CN114081039B - 一种促进荔枝果实转色的复合试剂及方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于水果的催熟技术领域，具体涉及一种促进荔枝果实转色的复合试剂及方法，为开发一种通过调控果皮色素来促进荔枝果实转色的方法，以提高荔枝的商品性，本发明提供了一种荔枝果实转色复合试剂，即血红素和硫酸钾复合试剂，通过该复合试剂对果皮转色前的荔枝果实进行调控处理，可以使荔枝果皮颜色提前变红，并着色更加均匀，从而提高荔枝的商品性。

Description

一种促进荔枝果实转色的复合试剂及方法

技术领域

本发明属于水果的催熟技术领域，具体涉及一种促进荔枝果实转色的复合试剂及方法。

背景技术

荔枝(Litchi chinensis Sonn.)是一种比较常见的热性水果，分布于我国的西南部、南部和东南部，广东和福建南部栽培最盛，荔枝与香蕉、菠萝、龙眼一同称为“南国四大果品”。荔枝味甘、酸、性温，入心、脾、肝经；可止呃逆，止腹泻，是顽固性呃逆及五更泻者的食疗佳品，同时有补脑健身，开胃益脾，有促进食欲之功效。荔枝木材坚实、纹理雅致、耐腐，历来为上等名材。荔枝属于常绿乔木，花期在春季，而果期在夏季，荔枝的果肉产鲜时半透明凝脂状，味香美，深受人们的喜爱。

果皮颜色是荔枝果实外观品质的重要组成部分之一，在荔枝果实的成熟过程中，随着叶绿素的降解和花色苷的合成，果皮颜色一般会发生由“绿色—黄色—红色”的变化，这也是判断荔枝成熟时期的一个重要标志。但由于荔枝果实可食部分由假种皮发育而成，果皮与果肉的细胞之间联系不紧密，这种特殊结构造成了部分荔枝品种的果实着色落后于假种皮糖的累积，从而造成果皮着色较差。比如，‘妃子笑’荔枝品种因其丰产稳产，果大肉厚的优良品质在我国海南省和广东省受到大力推广。但由于果皮着色较差，成熟果实通常着色不均匀甚至不着色，导致市场上消费者的接受度下降，严重影响了果实商品性。

当前，通过果皮色素对果皮着色进行调控是一种改善果皮外观质量的有效手段。因此，有必要开发一种通过调控果皮色素来促进荔枝果实转色的方法，以提高荔枝的商品性。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了一种促进荔枝果实转色的复合试剂，即血红素和硫酸钾复合试剂，通过该复合试剂可以促进荔枝果实转色，并着色更加均匀。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

本发明提供了一种荔枝果实转色复合试剂，该所述复合试剂包括血红素和硫酸钾。

优选地，所述复合试剂为血红素和硫酸钾的混合液，所述血红素的浓度为10μmol/L，所述硫酸钾的浓度为35g/L。

优选地，所述荔枝品种包括‘妃子笑’荔枝。

本发明经研究发现，利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂处理妃子笑荔枝果实，果皮在3d的时候就有显著的变化，在5d的时候达到一个理想的效果。而未处理的荔枝果实果皮达到近似的颜色效果需要15d左右。可见，利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂对进行调控处理，可以使妃子笑荔枝果皮颜色变红提前10天左右，并着色更加均匀。

本发明还提供了上述荔枝果实转色复合试剂在促进荔枝果实转色中的应用。

本发明还提供了一种促进荔枝果实转色的方法，具体为：往果皮转色前的荔枝果实上喷施上述的荔枝果实转色复合试剂。

优选地，所述复合试剂的用量为喷施至果实表面呈滴水状。

优选地，所述荔枝品种包括‘妃子笑’荔枝。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明提供了一种促进荔枝果实转色的复合试剂，即血红素和硫酸钾复合试剂，通过该复合试剂对果皮转色前的荔枝果实进行调控处理，可以使荔枝果皮颜色提前变红，并着色更加均匀，从而提高荔枝的商品性。

附图说明

图1为复合试剂处理与对照间的妃子笑荔枝果实的外观图(a：未处理的妃子笑荔枝青果；b：复合试剂处理3天的妃子笑荔枝果实；c：复合试剂处理5天的妃子笑荔枝果实；d：对照3天的妃子笑荔枝果实；e：对照5天的妃子笑荔枝果实)；

图2为复合试剂处理与对照间的妃子笑荔枝果实的色差仪测定结果；

图3为妃子笑荔枝果皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的高效液相色谱测定结果；

图4为PAL基因的表达量变化情况；

图5为F3-H基因的表达量变化情况；

图6为F3’-H基因的表达量变化情况。

上述图中所述的10μM处理为10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂处理。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。

实施例1一种促进荔枝果实转色的方法

1、材料方法

(1)果实的处理

选取盛花45d后的‘妃子笑’荔枝(果皮转色前)果实，选择的果树和果实尽量长势均一。在处理当天(0d)的上午8:00－10:00，用喷壶将各处理药液【5μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾处理组(以纯水为溶剂)、10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾处理组、50μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾处理组、100μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾处理组以及对照处理组(即纯水)，并设置未处理组】均匀喷施在己标记果穗的果实上，直至药液呈滴水状为止，在处理时(0d)和处理后3d、5d、15d(采收期)的上午8:00－10:00进行采样。采样时，参照标准果的生长状况每株树采摘发育程度相近的5串个果，每个处理共计采果50个左右。采摘后立即带回实验室进行各项指标的测定。

(2)果皮颜色的测定

用X-rite SP60色差仪测定果实颜色，测量孔径尺寸为8mm，以色差仪配套的黑白校正板校正后，测定果实赤道圈附近的L^*、a^*、b^*色度值，重复5次。

(3)矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量的测定

1)样本提取

称取约0.2g样本(果皮)，放入研钵中磨碎，加入2mL甲醇-盐酸水溶液(甲醇、盐酸与水的体积比为3：1：2)，40℃超声萃取60min后，90℃水浴2h，8000g室温离心20min，取上清液用针头式过滤器过滤后待测。

2)液相色谱条件

对步骤1)的上清液进行高效液相色谱分析，色谱条件为：岛津LC-20AT高效液相色谱仪，C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm)，流动相A：甲醇，流动相B：1％乙酸水，A:B＝20:80，进样量为10μL，流速为1mL/min，柱温为35℃，走样时间为40min，紫外检测器的波长为520nm。

3)标准曲线

先对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(标准品来源于Sigma)标样进行检测，确定峰的位置，并绘制标准曲线，然后根据该标准曲线确定后续测定样品中的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量。

(4)荧光定量PCR验证

利用全式金公司的EasyPure Plant RNA Kit试剂盒提取‘妃子笑’果皮组织的RNA，并以EasyScript One-Step RT-PCRSuperMix反转录试剂盒合成第1链cDNA。反转录所用的RNA浓度统一调整为0.5μmol·L^-1，每个反转录反应使用1μmol·L^-1RNA。定量引物利用Primer Premier 5.0软件进行设计，具体的引物序列如下所示：

PAL-F：CAGTTGCCAGCCATGATACT；

PAL-R：TGCTGTCCATGACCCAATC；

F3-H-F：AAGCGGTGGTGAACTCAAA；

F3-H-R：TGATTGGCTGCTCCAAGATAG；

F3'-H-F：GACGACTTCTTGGGTGAGATAC；

F3'-H-R：CATCAGCATCAGCGTTAT。

qRT-PCR反应在ABI 7500Real-Time PCR System上进行，qRT-PCR的扩增体系为：DNA模板2μL；2×TaqⅠMix 10μL；DyeⅡ0.4μL；上游引物0.8μL；下游引物0.8μL；ddH₂O6μL。采用的两步法进行：第一步预变性95°、30秒；第二步反应95°、5秒、62°、34秒，40个循环。扩增所得数据用2-△△CT法进行数据处理。所有试验均设3次重复，选用LcACTIN作为内参。

2、测试结果

1)果皮颜色观察

通过不同浓度梯度的对比试验发现(未图示)，10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂对妃子荔枝果实进行喷施处理后的效果最明显。

通过处理前后不同浓度间的对比图(图1)可以看到，与未处理组(图1a)和对照处理组(图1d；e)相比，利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂处理的妃子笑荔枝果实(图1b；c)有明显的变红，并且果实颜色更加均匀。

2)果皮颜色测定结果

用色差仪测定妃子笑荔枝果实颜色，测定果实赤道圈附近的L^*、a^*、b^*色度值，每个样品选择5个生物学重复。其中a^*值是与红绿颜色最为相关的值。将所有样品的a^*值做柱状图(图2)后发现：对照组的荔枝果皮颜色变红的速度缓慢，而利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂处理的妃子笑荔枝果实果皮在3d的时候就有显著变化，在5d的时候达到一个理想的效果。而未处理的荔枝果实果皮达到近似的颜色效果则需要15d左右。说明利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂进行调控处理，可以使妃子笑荔枝果皮颜色变红提前10天左右，并着色更加均匀。

3)矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量测定结果

利用液相测定了处理与对照间矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量(μg/g FW)的测定结果发现(图3)，处理后同样时间，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量显著增加，进一步验证了利用10μmol/L的血红素+35g/L的硫酸钾复合试剂对荔枝进行调控后，妃子笑荔枝果实的颜色变化。

4)荧光定量结果

花青素合成途径中，L-苯丙氨酸至肉桂酸合成的关键基因PAL、柚皮素至二氢黄酮醇合成的关键基因F3-H以及二氢黄酮醇至二氢橡黄素合成的关键基因F3’-H的荧光定量结果显示(图4；5；6)，与对照组相比，处理组PAL基因的表达量在同一时间都有明显的上调趋势，这与果皮颜色的变化趋势一致。而F3-H和F3’-H基因的表达趋势则在处理后3天就达到一个表达量的峰值，之后(3-5天之间)的表达量有一个回落，说明这两个基因可能是先于表型和含量变化的。

以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

                         序列表

<110>  广东省农业科学院果树研究所

<120>  一种促进荔枝果实转色的复合试剂及方法

<160>  6

<170>  SIPOSequenceListing 1.0

<210>  1

<211>  20

<212>  DNA/RNA

<213>  PAL-F(Artificial Sequence)

<400>  1

cagttgccag ccatgatact                                              20

<210>  2

<211>  19

<212>  DNA/RNA

<213>  PAL-R(Artificial Sequence)

<400>  2

tgctgtccat gacccaatc                                               19

<210>  3

<211>  19

<212>  DNA/RNA

<213>  F3-H-F(Artificial Sequence)

<400>  3

aagcggtggt gaactcaaa                                               19

<210>  4

<211>  21

<212>  DNA/RNA

<213>  F3-H-R(Artificial Sequence)

<400>  4

tgattggctg ctccaagata g                                            21

<210>  5

<211>  22

<212>  DNA/RNA

<213>  F3'-H-F(Artificial Sequence)

<400>  5

gacgacttct tgggtgagat ac                                           22

<210>  6

<211>  18

<212>  DNA/RNA

<213>  F3'-H-R(Artificial Sequence)

<400>  6

catcagcatc agcgttat                                                18

Claims (6)

1.一种荔枝果实转色复合试剂，其特征在于，所述复合试剂包括血红素和硫酸钾；所述复合试剂为血红素和硫酸钾的混合液，所述血红素的浓度为10μmol/L，所述硫酸钾的浓度为35g/L。

2.根据权利要求1所述的一种荔枝果实转色复合试剂，其特征在于，所述荔枝品种为‘妃子笑’荔枝。

3.权利要求1或2所述的荔枝果实转色复合试剂在促进荔枝果实转色中的应用。

4.一种促进荔枝果实转色的方法，其特征在于，往果皮转色前的荔枝果实上喷施权利要求1或2所述的荔枝果实转色复合试剂。

5.根据权利要求4所述的一种促进荔枝果实转色的方法，其特征在于，所述复合试剂的用量为喷施至果实表面呈滴水状。

6.根据权利要求4所述的一种促进荔枝果实转色的方法，其特征在于，所述荔枝品种为‘妃子笑’荔枝。

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