CN113976187A - 一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易。分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小；分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
Description
技术领域
本发明属于核酸分离提纯领域，具体涉及一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法。
背景技术
核酸的分离目前分离主要有离子交换和凝胶分离，离子交换分离价格实惠，适合工业生产，但分离周期一般在48-100小时，分离周期长效率低，溶剂用量大，馏分浓度低，后处理比较麻烦；凝胶色谱分离，分离周期短，但填料填料一般价格昂贵，一次投入非常大，填料货期长且不受控。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱或聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
优选的是，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料。
在上述任一方案中优选的是，硅胶键合的填料的极性基团可以但不局限于氨基，酯基，羰基，酰胺基，羧基，碳酸酯基，氨基碳酸脂。
在上述任一方案中优选的是，硅胶键合的填料的烃类可以是但不局限于辛烷基，十二烷基，十八烷基。
在上述任一方案中优选的是，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度范围为1℃至30℃。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，核酸样品为含有1、2或3个脱氧核苷结合2个或3个磷酸的化合物。
在上述任一方案中优选的是，硅胶键合的填料粒径为5微米至50微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为60埃至200埃。
在上述任一方案中优选的是，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水或含有少量水溶性的酸、碱、盐，或可以溶于水的有机溶剂。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
附图说明
图1为分离核酸制备谱图；
图2为图1组分的分析图谱。
具体实施方式
为了更进一步了解本发明的发明内容，下面将结合具体实施例详细阐述本发明。
实施例一
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为氨基，硅胶键合的填料的烃类为辛烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为1℃，步骤(2)中，核酸样品为含有1个脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为5微米至的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为60埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例二
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为酯基，硅胶键合的填料的烃类为十二烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为5℃，步骤(2)中，核酸样品为含有2脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为10微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为80埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例三
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为羧基，硅胶键合的填料的烃类为十八烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为10℃，步骤(2)中，核酸样品为含有3个脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为10微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为100埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例四
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为酰胺基，硅胶键合的填料的烃类为辛烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为15℃，步骤(2)中，核酸样品为含有1个脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为15微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为120埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为含有少量水溶性的酸。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例五
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为碳酸酯基，硅胶键合的填料的烃类为十二烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为18℃，步骤(2)中，核酸样品为含有3个脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为20微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为130埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为含有少量水溶性的碱。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例六
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为氨基碳酸脂，硅胶键合的填料的烃类为十八烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为22℃，步骤(2)中，核酸样品为含有1个脱氧核苷结合2个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为30微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为140埃，步骤(2)中，使用的洗脱液含有少量水溶性的盐。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例七
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为碳酸酯基，硅胶键合的填料的烃类可以为十二烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为25℃，步骤(2)中，核酸样品为含有3个脱氧核苷结合3个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为40微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为160埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为可以溶于水的有机溶剂。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例八
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为羧基，硅胶键合的填料的烃类可以为十八烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度为28℃，步骤(2)中，核酸样品为含有2个脱氧核苷结合3个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为46微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为180埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水。本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例九
本发明提供一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
其中，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料，硅胶键合的填料的极性基团为氨基碳酸脂，硅胶键合的填料的烃类可以为十八烷基，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度范围为30℃，步骤(2)中，核酸样品为含有3个脱氧核苷结合3个磷酸的化合物，硅胶键合的填料粒径为50微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为200埃，步骤(2)中，使用的洗脱液为含有少量水溶性的酸。
本发明采用硅胶键合的填料进行分离，较传统分离材料具有非常大的创新性，该分离周期在1h内即可实现分离，再生比较容易，分离采用的溶剂基本是纯水，成本低，环保压力小，分离选择性好，最高纯度可以达到99.9％。填料价格接近常规反相分离材料,使用次数初步估计在数百次，该分离工艺具有非常好的实用性，非常适合工业生产。
实施例十
核酸分离工艺操作
分析条件：
样品前处理：
取粗品冻干粉135.85mg，用1ml pH2.38甲酸水溶液溶解，此溶液为进样溶液；
制备：
取两支20*250mm酰胺键合色谱柱，填料规格为粒径13um，孔径
水浴冷凝循环系统将柱温控制在6-10℃，保持20min；
准备流动相A：0.1％三氟乙酸；流动相B：乙腈；流速为4ml/min,洗脱梯度如下：100％A平衡色谱柱体系30min；手动打入进样溶液0.3ml(进样量约为40mg)，4ml/min流速，100％A运行40min后100％B运行10min；
收集：使用自动收集器进行收集，一边收集一边滴加NaOH，使馏分的PH在12-14，制备谱图见图1，收集窗如下图中红框所示；
将图1中各组馏分进行分析检测，分析谱图见图2；
后处理及单体分析：
将接收馏分进行冻干处理后，进液相色谱分析，样品纯度为99.56％。
本领域技术人员不难理解，本发明的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法包括上述本发明说明书的发明内容和具体实施方式部分的各部分的任意组合，限于篇幅并为使说明书简明而没有将这些组合构成的各方案一一描述。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，按照先后顺序包括以下步骤：
(1)将硅胶键合的填料填装在不锈钢柱或聚四氟乙烯塑料材质的分离装置内；
(2)对核酸样品进行色谱分离或层析分离，再进行检测即可。
2.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，所述硅胶键合的填料为含有极性基团的烃类化合物修饰的球形硅胶材料。
3.根据权利要求2所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，硅胶键合的填料的极性基团可以但不局限于氨基，酯基，羰基，酰胺基，羧基，碳酸酯基，氨基碳酸脂。
4.根据权利要求2所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，硅胶键合的填料的烃类可以是但不局限于辛烷基，十二烷基，十八烷基。
5.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，步骤(1)中，选用的分离装置为色谱分离装置或一个简单的柱形容器，柱子上下端分别有孔径小于填料粒径的筛板。
6.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，分离采用以水为主的溶液进行洗脱。
7.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，该分离的流动相或淋洗剂、色谱柱或层析柱等部分需要进行温度控制，温度范围为1℃至30℃。
8.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，核酸样品为含有1、2或3个脱氧核苷结合2个或3个磷酸的化合物。
9.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，硅胶键合的填料粒径为5微米至50微米的球形或不定形材料，硅胶键合的填料孔径为60埃至200埃。
10.根据权利要求1所述的一种采用硅胶键合基质分离核酸的方法，其特征在于，步骤(2)中，使用的洗脱液为纯水或含有少量水溶性的酸、碱、盐，或可以溶于水的有机溶剂。
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2021
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