CN114081177A

CN114081177A - 一种冬枣核提取物的制备方法

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Publication number: CN114081177A
Application number: CN202111337083.XA
Authority: CN
Inventors: 刘德胜; 曲桂武; 吕长俊; 刘为忠; 于燕; 李付杰
Original assignee: Shandong Xinyue Health Technology Co ltd; Binzhou Medical College
Current assignee: Shandong Xinyue Health Technology Co ltd; Binzhou Medical College
Priority date: 2021-11-12
Filing date: 2021-11-12
Publication date: 2022-02-25

Abstract

本发明公开了一种冬枣核提取物的制备方法，其包括如下步骤：(1)将冬枣核粉碎，使用乙醇溶液对其进行浸提；将浸提液脱醇，得粗提取物；(2)向粗提取物加水混合，得混合液；然后向混合液接种酿酒酵母种子液，并加入果胶酶，在温度28～32℃条件下发酵5～7天，得发酵液；(3)将发酵液离心，取上清，干燥，得冬枣核提取物。经过该方法得到的冬枣核提取物的总糖脱糖率以及还原糖脱糖率均可达到90％以上，标志性物质总黄酮含量可达到9％以上。小鼠试验表明，用该方法得到的冬枣核提取物，可以实现低糖甚至无糖，其改善睡眠的效果要优于常规溶剂提取方法所得提取物。

Description

一种冬枣核提取物的制备方法

技术领域

本发明属于食品与医药领域，具体涉及一种冬枣核提取物的制备方法。

背景技术

冬枣，主产区位于山东滨州沾化区，是很多枣类品种中的产量较大的一种。滨州地区所产冬枣色泽亮丽，皮薄肉脆，甘甜清香，深受广大消费者喜爱；同时，冬枣除含有微量元素、维生素、蛋白、多糖等营养物质外，还富含黄酮类、有机酚酸类等多种对人体有益成分。冬枣在滨州地区已经形成了50万亩的种植规模，成为当地的主要经济作物和富民产业。在冬枣的使用、加工过程中，枣核往往成为废弃品。探索冬枣核在改善睡眠方面的新用途，充分利用丰富的产业资源，将冬枣核进一步加工利用，产生高附加值产品，可提高冬枣的利用率，促进当地冬枣产业发展。

在中医传统理论中，枣核中富含的黄酮类、皂苷类物质具有改善睡眠的作用。目前对枣核中的黄酮类或者皂苷类物质大部分以溶剂提取为方法对某种特定组分进行富集(许牡丹,张瑞花,王瑾锋.枣核中总皂苷提取工艺的研究[J].食品科技,2011,36(01):181-183；陈兰,李喜宏,王腾月,等.响应面法优化枣核总黄酮超声提取工艺研究[J].食品工业科技,2013,34(24):292-295.)。在枣核提取过程中也往往伴随着大量的以多糖、蛋白等为代表的对睡眠改善没有作用的物质。如何高效的同时富集枣核中黄酮、皂苷等多种改善睡眠的物质，降低多糖、蛋白等无效物质，是研究的热点。

以功能性食品或中药为原料发酵，可保存发酵底物固有的药效物质基础，可消耗非药效物质基础部分例如多糖、蛋白、脂肪油等物质，可大幅度降低非药效物质基础部分含量，从而提高提取物的功效。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种冬枣核提取物的制备方法，该法工艺简单，成本低廉，易于扩大生产，可以有效降低冬枣核提取物中的总糖以及还原糖的含量。按照该方法制备的冬枣核提取物，具有更好的改善睡眠效果。

具体技术方案如下：

一种冬枣核提取物的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将冬枣核粉碎，使用乙醇溶液对其进行浸提；将浸提液脱醇，得冬枣核提取物；

(2)向冬枣核粗提取物加水混合，得混合液；然后向混合液接种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)种子液，并加入果胶酶，在温度28～32℃条件下发酵5～7天，得发酵液；

(3)将发酵液离心，取上清，干燥，得冬枣核提取物。

本发明使用酿酒酵母与果胶酶共同作用于冬枣核的乙醇提取物，以冬枣中的糖为碳源，有效降低冬枣核提取物中的总糖以及还原糖的含量；同时，酿酒酵母发酵产生乙醇，可更有效地富集发酵产物中的醇溶成分，比如黄酮类。实验证实，本发明改善睡眠的效果要优于常规溶剂提取方法所得提取物。

进一步，步骤(1)中，乙醇溶液的体积百分浓度为50％～90％。

进一步，步骤(1)中，粉碎的冬枣核与乙醇溶液的用量比为1g：(3～10)mL(为每次浸提的用量比)。

进一步，步骤(1)中，浸提条件为室温浸提24～72h(为每次浸提的时间)。

进一步，步骤(1)中，所述的脱醇为真空减压脱醇，脱除条件优选为20℃～100℃、真空度为0.01～0.1mPa的条件下减压脱醇至无醇味。

进一步，步骤(1)中，可浸提1～3次。

进一步，步骤(1)中，使用超声辅助浸提。

进一步，步骤(1)中，将冬枣核粉碎后过120目筛。

进一步，步骤(2)中，冬枣核粗提取物与水的用量比为1g：(8～12)mL。

进一步，步骤(2)中，酿酒酵母的用量为以混合液计4×10⁶～8×10⁶cfu/mL。

进一步，步骤(2)中，果胶酶的添加量为以混合液计0.03～0.15U/mL。

进一步，步骤(2)中，所述的水为经过灭菌的去离子水。去离子水的灭菌条件优选为在121℃、0.1Mpa的条件下灭菌20min。

进一步，步骤(3)中，所述的过滤的条件为：通过0.45μm微孔滤膜过滤除渣，得到发酵产物的续滤液。

进一步，步骤(3)中，所述的干燥为真空浓缩干燥。真空浓缩干燥的条件优选为20℃～100℃、真空度为0.01～0.1mPa的条件下浓缩干燥。

进一步，所述的酿酒酵母种子液的制备方法包括：将YM培养基灭菌后，接种酿酒酵母，培养温度为26～30℃，摇床转速为120～160rpm，培养时间为72h～120h。

其中，YM培养基的灭菌条件优选为121℃、0.1Mpa的条件下灭菌20min。

本发明还公开了应用上述制备方法获得的冬枣核提取物。

本发明的有益效果如下：

本发明采用溶剂提取、微生物发酵的方法制备冬枣核提取物。经过该方法得到的冬枣核提取物的总糖脱糖率以及还原糖脱糖率均可达到90％以上，标志性物质总黄酮含量可达到9％以上。小鼠试验表明，用该方法得到的冬枣核提取物，可以实现低糖甚至无糖，其改善睡眠的效果要优于常规溶剂提取方法所得提取物。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

具体实施方式中，酿酒酵母种子液通过如下方法制备：YM培养基在121℃、0.1Mpa的条件下灭菌20min后，接种酿酒酵母，设置培养温度28℃，摇床转速设为120rpm，培养时间为72h。

具体实施方式中，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，编号bio-64552)购自北京百欧博伟生物技术有限公司；果胶酶R-10(生物技术级)购自上海麦克林生物化学有限公司(30000U/g)。

实施例1

一种冬枣核提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)选取冬枣核1kg，粉碎至全部过120目筛；在室温条件下用体积百分浓度90％的乙醇超声辅助浸提三次，每次溶剂用量3L，每次提取24h。将浸提液在40℃、真空度为0.1mPa的条件下减压脱醇至无醇味，得冬枣核粗提取物。

(2)将冬枣核粗提取物与灭菌去离子水按照1g：8mL混合，得混合液；然后向混合液按照以其体积计4×10⁶cfu/mL接种酿酒酵母种子液，同时向混合液中以按照以其体积计质量计0.15U/mL添加果胶酶，28℃发酵时间5d，得发酵液。

(3)将发酵液过0.45μm滤膜，取续滤液，40℃、真空度为0.1mPa条件下浓缩干燥，即得冬枣核提取物。

上述方法得到的冬枣核提取物的总糖脱糖率为92.2％，还原糖脱糖率为91.1％，标志性物质总黄酮含量为9.12％。

实施例2

一种冬枣核提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)选取冬枣核1kg，粉碎至全部过120目筛；在室温条件下用体积百分浓度85％的乙醇超声辅助浸提三次，每次溶剂用量5L，每次提取36h。将浸提液在40℃、真空度为0.1mPa的条件下减压脱醇至无醇味，得粗提取物。

(2)将粗提取物与灭菌去离子水按照1g：10mL混合，得混合液；然后向混合液按照以其体积计6×10⁶cfu/mL接种酿酒酵母种子液，同时向混合液中以按照以其体积计质量计0.12U/mL添加果胶酶，30℃发酵时间6d，得发酵液。

上述方法得到的冬枣核提取物的总糖脱糖率为95.6％，还原糖脱糖率为94.2％，标志性物质总黄酮含量为9.86％。

实施例3

一种冬枣核提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)选取冬枣核1kg，粉碎至全部过120目筛；在室温条件下用体积百分浓度80％的乙醇超声辅助浸提三次，每次溶剂用量8L，每次提取48h。将浸提液在40℃、真空度为0.1mPa的条件下减压脱醇至无醇味，得粗提取物。

(2)将粗提取物与灭菌去离子水按照1g：12mL混合，得混合液；然后向混合液按照以其体积计8×10⁶cfu/mL接种酿酒酵母种子液，同时向混合液中以按照以其体积计质量计0.09U/mL添加果胶酶，32℃发酵时间7d，得发酵液.

上述方法得到的冬枣核提取物的总糖脱糖率为93.7％，还原糖脱糖率为93.0％，标志性物质总黄酮含量为9.59％。

对比例1

参照实施例1的步骤(1)对冬枣核进行浸提，将浸提后得到的浸提液在40℃、真空度为0.1mPa条件下浓缩干燥，得冬枣核提取物。

上述方法得到的冬枣核提取物的标志性物质总黄酮含量为3.57％。

动物实验

对实施例1与对比例1获得的冬枣核提取物进行改善小鼠睡眠作用实验。

1实验方法

1.1给药方案

实验前称量小鼠的体质量，记录为初始体质量，并把小鼠分为四组，每组10只。分别为空白对照组(第一组)，用生理盐水灌胃；实施例1低剂量组(第二组)，10g/kg冬枣核提取物灌胃；实施例1高剂量组(第三组)，用剂量为20g/kg冬枣核提取物灌胃；对比例1组(第四组)，20g/kg提取物灌胃。四组小鼠连续7天每天在同一时间灌胃，然后在第7天进行直接睡眠实验。灌胃体积为0.1mL/10g。

1.2冬枣核提取物影响阈下剂量戊巴比妥小鼠睡眠实验

进行预实验，确定戊巴比妥钠阈下睡眠剂量。直接睡眠实验完成后，将给药方案项下4组小鼠，每组都按35mg/kg剂量腹腔注射物戊巴比妥钠(临用前用生理盐水配制)，注射量为0.1mL/10g，小鼠的入睡判断标准为将小鼠翻成后背朝下，腹部朝上的状态，如果在30～60秒没有翻正，说明在睡眠状态。在给药40min内观察小鼠入睡只数并做好记录。

1.3冬枣核提取物延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间实验

预实验确定能够让全部小鼠入睡的戊巴比妥钠阈上剂量。选择40只小鼠按照“给药方案”项下分组和剂量进行实验。最后一次给药后所有小鼠全部腹腔注射0.1mL/10g浓度为40mg/kg的戊巴比妥钠。当小鼠的翻正反应消失30～60秒，说明动物进入睡眠状态，恢复翻正反应时说明动物睡醒。计录小鼠睡眠时间(动物翻正反应消失到恢复的这段时间)。

1.4数据处理

所得实验数据用SPSS20统计软件进行分析处理，计数资料采用平均数±标准差

表示，组间各项指标参数对比采用t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2实验结果

2.1冬枣核提取物影响阈下剂量戊巴比妥小鼠睡眠实验结果

冬枣核提取物影响阈下剂量戊巴比妥小鼠睡眠实验结果见表1，结果证实冬枣核提取物高剂量组可有效协同戊巴比妥钠改善小鼠睡眠。而普通浸提法所得提取物虽然有一定作用，但并无显著性差异。

表1.冬枣核提取物影响阈下剂量戊巴比妥小鼠睡眠实验结果

^*与空白对照组相比较，P<0.05

2.2冬枣核提取物延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间实验结果

冬枣核提取物延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间实验结果见表2，结果证实冬枣核提取物低剂量以及高剂量组均可有效协同戊巴比妥钠改善小鼠睡眠。

表2.冬枣核提取物延长阈下剂量戊巴比妥小鼠睡眠实验结果

^*与空白对照组相比较，P<0.05

本发明通过果胶酶脱果胶、酿酒酵母菌发酵对浸提所得枣核提取物进行处理，能够富集冬枣核改善睡眠的黄酮类等有效物质，实现了低糖乃至无糖化。处理后的冬枣核提取物可以有效延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠，说明冬枣核提取物能够协同戊巴比妥钠产生较好的改善睡眠的效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种冬枣核提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将冬枣核粉碎，使用乙醇溶液对其进行浸提；将浸提液脱醇，得冬枣核粗提取物；

(2)向冬枣核粗提取物加水混合，得混合液；然后向混合液接种酿酒酵母种子液，并加入果胶酶，在温度28～32℃条件下发酵5～7天，得发酵液；

(3)将发酵液过滤，取滤液，干燥，得冬枣核提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中：

冬枣核粗提取物与水的用量比为1g：(8～12)mL；

酿酒酵母的用量为以混合液计4×10⁶～8×10⁶cfu/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中：

果胶酶的添加量为以混合液计0.03～0.15U/mL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的水为经过灭菌的去离子水。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中：

乙醇溶液的体积百分浓度为50％～90％；

粉碎的冬枣核与乙醇溶液的用量比为1g：(3～10)mL；

浸提条件为室温浸提24～72h。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的脱醇为真空减压脱醇。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的过滤的条件为：通过0.45μm微孔滤膜过滤除渣，得到发酵产物的续滤液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的酿酒酵母种子液的制备方法包括：将YM培养基灭菌后，接种酿酒酵母，培养温度为26～30℃，摇床转速为120～160rpm，培养时间为72h～120h。

9.一种冬枣核提取物，应用如权利要求1～8任一项所述的制备方法获得。