CN113995773A - 一种增强人造血干细胞移植能力的药物及其应用 - Google Patents

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程涛
尹秀秀
张孝兵
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Abstract

本发明公开了一种增强人造血干细胞(HSCs)移植能力的药物及其应用。所述药物包括过表达细胞因子的人间充质干细胞，所述细胞因子包括PDGFB、EGF或FGF2中的任意一种或至少两种的组合。本发明将过表达细胞因子的人间充质干细胞与人造血干细胞共移植，优化人造血干细胞植入的微环境，能提高人HSCs的植入率和造血重建能力，并显著提高人造血干细胞的自我更新能力，促进了人造血干细胞移植方面的研究，也为NOD‑SCID小鼠移植模型广泛地应用于临床和科学研究提供了新的思路。

Description

一种增强人造血干细胞移植能力的药物及其应用
技术领域
本发明属于造血干细胞移植技术领域，涉及一种增强人造血干细胞移植能力的药物及其应用。
背景技术
造血干细胞(HSCs)是一类具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的原始造血前体细胞，其主要功能是通过不断分化产生各系造血祖细胞，然后大量增殖分化为各种原始和成熟的血细胞，成熟的血细胞进入血液中发挥其各自的生理作用。造血干细胞移植(HSCT)是多种恶性血液病的主要治疗方法，并逐渐应用到其他实体瘤、自身免疫性疾病、糖尿病等非血液系统疾病的治疗中。
HSCT成功的关键是供者的HSCs能成功植入到受体造血微环境(Niche)中去并存活下来。Niche是HSCs在骨髓腔中定植的部位，是支持和调节HSCs自我更新、生长发育、分化成熟的特殊环境，是维持正常造血功能的重要场所。从区域上Niche可划分为骨内膜区域、血窦区域及血管周围区域；细胞类型上包括成骨细胞、血管内皮细胞、间充质干细胞、脂肪细胞、免疫细胞等。除细胞组成外，细胞因子、趋化因子、黏附分子、基质大分子等介导了细胞与细胞之间的相互作用，参与了骨髓微环境对造血干细胞的调节。目前临床治疗中，患者移植前一般要经过大剂量化疗或放疗预处理，破坏恶性克隆细胞后进行骨髓移植。但是，在清髓过程中不可避免地破坏了HSCs赖以生存的微环境而不利于其成功植入，纯化的HSCs移植到体内后增生速度很慢，造血恢复是一个极长的过程。植入率低下是当前临床HSCs移植后疾病复发的主要原因。
现有技术中，主要通过在移植前对造血干细胞进行预处理提高造血干细胞移植能力，如CN103379907A提供了一种通过离体预处理增强造血干细胞移入的新方法，所述方法包括下述步骤：获得包含造血干细胞的样品并且与前列环素类似物混合得到混合物，将所述混合物温育足以在所述细胞中刺激Gαs-信号传导的一段时间，和任选地分离所述被刺激过的细胞，通过前列环素类似物提高造血干细胞移植能力，CN112048474A公开一种增强造血干细胞移植能力的方法，通过采用JNK抑制剂上调造血干细胞CCN3基因的表达增强造血干细胞移植能力，但对于造血干细胞移植后的分化及自我更新未进行研究。
综上所述，如何提高造血干细胞的移植能力，同时提高移植后的多系分化及自我更新，是造血干细胞移植技术领域亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种增强人造血干细胞移植能力的药物及其应用，所述药物能够显著增强人造血干细胞植入率，并提高移植后人造血干细胞的多系分化和自我更新能力。
为达上述目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种增强人造血干细胞移植能力的药物，所述药物包括过表达细胞因子的人间充质干细胞，所述细胞因子包括PDGFB、EGF或FGF2中的任意一种或至少两种的组合。
本发明中，人间充质干细胞(MSCs)是一群高异质性的，能在体外克隆性生长、自我更新和多向分化的前体细胞，其可以分化成骨骼、脂肪、软骨及骨髓基质细胞等。MSCs作为骨髓基质细胞的重要成分对于正常HSCs微环境的形成起着至关重要的作用，可以分化成血管周细胞、肌成纤维细胞、骨髓基质细胞、骨细胞、成骨细胞和血管内皮细胞。细胞因子PDGFB、EGF和FGF2调控微环境的修复过程，可以修复改善造血微环境，且可以促进MSCs的增殖。
本发明首次发现将过表达EGF、FGF2或PDGFB中任意一种或至少两种的组合的人MSCs与人HSCs共移植到免疫缺陷鼠骨髓腔中，能提高人HSCs的植入率和造血重建能力，并显著提高人HSCs的自我更新能力，为临床HSCs移植提供一定的理论依据。
优选地，所述人造血干细胞包括人骨髓造血干细胞、外周造血干细胞或脐带血造血干细胞中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述人造血干细胞包括CD34+细胞。
优选地，所述过表达细胞因子的人间充质干细胞由如下制备方法制备得到：
将过表达细胞因子的慢病毒载体转入人间充质干细胞，得到所述过表达细胞因子的人间充质干细胞，所述细胞因子包括PDGFB、EGF或FGF2中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述过表达细胞因子的人间充质干细胞由包括如下步骤的制备方法制备得到：
(1)将编码所述细胞因子的基因插入慢病毒载体，得到过表达细胞因子的慢病毒载体；
(2)对所述过表达细胞因子的慢病毒载体进行包装，得到慢病毒；
(3)将所述慢病毒转染人间充质干细胞，得到所述过表达细胞因子的人间充质干细胞。
优选地，步骤(1)所述慢病毒载体包括pRSC-EF1-wpre、pRSC-SFFV-wpre或pRSC-PGK-wpre。
优选地，步骤(2)所述包装包括利用293T细胞进行病毒包装。
第二方面，本发明提供如第一方面所述的增强人造血干细胞移植能力的药物在制备促进人造血干细胞移植能力的产品中的应用。
第三方面，本发明提供如第一方面所述的增强人造血干细胞移植能力的药物在制备人造血干细胞制剂中的应用。
第四方面，本发明提供一种人造血干细胞制剂，所述人造血干细胞制剂包括人造血干细胞和第一方面所述的增强人造血干细胞移植能力的药物。
优选地，所述人造血干细胞制剂还包括药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体中的任意一种或至少两种的组合。
第五方面，本发明提供一种免疫缺陷鼠治疗模型的构建方法，所述构建方法包括：
将人造血干细胞与第一方面所述的增强人造血干细胞移植能力的药物共移植到免疫缺陷小鼠骨髓腔中，得到所述免疫缺陷鼠治疗模型。
本发明成功构建人造血干细胞与人间充质干细胞共移植的免疫缺陷鼠模型，能够有效应用于人造血干细胞移植研究中。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明针对移植模型的受体免疫缺陷小鼠(NOD-SCID)骨髓Niche中的相关因子，采用慢病毒载体技术将人的EGF、FGF2和PDGFB分别过表达在人MSCs上，构建了EGF-MSCs、FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs细胞系，然后将其与人HSCs共移植，优化人HSCs植入的微环境，能提高人HSCs的植入率和造血重建能力，并显著提高人HSCs的自我更新能力，方法新颖，有针对性，该方法把人的造血干细胞的研究引入了更深的层次，促进了人造血干细胞移植方面的研究，也为今后NOD-SCID小鼠移植模型广泛地应用于临床和科学研究提供了新的思路。
附图说明
图1为过表达细胞因子的慢病毒载体的基因结构图；
图2为GFP-MSCs、EGF-MSCs、FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs细胞系中EGF、FGF2、PDGFB基因mRNA表达水平图；
图3为GFP-MSCs、EGF-MSCs、FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs细胞系中EGF、FGF2、PDGFB蛋白表达水平图；
图4为GFP-MSCs、EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs细胞系分别和CD34+造血干细胞共移植模式图；
图5为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的注射侧骨髓中CD45+细胞比例结果图，＊表示p<0.05，＊＊表示p<0.01，＊＊＊表示p<0.001；
图6为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的注射侧骨髓中CD34+细胞比例结果图；
图7为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的注射侧骨髓中CD34+细胞分化结果图，B代表淋系细胞，M代表髓系细胞；
图8为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的对侧骨髓(Non-IT)中CD45+细胞比例结果图，＊表示p<0.05，＊＊表示p<0.01，＊＊＊表示p<0.001；
图9为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的对侧骨髓(Non-IT)中CD34+细胞比例结果图；
图10为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的对侧骨髓(Non-IT)中CD34+细胞分化结果图，B代表淋系细胞，M代表髓系细胞；
图11为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的脾脏中CD45+细胞比例结果图，＊表示p<0.05，＊＊表示p<0.01；
图12为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的脾脏中CD34+细胞分化结果图，NK代表natural killer细胞，B代表淋系细胞；
图13为EGF-MSCs、FGF2-MSCs、PDGFB-MSCs与人CD34+细胞共移植后小鼠的脾脏中CD45+CD19+IgM+B细胞比例结果图；
图14为不同二次移植小鼠骨髓中CD45+细胞的比例结果图，＊表示p<0.05；
图15为不同二次移植小鼠骨髓中CD45+细胞的比例相对于对照组小鼠骨髓中CD45+细胞的比例的倍数图；
图16为不同二次移植小鼠骨髓中CD34+细胞的分化结果图，B代表淋系细胞，M代表髓系细胞。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
本发明实施例中，首先构建过表达细胞因子的慢病毒载体，随后进行包装制备慢病毒，并测定滴度，培养人MSCs细胞，进行慢病毒转染，获得过表达细胞因子的人MSCs细胞，最后将过表达细胞因子的人MSCs细胞与人造血干细胞共移植，考察过表达细胞因子的人MSCs细胞对人造血干细胞移植的影响。
实施例1
本实施例使用过表达细胞因子(EGF、FGF2和PDGFB)的慢病毒载体pRSC-EF1-EGF-wpre、pRSC-EF1-FGF2-wpre和pRSC-EF1-PDGFB-wpre(均由中国医学科学院血液病医院张孝兵教授实验室提供)基因结构图如图1所示，以表达绿色荧光蛋白GFP的载体pRSC-EF1-GFP-wpre作为对照，进行病毒包装，包括以下步骤：
(1)于37℃水浴复苏239T细胞，复苏后，将细胞置于37℃，5％CO2培养箱中培养，培养液为含10％FBS的高糖DMEM培养基，当293T培养汇合度达到75％时，1:3传代；
第一天：
(2)用5mL/皿0.001％多聚赖氨酸处理15cm平皿30min，吸去多聚赖氨酸，用PBS清洗一遍；
(3)消化对数生长期的293T细胞，计数；
(4)按每皿1x107接种细胞；
第二天：
(5)6h左右，观察细胞汇合度达到80％以上；
(6)将培养皿中的细胞培养液换成新鲜含10％FBS的DMEM培养基；
(7)使用ABM转染试剂盒(Cat.G099)进行转染，按表1配制A液，表2配制B液；
表1
Figure BDA0003333173740000081
表2
Figure BDA0003333173740000082
(8)在超净台内将A液与B液用vortex充分混匀后逐滴加入细胞内，并将细胞置于37℃，5％CO2培养箱培养过夜；
第三天：
(9)换新鲜的含有10％FBS、4mM Butyrate和20mM HEPES的DMEM，37℃，5％CO2培养箱培养24h；
第四天：
(10)收集24h病毒上清到0.22μm真空滤器瓶中，4℃保存；
第五天：
(11)收集48h病毒上清到0.22μm真空滤器瓶中过滤；
(12)浓缩：4℃，20000rpm离心2h；
(13)溶解：每50mL病毒上清沉淀用500μL IMDM溶解，4℃(平行)放置至少1h充分溶解，次日分装100μL/支，得到过表达细胞因子的慢病毒，-80℃保存。
实施例2
本实施例测定实施例1制备的慢病毒的滴度(TU)，包括以下步骤：
第一天：
(1)在6孔板中铺293T细胞，1x105/孔；
第二天：
(2)按(原液，1:10，1:100，1:1000，1:10000)的方案对慢病毒进行稀释，将慢病毒加入孔中，并加入polybrene至终浓度为6μg/mL，继续在培养箱中培养；
第三天：
(3)转染后48h，收集转染的细胞，用流式检测GFP阳性率，按如下公式进行梯度计算：病毒滴度(TU/mL)＝GFP+细胞％×Day 1接种的293T细胞数×稀释倍数×病毒原液体积(mL)。
实施例3
本实施例培养人MSCs，包括以下步骤：
(1)脐带标本取自天津市中心妇产医院。将脐带用含青/链霉素的PBS充分冲洗，剪碎至2mm3大小的组织块，将组织块用0.1％的胶原酶Ⅱ和0.125％的胰蛋白酶于37℃各消化30min，而后用150μm的细胞筛过滤，去除未消化的组织，过滤后的细胞用培养基洗涤两次，1500rpm离心10min，将细胞重悬于完全培养基，按1×106/cm2的密度将其接种于培养瓶中，放置于37℃、低氧孵箱中内培养；
(2)MSCs完全培养基为PEF培养基：含有2％胎牛血清的a-MEM，5％的血清替代物(SR)，20ng/mL血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)，20ng/mL表皮生长因子(EGF)，20ng/mL的FGF2，0.1％的胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS)，200mmol/L的AAP，100U/mL青霉素和100μg/mL的链霉素；
(3)细胞贴壁生长至80％汇合时，弃掉培养瓶内原有培养液，用PBS缓冲液洗1次，加入0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA消化液，倒置显微镜下观察，细胞间隙增大，胞质回缩，摇动吹打后细胞呈圆形漂起，加入含有10％FBS的培养基中止胰酶消化，反复吹打冲洗，1000rpm离心5min；
(4)弃掉上清液，用PEF培养基重悬细胞，按1:3比例传代培养。传代培养至第三代，细胞形态均一，当70％的细胞融合时，用Accutase消化、传代。
实施例4
本实施例使用实施例1制备的慢病毒转染MSCs细胞，制备过表达细胞因子的MSCs细胞，包括以下步骤：
(1)消化MSCs细胞接种于6孔板中培养，1x105/well，加入慢病毒转染，MOI＝0.5，转染培养基为：含有protamine Sulfate(终浓度8μg/mL)的PEF培养基，1mL/孔(6孔板)，在37℃低氧培养箱中培养；
(2)转染过夜后，用PEF换液，2mL/孔；
(3)转染后2天，细胞消化传代。
慢病毒转染MSCs后48h，细胞传代培养，获得过表达细胞因子的GFP-MSCs，EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs细胞系。qPCR检测结果显示，过表达各组细胞系中EGF、FGF2、PDGFB基因mRNA水平明显高于对照组GFP-MSCs(P<0.001，图2)。Westernblot检测结果显示，与GFP-MSCs相比，EGF-MSCs，FGF2-MSCs，PDGFB-MSCs细胞中EGF，FGF2，PDGFB蛋白表达水平增高，且PDGFB-MSCs中PDGFB的蛋白表达量最高(图3)，本发明成功构建分别过表达EGF、FGF2和PDGFB的MSCs细胞系EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs，可用于后续实验。
实施例5
本实施例分离人脐血CD34+细胞，包括以下步骤：
(1)将新鲜脐血分装于无菌的血浆瓶中，加入HES(羟乙基淀粉)，体积比例为脐血：HES(5:1)，充分混匀后，室温静置40min，来沉降红细胞；
(2)于50mL离心管中预置15mL的Ficoll，将30mL去除红细胞的脐血缓慢加之其上，不要破坏界面；
(3)20℃，2000rpm离心20min，升降速均设置成no brake；
(4)离心结束后，小心吸掉上层液体，收集白膜层的单个核细胞，将单个核细胞放入离心管，加入PBS，混匀后，1500rpm再次离心8min；
(5)离心结束后弃掉上清液，用20mL PBS重悬细胞，混匀后取10μL计数，剩余细胞继续在20℃条件下1500rpm再次离心8min；
(6)离心结束后弃掉上清液，然后每108细胞中加300μL PBS，充分重悬细胞；
(7)避光条件下，每108细胞中加100μLFc-R阻断剂，充分重悬细胞；
(8)避光条件下，每108细胞中加100μL CD34+Microbeads，充分重悬细胞后4℃孵育30min；
(9)孵育结束后，向每管中加PBS混匀后1500rpm离心8min；
(10)离心结束后弃掉上清液，然后每108细胞中加500μL PBS，充分重悬细胞；
(11)将LS柱安装到磁铁架子上，用PBS润洗柱子3次，每次3mL；
(12)把充分重悬的细胞悬液逐滴加到LS柱里(注意柱子上放尼龙膜过滤细胞)，使标记好磁珠的细胞通过梯度磁场；
(13)当上述细胞悬液刚刚滴完后，向柱子中加3mL PBS冲洗柱子，一共3遍；
(14)将LS柱子小心移出磁场，将LS柱放在无菌的收集管上，加入3mL PBS后用活塞快速推出细胞，混匀后计数；
(15)将富集到的人脐血CD34+细胞用于后续实验。
实施例6
本实施例将实施例4制备的过表达细胞因子的MSCs细胞与实施例5制备的人造血干细胞(人脐血CD34+细胞)进行共移植，包括如下步骤：
(1)取免疫缺陷(NOD-SCID)小鼠(购于北京维通利华实验动物技术有限公司，雌性，6-8周龄)，饲养于SPF级无菌室内，饲料、饮水及垫料均高压灭菌，移植前3天，给予小鼠抗生素水饮用；
(2)移植前24h对小鼠进行半致死计量的X射线照射，照射剂量2.2Gy/只，剂量率1.2Gy/min。
(3)分离纯化人脐血CD34+细胞；
(4)消化各组过表达细胞因子MSCs细胞，计数；
(5)将CD34+细胞悬液分别与过表达细胞因子MSCs细胞悬液(GFP-MSCs，EGF-MSCs，FGF2-MSCs或PDGFB-MSCs)混合后，分别取10μL各混合后细胞悬液注射入小鼠的髓腔中，以单独注射CD34+细胞到小鼠骨髓腔中为对照组(Control)，具体移植实验流程如图4所示；
(6)小鼠移植后4周开始，每周对小鼠外周血中的人CD45+细胞比例进行监测；
(7)移植后12周对小鼠注射侧骨髓、对侧骨髓、脾脏进行流式分析，将小鼠脱颈处死，分别收集小鼠骨髓和脾脏细胞1×106个，用染色缓冲液洗涤后重悬，加入抗体：CD45-PE-Cy7，CD34-APC，CD33-Percp-Cy5.5，CD19-PE，4℃避光孵育30min，用2mL染色缓冲液洗涤1遍，用流式细胞术分别检测并比较小鼠注射侧骨髓(IT)、对侧骨髓(该侧未进行注射，Non-IT)和脾脏(SP)中人CD45+细胞的比例(植入率)，以及细胞分化情况，结果如图5-图7所示各表型细胞比例分析结果图。
如图5所示，共移植EGF-MSCs和CD34+细胞、共移植FGF2-MSCs和CD34+细胞以及共移植PDGFB-MSCs和CD34+细胞的小鼠的IT中，CD45+细胞比例(植入率)均高于仅移植CD34+细胞的对照小鼠和共移植GFP-MSCs(过表达绿色荧光蛋白)和CD34+细胞的小鼠；PDGFB-MSCs实验组CD45+细胞比例最高，为34.5±6.2％，是对照组Control(7.5±2.3％)的4.6倍，p<0.001，表明本发明将过表达细胞因子的MSCs与造血干细胞(HSCs)共移植，能够显著提高造血干细胞植入率。此外，如图6所示，EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs实验组的人CD34+细胞比例明显高于对照组，如图7所示EGF-MSCs，FGF2-MSCs，PDGFB-MSCs实验组共移植的人HSCs在NOD-SCID鼠体内的分化细胞主要为CD19+B细胞和CD33+髓系细胞，说明共移植后，人HSCs能够正常分化。
分析相对注射侧骨髓(IT)的对侧骨髓(Non-IT)中人HSCs的植入，是一个很好的测量移植细胞迁移等能力的方法，由图8-图10可知，Non-IT骨髓中人HSCs的植入情况和注射侧骨髓(IT)中相似，EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs实验组植入率均明显高于对照组(p<0.05)，表明本发明中将过表达细胞因子的MSCs与HSCs共移植后，HSCs还具有较强迁移能力，有助于造血功能重建。
在脾脏(SP)中，如图11所示，EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs实验组植入率也明显高于对照组和GFP-MSCs试验组(p<0.05)，如图12-图13所示，SP中植入的细胞主要为CD19+B细胞，包括成熟的CD45+CD19+IgM+B细胞，表明本发明将过表达细胞因子的MSCs与HSCs共移植后，HSCs还具有较强迁移能力，且能在SP中正常分化，有助于造血功能重建。
实施例7
本实施例利用实施例6中共移植小鼠进行二次移植试验，包括以下步骤：
(1)取NOD-SCID小鼠，饲养于SPF级无菌室内，饲料、饮水及垫料均高压灭菌，移植前3天，给予小鼠抗生素水饮用；
(2)移植前24h对受体小鼠进行半致死计量的X射线照射，照射剂量2.2Gy/只，剂量率1.2Gy/min；
(3)收集实施例6中一次移植实验中各实验组的小鼠骨髓细胞，计数，经尾静脉分别移植到步骤(2)免疫缺陷鼠中，以注射实施例6对照组小鼠(即单独移植人CD34+细胞)的骨髓细胞作为对照组；
(4)移植12周后，对移植后小鼠骨髓、脾脏进行流式分析，检测人CD45+细胞的比例和分化情况，将小鼠脱颈处死，分别收集小鼠骨髓和脾脏细胞1×106个，用染色缓冲液洗涤后重悬，加入抗体：CD45-PE-Cy7，CD33-Percp-Cy5.5，CD19-PE，4℃避光孵育30min，用2mL染色缓冲液洗涤1遍，用流式细胞术分别检测并比较各组小鼠骨髓人CD45+细胞的比例(植入率)，以及细胞分化情况。
如图14-图16所示的二次移植结果，EGF-MSCs，FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs实验组的小鼠的骨髓细胞进行二次移植后，二次移植小鼠中人CD45+细胞的比例明显高于对照组和GFP-MSCs实验组(图14，p<0.01)，其中PDGFB-MSCs实验组的CD45+细胞的比例为对照组的5.7倍(图15)；且各实验组人HSCs在二次移植小鼠体内的细胞主要分化为CD19+B细胞和CD33+髓系细胞(图16)，说明本发明将过表达细胞因子的MSCs与HSCs共移植，并将移植后HSCs进行二次移植，二次移植后HSCs仍具有高植入率并能进行正常分化，表明本发明过表达细胞因子的MSCs与HSCs共移植，不仅能够提高植入率，还能明显的提高HSCs自我更新能力。
综上所述，本发明采用慢病毒载体技术将人的EGF、FGF2和PDGFB分别过表达在人MSCs上，构建了EGF-MSCs、FGF2-MSCs和PDGFB-MSCs细胞系，然后将其与人HSCs共移植，优化人HSCs植入的微环境，能提高人HSCs的植入率和造血重建能力，并显著提高人HSCs的自我更新能力，方法新颖，有针对性，促进了人的造血干细胞移植方面的研究，也为今后NOD-SCID小鼠移植模型广泛地应用于临床和科学研究提供了新的思路。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种增强人造血干细胞移植能力的药物，其特征在于，所述药物包括过表达细胞因子的人间充质干细胞；
所述细胞因子包括PDGFB、EGF或FGF2中的任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的药物，其特征在于，所述人造血干细胞包括人骨髓造血干细胞、外周造血干细胞或脐带血造血干细胞中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，所述人造血干细胞包括CD34+细胞。
4.权利要求1-3任一项所述的药物，其特征在于，所述过表达细胞因子的人间充质干细胞由如下制备方法制备得到：
将过表达细胞因子的慢病毒载体转入人间充质干细胞，得到所述过表达细胞因子的人间充质干细胞；
所述细胞因子包括PDGFB、EGF或FGF2中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述过表达细胞因子的人间充质干细胞由包括如下步骤的制备方法制备得到：
(1)将编码所述细胞因子的基因插入慢病毒载体，得到过表达细胞因子的慢病毒载体；
(2)对所述过表达细胞因子的慢病毒载体进行包装，得到慢病毒；
(3)将所述慢病毒转染人间充质干细胞，得到所述过表达细胞因子的人间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，步骤(1)所述慢病毒载体包括pRSC-EF1-wpre、pRSC-SFFV-wpre或pRSC-PGK-wpre；
优选地，步骤(2)所述包装包括利用293T细胞进行病毒包装。
7.如权利要求1-6任一项所述的增强人造血干细胞移植能力的药物在制备促进人造血干细胞移植能力的产品中的应用。
8.如权利要求1-6任一项所述的增强人造血干细胞移植能力的药物在制备人造血干细胞制剂中的应用。
9.一种人造血干细胞制剂，其特征在于，所述人造血干细胞制剂包括人造血干细胞和权利要求1-6任一项所述的增强人造血干细胞移植能力的药物；
优选地，所述人造血干细胞制剂还包括药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体中的任意一种或至少两种的组合。
10.一种免疫缺陷鼠治疗模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：
将人造血干细胞与权利要求1-6任一项所述的增强人造血干细胞移植能力的药物共移植到免疫缺陷小鼠骨髓腔中，得到所述免疫缺陷鼠治疗模型。
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