CN114088823B - 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法 - Google Patents

一种通天口服液中多指标成分含量测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114088823B
CN114088823B CN202111157535.6A CN202111157535A CN114088823B CN 114088823 B CN114088823 B CN 114088823B CN 202111157535 A CN202111157535 A CN 202111157535A CN 114088823 B CN114088823 B CN 114088823B
Authority
CN
China
Prior art keywords
esi
acid
paeoniflorin
isochlorogenic acid
glycyrrhizin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111157535.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114088823A (zh
Inventor
周丹丹
崔雨晴
沙禕炜
米卓尔
陈方超
吴清云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jianzhen Detection Technology Shanghai Co ltd
Original Assignee
Jianzhen Detection Technology Shanghai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jianzhen Detection Technology Shanghai Co ltd filed Critical Jianzhen Detection Technology Shanghai Co ltd
Priority to CN202111157535.6A priority Critical patent/CN114088823B/zh
Publication of CN114088823A publication Critical patent/CN114088823A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114088823B publication Critical patent/CN114088823B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提供了一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，使用超高效液相色谱串联QDa检测器，同时测定通天口服液中18种成分含量：升麻素、紫花前胡苷、5‑O‑甲基维斯阿米醇苷、芹菜素‑7‑O‑葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C。该方法操作简单、快速高效、准确可靠，能够有效地监控生产工艺的稳定性，为通天口服液的质量提供保障。

Description

一种通天口服液中多指标成分含量测定方法
技术领域
本发明涉及中药成分含量测定技术领域，具体涉及一种通天口服液中多指标成分含量测定方法。
背景技术
通天口服液是以中医经典名方“川芎茶调散”为基础，为川芎、赤芍、天麻、羌活、白芷、细辛、菊花、薄荷、防风、茶叶、甘草等11味药材组成，具有活血化瘀，祛风止痛的功效，临床上主要用于淤血阻滞、风邪上扰所致的偏头痛的治疗。组方中川芎活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛为君药；羌活、白芷、天麻合用，解表散寒、祛风胜湿，与川芎相须配伍，共为臣药；赤芍、薄荷、防风、菊花、细辛共为佐药；甘草、茶叶调和诸药，兼为使药。诸药合用，共奏祛风止痛、通畅气血之功。通天口服液是国家中药二级保护品种、甲类OTC、国家重点新产品，其药品于1998年获得三类新药证书和生产批件。经过20多年来广泛的临床实践和严格的临床研究证明，疗效确切，安全可靠，取得了良好的社会效益。《偏头痛中医临床实践指南(征求意见稿)》指出，通天口服液为偏头痛急性期及预防性治疗的四种中成药之一。
目前，通天口服液在质量控制方面研究比较薄弱。《中国药典》2020版中仅对单一成分芍药苷进行含量测定。文献报道大多对单个或少数成分进行质量控制。肖礼娥等[1]采用UPLC-UV(230nm)法对通天口服液中没食子酸、天麻素和芍药苷的含量进行测定。高夏等[2]采用HPLC双波长(220nm，278nm)法同时测定5个成分(芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、洋川芎内酯I)，其分析时间长达95分钟。由于通天口服液组方较大，化学成分复杂，上述方法无法有效地对通天口服液进行质量评价，实用性不足。因此，亟待建立一种简单、准确、实用的通天口服液中多指标成分的质量控制方法，有效可行地控制产品质量。
参考文献：
[1]肖礼娥，余佳文，原欢欢等.UPLC法同时测定通天口服液中的3种有效成分[J].华西药学杂志，2016，31(5)：524-526.
[2]高夏，沈岚，马诗瑜等.基于定量指纹图谱分析与生物活性测定的通天口服液质量评价[J].中国实验方剂学杂志，2016，22(14)：44-50.
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了一种同时测定通天口服液中18种指标性成分含量的检测方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
步骤一，对照品溶液制备：精密称取18种对照品：升麻素、紫花前胡苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C溶于甲醇中制备混合对照品溶液；
步骤二，供试品溶液制备：精密量取通天口服液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
步骤三，样品测定：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用UPLC-QDa联用技术进行测定；
其中，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱：Waters Cortects UPLC C18 (100×2.1mm，1.6μm)、Waters Cortects UPLC T3(100×2.1mm，1.6μm)或色谱柱Waters CortectsUPLC Shield RP18(100×2.1mm，1.6μm)；柱温：30-40℃；流速：0.2-0.5mL/min；流动相：A相为0.01-0.1％甲酸或含2mM甲酸铵的0.05％甲酸，B相为乙腈；梯度洗脱：0～1min，10％B；1～1.5min，10％～14％B；1.5～8min，14％～20％B；8～10min，20％～35％B；10～12min，35％～65％B；12～14min，65％～95％B；14～19min，95％B；采用QDa质谱检测器进行色谱峰的检测。
进一步地，上述测定方法还包括如下步骤：
步骤四，标准曲线的建立：将上述混合对照品溶液稀释不同的浓度，进样分析；以质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；和
步骤五，根据供试品溶液超高效液相色谱图中18种指标成分各自的色谱峰峰面积以及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出各指标性成分的含量。
进一步地，步骤三中QDa质谱检测器的设置：毛细管电压：0.8kV；探头温度：550℃-600℃；监测方式：SIR离子监测模式。
进一步地，步骤三中QDa质谱检测器其他的参数设置如下：
进一步地，测定方法中采用的甲醇的浓度是75％。
进一步地，在混合对照品溶液中，每1mL含升麻素0.3μg、紫花前胡苷20μg、5-O-甲基维斯阿米醇苷1μg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷2μg、水合氧化前胡素1μg、洋川芎内酯A 0.4μg、咖啡因20μg、芍药苷40μg、迷迭香酸1μg、甘草素0.3μg、巴利森苷E 2μg、甘草苷2μg、异甘草苷0.3μg、木犀草苷2μg、氧化芍药苷2μg、异绿原酸B 3μg、异绿原酸A 2μg、异绿原酸C 2μg。
进一步地，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱为Waters Cortects UPLC C18，100×2.1mm，1.6μm；柱温：35℃；流速：0.3mL/min；流动相：A相为0.05％甲酸，B相为色谱纯乙腈。
进一步地，探头温度为600℃。
进一步地，步骤三中，吸取混合对照品溶液与供试品溶液的体积均为1μL。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
1、方法的先进性
超高效液相色谱串联QDa质谱检测器(UPLC-QDa)可通过选择离子监测(SIR)模式对目标化合物进行快速定量分析。QDa检测器具有价格相对低廉，操作简单，维护保养方便，检测灵敏度高等特点，尤其适用于复杂样品中多种化合物的同时高选择性分析。本发明采用UPLC-QDa技术同时测定通天口服液中18种成分(升麻素、紫花前胡苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C)的含量，方法简单、高效(分析时间～20分钟)、结果准确、重现性好。
2、方法的实用性及应用前景
18种指标性成分中，洋川芎内酯A来源于川芎；紫花前胡苷来源于羌活；水合氧化前胡素来源于羌活和白芷，巴利森苷E来源于天麻；芍药苷、氧化芍药苷来源于赤芍；迷迭香酸来源于薄荷；升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷来源于防风；芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C来源于菊花；甘草素、甘草苷、异甘草苷来源于甘草；咖啡因来源于茶叶。因此，本发明建立的UPLC-QDa方法能够对通天口服液中“君”、“臣”、“佐”、“使”药，共10种药味进行质量控制。采用本发明对15批通天口服液进行批间一致性的评估。结果表明，本发明能够有效地监控生产工艺的稳定性，为其质量标准提升提供参考。
附图说明
图1是本发明一实施例中供试品溶液UPLC-QDa色谱图，图A为正离子模式下的色谱图，图B为负离子模式下的色谱图；其中：1-升麻素；2-紫花前胡苷；3-5-O-甲基维斯阿米醇苷；4-芹菜素-7-O-葡萄糖苷；5-水合氧化前胡素；6-洋川芎内酯A；7-咖啡因；8-芍药苷；9-迷迭香酸；10-甘草素；11-巴利森苷E；12-甘草苷；13-异甘草苷；14-木犀草苷；15-氧化芍药苷；16-异绿原酸B；17-异绿原酸A；18-异绿原酸C。
具体实施方式
本发明提供了一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，使用超高效液相色谱串联QDa检测器，同时测定通天口服液中18种成分含量。具体得，该方法包括如下步骤：
步骤一，对照品溶液制备：精密称取18种对照品：升麻素、紫花前胡苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C溶于甲醇中制备混合对照品溶液；
步骤二，供试品溶液制备：精密量取通天口服液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
步骤三，样品测定：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用UPLC-QDa联用技术进行测定；
其中，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱：Waters Cortects UPLC C18(100×2.1mm，1.6μm)、Waters Cortects UPLC T3(100×2.1mm，1.6μm)或色谱柱Waters CortectsUPLC Shield RP18(100×2.1mm，1.6μm)；柱温：30-40℃；流速：0.2-0.5mL/min；流动相：A相为0.01-0.1％甲酸或含2mM甲酸铵的0.05％甲酸，B相为乙腈；梯度洗脱：0～1min，10％B；1～1.5min，10％～14％B；1.5～8min，14％～20％B；8～10min，20％～35％B；10～12min，35％～65％B；12～14min，65％～95％B；14～19min，95％B；采用QDa质谱检测器进行色谱峰的检测。
在本发明一优选的实施方式中，上述测定方法还包括如下步骤：
步骤四，标准曲线的建立：将上述混合对照品溶液稀释不同的浓度，进样分析；以质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；和
步骤五，根据供试品溶液超高效液相色谱图中18种指标成分各自的色谱峰峰面积以及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出各指标性成分的含量。
在本发明一优选的实施方式中，步骤三中QDa质谱检测器的设置：毛细管电压：0.8kV；探头温度：550℃-600℃；监测方式：SIR离子监测模式。
在本发明一优选的实施方式中，步骤三中QDa质谱检测器其他的参数设置如下：
在本发明一优选的实施方式中，测定方法中采用的甲醇的浓度是75％。
在本发明一优选的实施方式中，在混合对照品溶液中，每1mL含升麻素0.3μg、紫花前胡苷20μg、5-O-甲基维斯阿米醇苷1μg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷2μg、水合氧化前胡素1μg、洋川芎内酯A 0.4μg、咖啡因20μg、芍药苷40μg、迷迭香酸1μg、甘草素0.3μg、巴利森苷E 2μg、甘草苷2μg、异甘草苷0.3μg、木犀草苷2μg、氧化芍药苷2μg、异绿原酸B 3μg、异绿原酸A 2μg、异绿原酸C 2μg。
在本发明一优选的实施方式中，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱为WatersCortects UPLC C18，100×2.1mm，1.6μm；柱温：35℃；流速：0.3mL/min；流动相：A相为0.05％甲酸，B相为色谱纯乙腈。本发明人对洗脱程序、流速、柱温、色谱柱的选择进行了考察，以获得更好的峰分离度、色谱峰峰形最佳为判断标准，确定了上述条件的设置。
在本发明一优选的实施方式中，探头温度为600℃。
在本发明一优选的实施方式中，步骤三中，吸取混合对照品溶液与供试品溶液的体积均为1μL。
下面通过具体实施例和附图对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例中方法如无特殊说明的采用常规方法，使用的试剂如无特殊说明的使用常规市售试剂或按常规方法配制的试剂。
实施例1
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：取18种对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1mL含升麻素0.3μg、紫花前胡苷20μg、5-O-甲基维斯阿米醇苷1μg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷2μg、水合氧化前胡素1μg、洋川芎内酯A 0.4μg、咖啡因20μg、芍药苷40μg、迷迭香酸1μg、甘草素0.3μg、巴利森苷E 2μg、甘草苷2μg、异甘草苷0.3μg、木犀草苷2μg、氧化芍药苷2μg、异绿原酸B 3μg、异绿原酸A 2μg、异绿原酸C 2μg的混合对照品溶液，即得。
(2)供试品溶液制备：精密量取本品1mL，置25mL量瓶中，加75％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)流动相的制备：配制含0.05％甲酸的水溶液，作为流动相A；取色谱纯乙腈，作为流动相B，备用；
(4)色谱条件的设置：色谱柱：Waters Cortects UPLC C18(100×2.1mm，1.6μm)；柱温：35℃；流速：0.3mL/min；取步骤(1)的对照品溶液与步骤(2)的供试品溶液，定量进样，进行梯度洗脱(0～1min，10％B；1～1.5min，10％～14％B；1.5～8min，14％～20％B；8～10min，20％～35％B；10～12min，35％～65％B；12～14min，65％～95％B；14～19min，95％B)；采用QDa质谱检测器进行色谱峰的检测；
(5)QDa条件的设置：毛细管电压：0.8kV；探头温度：600℃，SIR质量数见表1。
表1 QDa参数设置
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定，参见图1。
(7)标准曲线：取升麻素、紫花前胡苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的混合对照品溶液，用75％甲醇稀释配制为7个不同浓度的混合对照品溶液，进样分析。以质量浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程及线性范围(见表2)。结果表明各成分在各线性范围内线性关系良好。
表2线性回归方程和线性范围
(8)精密度：取混合对照品溶液，连续进样6次，记录各指标性成分的峰面积并计算各成分的相对标准偏差(RSD％)。6针样品中各指标性成分峰面积RSD％值在1.3％～5.1％，表明仪器精密度良好。
(9)重复性：取同一批通天口服液，平行制备6份，分别注入超高效液相色谱仪，记录各指标性成分的峰面积并计算各成分含量，以及其相对标准偏差(RSD％)。6份样品中各指标性成分含量的RSD％值在0.7％～5.6％，表明样品重复性良好。
(10)准确度：取已知含量的通天口服液适量，精密称定，精密加入一定量的混合对照品溶液，使其加入量与所取通天口服液中各指标成分量之比控制在0.5∶1、1∶1、1.5∶1左右。按“供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液，进样，测定峰面积，计算回收率，结果见表3。各指标性成分的回收率和RSD％值均符合标准，表明方法准确度良好。
表3回收率结果
(11)样品的测定：取15批通天口服液(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，批号：19080030，19080031，19080032，19080033，19080034，19080035，19080036，19080037，19080038，19090040，19090041，19090042，19090043，19090044，19090045)按照上述方法进行测定，通天口服液中每m1含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，大于0.01mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，大于0.42mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，大于0.05mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，大于0.82mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，大于0.01mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，大于0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，大于0.22mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，大于0.05mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，大于0.37mg。
实施例2
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：流速：0.2mL/min；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.45mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.91mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.25mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.43mg。
实施例3
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：流速：0.5mL/min；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每m1含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.44mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.91mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.25mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.40mg。
实施例4
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：柱温：30℃；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.43mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.94mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.26mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.42mg。
实施例5
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：柱温：40℃；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.46mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.94mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.26mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.05mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.43mg。
实施例6
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：色谱柱Waters Cortects UPLC T3(100×2.1mm，1.6μm)；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.47mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.94mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.24mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.05mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.41mg。
实施例7
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：同实施例1。
(4)色谱条件的设置：色谱柱Waters Cortects UPLC Shield RP18(100×2.1mm，1.6μm)；其它条件同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.47mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.04mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.96mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.26mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.05mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.39mg。
实施例8
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：配制含0.01％甲酸的水溶液，作为流动相A；取色谱纯乙腈，作为流动相B，备用。
(4)色谱条件的设置：同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.45mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.05mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.97mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.25mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.38mg。
实施例9
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：配制0.05％甲酸水溶液(含2mM甲酸铵)，作为流动相A；取色谱纯乙腈，作为流动相B，备用。
(4)色谱条件的设置：同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每m1含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.45mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.06mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.91mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.25mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.43mg。
实施例10
本实施例提供一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其包括如下步骤：
(1)对照品溶液制备：同实施例1。
(2)供试品溶液制备：同实施例1。
(3)流动相的制备：配制含0.1％甲酸的水溶液，作为流动相A；取色谱纯乙腈，作为流动相B，备用。
(4)色谱条件的设置：同实施例1。
(5)QDa条件的设置：同实施例1。
(6)样品测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定。通天口服液(批号：19090040)中，每ml含川芎以洋川芎内酯A(C12H16O2)计，为0.02mg；含羌活和白芷以紫花前胡苷(C20H24O9)和水合氧化前胡素(C16H16O6)总量计，为0.49mg；含天麻以巴利森苷E(C19H24O13)计，为0.07mg；含赤芍以芍药苷(C23H28O11)和氧化芍药苷(C23H28O12)总量计，为0.95mg；含薄荷以迷迭香酸(C18H16O8)计，为0.02mg；含防风以升麻素(C16H18O6)和5-O-甲基维斯阿米醇苷(C22H28O10)总量计，为0.03mg；含菊花以芹菜素-7-O-葡萄糖苷(C21H20O10)、木犀草苷(C21H20O11)、异绿原酸B(C25H24O12)、异绿原酸A(C25H24O12)和异绿原酸C(C25H24O12)总量计，为0.25mg；含甘草以甘草素(C15H12O4)、甘草苷(C21H22O9)和异甘草苷(C21H22O9)总量计，为0.06mg；含茶叶以咖啡因(C8H10N4O2)计，为0.40mg。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (7)

1.一种通天口服液中多指标成分含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，对照品溶液制备：精密称取18种对照品：升麻素、紫花前胡苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、水合氧化前胡素、洋川芎内酯A、咖啡因、芍药苷、迷迭香酸、甘草素、巴利森苷E、甘草苷、异甘草苷、木犀草苷、氧化芍药苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C溶于甲醇中制备混合对照品溶液；
步骤二，供试品溶液制备：精密量取通天口服液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
步骤三，样品测定：分别精密吸取所述混合对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用UPLC-QDa联用技术进行测定；
其中，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱：Waters Cortects UPLC C18，100×2.1 mm，1.6 µm、Waters Cortects UPLC T3，100×2.1mm, 1.6µm或色谱柱Waters Cortects UPLCShield RP18，100×2.1mm, 1.6µm；柱温：30-40℃；流速：0.2-0.5 mL/min；流动相：A相为0.01-0.1%甲酸或含2mM甲酸铵的0.05%甲酸，B相为乙腈；梯度洗脱：0~1min，10%B；1~1.5min，10%~14%B；1.5~8min，14%~20%B；8~10min，20%~35%B；10~12min，35%~65%B；12~14min，65%~95%B；14~19min，95%B；采用QDa质谱检测器进行色谱峰的检测；
步骤三中QDa质谱检测器的设置：毛细管电压：0.8kV；探头温度：550℃-600℃；
步骤三中QDa质谱检测器其他的参数设置如下：
化合物名称 电离模式 SIR (m/z) 形成离子方式 锥孔电压/V 升麻素 +ESI 307.11 [M+H]+ 15 紫花前胡苷 +ESI 409.15 [M+H]+ 15 5-O-甲基维斯阿米醇苷 +ESI 453.17 [M+H]+ 15 芹菜素-7-O-葡萄糖苷 +ESI 433.11 [M+H]+ 15 水合氧化前胡素 +ESI 305.10 [M+H]+ 15 洋川芎内酯A +ESI 193.12 [M+H]+ 15 咖啡因 +ESI 195.08 [M+H]+ 30 芍药苷 -ESI 525.16 [M+HCOO]- 15 迷迭香酸 -ESI 359.07 [M-H]- 15 甘草素 -ESI 255.06 [M-H]- 15 巴利森苷E -ESI 459.11 [M-H]- 15 甘草苷 -ESI 417.11 [M-H]- 15 异甘草苷 -ESI 417.11 [M-H]- 15 木犀草苷 -ESI 447.09 [M-H]- 30 氧化芍药苷 -ESI 495.15 [M-H]- 30 异绿原酸B -ESI 515.12 [M-H]- 15 异绿原酸A -ESI 515.12 [M-H]- 15 异绿原酸C -ESI 515.12 [M-H]- 15
监测方式：SIR离子监测模式。
2. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，还包括如下步骤：
步骤四，标准曲线的建立：将所述混合对照品溶液稀释不同的浓度，进样分析；以质量浓度μg/mL为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；和
步骤五，根据所述供试品溶液超高效液相色谱图中18种指标性成分各自的色谱峰峰面积以及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出各指标性成分的含量。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，测定方法中采用的甲醇的浓度是75%。
4. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，在所述混合对照品溶液中，每1mL含升麻素0.3 μg、紫花前胡苷20 μg、5-O-甲基维斯阿米醇苷1 μg、芹菜素-7-O-葡萄糖苷2 μg、水合氧化前胡素1 μg、洋川芎内酯A 0.4 μg、咖啡因20 μg、芍药苷40 μg、迷迭香酸1 μg、甘草素0.3 μg、巴利森苷E 2 μg、甘草苷 2 μg、异甘草苷 0.3 μg、木犀草苷2 μg、氧化芍药苷 2 μg、异绿原酸B 3 μg、异绿原酸A 2 μg、异绿原酸C 2 μg。
5. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤三中色谱条件的设置：色谱柱为Waters Cortects UPLC C18，100×2.1 mm，1.6 µm；柱温：35℃；流速：0.3 mL/min；流动相：A相为0.05%甲酸，B相为色谱纯乙腈。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，探头温度为600℃。
7. 根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤三中，吸取的混合对照品溶液与供试品溶液的体积均为1 μL。
CN202111157535.6A 2021-09-29 2021-09-29 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法 Active CN114088823B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111157535.6A CN114088823B (zh) 2021-09-29 2021-09-29 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111157535.6A CN114088823B (zh) 2021-09-29 2021-09-29 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114088823A CN114088823A (zh) 2022-02-25
CN114088823B true CN114088823B (zh) 2024-02-27

Family

ID=80296428

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111157535.6A Active CN114088823B (zh) 2021-09-29 2021-09-29 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114088823B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116678978B (zh) * 2023-06-27 2023-11-17 中国中医科学院中药研究所 川芎茶调散指纹图谱及化学成分含量测定方法的建立

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111999395A (zh) * 2020-06-15 2020-11-27 陕西步长制药有限公司 一种药物制剂的指纹图谱检测方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111999395A (zh) * 2020-06-15 2020-11-27 陕西步长制药有限公司 一种药物制剂的指纹图谱检测方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HPLC-DAD法测定银屑优化颗粒中芍药苷、甘草苷、落新妇苷、迷迭香酸和甘草酸;李松 等;现代药物与临床;第29卷(第4期);第373-376页 *
Quality assessment of traditional herbal formula, Hyeonggaeyeongyo-tang through simultaneous determination of twenty marker components by HPLC–PDA and LC–MS/MS;Chang-Seob Seo 等;Saudi Pharmaceutical Journal;第28卷(第4期);第427-439页 *
Quantification of the 25 components in Onkyung-tang by ultra performance liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry;Seo ChangSeob 等;Korean Journal of Pharmacognosy;第47卷(第1期);第92-101页 *
基于定量指纹图谱分析与生物活性测定的通天口服液质量评价;高夏 等;中国实验方剂学杂志;第22卷(第14期);第44-50页 *
川芎茶调散的现代研究概况;王国有 等;中国实验方剂学杂志;第26卷(第13期);第228-234页 *
益胃饮中药血清药物化学研究;董宇 等;世界科学技术-中医药现代化(第01期);第84-92页 *
通天口服液的UPLC指纹图谱研究;肖礼娥 等;华西药学杂志;第32卷(第05期);第526-528页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114088823A (zh) 2022-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ong Extraction methods and chemical standardization of botanicals and herbal preparations
CN1670529B (zh) 一种复方血栓通制剂hplc指纹图谱的构建方法
CN101991661B (zh) 含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归的中成药的检测方法
Wang et al. Chromatographic fingerprinting and quantitative analysis for the quality evaluation of Xinkeshu tablet
Li et al. Comparative analysis of main aromatic acids and phthalides in Angelicae Sinensis Radix, Chuanxiong Rhizoma, and Fo-Shou-San by a validated UHPLC–TQ-MS/MS
CN102028840B (zh) 一种复方中成药的超高压液相检测方法
CN103969346B (zh) 一种三七皂苷类成分的分析方法
CN109374764B (zh) 八味龙钻颗粒hplc指纹图谱及主要成分含量测定方法
Guo et al. Comparative analysis of steroidal saponins in four Dioscoreae herbs by high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry
CN114088823B (zh) 一种通天口服液中多指标成分含量测定方法
Wu et al. UPLC–Q‐TOF–MS and UPLC–MS/MS methods for metabolism profiles and pharmacokinetics of major compounds in Xuanmai Ganjie Granules
CN114609269B (zh) 一种清金益气组合物的检测方法及其指纹图谱构建方法
Yan-Yan et al. Comparative pharmacodynamic, pharmacokinetic and tissue distribution of Dahuang-Gancao decoction in normal and experimental constipation mice
CN111487350B (zh) 丹参-三七药对的质量检测方法
CN104614450A (zh) 一种消渴清制剂的指纹图谱检测方法
CN107643343B (zh) 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法
CN110108827B (zh) 一种同时测定清瘟解毒片中八种活性成分的方法
CN116298001A (zh) 一种荆银颗粒及其指纹图谱的检测方法与应用
CN109115904B (zh) 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN104614475A (zh) 一种消渴清颗粒的含量检测方法
CN114994220B (zh) 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用
Kuang et al. Simultaneous determinations of eleven bioactive components in Suanzaoren decoction granules by high-performance liquid chromatography and its application to the quality control in productive processes
CN106918670B (zh) 一种药物组合物的质量检测方法
CN108776183A (zh) 大黄甘草汤的质量控制方法
CN103604898A (zh) 益心舒制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant