骤3：2-氯-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B43)的合成
化合物B43-3(1.26g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B43(0.6g，50％)。
MS(m/z)：240.2[M+H] +。
实施44 化合物T-44：N-(2-氯-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000146
化合物T-44的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000147
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-44。
MS(m/z)：554.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.72(d,J＝3.6Hz,1H),8.18(d,J＝1.2Hz,1H),8.11(d,J＝2.0Hz,1H),7.72(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),3.63-3.57(m,2H),3.17-3.12(m,2H),2.65(s,3H),2.42-2.35(m,2H),2.35-2.23(m,4H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.00(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1和中间体B41-3的合成路线与合成步骤，同实施例1和实施例41，此处不赘述。
实施例45 化合物T-45：N-(3-氯-4-(4-乙基哌嗪-1-基)乙基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙 基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000148
化合物T-45的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000149
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-45。
MS(m/z)：538.0[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B45的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000150
步骤1:(2-氟-4-硝基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基苯(B45-2)合成
2-氟-4-硝基苯乙酮B45-1(1.83g,10mmol)、N-乙基哌嗪(2.28g,20mmol)，三乙胺(2.6g,25mmol)溶于10mL无水二氯甲烷中，氮气保护下，滴加入1M的四氯化钛(5mmol),室温下搅拌过夜后，补加入硼氢化钠(1.14g,30mmol)和甲醇2mL，室温下继续搅拌8小时，TLC检测反应结束后，将10mL的碳酸氢钠饱和溶液加入反应液，搅拌1分钟后，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗滤饼两次(20mL×2)，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B45-2(2.25g)不纯化直接用于下一步。
MS(m/z)：282.1[M+H] +。
步骤2：(2-氟-4-氨基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基苯(B45)的合成
化合物B45-2(2g)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B45(1.5g,60％(两步))。
MS(m/z)：252.1[M+H] +。
实施例46 化合物T-46：N-(3-氯-4-(4-乙基哌嗪-1-基)异丙基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000151
化合物T-46的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000152
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-46。
MS(m/z)：552.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B46的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000153
步骤1:(2-氟-4-硝基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)异丙基苯(B46-2)合成
2-(2-氟-4-硝基苯基)丙-2氨B46-1(2g,10mmol)、二溴化物(2.57g,10mmol)，三乙胺(2.6g,25mmol)溶于10mL无水二氯甲烷中，氮气保护下，室温下搅拌过夜后，TLC检测反应结束后，将10mL的碳酸氢钠饱和溶液加入反应液，搅拌1分钟后，EA萃取(20mL X2)，无水硫酸钠干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B46-2(3g)不纯化直接用于下一步。
MS(m/z)：296.5[M+H] +。
步骤2：(2-氟-4-氨基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)异丙基苯(B46)的合成
化合物B46-2(3g)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B46(1.86g,70％(两步))。
MS(m/z)：266.1[M+H] +。
实施例47 化合物T-47：N-(3-氯-4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲基-丙基)苯基)-5-氟-4-(2-甲 基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000154
化合物T-47的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000155
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-47。
MS(m/z)：566.0[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B47的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000156
步骤1:1-乙基4-(1-(2-氟-4-硝基苯基)-2甲基-丙基)哌嗪(B47-2)合成
1-(2-氟-4-硝基苯基)-2甲基-丙基-1-酮B47-1(2.1g,10mmol)、N-乙基哌嗪(2.28g,20mmol)，三乙胺(2.6g,25mmol)溶于10mL无水二氯甲烷中，氮气保护下，滴加入1M的四氯化钛(5mmol),室温下搅拌过夜后，继续加入硼氢化钠(1.14g,30mmol)和甲醇2mL，室温下继续搅拌8小时，TLC检测反应结束后，将10mL的碳酸氢钠饱和溶液加入反应液，搅拌1分钟后，硅藻土过滤，乙酸乙酯洗滤饼两次(20mL×2)，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B45-2(2.5g)不纯化直接用于下一步。
MS(m/z)：310.1[M+H] +。
步骤2：1-乙基4-(1-(2-氟-4-氨基苯基)-2甲基-丙基)哌嗪(B47)的合成
化合物B47-2(2g)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干，过柱分离得到黄色油状物，即化合物B47(1.4g,50％(两步))。
MS(m/z)：280.1[M+H] +。
实施例48 化合物T-48：N-(4-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙基)-3-氟苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000157
化合物T-48的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000158
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-48。
MS(m/z)：538.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B48的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000159
步骤1:1-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-(2-氟-4-硝基苯基)乙酮(B48-2)合成
2-氟-4-硝基苯乙酸B48-1(2.0g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入N-乙基哌嗪(1.25g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B48-2(2.6g，88％)。
MS(m/z)：296.2[M+H] +。
步骤2：(2-(4-氨基-2-氟苯基)-1-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酮(B48-3)的合成
化合物B48-2(2.47g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B48-3(2.0g,85％)。
MS(m/z)：266.2[M+H] +。
步骤3：4-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙基)-3-氟苯胺(B48)的合成
化合物B48-3(1.33g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B48(0.5g，40％)。
MS(m/z)：252.2[M+H] +。
实施例49 化合物T-49：N-(3-氟-4-(4-H-哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000160
化合物T-49的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000161
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
步骤1:N-(3-氟-4-(4-Boc-哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(T49-1)合成
中间体A1(100mg,0.3mmol)、中间体B35-3(108mg,0.33mmol)、碳酸铯(195mg,0.6mmol)、4 5-双二苯基膦-9 9-二甲基氧杂蒽(Xantphos,34mg,0.06mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氮气保护下，加入三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd 2(dba) 3,54mg,0.06mmol)，90℃反应3小时，反应液冷却至室温倒入40mL水中，乙酸乙酯萃取三次(25mL×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥过滤，旋干后固体用硅胶柱纯化(DCM:CH 3OH＝20:1)，得到黄色固体，即中间体化合物T49-1(155mg,85％)。
MS(m/z)：610.1[M+H] +。
步骤2：N-(3-氟-4-(4-H-哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑 -5-基)嘧啶-2-胺(T49)合成的合成
将中间体化合物T49-1(140mg,0.24mmol)溶于30mL无水二氯甲烷中，加入三氟乙酸(0.5mL)室温下反应过夜，TLC检测反应完成后，旋干溶剂，加30mL水溶解，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，过柱分离即化合物T49(116mg,0.23mmol,95％)。
MS(m/z)：510.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),8.73(d,J＝3.6Hz,1H),8.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.96(dd,J＝13.2,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.31(t,J＝8.0Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),3.55-3.45(m,2H),3.19-3.16(m,2H),2.72-2.65(m,2H),2.65-2.56(m,5H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例50 化合物T-50：N-(3-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000162
化合物T-50的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000163
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-50。
MS(m/z)：524.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),8.73(d,J＝3.6Hz,1H),8.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.97(dd,J＝13.2,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.31(t,J＝8.4Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),3.62-3.56(m,2H),3.27-3.18(m,2H),2.65(s,3H),2.35-2.29(m,2H),2.26.2.20(m,2H),2.19(s,3H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H)。
中间体A1和中间体B36-3的合成路线与合成步骤，同实施例1和实施例36，此处不赘述。
实施例51 化合物T-51：N-(3-氟-4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酰基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000164
化合物T-51的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000165
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-51。
MS(m/z)：538.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),8.73(d,J＝3.6Hz,1H),8.22(d,J＝1.2Hz,1H),7.97(dd,J＝13.2,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.31(t,J＝8.4Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),3.63-3.56(m,2H),3.27-3.21(m,2H),2.65(s,3H),2.39-2.37(m,2H),2.36(q,J＝6.8Hz,2H),2.32-2.15(m,2H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.00(t,J＝3.6Hz,3H)。
中间体A1和中间体B21-3的合成路线与合成步骤，同实施例1和实施例21，此处不赘述。
实施例52 化合物T-52：1-(4-(2-氟-4-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮
Figure PCTCN2019128325-appb-000166
化合物T-52的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000167
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-52。
MS(m/z)：538.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.01(s,1H),8.68(d,J＝3.6Hz,1H),8.23(d,J＝1.2Hz,1H),7.82(dd,J＝13.1,2.1Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.49(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.29(t,J＝8.8Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),3.51(s,2H),3.41-3.25(m,4H),2.65(s,3H),2.35-2.17(m,4H),1.97(s,3H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B52的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000168
步骤1:2-氟-4-硝基苯甲醇(B52-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B21-1(9.25g,50mmol)溶于30ml THF中，降温至-15℃，搅拌10min后缓慢加入BH3的THF溶液(1mol/L,150mL,150mmol)，滴毕，转移至室温反应2小时。反应完全后，向反应液中缓慢倒入50ml甲醇淬灭，浓缩有机相，得到白色固体B52-2(7.7g,90％)。
MS(m/z)：170.2[M+H] +。
步骤2：2-氟-4-硝基苯基-4-甲基苯磺酸甲酯(B52-3)的合成
中间体B52-2(3.42g，20mmol)溶于20ml二氯甲烷中，加入三乙胺(4.04g，40mmol)、4-甲基苯磺酰氯(5.72g,30mmol)，氮气保护下室温反应2小时。反应完全后向反应液中加入5mL水洗涤，分离有机相，加饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到黄色油状物B52-3(5.85g,90％)。
MS(m/z)：326.3[M+H] +。
步骤3：1-(4-(2-氟-4-硝基苄基)哌嗪-1-基)乙酮(B52-4)的合成
中间体B52-3(1.63g,5mmol)溶于10ml乙腈中，加入三乙胺(757mg,7.5mmol)、1-(哌嗪-1-基)乙酮(960mg，7.5mmol)，氮气保护下室温反应过夜。反应完全后减压浓缩除去溶剂，向体系加入10mL水洗涤，加入乙酸乙酯萃取分层(20mL×3次)，合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到黄色油状物B52-4(1.3g,92％)。
MS(m/z)：282.1[M+H] +。
步骤4：1-(4-(4-氨基-2-氟苄基)哌嗪-1-基)乙酮(B52)的合成
中间体B52-4(1.1g,4mmol)溶于12mL乙醇和4mL水组成的混合溶剂中，加入氯化铵(384mg,7.2mmol)、还原铁粉(1.57g,28mmol)，升温至80℃反应2小时。反应完全后体系降温、抽滤，乙醇洗滤渣。浓缩滤液并加入饱和碳酸钾溶液，调节PH至碱性。加入乙酸乙酯萃取分层(20mL×3次)合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到黄色油状物B52(837mg,87％)。
MS(m/z)：252.1[M+H] +。
实施例53 化合物T-53：2-(4-(2-氟-4-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苄基)哌嗪-1-基)乙醇
Figure PCTCN2019128325-appb-000169
化合物T-53的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000170
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-53。
MS(m/z)：540.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),8.68(d,J＝4.0Hz,1H),8.23(d,J＝1.2Hz,1H),7.80(dd,J＝13.2,2.0Hz,1H),7.66(d,J＝12.0Hz,1H),7.47(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.27(t,J＝8.4Hz,1H),4.85(p,J＝6.8Hz,1H),4.37(s,1H),3.45-3.27(m,4H),2.65(s,3H),2.36-2.18(m,8H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B53的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000171
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B53-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B21-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入2-(哌嗪-1-基)乙醇(1.43g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B53-2(2.67g，90％)。
MS(m/z)：298.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲酮(B53-3)的合成
化合物B53-2(2.62g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B53-3(2.16g,92％)。
MS(m/z)：268.1[M+H] +。
步骤3：2-(4-(4-氨基-2-氟苄基)哌嗪-1-基)乙醇(B53)的合成
化合物B53-3(1.34g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B53(0.65g，51％)。
MS(m/z)：254.2[M+H] +。
实施例54 化合物T-54：1-(4-(2-氟-4-((5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苄基)哌嗪-1-基)丙-2-酮
Figure PCTCN2019128325-appb-000172
化合物T-54的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000173
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-54。
MS(m/z)：550.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B54的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000174
步骤1：1-(4-(2-氟-4-硝基苄基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(B54-2)的合成
中间体B52-3(1.63g,5mmol)溶于10mL乙腈中，加入三乙胺(757mg,7.5mmol),1-(哌嗪-1-基)-2-乙烯-酮(1.05g,7.5mmol)，氮气保护下室温反应过夜。反应完全后减压浓缩除去溶剂，向体系加入10mL水洗涤，加入乙酸乙酯萃取分层(20mL×3次)，合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到黄色油状物B54-2(1.17g,80％)。
MS(m/z)：294.1[M+H] +。
步骤4：1-(4-(4-氨基-2-氟苄基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(B54)的合成
中间体B54-2(1.17g，4mmol)溶于12mL乙醇和4mL水组成的混合溶剂中，加入氯化铵(384mg,7.2mmol)、还原铁粉(1.57g,28mmol)，升温至80℃反应2小时。反应完全后体系降温、抽滤，乙醇洗滤渣。浓缩滤液并加入饱和碳酸钾溶液，调节pH至碱性。加入乙酸乙酯萃取分层(20mL×3次)合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到黄色油状物B54(895mg，85％)。
MS(m/z)：264.2[M+H] +。
实施例55 化合物T-55：5-氟-4-(4-氟-1-异丙基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-N-(3-氟-4-((4-(3-甲基环丁氧烷)哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000175
化合物T-55的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000176
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-55。
MS(m/z)：552.3[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B55的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000177
步骤1:(2-氟-4-硝基苯基)(4-(3-甲基环丁氧烷)哌嗪-1-基)甲酮(B55-2)合成
2-氟-4-硝基苯甲酸B21-1(2.03g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入1-(3-甲基环丁氧烷)哌嗪(1.56g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，乙酸乙酯萃取(20mL× 2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B55-2(2.78g，90％)。
MS(m/z)：310.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-2-氟苯基)(4-(3-甲基环丁氧烷)哌嗪-1-基)甲酮(B55-3)的合成
化合物B55-2(2.72g,8.8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B55-3(2.2g,90％)。
MS(m/z)：280.2[M+H] +。
步骤3：3-氟-4-((4-(3-甲基环丁氧烷)哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B55)的合成
化合物B55-3(1.4g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B55(0.66g，50％)。
MS(m/z)：266.2[M+H] +。
实施例56 化合物T-56：N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000178
化合物T-56的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000179
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-56。
MS(m/z)：593.2[M+H] +。
中间体A25的合成路线与合成步骤，同实施例25，此处不赘述。
中间体B56的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000180
步骤1:(2-乙氧基-4-硝基-5-氟苯基)-(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B56-2)合成
2-乙氧基-4-硝基-5-氟苯基甲酸B56-1(2.29g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入N-乙基哌嗪(1.2g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B56-2(2.6g，80％)。
MS(m/z)：326.1[M+H] +。
步骤2：(2-乙氧基-4-硝基-5-N-吗啉基-苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B56-3)的合成
化合物B56-2(2.6g,8mmol)溶于30mL乙腈溶液中，加入吗啉(0.87g,10mmol)和K 2CO 3(2.74g,20mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙腈洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，过柱分离即化合物B56-3(2.5g,80％)。
MS(m/z)：393.1[M+H] +。
步骤3：(2-乙氧基-4-氨基-5-N-吗啉基-苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B56-4)的合成
化合物B56-3(2.5g,6.4mmol)溶于30mL乙腈溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B56-4(2.1g,90％)。
MS(m/z)：363.1[M+H] +。
步骤4：(5-乙氧基-2-N-吗啉基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B56)的合成
化合物B56-3(1.8g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B56(0.78g，45％)。
MS(m/z)：349.2[M+H] +。
实施例57 化合物T-57：N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7- 氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000181
化合物T-57的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000182
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-57。
MS(m/z)：635.2[M+H] +。
中间体A1和中间体B56的合成路线与合成步骤，同实施例1和实施例56，此处不赘述。
实施例58 化合物T-58：N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000183
化合物T-58的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000184
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-58。
MS(m/z)：625.2[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B58的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000185
步骤1:(2-N-吗啉基-4-甲基-5-氯)硝基苯(B58-2)合成
(2-氟-4-甲基-5-氯)硝基苯B58-1(1.89g,10mmol)、碳酸钾(2.74g,20mmol)和吗啉(1.7g,20mmol)溶于30mL乙腈中，升温到80℃反应12小时，TLC检测原料反应完全后，将反应液倒入80mL水中，乙酸乙酯萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B58-2(2.05g，80％)。
MS(m/z)：257.1[M+H] +。
步骤2：(2-N-吗啉基-4-甲基氯-5-氯)硝基苯(B58-3)的合成
化合物B56-2(2g,8mmol)溶于30mL乙腈溶液中，加入N-氯代丁二酰亚胺(NCS,1.46g,11mmol)，和催化量的AIBN，50℃反应2小时。反应结束后，将反应液加30mL水溶解，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，过柱分离即化合物B58-3(1.8g,78％)。
MS(m/z)：290.2[M+H] +。
步骤3：(5-氯-2-N-吗啉基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)硝基苯(B58-4)的合成
化合物B58-3(1.8g,6mmol)溶于30mL乙腈溶液中，加入N-乙基吗啉(1.14g,10mmol)和碳酸钾(1.37g,10mmol)，80℃反应2小时，TLC检测反应结束后，将反应液过滤，乙酸乙酯洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B58-4(2.0g,90％)。
MS(m/z)：369.1[M+H] +。
步骤4：(5-氯-2-N-吗啉基-4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B58)的合成
化合物B58-4(1.8g,4.8mmol)溶于30mL乙腈溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤，干燥旋干，得到黄色油状物，过柱分离得到化合物B58(1.3g,80％)。
MS(m/z)：339.2[M+H] +。
实施例59 化合物T-59：N-(3-氟-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-5-氟-4-(4-氟-1-异丙 基-2-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000186
化合物T-59的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000187
参考实施例1之T-1的合成方法，可得到白色固体，即目标化合物T-59。
MS(m/z)：510.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.80(s,1H),8.64(d,J＝3.6Hz,1H),8.21(d,J＝1.2Hz,1H),7.75(dd,J＝15.2,2.4Hz,1H),7.64(d,J＝12.4Hz,1H),7.42(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),6.99(t,J＝9.2Hz,1H),4.84(p,J＝6.8Hz,1H),2.96-2.82(m,4H),2.64(s,3H),2.55-2.45(m,4H),2.37(q,J＝7.2Hz,2H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H),1.03(t,J＝7.2Hz,3H)。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B59的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000188
步骤1：1-N-(2-氟-4-硝基苯基)-4-乙基哌嗪(B59-2)的合成
化合物B59-1(2.19g,10mmol)溶于20ml DMF中，加入N-(4-四氢吡喃)哌嗪(3.4g,20mmol)，并加入三乙胺(1.52g,15mmol)，在65℃条件下反应过夜。反应完全后向反应液中缓慢加入50mL水洗涤，加入乙酸乙酯萃取分层(20mL×3次)，合并有机相，加入饱和氯化钠溶液、无水硫酸钠干燥，浓缩有机相，得到褐色固体B59-2(1.53g,60.0％)
MS(m/z)：254.2[M+H] +。
步骤3：3-氟-4-(4-(乙基哌嗪-1-基)苯胺(B59)的合成
化合物B59-2(1.53g,6mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(2.3g,42mmol)和NH 4Cl(0.58g,10.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和 食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B59(0.94g,70％)。
MS(m/z)：224.2[M+H] +。
实施例60 对照化合物T-60：N-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-5-氟-4-(2-甲基-3-异丙基-7-氟-2H-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
Figure PCTCN2019128325-appb-000189
化合物T-60的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000190
参考实施例1之T-1的合成方法，得到白色固体，即目标化合物T-60。
MS(m/z)：506.0[M+H] +。
中间体A1的合成路线与合成步骤，同实施例1，此处不赘述。
中间体B60的合成路线如下：
Figure PCTCN2019128325-appb-000191
步骤1:(4-硝基苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B60-2)合成
4-硝基苯甲酸B60-1(1.67g,10mmol)、羰基二咪唑(CDI,1.62g,10mmol)溶于30mL DMF中，70℃反应至原料反应完全，放置室温，加入N-乙基哌嗪(1.2g,11mmol)DMF溶液，室温反应3小时，将反应液倒入80mL水中，EA萃取(20mL×2)干燥旋干，得到黄色油状物，即化合物B60-2(2.1g，80％)。
MS(m/z)：264.1[M+H] +。
步骤2：(4-氨基-苯基)(4-乙基哌嗪-1-基)甲酮(B60-3)的合成
化合物B60-2(2.1g,8mmol)溶于30mL乙醇/水(3:1)溶液中，加入Fe(3.4g,62mmol)和NH 4Cl(0.85g,15.8mmol)，80℃反应2小时，将反应液过滤，乙醇洗涤滤渣，旋干溶剂，加30mL水溶解，碳酸钾调节pH至弱碱性，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，饱和 食盐水洗涤，干燥旋干得到黄色油状物，即化合物B60-3(1.78g,95％)。
MS(m/z)：234.1[M+H] +。
步骤3：4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯胺(B60)的合成
化合物B60-3(1.17g,5mmol)溶于100mL无水THF中，-10℃环境中，缓慢加入LiAlH 4(0.46g,12.5mmol)，加料完成后，升温至70℃后，回流5小时，将反应液置于冰浴中，缓慢加水(50mL)淬灭，加5mL 15％NaOH，过滤，旋干溶剂，乙酸乙酯溶解(40mL)，用饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩后用硅胶柱分离纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1-10:1)，得到黄色油状物，即中间体B60(0.54g，45％)。
MS(m/z)：220.2[M+H] +。
实施例61 化合物对CDK4、CDK6和CDK9激酶的抑制作用
将本发明所述化合物用DMSO溶解制成原溶液。取20μL原溶液用60μL DMSO的比例稀释10个浓度的化合物。将100μL DMSO加到两个空孔中，作为无化合物对照和无酶对照组。准备一张中间板，取10μL的不同浓度的样品溶液加入中间板中，用激酶缓冲液稀释至10倍，充分振荡混匀。取5μL中间板中的溶液加入384孔板中。
分别将适量的CDK4、CDK6和CDK9激酶分别用缓冲液稀释成终浓度的2.5倍，将荧光标记肽和ATP用1×激酶缓冲液稀释成终浓度的2.5倍。
将稀释后的激酶10μL和不同的样品溶液5μL混合，室温孵育后。向反应体系中加入稀释后的10μL荧光标记肽和ATP，室温孵育30min。加入终止试验缓冲液25μL。用酶标仪检测荧光强度(发射波长：445nm和520nm，激发波长：400nm)，并用Graphpad Prism V5.0软件得到IC 50值。
本发明化合物对CDK4，CDK6和CDK9激酶的抑制活性，结果见下表。
本发明化合物对CDK4、CDK6和CDK9活性的抑制率
Figure PCTCN2019128325-appb-000192
Figure PCTCN2019128325-appb-000193
*【注】表中Abemaciclib的数据，来源于美国FDA公开的资料(Reference ID：4159689)。
a：表示抑制激酶的活性IC 50值小于10nM；
b：表示抑制激酶K的IC 50值大于等于10nM，小于25nM；
c：表示抑制激酶的活性IC 50值大于等于25nM，小于100nM。
从上表中可知，本发明化合物能显著抑制CDK4激酶的活性；对CDK6激酶或CDK9激酶的活性抑制上，本发明化合物比Abemaciclib有优势。
实施例62 CTG法测定化合物抑制癌细胞增殖实验
取对数生长期的细胞，常规消化后制成2×10 4/mL的细胞悬液，加入96孔板中，每孔100μL。培养12h待细胞贴壁，加入不同浓度的待测化合物，化合物的浓度梯度为10000nM、1000nM、100nM、10nM、1nM、0.1nM。化合物与细胞共培养72h后，使用CellTiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒(Promega)来评价细胞增值情况。每孔加入100μL CellTiter-Glo试剂，摇板10min，待细胞裂解后，用Tecan Spark型酶标仪检测信号强度。
IC 50值采用Graphpad Prism V5.0软件计算得出，结果见下表。
本发明化合物对不同癌细胞的抑制作用
Figure PCTCN2019128325-appb-000194
【注】++++：代表IC 50值小于50nM；
+++：代表IC 50值大于等于50nM，小于250nM；
++：代表IC 50值大于等于250nM，小于500nM；
+：代表IC 50值大于等于500nM，小于1000nM。
从上表中可知，本发明化合物对急性髓系白血病和/或非霍奇金淋巴瘤的细胞增殖，有很强的抑制作用。
实施例63 SRB法测定化合物抑制癌细胞增殖实验
采用磺酰罗丹明B(SRB)细胞增殖和毒性检测试剂盒测定受试化合物对人肿瘤细胞的增殖抑制活性，其活性用IC 50表示。实验方案：取对数生长期的细胞，常规消化后制成2×10 4/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔100μL，然后放入37℃、5％CO2、饱和湿 度孵箱中培养12小时，加入不同浓度梯度的受试化合物(受试化合物浓度为1000nM、333.33nM、111.11nM、37.04nM、12.35nM、4.12nM、1.37nM、0.46nM)。置于37℃、5％CO2、饱和湿度孵箱中培养72h；用SRB方法检测受试化合物OD值，严格按照SRB试剂盒说明书操作。用Tecan Spark型酶标仪检测OD值。
IC 50值采用Graphpad Prism V5.0软件计算得出，结果见下表。
本发明化合物对不同癌细胞的抑制作用
Figure PCTCN2019128325-appb-000195
【注】++++：代表IC50值小于50nM；
+++：代表IC50值大于等于50nM，小于100nM；
++：代表IC50值大于等于100nM，小于250nM；
+：代表IC50值大于等于250nM，小于500nM。
从上表中可知，本发明化合物对乳腺癌、肺癌、结直肠癌、黑色素瘤细胞和套细胞淋巴瘤中的一种或多种急性髓系细胞增殖，有很强的抑制作用。
实施例64 CCK-8法测定化合物抑制小细胞肺癌细胞增殖作用
采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖和毒性检测试剂盒测定受试化合物和Abemaciclib对人小细胞肺癌细胞H69的增殖抑制活性，其活性用IC 50值表示。实验方案：将每孔4000个细胞接种于96孔培养板中，每孔100μL，然后放入37℃、5％CO2、饱和湿度孵箱中培养12小时，加入不同浓度梯度的受试化合物(受试化合物浓度为10000nM、1000nM、333.33nM、111.11nM、37.04nM、12.35nM、4.12nM、1.37nM、0.46nM)。置于37℃、5％CO2、饱和湿度孵箱中培养72h；加入10μL CCK-8液再孵育2h，用酶标仪于450nm波长处测定OD值，用GraphPad Prim5.0软件计算IC 50值，结果见下表。
本发明化合物对小细胞肺癌细胞株H69的抑制作用
化合物编号 小细胞肺癌细胞H69(IC 50nM)
Abemaciclib 85.40
T-1 21.51
T-2 12.13
T-8 15.61
T-21 33.62
T-35 7.88
T-36 7.36
T-49 50.73
T-51 6.17
T-52 48.82
T-53 8.04
T-59 12.62
T-60(对照) 95.34
从表中可知，本发明化合物(T-60系对照用化合物)相比于Abemaciclib，对小细胞肺癌细胞增殖的抑制作用更优。
实施例65 裸鼠移植瘤模型试验
将人乳腺癌细胞MCF-7用RPMI 1640培养基培养，经EDTA胰蛋白酶处理，离心收集，PBS重悬，以1×10 7个细胞/动物，皮下注射于无胸腺裸鼠的腋下。当肿瘤生长至一定体积后(植入后10-14天)，将本发明化合物T-35溶于空白溶剂(2％DMSO+98％PBS)，每天灌胃给药50mg/kg。药物干预过程中密切观察裸鼠精神状态、活动、饮食等情况，瘤体生长过程中，用游标卡尺测量瘤体长短径，按体积计算公式TV＝L×W 2/2(L为长径，W为短径)。连续给药28天，在治疗过程中每2天测量一次瘤体长短径和裸鼠体重，实验结果见下表。
T-35对MCF-7移植瘤模型的抗肿瘤活性
Figure PCTCN2019128325-appb-000196
从表中可知，给予化合物T-35剂量50mg/kg×28天，抑制肿瘤生长效果明显，显示化合物在体内的抗肿瘤效果显著。

Claims (17)

  1. 一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，为式Ⅰ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100001
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；
    R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；
    R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；
    X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；
    Y和Z各自独立地选自N或C，且Y或Z中任一为N，另一则为C；
    n为0、1或2；m为1、2或3。
  2. 根据权利要求1所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，所述的式Ⅰ中，当R 6选自H、-CH 2CHF 2、-CH 2CF 3、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基时；R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
  3. 根据权利要求2所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，所述的式Ⅰ中，当X是单键时，R 7选自F或Cl；当X是-NHCO-时，R 7选自C 1-C 6烷基。
  4. 根据权利要求1～3中任一项所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，为式Ⅱ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100002
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；
    R 6选自H、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，且R 5和R 7不同时为H；
    R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；
    X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；
    n为0、1或2；m为1、2或3。
  5. 根据权利要求4所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，所述的式Ⅱ中，当X为单键时，R 7选自F或Cl；
    或，当X为-NHCO-时，R 7选自C 1-C 6烷基；
    或，当X为-O-时，R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
  6. 根据权利要求5所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，为式Ⅱa所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100003
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、C 1-C 6烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自F、-CF 3或C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自H、C 1-C 6烷氧基；
    R 6选自C 1-C 6烷基；
    R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；
    R 8选自CF 3；
    W选自C 1-C 6烷基或-CO-；
    n为1或2。
  7. 根据权利要求1～3中任一项所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，为式Ⅲ所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100004
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2或C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自H、F、Cl、Br、-CF 3、-CHF 2、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；
    R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 7选自H、F、Cl、C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，且R 5和R 7不同时为H；
    R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 9选自CF 3、CHF 2、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；
    X选自单键、-NH-、-S-、-O-、-CO-或-NHCO-；
    n为0、1或2；m为1、2或3。
  8. 根据权利要求7所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，所述的式Ⅲ中，当X为单键时，R 7选自H、F或Cl；
    或，当X为-NH-时，R 7选自C 1-C 6烷基；
    或，当X为-S-时，R 7选自C 1-C 6烷基；
    或，当X为-O-时，R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8，R 8选自CF 3、CHF 2、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基。
  9. 根据权利要求8所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，为式Ⅲa所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100005
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、-CF 3、C 1-C 6烷基或C 3-C 8环烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自H、F、-CF 3或C 1-C 6烷氧基；
    R 5选自H、Cl、-CF 3、C 1-C 6烷氧基、C 1-C 6的烷胺基或3-8元杂环基；
    R 6选自-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基或3-8元杂环基；
    R 7选自C 1-C 6烷基或-(CH 2) nR 8；
    R 8选自CF 3、CHF 2或3-8元杂环基；
    R 9选自CF 3；
    W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；
    n为1或2；m为1、2或3。
  10. 根据权利要求8所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，为式Ⅲb所示的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100006
    其中，R 1和R 2各自独立地选自H、C 1-C 6烷基；
    R 3和R 4各自独立地选自H或F；
    R 5选自H、F或Cl；
    R 6选自H、-COR 9、-(CH 2) mR 9、C 1-C 6烷基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    R 7选自H、F或Cl，且R 5和R 7不同时为H；
    R 9选自CF 3、-OH、C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 3-C 8环烷基或3-8元杂环基；
    W选自单键、C 1-C 6烷基或-CO-；
    m为1、2或3。
  11. 根据权利要求1～10中任一项所述的多取代苯氨基嘧啶衍生物，其特征在于，所述的 3-8元杂环基为选自一个或多个N、O、S杂原子的、取代或未取代的3-8元杂环，其中杂环基上的取代基团选自C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷氧基、-OH、-NH 2、-CO或-NHCO。
  12. 一种多取代苯氨基嘧啶衍生物，选自如下结构的化合物或其或其药学上可接受的盐或溶剂化合物：
    Figure PCTCN2019128325-appb-100007
    Figure PCTCN2019128325-appb-100008
  13. 一种药物组合物，包含如权利要求1～11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化合物作为活性成份，以及一种或多种药学上可接受的载体。
  14. 一种如权利要求1～11中任一项所述的化合物或权利要求13所述的药物组合物在制备预防或治疗细胞周期蛋白依赖性激酶活性介导的疾病的药物中的用途。
  15. 根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述的细胞周期蛋白依赖性激酶活性介 导的疾病为与CDK4、CDK6或CDK9活性改变相关的疾病。
  16. 根据权利要求15所述的用途，其特征在于，所述的疾病为癌症。
  17. 根据权利要求16所述的用途，其特征在于，所述的癌症选自乳腺癌、肺癌、肠癌、小细胞肺癌、黑色素癌、胶质瘤、淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、胰腺癌、肝癌、胃癌、膀胱癌、卵巢癌、套细胞淋巴癌、急性髓性白血病或慢性髓性白血病。
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