CN113980969A

CN113980969A - 用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子

Info

Publication number: CN113980969A
Application number: CN202111506722.0A
Authority: CN
Inventors: 吴双; 吴敏亮; 胡守荣; 沈静沅; 黄奔奔
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2021-12-10
Filing date: 2021-12-10
Publication date: 2022-01-28

Abstract

本发明提供了5个用于操纵在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达的启动子及其用途。所述启动子包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的5个启动子。构建所述启动子驱动的GUS报告基因表达载体，并在多细胞表皮毛植物番茄中进行遗传转化，在表皮毛细胞中表达GUS报告基因。本发明提供的5个启动子，都具有能够在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达所需要的元件，对于在多细胞表皮毛细胞中表达植物代谢产物、抗病虫害相关化合物、植物香气相关化合物或者改良多细胞表皮毛植物品质中具有重要的价值。

Description

用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子。

背景技术

大多数植物的地上组织表皮上都具有表皮毛细胞结构。这些表皮毛细胞往往能够增强植物的抗逆能力(Li, L.. et al. The Plant cell, 2004, 16, 126-143.)。这与植物表皮毛细胞中合成和分泌的代谢产物有着重要关联。在一些多细胞表皮毛植物（如烟草、番茄和大麻)的叶子上的分泌型表皮毛上合成和累计的代谢物可占其叶干重的多达10-15％(Wagner et al. Ann.Bot. 2004, 93:3-11）。在番茄多细胞表皮毛中合成的代谢生物包括能够抗虫的酰基糖、能够趋避昆虫的烯萜类物质等(McDowell et al. Plantphysiology, 2011, 155, 524-539; Schilmiller et al. PNAS, 2012, 109, 16377-16382； Schilmiller et al. Plant physiology, 2010, 153, 1212-1223; Bergau et al., BMC plant biology, 2015, 15)。而在烟草(Nicotiana tabacum)中，多细胞表皮毛合成和分泌的代谢物是烟草叶片香气的主要来源（Johnson A W. Tobacco Science,1985, 29: 67–72.）；在青蒿（Artemisia annua）中的多细胞表皮毛则是合成和分泌的青蒿素重要组织(Graham et al. Science, 2010, 327, 328-331)；同样的，大麻（Cannabis sativa L .）头状分泌型多细胞表皮毛也是是合成和分泌的大麻素重要组织（BrenneisenR. Chemistry and analysis of phytocannabinoids and other Cannabisconstituents. Marijuana and the Cannabinoids: Springer; 2007. p. 17–49.）。

植物多细胞表皮毛中合成和分泌的这些代谢产物往往具有一定毒性或者对植物自身的生长和发育会有不良的影响，因此，组成型启动子（如常用的烟草花叶病毒启动子35S等）不适合用于驱动这些化合物的表达。植物表皮毛是植物表皮毛上独立的细胞群体，存储和分泌代谢生物对植物其它组织的生长发育没有影响(Sirikanta ramas et al.Plant Cell Physiol, 2005, 46:1578-1582)。为此，发掘能够在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达的启动子具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于，针对上述问题，提供五个用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子，所述启动子文库包括SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的启动子。

一种表达载体，所述表达载体包括权利要求1所述SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列启动子中的任意一个或多个。

上述用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子的应用，所述的启动子与目的基因连接，促进目的基因在植物多细胞表皮毛细胞中的特异性表达。

进一步的，上述应用中所述启动子与GUS报告基因连接，启动子驱动GUS报告基因在植物多细胞表皮毛细胞中的特异性表达。

进一步的，上述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达植物代谢产物的运用。

进一步的，上述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达抗虫或者抗病相关化合物的运用。

进一步的，上述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达植物香气相关化合物的运用。

进一步的，上述表达载体在用于多细胞表皮毛植物品质改良中的运用。

进一步的，上述表达载体中所述表达载体包括遗传转化所形成的转基因植物，以及由此产生的外源基因表达产物；所述转基因植物包括番茄以及与番茄有着类似表皮毛细胞结构的植物。

本发明的有益之处在于：本发明提供了五种在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达的启动子及其用途。启动子核苷酸序列如SEQ ID NO.1、NO.2、NO.3、NO.4、NO.5所示。运用这些启动子序列设计和构建能够在表皮毛中特异表达的表达载体。这些启动子序列应用于植物多细胞表皮毛细胞中表达植物代谢产物、或者表达抗病虫害相关化合物、或者表达表达植物香气相关化合物，以及改良多细胞表皮毛植物品质。这些启动子驱动的GUS报告基因表达载体，并在多细胞表皮毛植物番茄中进行遗传转化，在表皮毛细胞中表达GUS报告基因。本发明提供的5个启动子序列，都具有能够在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达所需要的元件，对于在多细胞表皮毛细胞中表达植物代谢产物、抗病虫害相关化合物、植物香气相关化合物或者改良多细胞表皮毛植物品质中具有重要的价值。

附图说明：

图1 MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子表达载体转基因植株的GUS结果。（A）MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子序列驱动GUS表达的载体示意图；（B）MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子序列驱动GUS表达的载体转基因植株GUS染色结果；GUS蛋白能与显色底物X-gluc 反应，显现蓝色；蓝色位置就是GUS蛋白表达位置，标尺为250μm。

具体实施方式

介绍

本发明还公开了5个能够特异在植物多细胞表皮毛细胞种特异表达的启动子序列。

本发明提供了SEQ ID NO.1、NO.2、NO.3、NO.4、NO.5所列的启动子核苷酸序列驱动的多细胞表皮毛特异表达载体构建方法，以及这些特异表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达的应用。

说明

仅以说明的方式而不是以限制性的方式提供以下实施案例。本领域技术人员将容易地认识到可以改变或修改各种非关键参数以产生基本相同或相似结果。这些实施案例决不应被解释为限制由所附权利要求书限定的本技术的范围。

本发明要求的遗传工程转化植物或植物细胞包括番茄和与番茄具有类似表皮毛结构的植物。本文提供实施案例中仅展示在番茄中的遗传转化结果，这只是为了展示我们的发明方法的可行性，而不是限制本发明的实施，也不应被解释为限制由所附权利要求书限定的本技术的范围。

植物的遗传转化：目前已公开的植物遗传转化方法由很多。本文提供实施案例中仅使用农杆菌介导的遗传转化方法，这只是为了展示我们的发明方法的可行性，而不是限制本发明的实施，也不应被解释为限制由所附权利要求书限定的本技术的范围。

本发明提供的这些启动子序列都具有能够在植物多细胞表皮毛细胞中特异表达的所需要的元件，其特点在于它能够特异地在植物多细胞表皮毛中表达。在这些启动子序列的应用中，只需将需要表达的目的基因插入到这些启动子后面构建成融合表达载体，再将这些载体转入番茄以及和番茄有着类似表皮毛结构的植物中，就可以达到表达目的基因的目的。在本发明的实施案例中，使用这些启动子序列驱动GUS报告基因的表达，只是为了证明这些启动子序列具有在番茄以及和番茄有着类似表皮毛结构的植物的多细胞表皮毛细胞中特异表达的能力。而不是限制本发明的实施，也不应被解释为限制由所附权利要求书限定的本技术的范围。

实施例1：多细胞表皮毛特异表达载体构建

载体构建思路：使用PCR扩增技术，从番茄总DNA中扩增SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所列的MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子序列，并将这些序列插入GUS表达载体中，驱动GUS基因表达。

实验步骤：

（1）使用引物设计软件分别设计SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.4和SEQ ID NO.5所列的MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子扩增引物。同时在引物的5’端加入酶切位点或者同源臂序列，为后续使用酶切连接或者infusion方法进行载体构建做准备。本案例中使用了infusion连接方法，这些启动子序列的扩增引物如下表：

（2）使用高保真酶扩增启动子序列。以番茄总DNA为模板，使用高保真酶对这些启动子序列进行PCR扩增，PCR反应体系如下：

反应程序如下：94℃预变性3min ；94℃ 20s，退火温度55℃~65℃（根据每个引物的TM值而定） 30s，72℃ 3min，35 个循环； 72℃延伸10min；16 ℃保温

（3）电泳检测PCR产物，并将启动子DNA片段切胶，再用DNA回收试剂盒对DNA片段进行回收。

（4）使用SacI和XbaI内切酶对GUS质粒（PGC-GUS）进行酶切，将载体中原本的启动子序列切除。酶切体系如下：

37℃水浴3小时后，跑凝胶电泳，进行切胶回收质粒骨架片段，再用DNA回收试剂盒对DNA片段进行回收，备用。

（5）使用infusion方法将启动子DNA片段连入GUS载体中。反应体系如下：

37℃孵育30 min后，用热激法将连接产物转入DH5α感受态细胞中，并用含有100mg/L壮观霉素的LB培养基进行筛选，经过PCR鉴定后，将阳性克隆在含有相应抗性的LB液体培养基中大摇16小时，提质粒送测序公司进行测序分析，构建启动子融合GUS表达质粒。启动子核苷酸序列与GUS基因在表达载体中的位置示意图如附图1A所示。

实施例2：在番茄的多细胞表皮毛细胞中特异表达GUS基因

（1）遗传转化：参考前人已报道的浓杆菌介导的遗传转化方法（Hyeon-Jin Sun,Sayaka Uchii, Shin Watanabe, Hiroshi Ezura. Plant and Cell Physiology, March2006, Volume 47, Issue 3, Pages 426–431.）进行遗传转化。操作步骤大概如下：首先，将启动子融合GUS表达质粒分别通过热激法转入C58感受态细胞中，通过含有壮观霉素（100mg/L）和利福平（50mg/L）的固体LB筛选培养基进行筛选，在28℃培养箱中培养48小时后。将经过PCR鉴定的阳性克隆，分别使用含有壮观霉素（100mg/L）和利福平（50mg/L）的LB液体培养基进行扩繁。待菌浓度OD值达到0.6时，分别将菌体离心后收集后用KC液体培养基(含1.5 mg/L zeatin 的MS培养基)重悬，继而分别进行农杆菌侵染番茄子叶（时间5分钟）。侵染结束后，分别将子叶转移到KC固体培养基中，黑暗室温条件下共培养48小时，再分别将子叶转移至筛选培养基（含1.5 mg/L zeatin和300mg/L的特美丁，植物筛选抗生素根据使用载体的植物抗性决定，如果使用载体的植物抗性基因为潮霉素基因，则加入10 mg/L的潮霉素，如果是卡那霉素抗性，则再加入100 mg/L的卡那霉素）进行筛选，温度26℃，光照16小时，黑暗8小时。生长2-3周后，转入含1 mg/L zeatin的筛选培养基（其它成分不变）继续筛选；待转基因植株幼芽长出来后，分别将幼芽用手术刀切下来，并分别转移到生根培养基中进行生根培养（1/2MS，300mg/L的特美丁以及植物抗性10 mg/L的潮霉素或者100 mg/L的卡那霉素）。最终分别筛选获得这5个启动子序列驱动的GUS表达载体转基因植株。

（2）GUS染色：使用GUS染色反应液（50 mM PBS (Na^＋，pH7.2)，2 mM K₃[Fe(CN)₆]， 2mM K₄[Fe(CN)₆]，0.2% Triton X-100，2 mM X-Gluc）对获得的转基因材料叶片进行GUS染色分析。从附图1B可以看出，SEQ ID ID NO.1、NO.2、NO.3、NO.4、NO.5所列的MTNR1、MTNR2、MTNR3、LFS和TCP22基因的启动子驱动的GUS表达转基因植株的GUS染色都只出现在植物表皮上的表皮毛细胞中。结果说明这5个启动子序列都能够在植物多细胞表皮毛上特异表达。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建农林大学

<120> 用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子

<130> 15

<160> 15

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2693

<212> DNA

<213> SEQ ID NO.1

<400> 1

ccaccaacct tagcagccat atattataac atgaattaat cagatatgaa aactcaacca 60

tcataatatc aacaaatata ttaaggtgca ataaatagtg gaccagtatg agaatattac 120

tctctctatc atgttaagtt atctcatagt aattttttaa aataataata ttacttcctc 180

tgtctacttt atttatcata ttatactttt taaaagttaa tttaatttat ttttaaagtt 240

aaattaggtt atattaattt atttttttaa ataaaaaatt cagatattca aatattatac 300

gaaaagtact atacattgta attttttaca tatcaatatg acgaaaaaat atatcctaaa 360

agatagtcaa aattttcata gtttaactct aaaaatgaaa aacatgacat taatagtgaa 420

cggaaggagt atattataaa tgagagtaaa ataatgaaaa ttttcttccg attaatattt 480

attaacaagt atataaaaga aaaatatgac agataatttg tggcgaagaa atcgaataat 540

atttatgccg cccgtataaa aaaaactttg gtggtgtcac aaatgtattt tcaataaaca 600

gtaattcata ataaatcgcc ataaataatt tcaatctaat aatatcacgc caaccctctt 660

aaaactggtg acaaagagtg atatatttat caatcaccca aataatttat ttcttcctgt 720

tcattttaaa tgactttata acgttttggt gcatttattg aaaaatttac tagttaattt 780

acaaagttgt tcacaattta ttttagcaac cataagttca taaaaaataa aaatattaat 840

ataaaaggtt tctctctctc tatatatata tatatattaa caatacaaat gacaattatt 900

ttgaaccggt tttaattaac taaaaagtta ttcaaaagtg acagaaagaa ataaaaatat 960

atactaaaaa tgcaaaaaag tatttggggt ggggtgggtg tgaaggggcg gggttacatt 1020

tatataagat taataaggat atatataatc gatttcaact taatttggag ggaggataat 1080

taatattgtt aataaataaa taaaattgag aggatgtgtt taacatgacc tattaatttc 1140

atgtcattaa ttattaaaca agcccatcat gatacgtaac tcttaaattt ataatggata 1200

gctattgaaa attaatatga gtgaggtttg gatttgttag aaaatttagt tggaagcttt 1260

aaatactatg ttataaattt tcttgtgttt tgtatgtatt gtgtatctat agatttacca 1320

agaaacacac acaaacacat agtgacaata gttatataca cctagttagt cgaaatcaga 1380

attttaatct tatagattct gaattcacgt atttatatct gaactgttct aaatttaata 1440

tttatatata tattaataaa ttttttaata caaatatttt atttaagtaa aaattactaa 1500

aaatttagct aaactcatat tcatatccga atttctaact ccgctccgat ttgtacacct 1560

ttttcattat tgaccaactc tctttagcat gcaatgaatg aatcccctct cccaaccccc 1620

ctttaatttc cctgtatgca cttaatagtt ttaattgtaa aatatttact ccaattttcc 1680

tttttcagca aaccatcttg gcatttttcc aaccattaat aaatttacaa cccctcaatt 1740

taaactagca aattttttat ggtgaggtgg caagctcttt aagttacggt ttcaactgaa 1800

tttaataatt ttttgttaaa aattttgtac gtataaaata atataattgt atttcaggac 1860

tcataaacta gaaattctgg ttttattttt aagtattcct tagttcttga tcaaagattt 1920

tgaatttgag cttttacacg tctttcgcac ataacgtctt tcgcacgtaa tgtcttaatc 1980

tacaccaaaa atacgaattt gcaatatgaa tctaaattaa tatgatctaa aaatgaatat 2040

cggacactga atgaaaaaac gaaaaacaat ttattcctct ttcaattaat tcattcaatt 2100

gatttattgt caaccccctc tccccctctc ttaacttctc tcactaaaag tctaacttgc 2160

tccaacccct ctccctataa tttaattaag ctttaaaagc aatctcctct ctaccttcaa 2220

tagttcccat tatataatat ggccttttac aagttcaaaa atcatcatct aggaccacaa 2280

aatacaagta taactaattg tttatcttag tggtggttcc gtttatatct cctccgtact 2340

ccgccgtgtc gtttcgacta caaaaacccc tcacttccga tctcaaggta ttaaaaaaat 2400

ctcgttgttc ttttcgattt ctcaattttt aaaatttttt acgtagtcag acatgttata 2460

acaagttact tattatgttc ttcatattcg ttataaaaaa ataataattt ataattatct 2520

tttaaatgat tgtgatatca tatactgttg tattcatttt gggtttttga tttgagaaat 2580

ttacattatt gatttgattt ttattatttt ttaagttact ttttgaatga cttgatatcg 2640

tgaaagttct ttatttgatt tattttttat tttttatttt gtttgatttt aga 2693

<210> 2

<211> 2752

<212> DNA

<213> SEQ ID NO.2

<400> 2

tcatgtcatc cctaatgggt gtttaaatca cttgaaaaat attaagagag tatttaaatg 60

tctgtataat ttaaggatta aaataaattc tgctgtcaaa tttaggattt ctttttatgt 120

atttacacta aatactatga tctttttttt aatttttata gagaactaat tttcgactga 180

taaattcttt tccttgcatc acgaacacat tcatatttat aaggacttct cgagagacta 240

taatgttaat ttatcaaatt aataatgctt ataagttgag tctttcatta attataactt 300

gtaaacactt aattttgtaa ggacatttgg tgtgccctaa acttataaat gcttattatt 360

tacttctttg gcttacatga atttcgttta aatatacaaa cacattataa taataacaat 420

atcttaattc tatgtaagtt agaaaccatc tatataaatt tttgccgtat tatttttttc 480

tttaagataa aatataatct aaaaacgaat ctgagaagtt cgtacaagct atagtactaa 540

tcagcattca ataaaaagtt gatgaaaaaa acatttaatg ttgtagtaga tttaacgaca 600

caaagttaat aaattatttc accagagcct acaaaatgtt ggtttaatat ataattttgt 660

tacaggttta ttggtaaaac tattcaaagt ttactgagaa gaattaaata gggtaacata 720

tcaggagtta ggataaaaag taaactctct tttgttattt ttaatttgaa ataatctcag 780

actcaatcaa atctcaaatt cgagcctaga gagagaattt tattaggaac atcacctcaa 840

ataagctata gagtgttcga tttaaatttt ataaaaaatt taatacgtat aacaaacgcc 900

aaacgaaaaa tcaagaaaaa gaactactcg atcactccaa aaaagttgaa gaagatttct 960

ttttactaat ttattcttaa ttaaatgtct taaaaaggat atttctttaa ataaggctaa 1020

aaagaaatat gagagtactt ttttttttat tttataacaa taataacata ttcagttaaa 1080

tttaaaaaaa ataaattgta tacaaatttt actattacct tattaagata agatagaaca 1140

atcattttcg actaattgat tttggaaggg gtaaaagaat tcaaaaatag gtaaaacatt 1200

aaatgatgtg agcagctaac attagtatat tagctttaac taggttaggt ttcagtgaaa 1260

aattaactgt acctcaggca acaactacag ttggtcgtgt tggacccctt cttgaaaata 1320

atcgttatat caatttaaag atattcttaa tatacaataa acgatataat aatgatttta 1380

acaaaatttc ttttttaatt tagcgaactt taatagaaaa aactgaatag actgttggtg 1440

ggagaagcat agatttgaaa aggaataatt agttatcttt tttatttcct aaactgaata 1500

ttattcttga cctaatttat ttgactaaaa tgaggtttaa aatcaatgta acggcggtag 1560

tattaacttt ggttgtatat aagttattaa tattcaataa tgttagtttg acaactaaaa 1620

agatataaat gaaatctcaa taacagttgt aaaatattta tgctaaatta aacagggtgc 1680

ttaaaagata taaatatgta acatatattt aatatttttc gtataatttt ttaatattta 1740

aaattttaat ttttacaata ttacattaac ttaatctaat tgagttataa aatatactca 1800

aattgactct taaaatacac aaaatgaaaa ataatatact tacgtctaaa aattaagtgt 1860

taccttagaa attaagggta atgccaaata gccagaattt ggccagaaat tttaaaaaaa 1920

ttaaaatatt tatttattta ttaagaaatt gtttttttaa ttaaaagata ttaaagttaa 1980

aaagggtaaa aatgttcaaa atgataaaat atcattctgg ccaaaatgat ttttccgtct 2040

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atatttattt tgaaataaat aaatcatgag ttatcttttt aggtgaaact tttcgatatg 2160

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gttagatttt tatgaggatt tttagttctc taatcttagt actacaccta gattttttat 2280

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atctaattct ttaccaaatt cttctctatt ttttccctct gttataatca cacaattaat 2520

tctgcactta atttcccttt ctcctacaca ttatataaat cttgtcaatc tttttcgttt 2580

tctccaaaca actccctttt gcctatacta aaaaattcag gtaatttttt tttttcatga 2640

ttagactttt tcttttttct tcttcttcta aaaatgactt ttttctaatt atttttgctc 2700

tgttttacta taaatacagg ggattattgt cttgttgata aagctgttca aa 2752

<210> 3

<211> 2675

<212> DNA

<213> SEQ ID NO.3

<400> 3

aggaggggta gggtagcaag taggcatttg aattattttc ttttcttgat tttcattaaa 60

attgacagct aattagtatt aattcataat caaaatatgt gaactcttaa cataataagt 120

tcaacaaata tattaagctt gcaataaata ctattcaata ctaaacttga aaattaagtt 180

tggatgataa atacaataaa attaaataat gataataagt aggtgacata aaagtatttt 240

cataaattta aaaccattac ttattatata tatatatttt taaaaagtct cttttttttc 300

tttccctttc aattcttttc cttaaaaata atagagaaaa aaataatttt gtcttttttt 360

tctttgtaat gttatgttta tacaattaat atttactaaa aatacccata tacacaaaaa 420

aaaataaaaa ttgttggttg cttctaattt cttgctccaa agggtccaca tttaaaaaat 480

ttgtttttat ttccaaaata gtgtaaatat agccctttaa gaattatttt ttcgaataat 540

gttagacacg attttaatgt atgttcataa attgtgcaat attgaaaaca aaatatcata 600

ttgtcgttta acatttgcaa taatttataa aattttagac aattatctaa catcttttca 660

aatattttca atttatttaa aaaaaagaag aatttattag atcgttgtct acaagatcaa 720

taaatttttt taaaaatcat ttagtaattg gtactaccta gaaagtagat accggtgaaa 780

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ttgatctcta atttttactt ttcagcgatt aaactagttt ctagtaggat cataagttct 900

tttaagaatt aagattatgt ccaaacttat aaattattat attatgatat aaatatataa 960

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gcaacattgg gtcaaaagtg caaatgaggc ataatgctct cattcatttt cttaactaaa 1080

tatacaaaag cccatcataa gtatctcatg aatttattat agatattgaa attaataagt 1140

atgtagttgg atttgttaga aaatttagtt ttgagcttta aaggccacaa tgtctttttc 1200

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aacaaatata atatttggta gattatatcg tttttcatcg ttattatatc aatcatttat 1320

aatttcaatg ataaacctac aacaaaaatg agtacgtgat agagctacta tgaaaaggta 1380

gaataaaaga gaaaatacga ttattaaata ataaataacg acaaaatatt aaagtgacag 1440

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caatatagta ttggtgatga aagttacctt tttcttttat atatatatat atatatagtt 1620

cgatcaacta atttattgat ctggtcgaaa tagatattgt gtattagtgt atataatatg 1680

tatatttagt aaaagtataa cacaatctat actattttgt aaactagttg gtcgaagtga 1740

ttaggatcgt aattatcctt tttttgttgt tatatatgtt tgtatacatg tacatattat 1800

atgccttata tatacatgta tttatgtttt atatgcctta tatatacatg tatgtatgtt 1860

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ccacccccca accaccccct accccacccc caacccaccc cctaccccca ccccaccccc 1980

accccccttt acactgcatg cactaattag ttgtaattgc aatatttact ccaattttcc 2040

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tacaactatc tattgtactg ttccttcttc aattcaatta aattcctatt aaagactctt 2160

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cttttaatgt aatcccattt ctaccctcta aagtttcctt tatatataat gaggttttgc 2280

aagtccaaaa gttcataatc atcatcaaca acttgttgaa aatcattttt ttctaacatt 2340

gtggagctac aagaaatcat ttttaaggta caaacactta ctcacaactc ttgtcaagaa 2400

tgatcataca ggaacacggt agcagagtca gaaatttcac tgaaaattaa cgaaaagggt 2460

gttcagttga tcgttcttgg ataattatac ttttgtccaa ggattatttt gtgtttgaca 2520

tgacaaaagg ggtgtagaaa aatctttttt tttcctcatg ttaaaatgaa agagttatga 2580

ttcttgatat atactatttt tgttaaacat tttcttatgt tttgttgttg ttgttgtttg 2640

atttcaggat ttttcaaata acaaaaaaaa aaaac 2675

<210> 4

<211> 3030

<212> DNA

<213> SEQ ID NO.4

<400> 4

ttataaagtg ttgatcaatg gggcgcaata ataatataat catagagtaa taaaaatgat 60

atgattatag atttgccaag atatatatat tttttttgga atgaacgaac taaaaagatg 120

tgataattaa tttttgtttg aatttaattt gtatacattt atgtaggata aatcctggtt 180

caataatatt aatttgtgta catttttttt ggttattatt atcttgaaat gtaaataatc 240

caaaaataat ttaagaaaga atgtgccaat tactttgagg caaacgctct agagttaatg 300

ccattcaata ataatattta agaacgtcat aaatatacta catgtttcgt acgtgaaaat 360

ggaaatattt agactgaaat cttaattaaa atataattgt ttctatttca aattgtgaaa 420

acacaagtat actatgctta atgctaattt tttattattt ctagttgcta aaaaaataaa 480

attactatca aaggatttca aaaaaaaaaa aatctatttt gatttttcat aaacttctgt 540

tttccattcc cacaaatttc catctttgcc acaccatttt atctcatccg cgtggagatt 600

aatgtgtaaa tagttcattc attaattaat acctaacttt tttaaaaata aaaataaatt 660

aatgtggttt cttgttattt gaaaactcgt tttgatatgt atgataagat ataactaatt 720

tcgaaattat ttttttagga taaatttatt atgtttaatt ggataaaatt acaagttaac 780

ttattccaaa attaattatc ataaattaat aagttaataa caatcataaa ataattattc 840

acgaaacaat aatctcaata taatttattc ttcgatcaaa tgcgtcctca gagtaataca 900

gtaataaaat tggttaggtg taatcaaggt ccaacgatta aactgtaaaa aatcattcat 960

taactaatga aacacaacgc ttctttgaat acaccgtaag tacgaaatat ttgatgcaac 1020

aattattttc tctatctctt cttttgtact attgtatata ttttcttctt taacttttat 1080

tgactatgtt atggtttttg agaattaatt tgatatttta aataaaatat ttatatattc 1140

ataaattata cgaaaaatga tataaattat aatattttac atattaacat atgaaaaaat 1200

atattataat aaaatgttag ttaaaatttt tactctgaac ggagatgata atggtgttgg 1260

aaatagatga aaggctttta ctgcatgatc acgcttttag ctgtcatatt cccccaacta 1320

atttcttgga acgtcgttca accattatta ctaattatga gtatgtatgt atcaatttct 1380

acaccactta attatgcttc aatcgtgttc aattaattgg ttttcgtttc aacttttaaa 1440

ttattaaagt acaaacttag taataattat caagtttgta tgataatgtt atgttcattc 1500

ctccttttca aaaataaatt aagaacttag cttaaagaaa ataccaggtc tttttagaat 1560

acaatgaaat atattagcat caaaggaagg aaaaaaaaac tcacacctta ttattatatg 1620

agaaaaattt catcacgacg ctagattgac aaattaaata cattatgttg gagataatat 1680

agtaattgaa aatggtagtt gcaacattta ttcttctaat taatgagaaa taaacaggag 1740

catcgtatag aatttggatg ataatgtatt atcaaatata tgcaacgaca tcgtttgtag 1800

gcaccttatt ttcaaatgac tagttttttt tttttggtta cattattcat ctatcattac 1860

aattaaaata ttagtagttg taaaaagtat tttgaaatga aagtgagtaa actttaagaa 1920

attaaattca ttagacgtac tacttttatt ttcaaatttt gaaatgttat tcctttaatt 1980

ttctttatca aacaactatt taacttacta tttaatgcta ctataattca taataattaa 2040

tatacatcaa agttaaaaaa aattgaaagt ttgtattcca tcaaatactc tcatataaag 2100

tgaaattgaa tttaaataac attgactcgt gatgtaaaat catatttttg gtaattataa 2160

gtaaaagtta ttgaatacga gcactgattg ataaactttg aatttacaat tagacattta 2220

ttacactata agtcatctca tatatgtaaa ggcaatttaa atcaaattag aaaaggaaaa 2280

ataaaatatc gccactacta aaaagttact attttcttat tgaaatttct tagtaactat 2340

ttactctttg aaatttctta agttactatt ttcttattca aatttcttac tataagagtt 2400

gttcagtata gctatcctac acaaatattt ggattaagaa ataataaaaa aaaatattat 2460

tgtttcatat gaacaaatta taaagcttta ctattagtga aaatctatta ttcgttatgt 2520

acctactttt acaatgaatt gattcaatca aaatgagtgc aaaattatat ttgaaaataa 2580

cttcggacta ttgatcaatg cagtaattat taaactctga aattttatat tcaaaacaca 2640

ttgaagacta cgtaattata tttttatgtg cggaaccttt gatgaacaga attagcttat 2700

tatttttgaa aagtgacaat taacttgtgt aattagttaa gatgcgagag aaaacttatt 2760

tgatcgctaa gattataaaa aaaaaaattc tagttagtgt gtgttgagat gctttgtagt 2820

actagctgta gagtatttac tttctattta atgcccgtgc aacgcgtaaa ttcttcttta 2880

ttgatgcaac tacaacacaa ataccattat aaatacaacc tcaaaatccc tactacatac 2940

attctctcct gcacaaacta cttcgtccta agaagaaaaa gaaaaaaaaa tctccaccaa 3000

atattctttt tcatatttac aaaaacgaaa 3030

<210> 5

<211> 3024

<212> DNA

<213> SEQ ID NO.5

<400> 5

aaattcagta gcgtagtcat atacagcaaa gggtggtcag tcaaacatat tttatagaaa 60

aattatatat atatatataa ttaagctgtt acattcatgt catttttaat tatagataaa 120

atgttattat taattagtaa aatataatat aaaaattaat ttttaaaaaa attagatttt 180

attatagtga aatattatta tagtggaaat gtacaattat acacgtggct aaattgatga 240

agaaggataa ttgaaggcca aattttatcg cccaaacttg agaaaaagag aaaaggaagt 300

acccaaaaca tactgggcca gatgcaagcc caataattgg gaccaattca aaagaagaaa 360

attgacacaa ttgttttagg tccaaacaaa caaaatagga aaactctact aatttatgaa 420

ctaattagtt agatatacat taatttgtaa tattacatat ttcatcatat tttcatgcat 480

tcgaatacat ttagatatgt ctacatacat gtatctcgag atacataagg tcaaaattat 540

gtgtaatttg ttctaaatac attgtattta agtagattca catgcatatg agatatgtaa 600

caaattttgc tctcctgcat tgcctgtctc tctcatctcg ccgccactct cacaaatata 660

tatatatata tatggtccca aatatcaaaa tatatgtgaa tcacaccaga tatatacaaa 720

taatgaatat ctagtgtaat tcacatgtat atgacttttg cacaaatcac gctcgcctaa 780

ctccccatcg cgctcaactc tctccttgtt ttgttgaatc tggtaccaga aatacatata 840

tctaagtgta tttttcttaa taatattgta gggaagtatg tgtgtgtgtg tatatatata 900

tatatatata tagtaatctt agtatggtac aagatatcct cagtatggtc caagatcttt 960

gtaaattata tttagtagat tccttgtata gtacaaaatc tgcattagct taggttttac 1020

aatttttttt acactttcac attcttgtat atatatatag agagagagag taccctatat 1080

attcatgtag ttcctcaata atgacaccat gtttggatgg gtgttaaccc gggtattata 1140

ttatgttata ttgttcgttg gaatatcgta tcgtttaagt tcatgtttgg taatgataaa 1200

cattaatttt ataaaacgat caatttaatg tgattgcatt gttatcttaa tatttttcct 1260

ctccttttgt attatttcat cttttatcat atcttttctt agtagagtta cccagtatcc 1320

tacttttatt tagatttatc attcagatta ctttacgatt aaaaaaaata cattgttgat 1380

taatttaatt agtgtaatgt gttaatgagt agagagaata ggaaagagga atgtggggtt 1440

tgcaaacttt agaattgaaa aagactcatt agacaggtag tcaaaggagc atggccaatt 1500

caaagttttt aatgtgtagt aaagctattt taatattgct tgaaataatt gtcctcctct 1560

cattaggttt tgaattttga tagctataga ctttggccac agctaccaat ttttaaaaca 1620

ctttgataga ctatcaatct ctcacctgct ccctctgtca cattctattt tgtctcttat 1680

catatagcca aaagatatat atatatatat acacactctc tctaatttat atatatgagt 1740

gtagtatgta tttgactaga caaaagatct caaatattta gatttgtttt agattaagat 1800

ttatttattc atttgacaaa aagaaaaaaa aaatgttgtg taccaaaata aataatatga 1860

attaagggtg agatggggaa agtaataata taaaaaatgt caattaaggg tgtgatttta 1920

tagttaatgg agtgtgtaag aactatgaga aagagcaata ttctaattaa ccacaataga 1980

caatagttat tataagcaaa taatgttggt tgatatgctc tcatttgtct aggttttatt 2040

aggcaaagta aattgatact taggttagcg gtaacagata tccggtggaa tagttcaaaa 2100

tgcacatgtt gatcgaacat cataaaaagt aacgatcgaa aagtacattt ttttttgttt 2160

taatttattg gtcttatttc tttttgtttt atttaaaatt gaatgcatgt ttatatcttt 2220

aatagcacta tcttataaga atcatgatat gacaagctta agatttcaaa atttatagaa 2280

tatttgatat attgaacata tacttagtta tatattaaat tcaaaagttt tgttaatatt 2340

cctaaattat atgtccaatc aaattaacac atacaaaata aaacagagag aagtactagt 2400

tattagttta atataaaata gaacatcaat gtttaacgat tttgagtgtt ttaaacaaga 2460

aagatatgat attcatctat gtgacagtat ttgaatggac acgatttaag aaagaacaaa 2520

caatttaaaa tattatgata taaaacatgt catacacatt tttgtttggg tataaaatca 2580

cgtaaataaa gataaaccga gaattctaaa gttagactgt tttaaaggta aaaaaaatgt 2640

cattttcttt tataaataaa tcaaaaagaa aaaagtgtca tttatgaagt tataatttta 2700

gcaaaaaagt gtgggtttat tactaatatt atttgcccta aatttgtttt actattttcg 2760

aatataaata ggtaccttta cttttctaat tttccatggt cttccaattt tatatttttc 2820

tcttttcaac caccaccacc atcatcacat gagttatagt caagccatta acccttcatt 2880

tttttctatc aaaaacatgt tttttcaaca tagaaaatca agcaacatct aaggttcttg 2940

aaatctttta agcataaaat acttaaaagg cccaagtaag ccatcatcac ttttgaggat 3000

ttgcatactt agtaaaccct agac 3024

<210> 6

<211> 45

<212> DNA

<213> proMTNR1-SacI-F

<400> 6

atccaacgcg ttgggagctc ccaccaacct tagcagccat atatt 45

<210> 7

<211> 45

<212> DNA

<213> proMTNR1-XbaI-R

<400> 7

tctcctttac tcattctaga tctaaaatca aacaaaataa aaaat 45

<210> 8

<211> 45

<212> DNA

<213> proMTNR2-SacI-F

<400> 8

atccaacgcg ttgggagctc tcatgtcatc cctaatgggt gttta 45

<210> 9

<211> 45

<212> DNA

<213> proMTNR2-XbaI-R

<400> 9

tctcctttac tcattctaga tttgaacagc tttatcaaca agaca 45

<210> 10

<211> 45

<212> DNA

<213> proMTNR3-SacI-F

<400> 10

atccaacgcg ttgggagctc aggaggggta gggtagcaag taggc 45

<210> 11

<211> 48

<212> DNA

<213> proMTNR3-XbaI-R

<400> 11

tctcctttac tcattctaga gttttttttt tttgttattt gaaaaatc 48

<210> 12

<211> 45

<212> DNA

<213> proLFS-SacI-F

<400> 12

atccaacgcg ttgggagctc ttataaagtg ttgatcaatg gggcg 45

<210> 13

<211> 45

<212> DNA

<213> proLFS-XbaI-R

<400> 13

tctcctttac tcattctaga tcgtttttgt aaatatgaaa aagaa 45

<210> 14

<211> 45

<212> DNA

<213> proTCP22-SacI-F

<400> 14

atccaacgcg ttgggagctc aaattcagta gcgtagtcat ataca 45

<210> 15

<211> 45

<212> DNA

<213> proTCP22-XbaI-R

<400> 15

tctcctttac tcattctaga gtctagggtt tactaagtat gcaaa 45

Claims

1.用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子，其特征在于：所述启动子包括：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的启动子中的任意一个。

2.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体包括权利要求1所述SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示核苷酸序列启动子中的任意一个或多个。

3.权利要求1所述用于操纵在植物表皮毛细胞中特异性表达的启动子的应用，其特征在于：所述的启动子与目的基因连接，促进目的基因在植物多细胞表皮毛细胞中的特异性表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述启动子与GUS报告基因连接，启动子驱动GUS报告基因在植物多细胞表皮毛细胞中的特异性表达。

5.权利要求2所述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达植物代谢产物的运用。

6.权利要求2所述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达抗虫或者抗病相关化合物的运用。

7.权利要求2所述表达载体在植物多细胞表皮毛细胞中表达植物香气相关化合物的运用。

8.权利要求2所述表达载体在用于多细胞表皮毛植物品质改良中的运用。

9.权利要求2所述表达载体，其特征在于：所述表达载体包括遗传转化所形成的转基因植物，以及由此产生的外源基因表达产物；所述转基因植物包括番茄以及与番茄有着类似表皮毛细胞结构的植物。