CN114029037B - 一种反相色谱固定相及其制备方法和应用 - Google Patents

一种反相色谱固定相及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种反相色谱固定相及其制备方法和应用，涉及液相色谱固定相技术领域，反相色谱固定相的结构式为：
Figure DDA0003359446760000011
其中Silica Gel为硅胶，n＝0～10。所述反相色谱固定相的制备方法，通过巯基‑烯烃点击反应将截短侧耳素修饰到硅胶表面，制备得到新型反相色谱固定相。所述反相色谱固定相的能够应用于分离非极性化合物等物质。本发明提供的反相色谱固定相的结构新颖，制备方法简单高效，固定相中含水疏水骨架，同时多种官能团如酯基、羰基、羟基和硫醚键可提供不同的分离选择性，可广泛用于各类化合物的分离分析。

Description

一种反相色谱固定相及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及液相色谱固定相技术领域，具体说是一种使用二萜化合物截短侧耳素在硅胶表面进行修饰的反相色谱固定相及其制备方法和应用。
背景技术
反相色谱是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质的极性差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。反相色谱具有柱效高、分离能力强、保留机理清楚等优点，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，广泛应用于生物大分子、蛋白质及酶等样品的分离分析。
反相固定相中最具代表性的是以硅胶为载体，通过表面键合非极性分子层制备，获得性能稳定的反相填料。在硅胶基质的反相填料中，常规的C8、C18、苯基、五氟苯基键合基团最为常见。Matysova等报道了利用苯己基固定相对驱虫剂中双羟萘酸噻嘧啶、奥芬达唑、芬苯达唑、丁基羟基茴香醚具有良好的分离效果。但是目前常用种类的固定相并不能满足所有样品的分离需求，因此需要开发新型结构的反相固定相来提升不同样品之间分离选择性。
发明内容
本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种反相色谱固定相及其制备方法，该键合相含有二萜化合物截短侧耳素结构，其制备方法简单，适用性广泛。
本发明的技术解决方案如下：
本发明第一方面提供了一种反相色谱固定相，其结构式如下：
Figure BDA0003359446740000011
其中Silica Gel为硅胶，n＝0～10。
本发明第二方面一种反相色谱固定相的制备方法，包括以下步骤：
a、硅胶预处理：硅胶加入浓度为20～40wt％的强酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中100～160℃条件下干燥8～24小时，得酸化后硅胶；
b、巯基中间体合成：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入巯基硅烷偶联剂和酸化后硅胶，在20～130℃下反应1～48小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到巯基中间体；
c、巯基-烯烃点击反应：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂/水混合溶液中加入截短侧耳素、自由基引发剂和巯基中间体，在40～80℃下反应8～48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到色谱固定相。
本发明的一种具体实施方式，步骤a所用的强酸溶液为盐酸、硝酸、硫酸中的一种；以每克硅胶计，强酸溶液的用量为2～20mL。
本发明的一种具体实施方式，步骤b所用的巯基硅烷偶联剂有如下结构：
Figure BDA0003359446740000021
其中，X为氯、甲氧基或乙氧基中的一种，n＝0～10；
以每克硅胶计，巯基硅烷偶联剂的用量为1～10mmol。
本发明的一种具体实施方式，步骤b所用的有机溶剂为二氯甲烷、甲苯、二甲苯、二甲亚砜、N,N～二甲基甲酰胺中的一种；以每克硅胶计，有机溶剂的用量为5～15mL。
本发明的一种具体实施方式，步骤c所用的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、二甲亚砜、N,N～二甲基甲酰胺中的一种。
本发明的一种具体实施方式，步骤c所用的有机溶剂/水混合溶液，有机溶剂与水的体积比为7:3，以每克硅胶计，有机溶剂/水混合溶液的用量为5～20mL。
本发明的一种具体实施方式，步骤c所用的自由基引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异丁酸二甲酯、偶氮二异丁基脒盐酸盐、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐、偶氮二氰基戊酸、偶氮二异丙基咪唑啉中的一种，以每克硅胶计，自由基引发剂的用量为1～10mmol。
本发明的一种具体实施方式，步骤c中，以每克硅胶计，截短侧耳素的用量为1～20mmol。
本发明第三方面还提供了所述的反相色谱固定相在分离非极性化合物、二萜类化合物、三萜类化合物以及黄酮类化合物中的应用。
本发明至少具有以下有益效果之一：
1、本发明首次提出使用二萜化合物、截短侧耳素作为键合相修饰到硅胶表面，键合相中具有二萜骨架及有硫醚键、羟基和酯基基团等，从而得到一种结构新颖的反相色谱固定相，由于固定相中含水疏水骨架和多种官能团如酯基、羰基、羟基和硫醚键等，因此可提供不同的分离选择性，可广泛用于各类化合物的分离分析。
2、本发明提供的反相色谱固定相对非极性化合物、二萜类化合物、三萜类化合物以及黄酮类化合物均具有很好的分离选择性，因此可广泛用于各类样品的分离分析。
3、本发明提供的液相色谱固定相的制备过程简单可靠，反应条件温和，有利于实现产业化。
附图说明
图1为实施例1得到的色谱固定相应用在非极性化合物分离的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种反相色谱固定相的制备方法，包括以下步骤：
a.硅胶预处理：硅胶加入浓度为20～40wt％的强酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中100～160℃条件下干燥8～24小时，得酸化后硅胶；
其中，以每克硅胶计，强酸溶液的用量2～20mL；强酸溶液为盐酸、硝酸、硫酸中的一种。
b.巯基中间体合成：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入巯基硅烷偶联剂和酸化后硅胶，在20～130℃下反应1～48小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到烯基中间体；
其中，以每克硅胶计，巯基硅烷偶联剂的用量为1～10mmol，有机溶剂的用量为5～15mL。
基硅烷偶联剂有如下结构：
Figure BDA0003359446740000031
其中，X为氯、甲氧基或乙氧基中的一种，n＝0～10；
具体的，巯基硅烷偶联剂可以是巯丙基三甲氧基硅烷、巯己基三氯硅烷等，
有机溶剂为二氯甲烷、甲苯、二甲苯、二甲亚砜、N,N～二甲基甲酰胺中的一种。
c.巯基-烯烃点击反应：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂/水(v/v＝7/3)混合溶液中加入截短侧耳素、自由基引发剂和巯基中间体，在40～80℃下反应8～48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到反相色谱固定相。
其中，以每克硅胶计，截短侧耳素的用量为1～20mmol，自由基引发剂的用量为每克硅胶1～10mmol，有机溶剂/水(v/v＝7/3)混合溶液的用量为5～20mL。
巯基中间体可以是巯丙基中间体、巯己基中间体等。
自由基引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异丁酸二甲酯、偶氮二异丁基脒盐酸盐、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐、偶氮二氰基戊酸、偶氮二异丙基咪唑啉中的一种。
本发明得到的反相色谱固定相，键合相中具有二萜骨架及有硫醚键、羟基和酯基基团等，其结构式如下：
Figure BDA0003359446740000041
其中Silica Gel为硅胶，n＝0～10。
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。
实施例1
向250mL烧瓶中加入10g硅胶，加入100mL浓度为20wt％的硝酸溶液中，加热回流搅拌2小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中160℃条件下干燥24小时，得酸化后硅胶。
在氮气保护下，向100mL烧瓶中加入10g酸化后硅胶、6mL巯丙基三甲氧基硅烷和60mL二甲苯，在110℃下反应16小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到巯丙基中间体。
在氮气保护下，向250mL烧瓶中加入10g巯丙基中间体、12.8g截短侧耳素、4.9g偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐和100mL甲醇/水(v/v＝7/3)混合溶液，在60℃下反应48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥16小时，得到色谱固定相1，结构如下：
Figure BDA0003359446740000051
实施例2
向250mL烧瓶中加入10g硅胶，加入100mL浓度为35wt％的硝酸溶液中，加热回流搅拌2小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中160℃条件下干燥24小时，得酸化后硅胶。
在氮气保护下，向100mL烧瓶中加入10g酸化后硅胶、12mL巯己基三氯硅烷和120mL甲苯，在160℃下反应3小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到巯己基中间体。
在氮气保护下，向250mL烧瓶中加入10g巯己基中间体、12.8g截短侧耳素、4.9g偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐和100mL乙醇/水(v/v＝7/3)混合溶液，在60℃下反应48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到色谱固定相2，结构如下：
Figure BDA0003359446740000052
实施例3
向250mL烧瓶中加入10g硅胶，加入100mL浓度为35wt％的硝酸溶液中，加热回流搅拌2小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中160℃条件下干燥24小时，得酸化后硅胶。
在氮气保护下，向100mL烧瓶中加入10g酸化后硅胶、15mL巯庚基三甲氧基硅烷和120mL甲苯，在160℃下反应3小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到巯庚基中间体。
在氮气保护下，向250mL烧瓶中加入10g巯己基中间体、12.8g截短侧耳素、4.9g偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐和100mL乙醇/水(v/v＝7/3)混合溶液，在60℃下反应48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到色谱固定相3，结构如下：
Figure BDA0003359446740000061
实施例4
向250mL烧瓶中加入10g硅胶，加入100mL浓度为35wt％的硝酸溶液中，加热回流搅拌2小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中160℃条件下干燥24小时，得酸化后硅胶。
在氮气保护下，向100mL烧瓶中加入10g酸化后硅胶、20mL十二烷基巯基三氯硅烷和120mL二甲苯，在160℃下反应3小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到十二烷基巯基中间体。
在氮气保护下，向250mL烧瓶中加入10g十二烷基巯基中间体、12.8g截短侧耳素、4.9g偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐和100mL乙醇/水(v/v＝7/3)混合溶液，在60℃下反应48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中80℃条件下真空干燥24小时，得到色谱固定相4，结构如下：
Figure BDA0003359446740000062
色谱固定相的应用和效果测试
将实施例1～4得到的色谱固定相应用于分离非极性化合物等物质，并测试分离效果，测试方法如下：
(一)实施例1得到的色谱固定相的分离效果
(1)使用实施例1所得色谱固定相1装填4.6×50mm色谱柱，用于非极性化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：混标(尿嘧啶1mg/mL，硝基苯1mg/mL，萘2mg/mL，芴2.2mg/mL)；
溶剂：A：乙腈，D：水；
洗脱：A：D＝50:50；
流速：1.5mL/min；
柱温：30℃；
检测：PDA(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1.0μL。
测试结果如图1所示，由图1可以看出，实施例1所得的色谱固定相1对尿嘧啶、硝基苯、萘、芴的分离效果很好，由此说明，实施例1所得的色谱固定相1对非极性化合物具有良好的选择性。
(2)使用实施例1所得色谱固定相1装填4.6×50mm色谱柱，用于二萜类化合物的分离，分析色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表1；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％甲酸水；
洗脱：0～10min～15min～20min，20～60％A；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表1所示：
表1
Figure BDA0003359446740000071
由表1可以看出，实施例1所得的色谱固定相1对穿心莲内酯和甜菊苷的分离效果很好，由此说明，实施例1所得的色谱固定相1对二萜类化合物具有良好的分离选择性。
(3)使用实施例1所得色谱固定相1装填4.6×50mm色谱柱，用于三萜类化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表2；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％甲酸水；
洗脱：0～10min～15min～20min，20～60％A；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表2所示：
表2
Figure BDA0003359446740000081
由表2可以看出，实施例1所得的色谱固定相1对地榆皂苷和积雪草酸的分离效果很好，由此说明，实施例1所得的色谱固定相1对三萜类化合物具有良好的分离选择性。
(4)使用实施例1所得色谱固定相1装填4.6×50mm色谱柱，用于黄酮类化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表3；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％磷酸水；
洗脱：0～10～15min，5％～30％～90％A；
流速：1.5mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表3所示：
表3
Figure BDA0003359446740000091
由表3可以看出，实施例1所得的色谱固定相1对槲皮素和大豆素的分离效果很好，由此说明，实施例1所得的色谱固定相1对黄酮类化合物具有良好的分离选择性。
(二)实施例2得到的色谱固定相的分离效果
(1)使用实施例2所得色谱固定相2装填4.6×50mm色谱柱，用于非极性化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：混标(尿嘧啶1mg/mL，硝基苯1mg/mL，萘2mg/mL，芴2.2mg/mL)；
溶剂：A：乙腈，D：水；
洗脱：A：D＝50:50；
流速：1.5mL/min；
柱温：30℃；
检测：PDA(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1.0μL。
测试结果如下表4所示：
表4
样品 保留时间/min 选择性
尿嘧啶 0.355 /
硝基苯 0.798 2.557
萘 1.243 1.669
芴 1.708 1.385
由表4可以看出，实施例2所得的色谱固定相2对尿嘧啶、硝基苯、萘、芴的分离效果很好，由此说明，实施例2所得的色谱固定相2对非极性化合物具有良好的选择性。
(2)使用实施例2所得色谱固定相2装填4.6×50mm色谱柱，用于二萜类化合物的分离，分析色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表5；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％甲酸水；
洗脱：0～10min～15min～20min，20～60％A；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表5所示：
表5
Figure BDA0003359446740000101
由表5可以看出，实施例2所得的色谱固定相2对穿心莲内酯和甜菊苷的分离效果很好，由此说明，实施例2所得的色谱固定相2对二萜类化合物具有良好的分离选择性。
(三)实施例3得到的色谱固定相的分离效果
(1)使用实施例3所得色谱固定相3装填4.6×50mm色谱柱，用于非极性化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：混标(尿嘧啶1mg/mL，硝基苯1mg/mL，萘2mg/mL，芴2.2mg/mL)；
溶剂：A：乙腈，D：水；
洗脱：A：D＝50:50；
流速：1.5mL/min；
柱温：30℃；
检测：PDA(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1.0μL。
测试结果如下表6所示：
表6
Figure BDA0003359446740000102
Figure BDA0003359446740000111
由表4可以看出，实施例3所得的色谱固定相3对尿嘧啶、硝基苯、萘、芴的分离效果很好，由此说明，实施例3所得的色谱固定相3对非极性化合物具有良好的选择性。
(2)使用实施例3所得色谱固定相3装填4.6×50mm色谱柱，用于二萜类化合物的分离，分析色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表7；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％甲酸水；
洗脱：0～10min～15min～20min，20～60％A；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表7所示：
表7
Figure BDA0003359446740000112
由表7可以看出，实施例3所得的色谱固定相3对穿心莲内酯和甜菊苷的分离效果很好，由此说明，实施例3所得的色谱固定相3对二萜类化合物具有良好的分离选择性。
(四)实施例4得到的色谱固定相的分离效果
(1)使用实施例4所得色谱固定相4装填4.6×50mm色谱柱，用于非极性化合物的分离分析，色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：混标(尿嘧啶1mg/mL，硝基苯1mg/mL，萘2mg/mL，芴2.2mg/mL)；
溶剂：A：乙腈，D：水；
洗脱：A：D＝50:50；
流速：1.5mL/min；
柱温：30℃；
检测：PDA(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1.0μL。
测试结果如下表8所示：
表8
样品 保留时间/min 选择性
尿嘧啶 0.403 /
硝基苯 0.889 3.52
萘 1.289 1.74
芴 1.781 1.42
由表8可以看出，实施例2所得的色谱固定相2对尿嘧啶、硝基苯、萘、芴的分离效果很好，由此说明，实施例2所得的色谱固定相2对非极性化合物具有良好的选择性。
(2)使用实施例4所得色谱固定相4装填4.6×50mm色谱柱，用于二萜类化合物的分离，分析色谱条件为：
色谱柱：4.6×50mm；
样品：见下表9；
溶剂：A：乙腈，B：0.1％甲酸水；
洗脱：0～10min～15min～20min，20～60％A；
流速：1.0mL/min；
柱温：30℃；
检测：DAD(190nm～400nm)&UV(254nm)；
进样：1μL。
测试结果如下表9所示：
表9
Figure BDA0003359446740000121
Figure BDA0003359446740000131
由表9可以看出，实施例4所得的色谱固定相4对穿心莲内酯和甜菊苷的分离效果很好，由此说明，实施例4所得的色谱固定相4对二萜类化合物具有良好的分离选择性。
以上仅是本发明的特征实施范例，对本发明保护范围不构成任何限制。凡采用同等交换或者等效替换而形成的技术方案，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims (10)

1.一种反相色谱固定相，其特征在于，其结构式如下：
其中Silica Gel为硅胶，n= 0~10；其制备方法如下：
a、硅胶预处理：硅胶加入浓度为20~40 wt%的强酸溶液中，加热回流搅拌1~48小时，过滤，用水洗涤至pH=6~7，所得固体于干燥箱中100~160℃条件下干燥8~24小时，得酸化后硅胶；
b、巯基中间体合成：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入巯基硅烷偶联剂和酸化后硅胶，在20~130℃下反应1~48小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中40~80℃条件下真空干燥8~24小时，得到巯基中间体；
c、巯基-烯烃点击反应：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂/水混合溶液中加入截短侧耳素、自由基引发剂和巯基中间体，在40~80℃下反应8~48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中40~80℃条件下真空干燥8~24小时，得到色谱固定相。
2.一种如权利要求1所述的反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、硅胶预处理：硅胶加入浓度为20~40 wt%的强酸溶液中，加热回流搅拌1~48小时，过滤，用水洗涤至pH=6~7，所得固体于干燥箱中100~160℃条件下干燥8~24小时，得酸化后硅胶；
b、巯基中间体合成：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入巯基硅烷偶联剂和酸化后硅胶，在20~130℃下反应1~48小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中40~80℃条件下真空干燥8~24小时，得到巯基中间体；
c、巯基-烯烃点击反应：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂/水混合溶液中加入截短侧耳素、自由基引发剂和巯基中间体，在40~80℃下反应8~48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中40~80℃条件下真空干燥8~24小时，得到色谱固定相。
3. 根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤a所用的强酸溶液为盐酸、硝酸、硫酸中的一种；以每克硅胶计，强酸溶液的用量为2~20 mL。
4.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤b所用的巯基硅烷偶联剂有如下结构：
其中，X为氯、甲氧基或乙氧基中的一种，n= 0~10；
以每克硅胶计，巯基硅烷偶联剂的用量为1~10 mmol。
5.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤b所用的有机溶剂为二氯甲烷、甲苯、二甲苯、二甲亚砜、N,N~二甲基甲酰胺中的一种；以每克硅胶计，有机溶剂的用量为5~15 mL。
6.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤c所用的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、二甲亚砜、N,N~二甲基甲酰胺中的一种。
7.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤c所用的有机溶剂/水混合溶液，有机溶剂与水的体积比为7:3，以每克硅胶计，有机溶剂/水混合溶液的用量为5~20 mL。
8.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤c所用的自由基引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异丁酸二甲酯、偶氮二异丁基脒盐酸盐、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐、偶氮二氰基戊酸、偶氮二异丙基咪唑啉中的一种，以每克硅胶计，自由基引发剂的用量为1~10 mmol。
9.根据权利要求2所述的一种反相色谱固定相的制备方法，其特征在于，步骤c中，以每克硅胶计，截短侧耳素的用量为1~20 mmol。
10.根据权利要求1所述的反相色谱固定相在分离非极性化合物、二萜类化合物、三萜类化合物以及黄酮类化合物中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1310872A (en) * 1969-01-13 1973-03-21 Simpson C F Liquid partition chromatography
CN101921370A (zh) * 2010-08-10 2010-12-22 华南农业大学 一种用于检测沃尼妙林的分子印迹聚合物的制备方法
CN105749887A (zh) * 2014-12-16 2016-07-13 中国科学院大连化学物理研究所 一种液相色谱固定相的制备方法及其糖基键合固定相
CN106008395A (zh) * 2016-06-22 2016-10-12 华南农业大学 一种具有硫醚侧链的截短侧耳素类化合物及其制备方法和用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1310872A (en) * 1969-01-13 1973-03-21 Simpson C F Liquid partition chromatography
CN101921370A (zh) * 2010-08-10 2010-12-22 华南农业大学 一种用于检测沃尼妙林的分子印迹聚合物的制备方法
CN105749887A (zh) * 2014-12-16 2016-07-13 中国科学院大连化学物理研究所 一种液相色谱固定相的制备方法及其糖基键合固定相
CN106008395A (zh) * 2016-06-22 2016-10-12 华南农业大学 一种具有硫醚侧链的截短侧耳素类化合物及其制备方法和用途

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"基于脱氢枞酸新型手性固定相的制备和应用";郭亮池;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》(第5期);B014-275 *
"截短侧耳素分子印迹聚合物吸附性能的初步研究";王新杨等;《时珍国医国药》;第22卷(第4期);第825-828页 *

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