CN113980323B - 一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微型固相萃取技术领域，具体涉及一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及其应用，该支化改性移液器吸头由商品化移液器吸头经表面修饰后逐层可控支化反应进行化学改性而制得，不仅能根据支化反应类型在吸头壁灵活地定制不同的化学基团从而满足不同的SPE要求，还显著提高了吸头表面的官能团密度，使得SPE过程可直接在吸头内部高效地进行而无需额外填充吸附剂，有效避免了传统移液器吸头SPE装置繁琐的吸附剂填充和滤头固定步骤，且极大地提高SPE的萃取效率和萃取容量，该支化改性移液器吸头还具有与移液器兼容性好、操作便捷、萃取高效以及成本低廉等优点。

Description

一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及其 应用

技术领域

本发明涉及微型固相萃取技术领域，具体涉及一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及其应用。

背景技术

因样品消耗量少、分析速度快、成本低廉等特点，基于移液器吸头的固相萃取技术(PT-SPE)已成为了微型化SPE领域的研究热点。该技术仅通过移液器的反复吸液和移除操作即可完成SPE过程，操作便捷且原理简单，因而吸引了大量科学家们的关注并逐渐发展成了微型化萃取领域的主要技术手段。正因如此，PT-SPE技术已被广泛应用于食品安全检测、环境分析、药物分析以及疾病诊断等领域。

现有PT-SPE装置绝大部分是由移液器吸头及其内部的吸附剂和滤头(如多孔砂芯熔块、脱脂棉和玻璃纤维丝等)组成，滤头分别置于吸附剂的上下两端与吸附剂形成夹心结构，一个位于移液器吸头下端允许溶液通过的同时阻挡吸附剂颗粒，另一个置于移液器上端防止溶剂溢出而污染移液器，吸附剂则置于两个滤头中间。

由上述夹心结构组成的PT-SPE装置不仅制造步骤繁琐，还存在因滤头松动而造成吸附剂泄露的风险，从而影响甚至破坏SPE过程与结果，同时也可能会污染移液器。更重要的是，此类结构的PT-SPE装置无一例外都存在一个严重的问题，那就是粒径比滤头孔径小的吸附剂无法使用，因此许多高容量的纳米吸附剂无法用于PT-SPE分析，极大地限制了PT-SPE技术的发展和应用。尽管多孔整体聚合物材料封装的移液器吸头可直接用于SPE过程而不需要安装滤头，且在药物分析和生化分离等方面也获得了应用，但这类PT-SPE装置的液体流动性较差，萃取容量也因为聚合物材料的用量少而受到限制，且同样存在不可预知的聚合物整体材料从移液器吸头内壁脱落的风险；此外，由于PT-SPE是一项相对而言起步较晚的分离分析技术，商品化吸附剂的种类与数量十分有限，因此在常规分析中比传统SPE装置的成本仍然更高，这些因素同样也限制了PT-SPE在分离分析领域的应用。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本发明。

发明内容

本发明的目的在于解决现有PT-SPE装置结构复杂、吸附剂存在泄露风险、萃取容量有待提高的问题，提供了一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明公开了一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头的制备方法，包括以下步骤：

S1：表面修饰

利用可自聚合化合物在水相或有机相中的自聚合反应对任意规格商品化移液器吸头的内表面进行修饰；

S2：支化改性

利用多活性官能团单体间的化学反应对步骤S1中经过表面修饰的移液器吸头进行逐层可控支化改性，得到表面含高密度活性官能团的移液器吸头。

所述步骤S1中表面修饰的方式为物理涂覆聚合物或化学交联。

所述步骤S1中可自聚合化物为硅烷偶联剂、多巴胺、苯胺、间氨基苯硼酸、吡咯以及这些化合物的类似物中任意一种或几种组合。

所述步骤S2中多活性官能团单体为含有氨基、醛基、巯基、羧基、磺酸基、硫氰酸根、环氧基、不饱和键、取代芳烃、取代杂环的任意几个相同或不同活性基团的单体。

所述步骤S2中可控支化改性方式为在吸头内逐层进行原位树枝状支化反应和逐层修饰不同代数的超支化高分子聚合物。

本发明还公开了由上述制备方法制得的基于逐层可控支化改性的移液器吸头，这种移液器吸头规格包括：10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL、5mL、10mL。

本发明还公开了上述基于逐层可控支化改性的移液器吸头在固相萃取中的应用，所述固相萃取的应用包括但不限于食品着色剂、有机染料、芳香类化合物的萃取、吸附、分离、浓缩、纯化和检测，尤其是食品中人工色素的固相萃取和半定量裸眼比色检测，该移液器吸头的萃取效率高、样品消耗量少，还具有操作简单、成本低廉、萃取速度快等优点。

与现有技术比较本发明的有益效果在于：

与现有PT-SPE技术相比，该基于逐层可控支化改性的移液器吸头、制备方法及应用，基于商品化移液器吸头的表面修饰和支化改性而成，在保留与移液器良好兼容性的同时，还具有免填充吸附剂、更高的萃取效率和萃取容量以及可定制修饰官能团等优点，能更好地适用于不同的SPE分析任务；且该支化改性的移液器吸头的制备过程简单、样品消耗量少、普适性强，是一种高效、便捷和通用的SPE支持介质，具有很强的推广使用价值；结合逐层可控支化反应和PT-SPE(移液器吸头固相萃取)，制备一种具有很高萃取效率且可用于裸眼比色分析的吸头萃取装置，从而解决现有PT-SPE装置结构复杂、吸附剂存在泄露风险、萃取容量有待提高的问题。

附图说明

图1为本发明中支化改性移液器吸头的制备路线示意图；

图2为制备氨基功能化移液器吸头的技术路线示意图；

图3为以三-(2-氨乙基)胺/均苯三甲醛反应体系为例的逐层可控支化改性移液器吸头的制备路线示意图；

图4为移液器吸头支化改性前后的扫描电子显微镜图，其中图A表示支化改性前的吸头，图B表示APTES聚合后的吸头，图C表示APTES聚合后经4轮支化改性的吸头，图D表示APTES聚合后经8轮支化改性的吸头，图E表示APTES聚合后经12轮支化改性的吸头；

图5为移液器吸头经不同轮数支化改性后的能量散射X射线光谱示意图，图A表示APTES聚合后的吸头，图B表示APTES聚合后经4轮支化改性的吸头，图C表示APTES聚合后经8轮支化改性的吸头，图D表示APTES聚合后经12轮支化改性的吸头；

图6与移液器吸头相同材质的塑料片在经过不同轮数支化反应改性后的界面润湿性变化，其中图A 1-9分别表示0-8轮支化反应改性后塑料片表面的水接触角示意图，图B表示不同轮数支化反应改性后塑料片表面的接触角变化与支化轮数间的关系；

图7为不同吸头对诱惑红色素的吸附动力学，其中图A是诱惑红标准溶液经裸吸头吸附不同时间后的紫外-可见吸收光谱图，图B是诱惑红标准溶液经聚APTES修饰吸头吸附不同时间后的紫外-可见吸收光谱图，图C是诱惑红标准溶液经4轮支化改性吸头吸附不同时间后的紫外-可见吸收光谱图，图D是诱惑红标准溶液经8轮支化改性吸头吸附不同时间后的紫外-可见吸收光谱图，图E是诱惑红标准溶液经12轮支化改性吸头吸附不同时间后的紫外-可见吸收光谱图，图F是诱惑红标准溶液经不同吸头吸附后上清液的吸光度与吸附时间的关系示意图；

图8为0轮和10轮支化反应改性后氨基功能化的移液器吸头对几种色素的萃取效果对比，其中图A是0轮支化改性后氨基功能化的移液器吸头，图B是10轮支化改性后氨基功能化的移液器吸头；

图9为不同吸头与色素间的吸附等温线示意图，其中图A和C为日落黄，图B和D为亮蓝，图A和B为聚APTES修饰吸头，图C和D为聚APTES修饰后经三-(2-氨乙基)胺/均苯三甲醛反应体系进行12轮支化改性的吸头；

图10为支化反应的轮数对移液器吸头萃取效果的影响，其中图A是0,2,4,6,8,10和12轮支化反应改性后氨基功能化吸头产生的诱惑红萃取物的紫外-可见吸收光谱示意图，图B是0,2,4,6,8,10和12轮支化反应改性后氨基功能化吸头对几种色素的萃取量的比较；

图11为HPLC表征聚APTES修饰的吸头对实际饮料样品中亮蓝色素的萃取情况，其中图A是实际饮料样品的色谱图，图B是实际饮料样品经吸头萃取后的上清液的色谱图，图C是吸头萃取实际饮料样品后第一次解吸液的色谱图，图D是吸头萃取实际饮料样品后第二次解吸液的色谱图，灰色条带表示亮蓝的色谱峰位置；

图12为HPLC表征聚APTES修饰并经三-(2-氨乙基)胺/均苯三甲醛反应体系4轮支化改性后的吸头对实际饮料样品中亮蓝色素的萃取情况，其中图A是实际饮料样品的色谱图，图B是实际饮料样品经吸头萃取后的上清液的色谱图，图C是吸头萃取实际饮料样品后第一次解吸液的色谱图，图D是吸头萃取实际饮料样品后第二次解吸液的色谱图，灰色条带表示亮蓝的色谱峰位置；

图13为HPLC表征聚APTES修饰并经三-(2-氨乙基)胺/均苯三甲醛反应体系8轮支化改性后的吸头对实际饮料样品中亮蓝色素的萃取情况，其中图A是实际饮料样品的色谱图，图B是实际饮料样品经吸头萃取后的上清液的色谱图，图C是吸头萃取实际饮料样品后第一次解吸液的色谱图，图D是吸头萃取实际饮料样品后第二次解吸液的色谱图，灰色条带表示亮蓝的色谱峰位置；

图14为HPLC表征聚APTES修饰并经三-(2-氨乙基)胺/均苯三甲醛反应体系12轮支化改性后的吸头对实际饮料样品中亮蓝色素的萃取情况，其中图A是实际饮料样品的色谱图，图B是实际饮料样品经吸头萃取后的上清液的色谱图，图C是吸头萃取实际饮料样品后第一次解吸液的色谱图，图D是吸头萃取实际饮料样品后第二次解吸液的色谱图，灰色条带表示亮蓝的色谱峰位置；

图15为基于不同轮数支化改性移液器吸头的实际饮料样品中亮蓝色素的裸眼比色分析示意图，其中图A是聚APTES修饰的吸头吸附浓度梯度亮蓝标准色素后的颜色梯度，图B是4轮支化改性吸头吸附浓度梯度亮蓝标准色素后的颜色梯度，图C是8轮支化改性吸头吸附浓度梯度亮蓝标准色素后的颜色梯度，图D是12轮支化改性吸头吸附浓度梯度亮蓝标准色素后的颜色梯度，图E是聚APTES修饰吸头吸附实际饮料样品后呈现的颜色，图F是4轮支化改性吸头吸附实际饮料样品后呈现的颜色，图G是8轮支化改性吸头吸附实际饮料样品后呈现的颜色，图H是12轮支化改性吸头吸附实际饮料样品后呈现的颜色。

具体实施方式

以下结合附图，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明中所用的超纯水是指经过美国密理博公司Milli-Q Advantage A10超纯水净化系统得到的水。

一、移液器吸头的氨基或脲基功能化

将商品化的移液器吸头分别用水和乙醇清洗，然后置于60℃真空干燥。将干燥的吸头吸满含10％(v/v)氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)或80％(v/v)脲丙基三乙氧基硅烷(UPTES)的水溶液(pH 7.2～7.3)，密闭后40℃反应3小时。接着挤出吸头内残留的试剂，并在60℃老化12小时。最后将所得吸头分别用水和乙醇清洗，这样就制得了氨基或脲基功能化的移液器吸头。

二、移液器吸头的支化改性

将实施例1制得的氨基或脲基功能化的吸头吸取200μL含有均苯三甲醛(0.5mg/mL)的DMSO溶液，40℃反应6小时。然后加入NaBH₃CN的DMSO溶液(1mg/mL)并在40℃继续反应12小时。反应完成后，挤出吸头内残留的试剂，用无水乙醇清洗3次。然后吸取200μL含0.2％(v/v)三(2-氨基乙基)胺的DMSO溶液，40℃反应6小时，接着加入NaBH₃CN的DMSO溶液(1mg/mL)并在40℃继续反应12小时。反应完成后，挤出吸头内残留的试剂，并用无水乙醇清洗3次。至此，一轮支化反应结束。重复上述操作至所需支化反应轮数即制得不同轮数支化改性的移液器吸头。图4为移液器吸头支化改性前后的扫描电子显微镜图，由图可知，随着支化改性轮数的增加，移液器吸头内壁的凸起结构愈发明显，说明了支化改性是成功的，且具有良好的可控性。

三、支化改性移液器吸头中C、N、O、Si相对含量的测定

将实施例1和2中制得的不同轮数支化改性的移液器吸头用能量散射X射线光谱表征元素相对含量的变化，聚APTES修饰、4轮、8轮和12轮支化改性移液器吸头的表征结果分别如图5A-D所示。显然，N元素的相对含量明显随着支化改性的轮数增加而增加，证明了移液器吸头的支化改性是成功的，且支化改性的可控性好。

四、支化改性对表面润湿性的影响考察

S1：塑料片的氨基功能化

由于移液器吸头不能直接进行接触角测定，故本实施例采用与移液器吸头相同材质的平整塑料片为基底材料用于考察支化改性对表面润湿性的影响。步骤如下：将商品化的塑料片切割成1cm×1cm的小片，用水和乙醇清洗后置于60℃干燥。将所得塑料片浸没于含10％(v/v)APTES的水溶液(pH7.2～7.3)中，密闭后在40℃反应3小时。移除残留试剂后置于60℃老化12小时，这样就制得了氨基功能化的塑料片。

S2：塑料片的支化改性和接触角测定

将步骤S1制得的塑料片浸没于含0.5mg/mL均苯三甲醛的DMSO溶液中，40℃反应6小时，接着加入NaBH₃CN的DMSO溶液(1mg/mL)并在40℃继续反应12小时。反应完成后，移除残留试剂并用乙醇清洗3次。然后将所得塑料片浸没于含0.2％(v/v)三(2-氨基乙基)胺的DMSO溶液，40℃反应6小时，接着加入NaBH₃CN的DMSO溶液(1mg/mL)并在40℃继续反应12小时。反应完成后，移除残留试剂并用乙醇清洗3次即制得1轮支化改性的塑料片，重复上述支化反应制得1-8轮支化改性的塑料片。通过接触角测量仪分别测定不同轮数支化改性塑料片的水接触角，结果如图6所示。由图可知，随着支化改性轮数的增加，塑料片表面的水接触角逐渐降低，表面亲水性逐渐增强，说明氨基官能团密度逐渐增加，同时也说明支化改性的技术路线具有良好的可控性。

五、支化改性吸头对色素的结合动力学考察

分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰、4轮、8轮和12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的移液器吸头吸取200μL含0.1mg/mL诱惑红的水溶液(pH7.2～7.3)，室温下吸附不同时间(0，5，10，15，20，30，50，70，90，120，180和240分钟)后将吸头内的溶液挤出至96孔微板中测量溶液的紫外-可见吸收光谱。该试验平行测定3次并对最终的结果进行加权平均。吸附动力学的测试结果如图7所示，显然，随着支化改性轮数的增加，吸头对诱惑红色素的吸附量有所增加，且达吸附平衡所需时间有所延长。

六、未支化改性的吸头和10轮支化改性的吸头对不同色素的吸附行为比较

称取等质量的诱惑红、赤藓红、日落黄、柠檬黄、固绿FCF、罗丹明B、甲基紫和亚甲基蓝8种色素标准样品溶于水(pH 7.2～7.3)中，制备成浓度均为1mg/mL的标准溶液。分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰吸头和10轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL上述色素的标准溶液，40℃温育3小时，接着用水(pH 7.2～7.3)清洗吸头3遍。然后每个吸头吸取250μL含60％(v/v)乙腈的NaOH溶液(pH 12.4)，室温下解吸2小时，收集解吸液。重复解吸3次后将所有解吸液汇总并测定每组解吸液的紫外-可见吸收光谱。结果如图8所示，显然，10轮支化改性后的吸头萃取几种色素后的解吸液比聚APTES修饰吸头的萃取解吸液有着明显更强的吸光度，证实了支化后的吸头有着更大的吸附容量。

七、吸头在支化改性前后对色素的吸附等温线考察

配置浓度为5，3，2，1.5，1，0.5，0.25，0.1，0.05，0.01，0.005和0.001mg/mL的日落黄和亮蓝标准溶液(pH 7.2～7.3水为溶剂)，然后分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰吸头和12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL上述溶液，40℃下吸附3小时。接着用pH 7.2～7.3水清洗吸头3遍，然后每个吸头吸取250μL含60％(v/v)乙腈的NaOH水溶液(pH 12.4)，室温下解吸2小时并收集解吸液。重复解吸3次并将所有解吸液汇总。然后分别在481nm和628nm处测定日落黄和亮蓝解吸液的吸光度，用标准曲线计算解吸液中色素的含量，对计算得出的吸附含量与色素浓度进行作图，绘制如图9A-D所示的吸附等温线。由图可知，支化改性后的移液器吸头对两种色素的吸附容量均有显著提高。

八、不同轮数支化改性的吸头对几种色素的吸附能力比较

称取等质量的诱惑红、赤藓红、日落黄、柠檬黄、固绿FCF、罗丹明B、甲基紫和亚甲基蓝8种色素标准样品溶于水(pH 7.2～7.3)中，制备成浓度均为1mg/mL的标准溶液。分别用实施例1和2制得的聚APTES修饰吸头(0轮支化)和2，4，6，8，10，12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL上述色素标准溶液，40℃温育3小时。温育结束后移除残留溶液并用pH 7.2～7.3的水清洗吸头3次，接着每个吸头吸取250μL含60％(v/v)乙腈的NaOH溶液(pH 12.4)，室温下解吸2小时，重复解吸3次并收集解吸液。测定每组解吸液的紫外-可见吸收光谱并根据标准曲线法计算吸头的饱和吸附容量，不同吸头吸附诱惑红后解吸液的紫外-可见吸收光谱以及不同吸头对几种色素的保留容量分别如图10A和B所示。由图10A可知，诱惑红解吸液的吸光度随着吸头支化轮数的增加而显著增加。由图10B可知，相对于未支化改性的吸头而言，支化改性吸头对几种色素的吸附容量均随着支化轮数的增加而明显增加，最大增加倍数达524倍(罗丹明B，10轮支化改性的吸头)，但在支化轮数达10轮左右吸附容量的增长基本达最大。证明了支化改性是一种提升移液器吸头吸附能力的有效方法。

九、高效液相色谱法(HPLC)评价聚APTES修饰的吸头对实际饮料样品中亮蓝色素的萃取性能

S1：HPLC法测定亮蓝的标准曲线

称取不同质量的亮蓝标准样品溶于水(pH 7.2～7.3)中，配制成一定浓度梯度的标准溶液，具体浓度包括：0.05，0.025，0.01，0.005，0.0025，0.001，0.0005和0.0001mg/mL。色谱条件：色谱柱Pronaos EP-C18(5μm，4.6×250mm)；柱温：40℃；进样量：20μL；流动相A：甲醇；流动相B：乙酸铵(pH 7.5)；梯度洗脱条件：0min：15％A；0-4min：15％-30％A；4-11min：30％-85％A；11-18min：85％-30％A；18-22min：30％-15％A；22-50min：15％A，流速为0.4mL/min；检测波长：628nm。在上述色谱条件下考察亮蓝的色谱保留行为，绘制色谱峰面积与色素浓度间的关系曲线并进行线性拟合，得出线性回归方程、线性相关系数及其工作浓度范围。结果如表1，表1为HPLC法测得亮蓝的标准曲线及其线性相关性和工作范围。显然，亮蓝标准曲线的线性相关性很好且线性范围宽泛，说明HPLC是一种色素定量分析的有效方法。

表1 HPLC法测得亮蓝的标准曲线及其线性相关性和工作范围

S2：HPLC法测定吸头对实际饮料样品中亮蓝的萃取性能

分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰、4轮、8轮和12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL亮蓝着色的实际饮料样品，40℃吸附3小时，吸附结束后挤出上清液并单独收集。然后每个吸头吸取250μL含60％(v/v)乙腈的NaOH水溶液(pH 12.4)，室温下解吸2小时，重复解吸3次并收集解吸液。依次将亮蓝着色的实际饮料样品、上清液和不同解吸次数的解吸液直接色谱进样，根据步骤S1中的色谱条件进行分析并以亮蓝标准样品为参照来确定饮料中亮蓝的色谱峰位置。每个样品平行测定3次并对峰面积进行加权平均，再根据步骤S1中表1的HPLC标准曲线计算实际饮料样品、上清液和解吸液中亮蓝色素的含量，色谱保留结果分别如图11，图12，图13和图14，HPLC法测得不同吸头对实际饮料中亮蓝色素的萃取性能如表2。表2为HPLC法测得不同吸头对实际饮料中亮蓝色素的萃取量与萃取效率。显然，饮料中亮蓝的萃取效率随着吸头的支化轮数增加而增加。

表2 HPLC法测得不同吸头对实际饮料中亮蓝色素的萃取量与萃取效率

十、不同轮数支化改性吸头用于实际饮料样品中亮蓝色素的裸眼比色分析性能考察

S1：比色卡制作

称取不同质量的亮蓝标准样品溶于水(pH 7.2～7.3)中，配制成一定浓度梯度的标准溶液，具体浓度包括：0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.08，0.06，0.04，0.02，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002和0.001mg/mL。分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰、4轮、8轮和12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL上述亮蓝标准溶液，40℃吸附3小时，移除溶液后将吸头按照吸附色素的浓度梯度排列并拍照记录吸头的颜色，根据浓度梯度与颜色的对应关系制作成比色卡，结果如图15A-D所示。由图可知，随着支化改性轮数的增加，比色卡的颜色梯度逐渐明显，说明吸头的萃取能力随支化轮数增加而增强。

S2：比色分析

分别用实施例1和2中制得的聚APTES修饰、4轮、8轮和12轮支化改性(三(2-氨基乙基)胺和均苯三甲醛反应体系)的吸头吸取200μL亮蓝着色的实际饮料样品，40℃吸附3小时，吸附结束后移除溶液，所得吸头的颜色如图15E-H所示。将吸附过实际饮料样品后12轮支化改性吸头的颜色与步骤S1中的比色卡进行比较，通过目测比色分析知实际饮料样品中亮蓝色素的含量为0.001～0.002mg/mL。通过与实施例9中HPLC测得的实际饮料样品中亮蓝色素的含量(～0.0013mg/mL)进行比较，两者结果基本一致，故可得出如下结论：本发明的支化改性移液器吸头可用于半定量目测比色测定实际饮料中的色素。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对本发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (7)

1.一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：表面修饰

利用可自聚合化合物在水相或有机相中的自聚合反应对任意规格商品化移液器吸头的内表面进行修饰；

S2：支化改性

利用多活性官能团单体间的化学反应对步骤S1中经过表面修饰的移液器吸头进行逐层可控支化改性，得到表面含高密度活性官能团的移液器吸头；

所述步骤S2中可控支化改性方式为在吸头内逐层进行原位树枝状支化反应和逐层修饰不同代数的超支化高分子聚合物；

所述步骤S2中多活性官能团单体为含有氨基、醛基、巯基、羧基、磺酸基、硫氰酸根、环氧基、取代芳烃、取代杂环中的任意几个相同或不同活性基团的单体。

2.如权利要求1所述的一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中表面修饰的方式为物理涂覆聚合物或化学交联。

3.如权利要求1所述的一种基于逐层可控支化改性的移液器吸头的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中可自聚合化物为硅烷偶联剂、多巴胺、苯胺、间氨基苯硼酸、吡咯中任意一种或几种组合。

4.一种采用如权利要求1~3任一项所述的制备方法制得的基于逐层可控支化改性的移液器吸头。

5.如权利要求4所述的基于逐层可控支化改性的移液器吸头，其特征在于，规格为10 μL、20 μL、100 μL、200μL、1000μL、5mL和10 mL中的任意一种。

6.一种如权利要求4或5所述的基于逐层可控支化改性的移液器吸头在固相萃取中的应用。

7.一种如权利要求4或5所述的基于逐层可控支化改性的移液器吸头在萃取分离和有色分析物的目视比色检测中的应用。

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