CN113995775A - 一种具有护足功效的益生菌足膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种具有护足功效的益生菌足膜，是使用保藏编号为CCTCC NO：M2019940的唾液乳杆菌VHProbi Y39株的裂解液来制备足膜。本发明制备的益生菌足膜对人体皮肤无不良反应，安全性良好；能够有效抑制足部皮肤有害微生物的增殖，对足癣有很好的治愈效果，且复发率极低。患者使用益生菌足膜后，足部皮肤平坦、无瘢痕、无痛痒、弹性良好，皮肤颜色正常，效果显著。本发明的益生菌足膜还能显著减少足部皮肤水分的散失量，有效保护足部皮肤屏障，预防或缓解足部皲裂；敷用益生菌足膜的皮肤失水率显著低于空白对照组。本发明提供的益生菌足膜可广泛用于足部皮肤的日常保养以及足部皮肤病的预防和治疗，应用前景广阔。

Description

一种具有护足功效的益生菌足膜及其制备方法

技术领域

本发明属于益生菌应用技术领域，具体涉及一种能有效预防和/或缓解足癣、足部皲裂，提高足部皮肤屏障功能的护足益生菌株，以及由该益生菌株制备的足膜及其制备方法。

背景技术

当前，人们对于美容护肤的需求逐渐高涨，市面上针对脸部、颈部和手部等身体部位的护肤产品功能齐全、种类多样。但是针对足部护理的产品非常少，并且功能较为单一，多以清洁功效为主。从成份上来说，很少有专门针对足部问题并可以有效解决足部问题的护肤品，大多是身体护肤品配方经过些许改进后用于足部。对于足癣、足部皲裂等常见足部问题，市面上常用抗生素药物或中药制剂产品，存在治疗效果差、需要长期使用或病情容易出现反复等问题。

皮肤是人体的第一大器官，也是人体的第一道保护屏障。在皮肤上，居住着数量庞大的微生物，它们在抗感染、免疫平衡和屏障修复中均发挥着重要作用。不同部位的皮肤，其皮肤微生态结构呈现较大差异，例如在足部，由于其高热、潮湿的特点，皮肤微生态复杂且稳定性偏低，容易滋生致病菌。

益生菌是活的微生物，当施以足够数量时能够对人体健康带来益处。临床研究结果表明，益生菌能够对人体的消化系统、呼吸系统、免疫系统和神经系统等产生有益作用。针对胃肠功能调节的益生菌保健产品已经较多，但是针对皮肤护理的益生菌产品较少，尤其是针对足部皮肤微生态调节、能起到预防和舒缓足癣、足裂、提高足部皮肤屏障功能的益生菌产品未见报道。因此，研究出一种能提高足部皮肤屏障功能、预防和/或舒缓足癣、足部皲裂等作用的益生菌组合物具有重要价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有护足功效的益生菌足膜及其制备方法。所述益生菌足膜中包含一种唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)的裂解液，能够有效预防和/或缓解足癣、足部皲裂等现象，保护足部皮肤，提高皮肤屏障功能。

本发明首先提供唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)VHProbi Y39株的一种新用途，是在制备用于治疗足部皮肤疾病的制品中的应用；

所使用的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)VHProbi Y39株已于2019年11月18日保藏于位于中国武汉的武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCCNO：M2019940。

本发明再一个方面提供一种益生菌足膜，所述的益生菌足膜中包含有上述唾液乳杆菌VHProbi Y39的裂解液。

所述益生菌足膜还包含有丙二醇、甲基异噻唑啉酮、氯化钠、月桂二醇醚、氢化蓖麻油、VP共聚物、辛酸、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、海藻糖和EDTA二钠。

优选的，所述的组分及其质量百分比分别为：丙二醇0.1-0.2％、甲基异噻唑啉酮0.05-0.15％、氯化钠0.1-0.2％、月桂二醇醚0.05-0.10％、氢化蓖麻油0.6-1.8％、VP共聚物0.05-0.15％、辛酸1.0-2.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15-0.45％、1，3-丙二醇0.5-1.5％、丁二醇5-15％、甜菜碱1-6％、海藻糖5-15％、EDTA二钠0.05-0.15％。

进一步优选的，所述益生菌足膜中保护剂各组分及其质量百分比分别为：丙二醇0.20％、甲基异噻唑啉酮0.15％、氯化钠0.20％、月桂二醇醚0.05％、氢化蓖麻油1.8％、VP共聚物0.05％、辛酸2.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15％；1，3-丙二醇1.5％、丁二醇5％、甜菜碱6％、海藻糖5％、EDTA二钠0.15％。

本发明所提供的益生菌足膜在制备用于预防或治疗足癣的制品中的应用。

本发明还提供所述的益生菌足膜在制备用于预防或缓解足部皲裂的制品中的应用。

本发明再一个方面还提供用于预防或治疗足癣或足部皲裂的制品，其中包含有本发明所提供的益生菌足膜。

本发明制备的益生菌足膜对人体皮肤无不良反应，安全性良好。所述益生菌足膜能有效抑制足部皮肤有害微生物的增殖，对足癣有很好的治愈效果，且复发率极低。患者使用益生菌足膜后，足部皮肤平坦、无瘢痕、无痛痒、弹性良好，皮肤颜色正常，效果显著。所述益生菌足膜还能显著减少足部皮肤水分的散失量，有效保护足部皮肤屏障，预防或缓解足部皲裂；敷用足膜2h以内，敷用益生菌足膜的皮肤失水率显著低于空白对照组，2h以后，空白对照组皮肤失水率继续提高，4h时达到23％左右，而敷用益生菌足膜的皮肤失水率提高不明显，基本维持在7％-8％的范围。本发明提供的益生菌足膜可广泛用于足部皮肤的日常保养以及足部皮肤病的预防和治疗，应用前景广阔。

附图说明

图1为足部皮肤失水率。

具体实施方式

本发明所使用的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)VHProbi Y39株分离自健康婴儿粪便，已于2019年11月18日保藏于位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2019940。

申请人研究发现唾液乳杆菌VHProbi Y39对人工肠胃液具有很强的耐受性，在人工肠胃液中的存活率达到85％以上；VHProbi Y39株不产生溶血素，不溶解血细胞，对红霉素、四环素等常见的抗生素敏感，具有良好的生物安全性；能够耐受较高的盐度，最大耐受盐浓度为6％。

唾液乳杆菌VHProbi Y39抗氧化能力较强，其上清液抗脂质过氧化抑制率在54％以上，菌体抗脂质过氧化抑制率在71％以上,DPPH清除率达到43％以上,HRS清除率达到54％以上。该菌株还能有效降解胆固醇，降解率达到32％以上；另外，该菌株细胞表面疏水性为70.61％，有一定的黏附能力。

唾液乳杆菌VHProbi Y39具有较好的缓解特异性皮炎的功效。使用本发明提供的唾液乳杆菌VHProbi Y39灌胃或涂抹疾病模型小鼠的皮损部位，其皮炎症状较安慰剂组显著减轻，说明该菌株无论内服还是外用均可以明显改善特异性皮炎模型小鼠的皮损进展，有效缓解特异性皮炎。

唾液乳杆菌VHProbi Y39能够代谢产生短链脂肪酸，降低足部皮肤环境的pH值，抑制足部有害微生物的增殖。此外，唾液乳杆菌VHProbi Y39分泌的抗菌肽或产生的抗炎物质，能加强细胞间紧密连结，加固足部皮肤屏障，训练足部皮肤免疫系统，提高免疫力。

唾液乳杆菌VHProbi Y39的使用，能够有效降低特应性皮炎模型小鼠血清中IL-5、IL-6、IFN-γ和总的IgE,使小鼠免疫反应呈TH1型并抑制TH2型免疫反应。

从小鼠皮肤HE染色结果来看，经唾液乳杆菌VHProbi Y39处理后，小鼠皮肤角质化及表皮增厚状况较安慰剂组明显改善。

下面结合实施例和附图对本发明进行详细的描述。

实施例1：制备益生菌裂解液

1、制备益生菌发酵液

在无菌条件下，将唾液乳杆菌VHProbi Y39种子液以3％的体积比接种于发酵培养基中，所述发酵培养基中各组分及其含量分别为：、磷酸氢二钾3g/L、红糖20g/L、骨胶原20g/L、酵母粉2g/L；37℃培养24h，转速为180rpm，通风量为1：1.2，罐压为0.05MPa。发酵完成后，即得到唾液乳杆菌VHProbi Y39发酵液。

2、制备裂解液液

将唾液乳杆菌VHProbi Y39发酵液在常温下使用高压均质机进行裂解处理，压力为100MPa,重复均质3次后置于70℃水浴锅彻底灭活处理，制备成裂解液。

本发明的唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液制备工艺，还可以采用其它的方法，而不仅限于本实施例的记载。

实施例2：制备益生菌足膜

一种益生菌足膜，由下述质量百分比的原料组成：丙二醇0.15％、甲基异噻唑啉酮0.05％、氯化钠0.10％、月桂二醇醚0.10％、氢化蓖麻油0.6％、VP共聚物0.15％、辛酸1.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.45％；1，3-丙二醇0.5％、丁二醇15％、甜菜碱1％、海藻糖10％、EDTA二钠0.05％；唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液5％。

所述益生菌足膜的制备方法，包括如下步骤：

(1)按上述比例称取各原料组分；

(2)将丙二醇、甲基异噻唑啉酮、氯化钠、月桂二醇醚、氢化蓖麻油、VP共聚物、辛酸和碘丙炔醇丁基氨甲酸酯加入油浴锅，将1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、海藻糖、EDTA二钠加入水浴锅中，分别加热搅拌至80～85℃，直至原料全部溶解；

(3)将水浴锅中溶解后的原料抽入乳化锅中，边搅拌边加入油浴锅中溶解后的原料；全部加完后，抽真空、并均质10分钟；均质完成后80℃保温15分钟，降温；

(4)当温度降到40℃左右时，加入唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液，搅拌均匀，即得益生菌足膜。

实施例3：制备一种益生菌足膜

一种益生菌足膜，由下述质量百分比的原料组成：丙二醇0.10％、甲基异噻唑啉酮0.10％、氯化钠0.15％、月桂二醇醚0.08％、氢化蓖麻油1.2％、VP共聚物0.10％、辛酸1.5％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.30％；1，3-丙二醇1.0％、丁二醇10％、甜菜碱3％、海藻糖15％、EDTA二钠0.10％；唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液10％。

所述益生菌足膜的制备方法，同实施例2。

实施例4：一种益生菌足膜及其制备方法

一种益生菌足膜，由下述质量百分比的原料组成：丙二醇0.20％、甲基异噻唑啉酮0.15％、氯化钠0.20％、月桂二醇醚0.05％、氢化蓖麻油1.8％、VP共聚物0.05％、辛酸2.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15％；1，3-丙二醇1.5％、丁二醇5％、甜菜碱6％、海藻糖5％、EDTA二钠0.15％；唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液15％。

所述益生菌足膜的制备方法，同实施例2。

实施例5：益生菌足膜的安全性评价

为了评估本发明提供的益生菌足膜对人体是否有不良反应，申请人通过红细胞溶血试验、小鼠多次皮肤刺激试验和人体封闭式斑贴试验，对实施例2-4制备得到的益生菌足膜进行安全性评价。具体试验如下：

1、红细胞溶血性试验

红细胞溶血率在一定程度上可以反应样品的刺激性，溶血率越高，表明样品潜在的刺激性越大。红细胞溶血试验参照红细胞测试标准。

结果显示，在受试浓度1-10％的范围内，益生菌足膜的细胞溶血率非常低，表明该足膜刺激性非常小，安全性良好。

2、小鼠多次皮肤刺激试验

采用小鼠多次皮肤刺激试验，确定和评价益生菌足膜对哺乳动物皮肤局部是否有刺激或腐蚀作用。

将益生菌足膜一次或多次涂于受试动物的皮肤上，在规定时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。采用自身对照，以评价足膜对皮肤的刺激作用。

实验结果显示，连续涂抹益生菌足膜14天后，小鼠皮肤未出现红斑和水肿现象，说明本发明提供的益生菌足膜安全性良好，无刺激性。

3、人体封闭式斑贴实验

人体斑贴实验方法参照《化妆品卫生规范》。将益生菌足膜进行封闭式斑贴，考察其对人体造成不良反应的可能性。空白基质是用水代替组分C制得。皮肤不良反应分级如下表1所示。

表1皮肤不良反应分级

使用去除斑受试器观察20位受试者在30分钟、24小时和48小时的皮肤反应情况。试验结果如表2-4所示。

表2去除斑受试器30分钟观察结果

表3去除斑受试器24小时观察结果

表4去除斑受试器48观察结果

根据《化妆品卫生规范》的要求，判定本发明提供的益生菌足膜对人体皮肤无不良反应，安全性良好。

实施例6：益生菌足膜在治疗足癣和修复足部皮肤中的应用

1、益生菌足膜治疗足癣的效果

(1)受试方法：选取确诊足癣患者24名，男性10名，女性14名。使用实施例4制备的益生菌足膜，每天睡前涂于整个足部，连续使用40天。

(2)评判标准：治愈：糜烂、水泡、角质层脱落级瘙痒症状全部消失，足癣痊愈，恢复正常；显效：足部瘙痒症状减轻；无效：症状无缓解。

(3)试验结果

45天后，24名患者痊愈的有18人，治愈率为75％；显效的有4人，显效率为16.7％，无效的有2人，无效率为8.3％。同时，所有患者的足部外观均比以前光滑。继续跟踪患者4个月后，治愈者足癣没有出现复发情况。从而说明，本发明提供的益生菌足膜对足癣有很好的治愈效果，且复发率极低。患者使用益生菌足膜后，足部皮肤平坦、无瘢痕、无痛痒、弹性良好，皮肤颜色正常，效果显著。

2、益生菌足膜修复足部皮肤的效果

(1)受试方法：健康志愿者30名，男女各半。所有受试者均无皮肤或系统性疾病，受试部位无异常，且受试期间不涂抹任何与试验无关的药物或化妆品。在受试者足部标记受测区域(4cm×4cm)。先测量各测试区域的空白值，敷用足膜后采用多功能皮肤水分测试仪和皮肤水分散失仪分别测量30min、1h、2h和4h受试区域和空白对照区域的水分散失量值。空白对照组为不添加唾液乳杆菌VHProbi Y39裂解液的足膜样品。

(2)检测标准：皮肤水分散失量反映了测试周期内，实验区域水分散失随时间的变化规律，它可以表征测试样品的皮肤屏障修复功能，其值越小，水分散失越少，皮肤修护能力越强；反之，皮肤修护能力越弱。

失水率(％)＝(样品组水分散失量-起始水分散失量)/起始水分散失量×100。

(3)试验结果

结果如图1所示，敷用足膜2h以内，受试者的足部皮肤失水率随时间的延长而不断提高，其中敷用益生菌足膜的皮肤失水率显著低于空白对照组，说明益生菌唾液乳杆菌VHProbi Y39开始显现皮肤修护能力；2h以后，空白对照组皮肤失水率继续提高，4h时达到23％左右；而敷用益生菌足膜的皮肤失水率提高不明显，基本维持在7％-8％的范围。从而说明，本发明提供的添加了唾液乳杆菌VHProbi Y39冻干粉的益生菌足膜能显著减少足部皮肤水分的散失量，有效保护足部皮肤屏障，预防或缓解足部皲裂。

申请人使用实施例2和3制备得到的益生菌足膜重复了上述实验，也取得了基本相当的实验结果。所述益生菌足膜对足癣同样有很好的治愈效果，且能显著降低足部皮肤的失水率。

综上所述，本发明提供的含唾液乳杆菌VHProbi Y39的益生菌足膜对人体皮肤无不良反应，安全性良好，对足癣有显著的治疗效果，且能有效预防足部皲裂，可广泛用于足部皮肤的日常保养以及足部皮肤病的预防和治疗，取得了意料不到的技术效果。

Claims (10)

1.保藏编号为CCTCC NO：M2019940的唾液乳杆菌在制备用于治疗足部皮肤疾病的制品中的应用。

2.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制品为益生菌足膜。

3.一种益生菌足膜，其特征在于，所述的益生菌足膜中包含有保藏编号为CCTCC NO：M2019940的唾液乳杆菌的裂解液。

4.如权利要求3所述的益生菌足膜，其特征在于，所述的益生菌足膜中还包含有其它组分。

5.如权利要求4所述的益生菌足膜，其特征在于，所述的其它组分包含有丙二醇、甲基异噻唑啉酮、氯化钠、月桂二醇醚、氢化蓖麻油、VP共聚物、辛酸、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、1，3-丙二醇、丁二醇、甜菜碱、海藻糖和EDTA二钠。

6.如权利要求5所述的益生菌足膜，其特征在于，所述的组分及其质量百分比分别为：丙二醇0.1-0.2％、甲基异噻唑啉酮0.05-0.15％、氯化钠0.1-0.2％、月桂二醇醚0.05-0.10％、氢化蓖麻油0.6-1.8％、VP共聚物0.05-0.15％、辛酸1.0-2.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15-0.45％、1，3-丙二醇0.5-1.5％、丁二醇5-15％、甜菜碱1-6％、海藻糖5-15％、EDTA二钠0.05-0.15％。

7.如权利要求5所述的益生菌足膜，其特征在于，所述的组分及其质量百分比分别为丙二醇0.20％、甲基异噻唑啉酮0.15％、氯化钠0.20％、月桂二醇醚0.05％、氢化蓖麻油1.8％、VP共聚物0.05％、辛酸2.0％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.15％；1，3-丙二醇1.5％、丁二醇5％、甜菜碱6％、海藻糖5％、EDTA二钠0.15％。

8.权利要求5所述益生菌足膜在制备用于预防或治疗足癣的制品中的应用。

9.权利要求5所述益生菌足膜在制备用于预防或缓解足部皲裂的制品中的应用。

10.一种预防或治疗足癣或足部皲裂的制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求5所述的益生菌足膜。

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