CN114073720B - 一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其制备方法和应用 - Google Patents

一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药提取领域，具体涉及一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其制备方法和应用。所述复方中药由美洲大蠊和蒲公英组成，按重量份配比为美洲大蠊∶蒲公英＝(4～9)∶(2～6)；所述复方中药的中药材混合后，经水提醇沉后得到中药复方提取物。本发明制备得到的中药复方提取物产品收率高、生物活性好，且便于操作、易于大规模生产操作；并且对湿热型溃疡性结肠炎具有显著的治疗效果，并经试验证实可应用于制备结肠靶向定位制剂。

Description

一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其制备方法和 应用
技术领域
本发明涉及中药提取领域，具体涉及一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其制备方法和应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)，是一种由遗传、免疫、环境、肠道微生态等多种因素相互作用而产生的肠道疾病，以发作、缓解和复发交替为特征，临床多表现为腹痛、腹泻、粘液脓血便和里急后重。2017年“溃疡性结肠炎中西医结合诊疗共识意见”将UC辩证分型为6型，其中临床上以大肠湿热型居多。随着人们生活水平不断提高，环境因素不断改变，饮食结构更加多样化，UC的发病率和患病率逐年呈增长趋势，且具有癌变倾向，已被世界卫生组织(WHO)列为世界性现代难治病之一。目前临床上常使用单一抗炎药物对轻中度UC进行治疗，长期使用毒副作用大，且以反复发作，然而中药具有多组分，多靶点，协同发挥药效，辨证论治，标本兼治的优势。
美洲大蠊(Periplaneta americana L.)，味咸，性寒，归心、肝、脾、肾经，功能活血散瘀、健脾消疳、利水消肿、敛疮生肌。《神农本草经》列为中品，云其“主血瘀，症坚，寒热，破积聚，喉咽痹”。现代药理学研究主要有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫、保肝、促进组织修复等作用。其主要化学成分为信息素、蛋白多肽类、氨基酸类、脂肪运动激素和二氢异香豆素。2017年“溃疡性结肠炎中西医结合诊疗共识意见”指出以美洲大蠊干燥虫体为原料药精制的乙醇提取物康复新液具有通利血脉养阴生肌的功效用于各证型UC患者，临床上采用美沙拉嗪联合康复新液、柳氮磺胺吡啶联合康复新液、益生菌联合康复新液通过联合用药保留灌肠的方式治疗轻中度UC患者，能够明显改善患者腹痛、腹泻、粘液血便等症状，修复受损肠黏膜。蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)，作为药食两相宜的植物，主要功能为清热解毒、祛风除湿、通经活络、利尿凉血。现代药理学研究主要有抗菌、抗炎消炎、抗肿瘤、利胆等作用，其活性成分主要有黄酮类、多糖类、有机酸类、倍半萜内脂类等。
UC的病机为本虚标实，脾肾亏虚为本，湿、热、瘀、积为标。初病以实证为主，多见大肠湿热证；久病入络及肾，以虚证为主。然而临床上往往虚实并存，寒热互见，气血同病，互相影响。本验方根据大肠湿热人群症候，结合该病中医临床辩证的特点组方，治疗法则以清热化湿、活血化瘀等治其标，健脾益气治其本。其中美洲大蠊入心、肝、脾、肾，健脾、散瘀消肿、敛疮生肌促修复，且加强收敛止泻；蒲公英苦寒，清热燥湿，泻火解毒，善治肠胃湿热所致泄泻，痢疾；两药合用以共同调补脏腑，益气健脾、去腐生肌、消除炎症水肿，清流洁源，标本兼顾，使湿热得除，诸证自消。
CN101829220B也公开了一种治疗溃疡性结肠炎的中药组合物，含有美洲大蠊提取物和蒲公英。但其组分种类多，提取工艺复杂，不利于产业化。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明通过优化提取方法和成分，提供了一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药及其提取、制备方法和应用。
本发明的一个目的在于提供一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药，其特征在于，所述复方中药的中药材由美洲大蠊和蒲公英组成。
进一步的，所述复方中药的中药材按重量份配比为：美洲大蠊∶蒲公英＝(4～9)∶(2～6)；优选的，所述配比为：美洲大蠊∶蒲公英＝7∶3或6∶4。
进一步的，所述复方中药的中药材混合后，经水提醇沉后得到中药复方提取物。
进一步的，所述复方中药的中药材混合后，通过水煎煮提取，将提取液合并过滤浓缩得到中药复方水提取物，再将中药复方水提取物醇沉，弃去油脂后，将溶液过滤浓缩，得到中药复方提取物。
进一步的，所述复方中药的中药材按如下方法提取：
①将美洲大蠊和蒲公英干料与水混合后于多功能提取罐中75～100℃微沸煎煮，收集合并提取液过滤后于70℃浓缩至密度为1.04～1.26g/mL，即得复方药材水提物；
②将所述步骤①得到的复方水提物与乙醇混合，调节含醇量至40～80％，搅拌静置后，弃去上层油脂，过滤，将得到的滤液于60℃减压浓缩至密度为1.20～1.30g/mL，即得中药复方提取物。
优选的，所述美洲大蠊和蒲公英为干燥全虫和全草。
优选的，所述步骤①中美洲大蠊和蒲公英干料与水的质量比为1∶(8～12)，更优选为1∶(9～11)。
优选的，所述提取次数为1～4次，单次提取时间为1～4h；更优选为提取次数为2～3次，单次提取时间为2～3h。
优选的，所述上层油脂于10～25℃静置12～48h后除去。更优选的，于25℃静置48h后去除油脂。
优选的，所述提取温度为90～100℃。
本发明对过滤及浓缩方法没有特殊限定，采用本领域的常规方法即可。
优选的，所述步骤②中调节含醇量至55％。本发明中，优选所用95％乙醇。
优选的，所述减压浓缩的压力为-0.075Pa。
进一步的，所述复方中药的剂型选自微丸、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂；优选的，所述剂型为结肠定位微丸。
本发明的复方中药除了含有中药复方提取物外，还包括辅料或辅助成分。本发明对辅料的种类和比例没有特殊限定，采用本领域常规方法即可。
进一步的，所述结肠定位微丸由丸芯和包衣材料组成，所述丸芯的组成为中药复方提取物、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠，所述包衣材料选自尤特奇和/或乙基纤维素。
进一步的，所述中药复方提取物、所述微晶纤维素和所述羧甲基淀粉钠的用量为(30-50)∶(45-65)∶(1-10)；优选的，所述用量比为40∶55∶5。
进一步的，所述复方中药中，所述中药复方提取物的质量百分含量为20～50％；优选为30～40％。
本发明的另一个目的在于提供一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药的制备方法，其特征在于，所述复方中药为结肠定位微丸，包括如下步骤：
①称取中药复方提取物、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，制备成合适的软材，用挤出滚圆机制备丸芯，烘干，以20～40目的微丸为合格丸芯；
②称取合格丸芯至流化床中，以尤特奇S100和乙基纤维素的混合液体包衣，干燥后即得结肠定位微丸。
本发明的另一个目的在于提供上述中药复方提取物。
本发明的另一个目的在于提供上述中药复方提取物在制备治疗湿热型溃疡性结肠炎药物中的应用。
本发明的另一个目的在于提供上述复方中药在制备治疗湿热型溃疡性结肠炎药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明的中药复方提取物通过水浸泡，煎煮提取，将提取液合并过滤浓缩得到中药复方水提取物，再将中药复方水提取物醇沉，弃去油脂后，将溶液过滤浓缩，得到中药复方提取物。本发明的制备得到的中药复方提取物产品收率高、生物活性好，且便于操作、易于大规模生产操作。
本发明通过对中药复方提取物进行研究发现，中药复方提取物灌肠对湿热型UC具有显著的治疗效果，并经试验证实可应用于制备结肠靶向定位制剂。
附图说明
图1是Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠组织的影响(HE，×200)。
图2是Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠组织的影响(HE，×200)。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是：下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
本发明中，所用药材为干燥全虫和全草，本发明对美洲大蠊的来源没有设定，可以采用市售产品。蒲公英药材为《中国药典》2015版所载药材。
在本发明具体实施例中，所述中药复方提取物记为Ento-PB。
实施例1
中药复方药材(美洲大蠊∶蒲公英＝7:3、6:4、5:5、4:6、3:7)500g，加水5L于多功能提取罐中95℃加热提取，提取3次，每次2h，收集滤液，过滤，浓缩至密度1.04～1.26g/mL(70℃)。加入95％乙醇，调节醇含量至55％，于25℃静置48h后去除油脂，过滤，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20～1.26g/mL(65℃)，即得Ento-PB。
表1不同药材比下中药复方提取物的收率及活性指标评价
Figure BDA0002625483350000041
根据表1结果，随着美洲大蠊药材比例减少，蒲公英药材比例增加，总游离氨基酸质量及Caco-2细胞24h相对迁移能力减小，总酚酸质量及抗炎活性增加，优选美洲大蠊∶蒲公英＝7:3进行下一步的提取工艺优化。
实施例2
中药复方药材(美洲大蠊∶蒲公英＝7:3)500g，加水5L于多功能提取罐中95℃加热提取，提取3次，每次2h，收集滤液，过滤，浓缩至密度1.04～1.26g/mL(70℃)。加入95％乙醇，调节醇含量至55％，于25℃静置48h后去除油脂，过滤，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20～1.26g/mL(65℃)，即得Ento-PB。
表2不同液料比下中药复方提取物的收率及活性指标评价
Figure BDA0002625483350000042
根据表2结果，随着液料比的增加，干膏收率、总游离氨基酸、总酚酸、Caco-2细胞24h相对迁移能力及抗炎活性均增加，但当液料比超过1:10时，增加均不明显，考虑大规模产业化的成本控制，优选1:10的比例，进行下一步的提取工艺优化。
实施例3
中药复方药材(美洲大蠊∶蒲公英＝7:3)500g，加水5L于多功能提取罐中75～100℃加热提取，提取3次，每次2h，收集滤液，过滤，浓缩至密度1.04～1.26g/mL(70℃)。加入95％乙醇，调节醇含量至55％，于25℃静置48h后去除油脂，过滤，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20～1.26g/mL(65℃)，即得Ento-PB。
根据表3结果，当温度较低时，药材中的有效物质溶出缓慢，当温度超过85℃时干膏收率才会随温度升高而显著增加，提取温度到达90℃时，干膏收率增加不再明显，增加量<1％，且随着温度的升高，氨基酸类、酚酸类物质总量、Caco-2细胞24h相对迁移能力及抗炎活性增加，90℃以上增加不再明显，其中当提取温度为95℃时氨基酸总量收率最高及抗炎活性较好，优选95℃为提取温度进行下一步工艺研究。
表3不同提取温度下中药复方提取物的收率及活性指标评价
Figure BDA0002625483350000051
实施例4
中药复方药材(美洲大蠊∶蒲公英＝7:3)500g，加水5L于多功能提取罐中95℃加热提取，提取3次，每次1～4h，收集滤液，过滤，浓缩至密度1.04～1.26g/mL(70℃)。加入95％乙醇，调节醇含量至55％，于25℃静置48h后去除油脂，过滤，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20～1.26g/mL(65℃)，即得Ento-PB。
表4不同单次提取时间下中药复方提取物的收率及活性指标评价
Figure BDA0002625483350000052
根据表4结果，干膏收率、总氨基酸、总酚酸含量与Caco-2细胞24h相对迁移能力随单次提取时间的增加而增加，但当单次提取时间大于2h时，各评价指标均增加很小。综合考虑提取效率，优选单次提取时间为2h。
实施例5
中药复方药材(美洲大蠊∶蒲公英＝7:3)500g，加水5L于多功能提取罐中95℃加热提取，提取3次，每次2h，收集滤液，过滤，浓缩至密度1.04～1.26g/mL(70℃)。加入95％乙醇，调节醇含量至40～80％，于25℃静置48h后去除油脂，过滤，回收乙醇，浓缩至相对密度1.20～1.26g/mL(65℃)，即得Ento-PB。
根据表5结果，干膏收率、总氨基酸与总酚酸含量、Caco-2细胞24h相对迁移能力及抗炎活性在含醇量为60％时最高，优选含醇量为60％。
表5不同含醇量下中药复方提取物的收率及活性指标评价
Figure BDA0002625483350000061
实施例6
本发明Ento-PB通过不同给药途径对大肠湿热型UC大鼠的治疗作用
1.实验材料
1.1实验动物
SPF级SD雄性大鼠50只，200±20g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2016-0004，批号：20190423
1.2受试药物
本发明中药复方浸膏Ento-PB；
奥沙拉秦钠胶囊，(批号：1902002，天津力生制药股份有限公司，规格：0.25g)。
1.3实验试剂
2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid sol，TNBS)，(批号：026K5006，美国sigma公司)；
老白干，(批号：GB/T22045，泸州老窖股份有限公司)；
蜂蜜，(批号：GB14923，大姚汇源蜂业食品有限公司)；
油脂，(批号：GB16752，佛山市顺德区三海食品贸易有限公司)；
无水乙醇，AR(批号：2017，天津市福晨化学试剂厂)；
异氟烷，(批号：20190701，山东科源制药股份有限公司)；
水合氯醛，AR(批号：20170203，国药集团化学试剂有限公司)；
甲醛溶液，AR(批号：20170523，天津市风船化学试剂科技有限公司)；
磷酸氢二钠，AR(批号：20171008，天津市风船化学试剂科技有限公司)；
磷酸二氢钠，AR(批号：20160318，天津市风船化学试剂科技有限公司)；
生理盐水，NS(批号：A15031602，贵州天地药业有限公司)；
隐血试剂盒，(批号：20190323，南京建成生物工程研究所)；
大鼠血清IL-8试剂盒，批号：ml002885；大鼠血清COX-2试剂盒，批号：ml058808；大鼠血清TNF-α试剂盒，批号：ml002859；大鼠结肠MPO试剂盒，批号：ml003250；大鼠结肠IL-2试剂盒，批号：ml102822；大鼠结肠VEGF试剂盒，批号：ml002862；均购自上海酶联生物科技有限公司。
1.4主要仪器
高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)，型号：HC-30118R；
电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，型号：AL204-IC；
精密电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，型号：METTLERAE240；
涡旋仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，型号：VORTFX-5；
冷冻干燥机(美国Cold-Sim公司)，型号：FD8-4a；
普通光学显微镜(重庆光学仪器厂)，型号：OLYMPUS CX31；
小动物呼吸麻醉机(RWD Life Science CO)，型号：Ltd D01429-015；
大鼠代谢笼(苏州市冯氏实验动物设备有限公司)，型号：DXL-D；
医用电子体温计(杭州欧汇科技有限公司)，型号：PT-01A；
病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器有限公司)，型号：PHY-Ⅲ；
石蜡切片机(Leica公司)，型号：RM2245；
冷冻台(常州市中威电子仪器有限公司)，型号：BMJ-C；
生物组织包埋机(孝感市宏业医用仪器有限公司)，型号：BM-Ⅷ；
生物组织摊烤片机(湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司)，型号：YT-7FB；
自动脱水机(德国Leica公司生产)，型号：Leica ASP-300S；
医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)，型号：BI-2000；
微距相机，型号：DIGITAI CAMERA D7100，微距镜头，型号：AF-S Micro 60/2.8GED均购自尼康。
2.实验方法
2.1实验动物模型建立
将50只大鼠适应性喂养1w，然后随机选取6只作为正常组，进行普通饲料喂养，其余44只大鼠进行湿热型溃疡性结肠炎造模。即在普通饲料喂养的基础上，喂以高糖高脂、辛辣饮食并联合灌肠TNBS乙醇溶液：每天自由饮用200g/L蜂蜜水，第2天灌服油脂15mL/kg，于灌服油脂的隔天灌服白酒15mL/kg，交叉造模持续20d；于湿热造模的第6d和第20d，配制抗原乳化剂，并于大鼠左侧足趾、右侧足趾、腹股沟、背部等多点皮下注射(0.5mL/只)，引起大鼠局部免疫反应；第21d，造模大鼠禁食不禁水24h，10％(W/V)水合氯醛溶液腹腔注射(3mL/kg)轻度麻醉，俯卧位，将连有直径2.0mm聚乙烯管的注射器经大鼠肛门轻轻插入至8cm处，缓慢注入TNBS乙醇溶液(15mg TNBS溶于20％(V/V)乙醇溶液0.6mL中)，拔出导管，使大鼠保持倒立姿态10s。正常对照组用生理盐水代替TNBS乙醇溶液按上述方法平行操作。
2.2实验动物分组与给药
第27d，参照文献标准进行疾病活动指数(Disease activity index，DAI)评分，并根据DAI评分分值剔除极轻度及重度炎症的大鼠8只。将剩余36只模型大鼠分为6组，分别为生理盐水组(NS组)、奥沙拉秦钠组(100mg/kg)、Ento-PB灌胃低剂量组(50mg/kg)、Ento-PB灌胃高剂量组(100mg/kg)、Ento-PB灌肠低剂量组(50mg/kg)、Ento-PB灌肠高剂量组(100mg/kg)，每组6只。于分组的当天开始给药，连续给药14d。
2.3指标观察及检测方法
2.3.1一般状态观察
实验期间观察各组大鼠的毛发，粪便性状(颜色、硬度)，并于实验第0d、21d、23d、27d、30d、33d、36d、40d记录大鼠体重。
2.3.2肛温、粪便计数和尿液体积
于实验的第0d、21d、27d、33d、40d使用电子体温计测量大鼠肛温并记录，随后将大鼠上代谢笼12h，收集大鼠尿液和粪便，记录尿液体积和粪便颗粒数。
2.3.3疾病活动指数
于实验第0d、21d、23d、27d、30d、33d、36d、40d称量大鼠体重，观察大鼠粪便性状及粪便隐血测试情况进行DAI评分，计算每只大鼠的DAI分值评估疾病活动情况。
2.3.4脏器指数
给药14d后，10％(W/V)水合氯醛麻醉大鼠(3.0mL/kg)，腹主动脉采血，处死大鼠后进行解剖，取出胸腺、肝脏、脾脏、肾脏和肺脏，生理盐水涮洗干净后，用滤纸吸干表面水分。称质量，计算脏器指数：脏器指数(mg/g)＝脏器湿质量(mg)/体质量(g)。
2.3.5结肠黏膜损伤指数
解剖大鼠后，截取距离肛门约1cm至盲肠末端的整个结肠，延肠系膜剪开，冰生理盐水洗净肠腔内容物，平铺于白瓷板上，用钢尺测量结肠的长度和宽度，并参照文献标准进行结肠黏膜损伤指数评分(Colon mucosal damage index,CMDI)；随后用滤纸吸干结肠表面水分，称重，计算结肠指数。
2.3.6病理组织学评分
将结肠组织纵向截取一半，用10％(W/V)中性福尔马林固定，脱水后用石蜡进行包埋，常规制作5μm病理切片，苏木精-伊红(HE)染色，中性树胶封片，显微镜下观察其病理变化，参照文献标准进行结肠病理组织学(Histological score,HS)评分。
2.3.7结肠组织细胞因子测定
结肠组织纵向截取的另一半至-80℃低温冰箱保存备用。实验时取出保存的结肠组织，分别经-20℃及4℃梯度冻融后，用预冷的生理盐水制备10％(W/V)组织匀浆液，于4℃，3000r/min离心10min，取上清液，严格按照相关试剂盒操作说明书检测结肠组织中MPO、IL-2、VEGF的含量。
2.3.8血清细胞因子测定
大鼠麻醉后使用负压采血管进行腹主动脉采血，收集的血液于4℃条件下静置凝固后，于冷冻离心机中，4℃，3000r/min离心10min，取上清液分装并于-80℃冰箱中保存。实验时分别经-20℃及4℃梯度冻融后，严格按照相关试剂盒操作说明书检测血清中IL-8、COX-2、TNF-α含量。
3.结果
3.1Ento-PB对湿热型UC大鼠一般状况的影响
正常组大鼠饮食饮水正常，毛发光滑、洁白、干净，精神状态良好，粪便为黑色、质地硬呈椭球形，尿液呈淡黄色，颜色正常。NS组大鼠随时间推移精神状态有一定改善，进食量稍有增加，但尾部仍附着稀便，或便中带血。奥沙拉秦钠组大鼠精神状态明显好转，活动增多，未见黄色黏稠大便，粪便基本成型转为黑色；大鼠体重逐渐增加。Ento-PB灌胃组大鼠精神状态好转，扎堆蜷卧现象减少，肛门污秽减少，粪便基本成型且颜色转为黑色，体重逐渐回升。Ento-PB灌肠组大鼠精神状态良好，活动量增多，肛门未见粘连粪便，粪便成型且颜色转为黑色，体重逐渐增加。
3.2Ento-PB对湿热型UC大鼠肛温的影响(见表6和表7)
对各组大鼠在第0～40d的肛温进行重复测量方差分析，结果显示：(1)交互作用：时间*分组的交互作用对大鼠肛温的变化具有统计学意义(P＜0.01)，说明时间因素对不同组别大鼠肛温的影响有差别。(2)时间效应：大鼠肛温的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠肛温有差别。(3)组间效应：大鼠肛温的组间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明在控制了不同时间点的影响后，各组大鼠的肛温有差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，第0d、40d各组大鼠肛温均无统计学差异(P＞0.05)；第21d和第27d各处理组较正常组大鼠肛温显著增加(P＜0.01)；第33d Ento-PB灌肠高剂量组肛温较NS组明显降低(P＜0.05)。
表6 Ento-PB对湿热型UC大鼠肛温的影响(
Figure BDA0002625483350000091
n＝6)
Figure BDA0002625483350000092
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表7 Ento-PB对湿热型UC大鼠肛温影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000093
注：Mauchly的球形度检验：P＝0.814＞0.05。
3.3Ento-PB对湿热型UC大鼠尿液体积的影响(见表8和表9)
对各组大鼠在第0～40d的尿液体积进行重复测量方差分析，Mauchly’s球形度检测结果显示数据不符合球形假设(P＜0.05)，因此采用Greenhousc-Geisser(G-Ge)方法校正自由度后分析结果。重复测量方差分析结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠尿液体积的交互作用无统计学意义(P＞0.05)，说明不同组别大鼠尿液体积的在不同时间的变化趋势无差别。(2)时间效应：大鼠尿液体积的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠尿液体积有差别。(3)组间效应：大鼠尿液体积的组间效应有统计学意义(P＜0.05)，说明在控制了不同时间点的影响后，各组大鼠的尿液体积有差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，第0d和33d各组大鼠尿液体积均无统计学差异(P＞0.05)；第21d各处理组较正常组大鼠尿液体积明显增加(P＜0.05)；第27dNS组，Ento-PB灌胃低、高剂量组和Ento-PB灌肠高剂量组较正常组仍明显增加(P＜0.05)；第40d奥沙拉秦钠组和Ento-PB各给药组尿液体积较NS组均有降低的趋势，其中Ento-PB灌肠低剂量和高剂量组明显降低(P＜0.05)。
表8 Ento-PB对湿热型UC大鼠尿液体积的影响(
Figure BDA0002625483350000101
n＝6)
Figure BDA0002625483350000102
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表9 Ento-PB对湿热型UC大鼠尿液体积影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000103
注：Mauchly的球形度检验：P＜0.05，G-Ge校正系数＝0.700。
3.4 Ento-PB对湿热型UC大鼠粪便计数的影响(见表10和表11)
对各组大鼠在第0～40d的粪便计数进行重复测量方差分析，结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠粪便计数的交互作用无统计学意义(P＞0.05)，说明时间因素对不同组别大鼠粪便计数的影响无差别。(2)时间效应：大鼠粪便计数的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠粪便计数有差别。(3)组间效应：大鼠粪便计数的组间效应无统计学意义(P＞0.05)，说明各组大鼠的粪便计数无差异。
表10 Ento-PB对湿热型UC大鼠粪便计数的影响(
Figure BDA0002625483350000111
n＝6)
Figure BDA0002625483350000112
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表11 Ento-PB对湿热型UC大鼠粪便计数影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000113
注：Mauchly的球形度检验：P＝0.590＞0.05。
3.5 Ento-PB对湿热型UC大鼠DAI评分的影响(见表12和表13)
对各组大鼠在第0～40d的DAI评分进行重复测量方差分析，Mauchly’s球形度检测结果显示数据不符合球形假设(P＜0.05)，因此采用Greenhousc-Geisser方法校正自由度后分析结果。重复测量方差分析结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠DAI评分的交互作用有统计学意义(P＜0.01)，说明时间因素对不同组别大鼠DAI评分的影响有差别。(2)时间效应：大鼠DAI评分的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠DAI评分有差别。(3)组间效应：大鼠DAI评分的组间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明各组大鼠的DAI评分有差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，实验第0d，各组之间DAI评分均较低且无显著性差异(P＞0.05)，即所有大鼠正常且处于同一水平。实验第27d，湿热型UC模型建立结束，正常组DAI评分较低，所有造模大鼠DAI评分较正常组显著升高(P＜0.01)，且各造模组之间无显著性差异，即湿热型UC模型复制成功。实验第40d，药物治疗结束，与正常组比较，NS组及各药物治疗组DAI评分均显著升高(P＜0.01)，与NS组比较，奥沙拉秦钠组、Ento-PB灌胃高剂量及Ento-PB灌肠低、高剂量组均明显降低(P＜0.01或P＜0.05)。
表12 Ento-PB对湿热型UC大鼠DAI评分的影响(
Figure BDA0002625483350000121
n＝6)
Figure BDA0002625483350000122
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表13 Ento-PB对湿热型UC大鼠DAI评分影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000123
注：Mauchly的球形度检验：P＝0.035＜0.05，G-Ge校正系数＝0.738。
3.6Ento-PB对湿热型UC大鼠脏器指数的影响(见表14)
与正常组比较，NS组脾脏指数和胸腺指数明显减小(P＜0.01或P＜0.05)，肝脏指数和肾脏指数显著增加(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组胸腺指数显著增加(P＜0.01)，肝脏指数和肾脏指数明显减小(P＜0.01或P＜0.05)；Ento-PB各给药组脾脏指数均有增大的趋势，但无显著性差异(P＞0.05)，肝脏指数均显著减小(P＜0.01)；Ento-PB灌胃高剂量组与Ento-PB灌肠高剂量组胸腺指数明显增大(P＜0.05)，Ento-PB灌胃低剂量组与Ento-PB灌肠低、高剂量肾脏指数明显减小(P＜0.05)。
表14 Ento-PB对湿热型UC大鼠脏器指数的影响(
Figure BDA0002625483350000124
n＝6)
Figure BDA0002625483350000125
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.7 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠相关指标的影响(见表15)
肉眼观察各组大鼠结肠组织发现：正常组大鼠结肠黏膜无充血水肿、糜烂和溃疡现象；NS组大鼠肠壁可见重度充血和水肿，肠壁黏膜坏死及溃疡形成，面积>1cm2，以近肛端结肠病变最严重；各药物治疗组大鼠结肠黏膜病变情况均有所改善，奥沙拉秦钠组可见明显充血水肿，肠壁较小浅表溃疡形成；Ento-PB灌胃低剂量组可见充血水肿，肠壁增厚及炎性息肉形成；Ento-PB灌胃高剂量组可见充血水肿，黏膜粗糙呈颗粒感；Ento-PB灌肠低剂量组可见明显充血水肿，肠壁粗糙，较小浅表溃疡形成；Ento-PB灌肠高剂量组轻度充血水肿，表面光滑，无糜烂或溃疡形成。与正常组比较，NS组大鼠结肠明显缩短(P＜0.05)，结肠宽、结肠指数及CMDI评分显著升高(P＜0.01)；与NS组比较，奥沙拉秦钠组及Ento-PB给药组大鼠结肠指数、结肠宽及CMDI评分均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)，其中Ento-PB灌肠高剂量组结肠长度明显增加，其余各组呈增加趋势。
表15 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠相关指标的影响(
Figure BDA0002625483350000131
n＝6)
Figure BDA0002625483350000132
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.8Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠HS评分的影响(见表16)
显微镜观察结肠病理切片发现，正常组结肠结构完整、清晰，腺体排列整齐，可见明显的隐窝和杯状细胞，基本无充血水肿、炎性细胞浸润现象。NS组大鼠结肠黏膜表层脱落、缺损，隐窝和杯状细胞大面积丢失，大量炎性细胞浸润。奥沙拉秦钠组及Ento-PB各给药组大鼠结肠杯状细胞和隐窝均出现不同程度的修复好转，炎性细胞浸润减少，如图1所示。与正常组比较，NS组上皮细胞评分、炎细胞浸润评分及HS总分均显著升高(P＜0.01)；与NS组比较，奥沙拉秦钠组及Ento-PB给药组上皮细胞评分、炎细胞浸润评分及HS总分均显著降低(P＜0.01)；其中，Ento-PB灌胃低高量组与Ento-PB灌肠低剂量组数值上相近。
表16 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠HS评分的影响(
Figure BDA0002625483350000133
n＝6)
Figure BDA0002625483350000134
Figure BDA0002625483350000141
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.9Ento-PB对湿热型UC大鼠血清中细胞因子的影响(见表17)
与正常组比较，NS组大鼠血清中IL-8、COX-2、TNF-α的表达量均显著升高(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组，Ento-PB灌胃低、高剂量组及Ento-PB灌肠低、高剂量组大鼠血清中IL-8、COX-2、TNF-α的表达量呈剂量依赖性显著降低(P＜0.01)，说明奥沙拉秦钠及Ento-PB对湿热型UC具有治疗作用。
表17 Ento-PB对湿热型UC大鼠血清中细胞因子的影响(
Figure BDA0002625483350000142
n＝6)
Figure BDA0002625483350000143
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与奥沙拉秦钠组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
3.10 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠组织中细胞因子的影响(见表18)
与正常组比较，NS组大鼠结肠组织中炎性因子MPO、IL-2和修复相关因子VEGF的表达含量显著升高(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组，Ento-PB灌胃低、高剂量组及Ento-PB灌肠低、高剂量组大鼠结肠组织中炎性因子MPO、IL-2和修复相关因子VEGF的表达含量显著降低(P＜0.01)，说明奥沙拉秦钠及Ento-PB药物对湿热型UC大鼠具有治疗作用。
表18 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠组织中细胞因子的影响(
Figure BDA0002625483350000144
n＝6)
Figure BDA0002625483350000145
Figure BDA0002625483350000151
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与奥沙拉秦钠组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
本实施例研究结果提示，中药复方提取物Ento-PB通过改善大鼠湿热症状、促进结肠黏膜修复、减少机体炎症因子分泌发挥其对大肠湿热型UC的治疗作用，且灌肠效果优于灌胃。
实施例7
一种治疗湿热型UC的中药复方制剂，通过下述方法制备，包括步骤为：
①称取浓缩至1.20～1.30g/mL的中药复方提取物Ento-PB 40g，微晶纤维素55g，羧甲基淀粉钠5g，混合均匀，制备成合适的软材，投入至摇摆颗粒机中，制粒后投入到挤出滚圆机挤出槽中，挤出转速80rpm，经挤出筛板(0.8mm)挤成条状，至滚圆桶内，设置滚圆转速为1500rpm，滚圆时间为3min，使挤出条状物完全滚圆，取出微丸至烘箱中60℃，干燥2h，以20～40目的微丸为合格丸芯；
②称取40g合格丸芯至流化床中，以8％的聚合物(尤特奇S100:乙基纤维素＝7:3)作为包衣液，设置进风温度为60～65℃，物料温度为35～40℃，进风流量为25～30L/min，喷气压力为0.1～0.15MPa，雾化压力为0.9～0.1MPa，包衣流速为3.0mL/min，进行微丸包衣，包衣增重25％，干燥后即得结肠定位微丸。制备得到的Ento-PB结肠定位微丸能够用于大肠湿热型UC的治疗。
实施例8
本发明Ento-PB为主药制备得到的结肠定位微丸对大肠湿热型UC大鼠的治疗作用
1.实验材料
1.1实验动物
SPF级SD雄性大鼠35只，200±20g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2016-0004，批号：20200910
1.2受试药物
本发明Ento-PB为主药制备得到的结肠定位微丸；
奥沙拉秦钠胶囊，(批号：1902002，天津力生制药股份有限公司，规格：0.25g)。
1.3实验试剂和1.4主要仪器
同实施例6。
2.实验方法
2.1实验动物模型建立
将35只大鼠适应性喂养1w，然后随机选取6只作为正常组，进行普通饲料喂养，其余29只大鼠进行湿热型溃疡性结肠炎造模。即在普通饲料喂养的基础上，喂以高糖高脂、辛辣饮食并联合灌肠TNBS乙醇溶液：每天自由饮用200g/L蜂蜜水，第2天灌服油脂15mL/kg，于灌服油脂的隔天灌服白酒15mL/kg，交叉造模持续20d；于湿热造模的第6d和第20d，配制抗原乳化剂，并于大鼠左侧足趾、右侧足趾、腹股沟、背部等多点皮下注射(0.5mL/只)，引起大鼠局部免疫反应；第21d，造模大鼠禁食不禁水24h，10％(W/V)水合氯醛溶液腹腔注射(3mL/kg)轻度麻醉，俯卧位，将连有直径2.0mm聚乙烯管的注射器经大鼠肛门轻轻插入至8cm处，缓慢注入TNBS乙醇溶液(15mg TNBS溶于20％(V/V)乙醇溶液0.6mL中)，拔出导管，使大鼠保持倒立姿态10s。正常对照组用生理盐水代替TNBS乙醇溶液按上述方法平行操作。
2.2实验动物分组与给药
第27d，参照文献标准进行疾病活动指数(Disease activity index，DAI)评分，并根据DAI评分分值剔除极轻度及重度炎症的大鼠5只。将剩余24只模型大鼠分为4组，分别为生理盐水组(NS组)，奥沙拉秦钠组(100mg/kg)，Ento-PB微丸低剂量组(50mg/kg)，Ento-PB微丸高剂量组(100mg/kg)，每组6只。于分组的当天开始给药，连续给药14d。
2.3指标观察及检测方法
2.3.1一般状态观察
同实施例6。
3.结果
3.1 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠一般状况的影响
正常对照组大鼠饮食正常，毛发光滑、洁白、干净，精神状态良好，体重增加，大便为黑色和尿液均正常；NS组大鼠进食减少，出现明显的体重减轻，毛发稀疏松散无光泽，精神状态差，出现拱背、扎堆等现象。随着造模时间推移，大鼠粪便由黑色变为黄色，且在灌油日松软、潮湿，灌酒日干燥，后期部分大鼠肛周和尾巴底部覆盖着黄色黏稠稀便，尿液量减少且发黄。经奥沙拉嗪钠治疗后大鼠精神状态明显好转，活动增多，未见黄色黏稠大便，粪便基本成型转为黑色；Ento-PB微丸高、低剂量药物治疗后，大鼠状态有不同程度的改善，扎堆蜷卧现象减少，肛门污秽减少，粪便基本成型转为黑色，体重逐渐回升。
3.2 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠肛温的影响(见表19和表20)
对各组大鼠在第0～40d的肛温进行重复测量方差分析，分析结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠肛温的交互作用有统计学意义(P＜0.01)，说明时间因素对不同组别大鼠肛温的影响有差别。(2)时间效应：大鼠肛温的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠肛温有差别。(3)组间效应：大鼠肛温的组间效应无统计学意义(P＞0.05)，说明各组大鼠的肛温无差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，第21d和27d各处理组较正常组大鼠肛温显著增加(P＜0.01)。第40d各处理组均恢复至正常水平。
表19 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠肛温的影响(
Figure BDA0002625483350000171
n＝6)
Figure BDA0002625483350000172
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表20 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠肛温影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000173
注：Mauchly的球形度检验：P＝0.653＞0.05。
3.3 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠尿液体积的影响(见表21和表22)
对各组大鼠在第0～40d的尿液体积进行重复测量方差分析，Mauchly’s球形度检测结果显示数据不符合球形假设(P＜0.05)，因此采用Greenhousc-Geisser方法校正自由度后分析结果。重复测量方差分析结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠尿液体积的交互作用无统计学意义(P＞0.05)，说明时间因素对不同组别大鼠尿液体积的影响无差别。(2)时间效应：大鼠尿液体积的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠尿液体积有差别。(3)组间效应：大鼠尿液体积的组间效应有统计学意义(P＜0.05)，说明各组大鼠的尿液体积有差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，第0d、33d、40d各组大鼠尿液体积均无统计学差异(P＞0.05)；第21d各处理组较NS组大鼠尿液体积明显增加(P＜0.05)；第27dNS组和Ento-PB微丸低剂量组较正常组明显增加(P＜0.05)。
表21 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠尿液体积的影响(
Figure BDA0002625483350000174
n＝6)
Figure BDA0002625483350000175
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表22 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠尿液体积影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000181
注：Mauchly的球形度检验：P＜0.05，G-Ge校正系数＝0.600。
3.4Ento-PB对湿热型UC大鼠DAI评分的影响(见表23和表24)
对各组大鼠在第0～40d的DAI评分进行重复测量方差分析，Mauchly’s球形度检测结果显示数据不符合球形假设(P＜0.05)，因此采用Greenhousc-Geisser方法校正自由度后分析结果。重复测量方差分析结果显示：(1)交互作用(时间*分组)：大鼠DAI评分的交互作用有统计学意义(P＜0.01)，说明时间因素对不同组别大鼠DAI评分的影响有差别。(2)时间效应：大鼠DAI评分的时间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明不同时间点大鼠DAI评分有差别。(3)组间效应：大鼠DAI评分的组间效应有统计学意义(P＜0.01)，说明各组大鼠的DAI评分有差异。为了评价同一时间点上的组间差异情况，根据单因素方差分析结果显示，实验第0d，各组之间DAI评分均较低且无显著性差异(P＞0.05)，即所有大鼠正常且处于同一水平。实验第27d，湿热型UC模型建立结束，正常组DAI评分较低，所有造模大鼠DAI评分较正常组显著升高(P＜0.01)，且各造模组之间无显著性差异，即湿热型UC模型复制成功。实验第40d，药物治疗结束，与正常组比较，NS组及各药物治疗组DAI评分均显著升高(P＜0.01)，与NS组比较，奥沙拉秦钠组、Ento-PB微丸低、高剂量组均明显降低(P＜0.01或P＜0.05)。
表23 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠DAI评分的影响(
Figure BDA0002625483350000182
n＝6)
Figure BDA0002625483350000183
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
表24 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠DAI评分影响的方差分析表
Figure BDA0002625483350000184
注：Mauchly的球形度检验：P＝0.013＜0.05，G-Ge校正系数＝0.620。
3.5Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠脏器指数的影响(见表25)
与正常组比较，NS组脾脏指数和胸腺指数明显减小(P＜0.01或P＜0.05)，肝脏指数和肾脏指数显著增加(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组胸腺指数显著增加(P＜0.01)，肝脏指数和肾脏指数明显减小(P＜0.01或P＜0.05)；Ento-PB微丸各给药组脾脏指数均有增大的趋势，但无显著性差异(P＞0.05)，胸腺指数显著增加(P＜0.01)，肝脏指数和肾脏指数明显减小(P＜0.01或P＜0.05)。
表25 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠脏器指数的影响(
Figure BDA0002625483350000191
n＝6)
Figure BDA0002625483350000192
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.6Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠相关指标的影响(见表26)
肉眼观察各组大鼠结肠组织发现：正常组大鼠结肠黏膜无水肿、糜烂和溃疡现象；NS组大鼠肠壁可见明显的充血和水肿，肠壁黏膜有散在溃疡点和糜烂现象，病变主要累及远端结肠，以近直肠端病变最严重；各药物治疗组大鼠肠黏膜病变情况明显好转。与正常组比较，NS组大鼠结肠缩短，结肠宽、结肠指数及CMDI评分显著升高(P＜0.01)；与NS组比较，奥沙拉秦组及Ento-PB微丸给药组大鼠结肠增长，结肠指数、结肠宽及CMDI评分明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表26 Ento-PB对湿热型UC大鼠结肠相关指标的影响(
Figure BDA0002625483350000193
n＝6)
Figure BDA0002625483350000194
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.7 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠HS评分的影响(见表27)
显微镜观察结肠病理切片发现，正常组结肠结构完整、清晰，腺体排列整齐，可见明显的隐窝和杯状细胞，基本无充血水肿、炎性细胞浸润现象。NS组大鼠结肠黏膜表层脱落、缺损，隐窝和杯状细胞大面积丢失，大量炎性细胞浸润。给药组大鼠结肠杯状细胞和隐窝均出现不同程度的修复好转，炎性细胞浸润减少。与正常组比较，NS组上皮细胞评分、炎细胞浸润评分及HS总分均显著升高(P＜0.01)；与NS组比较，奥沙拉秦组及Ento-PB微丸给药组上皮细胞评分、炎细胞浸润评分及HS总分均显著降低(P＜0.01)。
表27 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠HS评分的影响(
Figure BDA0002625483350000201
n＝6)
Figure BDA0002625483350000202
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
3.8 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠血清中细胞因子的影响(见表28)
与正常组比较，NS组大鼠血清中IL-8、COX-2、TNF-α的表达量均显著升高(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组，Ento-PB微丸低、高剂量组大鼠血清中IL-8、COX-2、TNF-α的表达量呈剂量依赖性显著降低(P＜0.01)，说明奥沙拉秦钠及Ento-PB微丸对湿热型UC具有治疗作用。
表28 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠血清中细胞因子的影响(
Figure BDA0002625483350000203
n＝6)
Figure BDA0002625483350000204
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与奥沙拉秦钠组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
3.9 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠组织中细胞因子的影响(见表29)
与正常组比较，NS组大鼠结肠组织中炎性因子MPO、IL-2和修复相关因子VEGF的表达含量显著升高(P＜0.01)。与NS组比较，奥沙拉秦钠组，Ento-PB微丸灌胃低、高剂量组及Ento-PB微丸低、高剂量组大鼠结肠组织中炎性因子MPO、IL-2和修复相关因子VEGF的表达含量显著降低(P＜0.01)，说明奥沙拉秦钠及Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠具有治疗作用。
表29 Ento-PB微丸对湿热型UC大鼠结肠组织中细胞因子的影响(
Figure BDA0002625483350000211
n＝6)
Figure BDA0002625483350000212
注：与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与NS组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与奥沙拉秦钠组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
本实施例研究结果提示，中药复方提取物Ento-PB为主药制备的结肠定位微丸对大肠湿热型UC大鼠具有治疗作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药，其特征在于，所述复方中药的中药材由美洲大蠊和蒲公英组成；
所述复方中药的中药材按重量份配比为：美洲大蠊∶蒲公英＝(4～9)∶(2～6)；
所述复方中药的中药材按如下方法提取：
①将美洲大蠊和蒲公英干料与水混合后于多功能提取罐中75～100℃微沸煎煮，收集合并提取液过滤后于70℃浓缩至密度为1.04～1.26 g/mL，即得复方药材水提物；
②将所述步骤①得到的复方水提物与乙醇混合，调节含醇量至40～80％，搅拌静置后，弃去上层油脂，过滤，将得到的滤液于60℃减压浓缩至密度为1.20～1.30 g/mL，即得中药复方提取物；
所述步骤①中美洲大蠊和蒲公英干料与水的质量比为1∶(8～12)；
所述提取的次数为1～4次，单次提取的时间为1～4h；
所述上层油脂于10～25℃静置12～48h后除去。
2.根据权利要求1所述的复方中药，其特征在于，所述复方中药的中药材按重量份配比为：美洲大蠊∶蒲公英＝7∶3或6∶4。
3.根据权利要求1所述的复方中药，其特征在于，所述美洲大蠊和蒲公英为干燥全虫和全草；
所述步骤①中美洲大蠊和蒲公英干料与水的质量比为1∶(9～11)；
所述提取次的数为2～3次，单次提取的时间为2～3h；
所述上层油脂于25℃静置48h后去除油脂；
所述提取温度为90～100℃；
所述步骤②中调节含醇量至55％；
所述减压浓缩的压力为-0.075Pa。
4.根据权利要求1-3任一所述的复方中药，其特征在于，所述复方中药的剂型选自微丸、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂。
5.根据权利要求4所述的复方中药，其特征在于，所述复方中药的剂型为结肠定位微丸。
6.根据权利要求5所述的复方中药，其特征在于，所述结肠定位微丸由丸芯和包衣材料组成，所述丸芯的组成为中药复方提取物、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠，所述包衣材料选自尤特奇和/或乙基纤维素；
所述中药复方提取物、所述微晶纤维素和所述羧甲基淀粉钠的用量为(30-50)∶(45-65)∶(1-10)。
7.根据权利要求6所述的复方中药，其特征在于，所述中药复方提取物、所述微晶纤维素和所述羧甲基淀粉钠的用量比为40∶55∶5。
8.根据权利要求1所述的复方中药，其特征在于，所述复方中药中，所述中药复方提取物的质量百分含量为20～50％。
9.根据权利要求8所述的复方中药，其特征在于，所述复方中药中，所述中药复方提取物的质量百分含量为30～40％。
10.根据权利要求1-9任一所述的一种治疗湿热型溃疡性结肠炎的复方中药的制备方法，其特征在于，所述复方中药为结肠定位微丸，包括如下步骤：
①称取中药复方提取物、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠，混合均匀，制备成合适的软材，用挤出滚圆机制备丸芯，烘干，以20～40目的微丸为合格丸芯；
②称取合格丸芯至流化床中，以尤特奇S100和乙基纤维素的混合液体包衣，干燥后即得结肠定位微丸。
11.权利要求1-9任一项所述的复方中药在制备治疗湿热型溃疡性结肠炎药物中的应用。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1981743A (zh) * 2005-12-13 2007-06-20 珠海天翼医药技术开发有限公司 一种结肠定位释放微丸及其制备方法
CN101829220A (zh) * 2010-05-25 2010-09-15 耿福能 一种治疗溃疡性结肠炎的美洲大蠊药物组合物及其制备方法
CN101829219A (zh) * 2010-05-25 2010-09-15 耿福能 一种治疗溃疡性结肠炎的美洲大蠊药物组合物及其制备方法
WO2013040873A1 (zh) * 2011-09-22 2013-03-28 贝沃特医药技术(上海)有限公司 一种治疗肠道疾病的药物缓控释微粒制剂及其制备方法
CN109966319A (zh) * 2017-12-22 2019-07-05 四川好医生攀西药业有限责任公司 一种康复新液的原料及其制备方法和应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100152304A1 (en) * 2008-12-17 2010-06-17 Geng Funeng Pharmaceutical composition comprising periplaneta americana or its ethanol extract and a method of using the same for treating inflammations

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1981743A (zh) * 2005-12-13 2007-06-20 珠海天翼医药技术开发有限公司 一种结肠定位释放微丸及其制备方法
CN101829220A (zh) * 2010-05-25 2010-09-15 耿福能 一种治疗溃疡性结肠炎的美洲大蠊药物组合物及其制备方法
CN101829219A (zh) * 2010-05-25 2010-09-15 耿福能 一种治疗溃疡性结肠炎的美洲大蠊药物组合物及其制备方法
WO2013040873A1 (zh) * 2011-09-22 2013-03-28 贝沃特医药技术(上海)有限公司 一种治疗肠道疾病的药物缓控释微粒制剂及其制备方法
CN109966319A (zh) * 2017-12-22 2019-07-05 四川好医生攀西药业有限责任公司 一种康复新液的原料及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
康复新液对噁唑酮诱导溃疡性结肠炎大鼠治疗作用及机制初探;杜雯雯等;《中国实验方剂学杂志》;20170220;第23卷(第04期);第127页第1段、第130页"讨论"、参考文献23 *
美洲大蠊提取物Ento-A对湿热型溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用研究;张晶娜等;《中国药房》;20200115;第31卷(第01期);摘要、第35-41页第1段、"方法"、"结果" *
蒲公英水提物对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用;陈玉杰;《中国老年学杂志》;20130710;第33卷(第13期);第206页"2.2蒲公英的煎煮"、第207页"讨论" *

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