CN114058612A - 一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，将三文鱼脱氧核糖核酸溶解于注射用水中，制成浓度为5％‑50％的三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液，加入肉碱，肉碱加入量为三文鱼脱氧核糖核酸重量的5％‑8％，搅拌使溶解，迅速升温至95℃，升温速率应大于10℃/分钟，保持温度95℃，保持时间为1‑2小时，之后，室温放置，使缓慢降温至20‑25℃，再加入肉碱，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸重量的2％，制得三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液，可促进细胞增殖分化，加快伤口愈合，比常规的三文鱼脱氧核糖核酸溶液具有更高的生物活性。
Description
技术领域
本发明属于具有生物活性的高分子生物材料制备领域，具体涉及一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法。
背景技术
三文鱼，又名大马哈鱼、鲑鱼，属于硬骨鱼纲、鲑形目、鲑属，主要分布在大西洋与太平洋、北冰洋交界的水域。
雄性三文鱼的精囊是优质脱氧核糖核酸来源之一。三文鱼精囊主要是三文鱼精子，主要化学成分为脱氧核糖核酸，经过裂解、水提取、醇沉淀方法，可得到纯净的三文鱼脱氧核糖核酸。
三文鱼脱氧核糖核酸中碱基组成与人类相似，对于人类来说，没有免疫原性，是一种安全的异体来源的生物大分子。
三文鱼脱氧核糖核酸作为医药保健产品的原料，制成药品、医疗器械、化妆品后，本身作为营养物质为人体细胞增殖、分化提供原料，同时，也可作为一种活性物质，激活体内细胞受体，发挥多种生物功能：能够提高成纤维细胞增殖和生长能力，起到修复皮肤屏障的作用；可提高血管内皮生长因子的表达，促进血管的新生，增加血流的供应，改善微循环；可激活腺苷A2A受体，提高抗炎细胞因子如白细胞介素-10的表达，降低炎症细胞因子及凋亡蛋白的表达，发挥抗炎作用；减少组织的损伤，激活p53蛋白，提高DNA修复能力。
三文鱼脱氧核糖核酸是以双链螺旋形式存在的，提取得到的三文鱼脱氧核糖核酸，虽然在提取过程中，部分破坏了原有的双链螺旋结构，双链会解开，并有部分断裂，但是，由于碱基自身配对亲和的特性，提取得到的三文鱼脱氧核糖核酸溶解后，在溶液状态下，仍会形成双链螺旋结构。由于双螺旋结构中的两条链解开之后，才能正常发挥活性作用，因此，溶液状态下的双螺旋结构对于三文鱼脱氧核糖核酸发挥生物活性是不利的。
为了增加三文鱼脱氧核糖核酸的活性，快速发挥生物效应，需要采用创新的方法，使溶液状态下三文鱼脱氧核糖核酸的双链永久解开，成为单链结构。本发明开发了化学方法使三文鱼脱氧核糖核酸溶液中的脱氧核糖核酸处于单链游离状态，达到了提升活性的目的。
发明内容
针对现有提取得到的三文鱼脱氧核糖核酸主要以双链形式存在，不能直接快速发挥其原有的生物活性的问题，本发明提出了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，其目的为：采用常规方法提取的三文鱼脱氧核糖核酸，经过溶解、活化、固定过程，制得三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液。该活性溶液可作为工艺中间产品，用于制造药品、医疗器械、化妆品等医疗保健产品。
为实现上述目的本发明所采用的技术方案是：一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括如下步骤：
(1)制取三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液：取三文鱼脱氧核糖核酸，加入注射用水，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液；
(2)制取三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系：向(1)中制得的三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液加入三文鱼脱氧核糖核酸活化剂，充分搅拌，使溶解，制得三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系；
(3)活化：将(2)中制得的加入了活化剂的三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系，置于加热设备中，采用升温程序，快速升温，并保持温度；然后，室温放置，使自然降温至20-25℃；
(4)固定：将(3)中制得的三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液，在常温下加入活化剂，搅拌均匀。
其进一步的优选技术方案为：所述三文鱼脱氧核糖核酸为采用雄性三文鱼精囊通过裂解、水提取、醇沉淀方法制备的三文鱼脱氧核糖核酸。
其进一步的优选技术方案为：制备三文鱼脱氧核糖核酸的三文鱼为三文鳟、金鳟、太平洋鲑、大西洋鲑或北极白点鲑。
其进一步的优选技术方案为：三文鱼脱氧核糖核酸采用注射用水溶解，其和注射用水的比例为5:95-50:50，制得的三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液浓度为5％-50％。
其进一步的优选技术方案为：所述三文鱼脱氧核糖核酸活化剂为肉碱、尿囊素或熊果苷。
其进一步的优选技术方案为：所述三文鱼脱氧核糖核酸固定剂为肉碱、尿囊素或熊果苷。
其进一步的优选技术方案为：所述活化剂浓度为三文鱼脱氧核糖核酸重量的5-8％。
其进一步的优选技术方案为：加入了肉碱的三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系，快速升温的起始温度为室温(20-25℃)，终点温度为95℃，升温速率不低于10℃/分钟。
其进一步的优选技术方案为：快速升温达到终点温度后，保持温度时间为1-2小时。
其进一步的优选技术方案为：快速升温和保持温度后，活化反应体系，自然降温至20-25℃。
其进一步的优选技术方案为：自然降温至20-25℃后，加入活化剂的量为三文鱼脱氧核糖核酸重量的2％。
相比现有技术，本发明的技术方案具有如下优点/有益效果：
以三文鱼脱氧核糖核酸为原料，通过溶解、活化、固定等步骤，制得高活性的三文鱼脱氧核糖核酸溶液，与通过传统单一溶解方式制得的三文鱼脱氧核糖核酸溶液相比较，三文鱼脱氧核糖核酸主要以单链形式存在，在被人体利用过程中，减少了双链拆解过程，提高了利用效率，能够快速发挥三文鱼脱氧核糖核酸原有的生物活性。
肉碱、尿囊素或熊果苷具有强分子极性。其中，肉碱具有季氨正离子结构，带正电，而双螺旋结构是靠氢键结合起来的，有肉碱的正电性进行干扰，插进去双螺旋结构，就破坏了原因的氢键电性结合，解开了双螺旋结构，使得三文鱼脱氧核糖核酸溶液中的脱氧核糖核酸能够保持单链结构，从而提升其活性。
具体实施方式
为使本发明目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明的一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。
实施例1：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸50克，加入注射用水950毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为5％；
(2)加入活化剂：加入肉碱2.5克，加入重量为三文鱼脱氧核糖核酸的5％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度1小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入肉碱1克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例2：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸500克，加入注射用水500毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为50％；
(2)加入活化剂：加入肉碱40克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的8％，充分搅拌，使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度2小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入肉碱10克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例3：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸500克，加入注射用水500毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为50％；
(2)加入活化剂：加入尿囊素40克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的8％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度2小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入尿囊素10克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例4：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸50克，加入注射用水950毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为5％；
(2)加入加入活化剂：加入尿囊素2.5克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的5％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度1小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入尿囊素1克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例5：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸50克，加入注射用水950毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为5％；
(2)加入活化剂：加入熊果苷2.5克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的5％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度1小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入熊果苷1克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例6：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸500克，加入注射用水500毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为50％；
(2)加入活化剂：加入熊果苷40克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的8％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度2小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温下加入熊果苷10克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
实施例7：
本发明实施例提供了一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液及其制备方法，包括以下步骤：
(1)三文鱼脱氧核糖核酸溶解：取三文鱼脱氧核糖核酸250克，加入注射用水500毫升，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液，浓度为25％；
(2)加入活化剂：加入熊果苷20克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的4％，搅拌使溶解；
(3)快速升温：置于程序升温仪器中，加热升温至95℃，保持95℃温度2小时；取出，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)活性固定：常温加入熊果苷10克，加入量为三文鱼脱氧核糖核酸的2％，搅拌均匀。
采用动物实验，评估上述实施例所得三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液与同等条件下制得的三文鱼脱氧核糖核酸溶液对小鼠伤口愈合的作用；随机选择80只健康的CD-1小鼠，编号，剃去背部毛发，使用沸水在直径1厘米的背部区域与小鼠皮肤接触10秒，制得小鼠烫伤模型。
将三文鱼脱氧核糖核酸溶液涂抹于伤口，每日两次，观察伤口恢复情况，记录伤口结痂脱落时间。试验结果见表1。
表1伤口结痂脱落时间如下(实施例1-7与三文鱼脱氧核糖核酸溶液对比)
表1过敏反应试验结果
| 组别 | 平均结痂脱落时间\天 | p值(与对照组比较) |
| 试验组1平均值(实施例1) | 3.40±0.27 | ＜0.05 |
| 试验组2平均值(实施例2) | 2.98±0.16 | ＜0.05 |
| 试验组3平均值(实施例3) | 3.67±0.43 | ＜0.05 |
| 试验组4平均值(实施例4) | 4.56±1.02 | ＜0.05 |
| 试验组5平均值(实施例5) | 2.99±0.52 | ＜0.05 |
| 试验组6平均值(实施例6) | 3.51±0.41 | ＜0.05 |
| 试验组7平均值(实施例7) | 4.15±0.59 | ＜0.05 |
| 对照组(三文鱼脱氧核糖核酸溶液) | 8.24±0.67 |
由表1可见，采用本发明提供的方式制备三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液与三文鱼脱氧核糖核酸溶液相比，小鼠伤口结痂脱落时间显著短于三文鱼脱氧核糖核酸溶液，具有统计学意义。可见，排除小鼠个体差异导致的误差因素，采用本发明提供的方法制备的三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液在促进小鼠伤口愈合方面，明显优于未采用本发明方法同等条件下制备的三文鱼脱氧核糖核酸溶液。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于,制备步骤如下：
(1)制取三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液：取三文鱼脱氧核糖核酸，加入注射用水，搅拌使溶解，制成三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液；
(2)制取三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系：向(1)中制得的三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液加入三文鱼脱氧核糖核酸活化剂，充分搅拌至溶解，制得三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系；
(3)制取三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液：将(2)中制得的三文鱼脱氧核糖核酸活化反应体系，置于加热设备中，采用快速升温程序升温，并保持终点温度；然后，室温放置，自然降温至20-25℃；
(4)固定：将(3)中制得的三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液，在常温下加入固定剂，搅拌均匀。
2.根据权利要求1所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述三文鱼脱氧核糖核酸为采用雄性三文鱼精囊，通过裂解、水提取、醇沉淀方法制备的三文鱼脱氧核糖核酸。
3.根据权利要求2所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述的三文鱼取自三文鳟、金鳟、太平洋鲑、大西洋鲑或北极白点鲑。
4.根据权利要求1所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，三文鱼脱氧核糖核酸和注射用水的比例为5:95-50:50，制得的三文鱼脱氧核糖核酸普通溶液浓度为5％-50％。
5.根据权利要求1所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述三文鱼脱氧核糖核酸活化剂为肉碱、尿囊素或熊果苷。
6.根据权利要求5所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述三文鱼脱氧核糖核酸固定剂为肉碱、尿囊素或熊果苷。
7.根据权利要求6所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述活化剂重量为三文鱼脱氧核糖核酸重量的5-8％。
8.根据权利要求1所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，所述快速升温程序的起始温度为室温，即20-25℃，终点温度为95℃，升温速率不低于10℃/分钟，保持终点温度的时间为1-2小时。
9.根据权利要求1所述的一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液的制备方法，其特征在于，固定需要加入的肉碱的重量为三文鱼脱氧核糖核酸重量的2％。
10.一种三文鱼脱氧核糖核酸活性溶液，其特征在于，根据权利要求1-9任一项所述方法制得。
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| CN113105515A (zh) * | 2021-04-13 | 2021-07-13 | 瑞吉明(山东)生物科技有限公司 | 一种从鲑鱼精液中分离脱氧核苷酸的方法 |
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