CN113969278B - 一种针对表位点为iyvlvmlvl的tcr所设计的引物及其应用 - Google Patents
一种针对表位点为iyvlvmlvl的tcr所设计的引物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及质粒克隆技术领域。本发明提供了一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24‑49位点的引物对和L24‑2位点的引物对中的一种或两种。本发明的引物对针对分型为HLAA24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。
Description
本发明要求申请号为202110680588.X，申请日为2021年6月18日，专利名称为一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用的中国专利申请的全部优先权。
技术领域
本发明涉及质粒克隆技术领域，尤其涉及一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用。
背景技术
载体是一种运载体(vehicle)，通过其可将多核苷酸序列(例如，外源基因)引入至宿主细胞中，以便转化宿主并促进引入的序列的表达(例如转录和翻译)。载体包括质粒、噬菌体、病毒等。载体的最普遍的类型是质粒，其是指闭合的环状双链DNA环，其中可连接含有目标基因的另外的DNA段。载体的另一种类型为病毒载体，其中将待运输的核酸构建体连接至病毒基因组中。病毒载体可在它们被引入的宿主细胞中自主复制、或可将它们自身整合至宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体可指导与其可操作连接的基因的表达。
要将某一目标基因片段克隆进质粒载体，必须有与目标基因片段序列相匹配的引物。我公司克隆到了2条针对免疫分型为HLA A24的病人体内的EBV病毒蛋白的IYVLVMLVL表位点的TCR，并对这2条TCR的基因序列申请了专利保护。但是，现有技术中尚没有将此2条TCR的基因序列克隆进质粒载体的引物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种引物对，用于质粒克隆。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。
本发明提供了一种引物对，所述引物对包括L24-49位点的引物对和L24-2位点的引物对中的一种或两种。
作为优选，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
作为优选，所述L24-49位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
作为优选，所述L24-2位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
作为优选，所述L24-49位点的引物对的序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。
作为优选，所述L24-2位点的引物对的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
本发明还提供了所述的引物对在质粒克隆中的应用。
本发明提供了一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24-49位点的引物对和L24-2位点的引物对中的一种或两种。本发明的引物对针对分型为HLA A24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。
附图说明
图1为TCRPCR扩增后胶回收电泳结果；
图2为骨架载体质粒图谱；
图3为TCR与载体重组质粒酶切电泳结果；
图4为TCR与载体重组质粒测序峰图；
图5为TCR转染Jurkat细胞，流式检测转染效率；
图6为TCR转染Jurkat细胞，流式检测转染效率；
图7为TCR转染Jurkat细胞后，功能验证流式检测IFN-γ；
图8为TCR转染Jurkat细胞后，功能验证流式检测IFN-γ。
具体实施方式
本发明提供了一种引物对，所述引物对包括L24-49位点的引物对和L24-2位点的引物对中的一种或两种。
在本发明中，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
在本发明中，所述L24-49位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
在本发明中，所述L24-2位点的引物对的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
在本发明中，所述L24-49位点的引物对的序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。
在本发明中，所述L24-2位点的引物对的序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
在本发明中，所述L24-49位点的引物对的模板序列如SEQ ID NO.10所示。
在本发明中，所述L24-2位点的引物对的模板序列如SEQ ID NO.11所示。
本发明还提供了所述的引物对在质粒克隆中的应用。
在本发明中，所述质粒优选为MP71。
在本发明中，所述质粒骨架为public available information。
在本发明中，所述MP71的序列如SEQ ID NO.5所示。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
引物对设计实例：以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为例。
Forwardprimer(SEQ ID NO.1):GCCGCGCCACCATGGCCACA；
Reverse primer(SEQ ID NO.2):GTAGGTCCTCCAGAACCAGCAG。
实施例2 载体构建
载体构建方法包括如下步骤：
1、TCR基因合成后进行PCR扩增以合成的TCR基因为模板，运用SEQ ID NO.1和SEQID NO.2进行PCR扩增；PCR反应体系如下：PCR预混液25μl，正向引物5μl，引物浓度：10μm/μl，反向引物5μl，引物浓度：10μm/μl，合成的TCR基因序列1μl，浓度：10ng/μl，Nuclease-Free Water 14μl，总反应体系共50μl；PCR反应程序：98℃，2min；(98℃，15s；64℃，15s；72℃，20s)30循环；72℃，2min。
2、PCR产物胶回收
对步骤1中的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后胶回收，具体步骤参照试剂盒TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0说明书，制备琼脂糖凝胶，对回收产物片段运行电泳，其结果如图1所示。
3、线性化载体与胶回收片段进行同源重组
步骤2中的胶回收PCR产物片段与线性化的载体重组摩尔比为1:1，然后加入10μl的2X Seamless Cloning Mix，并用水补至20μl，50℃反应30min，质粒骨架核酸序列如SEQID NO.5所示，重组质粒图谱信息如图2所示。
4、重组质粒载体转化DH5α感受态细菌
取5μl步骤4的反应样品加入到50μl DH5α等感受态细胞中，轻轻混匀，将该混合物置于冰上30min；42℃水浴中90秒进行热激，然后迅速放回冰浴中，静置3～5min；加入300μl不含抗生素的LB培养液，轻轻混匀，37℃震荡培养1h；然后全部均匀涂布到含适当抗生素的LB平板上，37℃培养箱中培养过夜。
5、质粒提取
挑取步骤4中的单克隆菌落，摇菌过夜；取5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，12,000rpm离心1min，吸除上清；向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液P1，吹散沉淀；向离心管中加入250μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解；向离心管中加入350μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000rpm离心10min；将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱中，12,000rpm离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中；向吸附柱中加入600μl漂洗液PW，12,000rpm离心30-60s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱入收集管中；重复上一步骤；将吸附柱C放入收集管中，12,000rpm离心2min；将吸附柱置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50μl洗脱缓冲液，室温放置2min，12,000rpm离心2min将质粒溶液收集到离心管中。
6、重组质粒的鉴定
对步骤5中提取的质粒进行双酶切、测序鉴定，酶切电泳结果及测序峰图见图3、图4。
实施例3 载体的使用
本过程包括病毒液的制备及细胞的转染，详细过程如下所述：
1、制备病毒液
Lipo3000转染293FT细胞，转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔板培养板中，Lipo3000试剂转染操作流程详细步骤参见试剂InvitrogenTMLipofectamineTM3000Transfection Reagent；37℃、5％CO2培养培养48小时，吸出培养基上清，保留细胞用于转染；
2、病毒转染Jurkat细胞
293T细胞转染后第二天，用Retronectin包被24孔培养板，4℃过夜备用；将病毒液加入Retronectin包被过的24孔培养板中，32℃，2000g，离心2h，弃去上清液；取适量转染的Jurkat细胞加入24孔培养板中，30℃，600g，离心30min，使细胞贴于底壁；离心完毕后，将培养板置于37℃，5％CO2培养箱中培养。48h后，取适量细胞，500g离心5min，去培养基上清；PBS重悬，hCD3(PE)/mTCRbeta(PB)流式染料各1ul，室温避光染色15min，加入1ml PBS，500g离心5min，去上清；适量PBS或FASC Buffer重悬后做流式细胞检测，其结果流式图如图5和图6所示。
实施例4：结果验证
结果验证详细过程如下所述：
收集K562细胞，重悬并计数，在24孔板中进行刺激共培养，每孔4e5个K562细胞，加相应的抗原肽至终浓度10μg/ml；培养箱中孵育1.5h，将24孔板离心去培养基上清；补新鲜培养基及每孔2e5个转染的Jurkat细胞，孵育过夜；hCD3(PE)，mTCRbeta(PB)，hCD69(APC)，室温避光染色15min；加PBS清洗后做流式细胞检测，其结果流式图如图7和图8所示。
实施例5
按照SEQ ID NO.12所示的质粒载体设置L24-49和L24-2位点对应的TCR基因片段，得到SEQ ID NO.13～14所示的基因片段，所述L24-49位点对应SEQ ID NO.13，L24-2位点对应SEQ ID NO.14。利用这两个位点设计的引物，同样能实现实施例1～4所述效果。
由以上实施例可知，本发明提供了一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用，所述引物对包括L24-49位点的引物对和L24-2位点的引物对中的一种或两种。本发明的引物对针对分型为HLA A24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计，能够实现特定质粒的克隆。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 重庆天科雅生物科技有限公司
<120> 一种针对表位点为IYVLVMLVL的TCR所设计的引物及其应用
<150> 202110680588.X
<151> 2021-06-18
<160> 14
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggcgcg ccagtcctcc 2160
gatagactgc gtcgcccggg tacccgtatt cccaataaag cctcttgctg tttgcatccg 2220
aatcgtggac tcgctgatcc ttgggagggt ctcctcagat tgattgactg cccacctcgg 2280
gggtctttca tttggaggtt ccaccgagat ttggagaccc ctgcccaggg accaccgacc 2340
cccccgccgg gaggtaagct ggccagcggt cgtttcgtgt ctgtctctgt ctttgtgcgt 2400
gtttgtgccg gcatctaatg tttgcgcctg cgtctgtact agttggctaa ctagatctgt 2460
atctggcggt cccgcggaag aactgacgag ttcgtattcc cggccgcagc ccctgggaga 2520
cgtcccagcg gcctcggggg cccgttttgt ggcccattct gtatcagtta acctacccga 2580
gtcggacttt ttggagctcc gccactgtcc gaggggtacg tggctttgtt gggggacgag 2640
agacagagac acttcccgcc cccgtctgaa tttttgcttt cggttttacg ccgaaaccgc 2700
gccgcgcgtc ttgtctgctg cagcatcgtt ctgtgttgtc tctgtctgac tgtgtttctg 2760
tatttgtctg aaaattagct cgacaaagtt aagtaatagt ccctctctcc aagctcactt 2820
acaggcggcc gcgccaccat ggccacaggc agcagaacat ctctgctgct ggccttcgga 2880
ctgctgtgtc tgccttggct gcaagaagcc agcgccagaa aagaggtgga acaggacccc 2940
ggacctttca atgtgcctga aggcgccacc gtggccttca actgcaccta cagcaatagc 3000
gccagccaga gcttcttctg gtacagacag gactgccgga aagaacccaa gctgctgatg 3060
agcgtgtaca gcagcggcaa cgaggacggc agattcacag cccagctgaa cagagccagc 3120
cagtacatca gcctgctgat ccgggatagc aagctgagcg atagcgccac ctacctgtgt 3180
gtcgtgcggg gctacaactt caacaagttc tacttcggca gcggcaccaa gctgaacgtg 3240
aagcctgaca ttcagaatcc cgaacccgcc gtgtaccagc tgaaggaccc taggagccag 3300
gactctaccc tctgcctgtt caccgacttc gacagccaga tcaacgtgcc caagacaatg 3360
gagagcggca ccttcatcac cgacaagacc gtgctggaca tgaaggctat ggacagcaag 3420
agcaacggag ccatcgcttg gagcaaccag accagcttca cttgccagga catcttcaag 3480
gagaccaacg cttgctaccc ctctagcgac gtgccttgcg acgccacact gacagagaag 3540
agcttcgaga ccgacatgaa cctgaacttc cagaacctga gcgtgatggg cctgagaatc 3600
ctgctgctga aggtggccgg attcaacctg ctgatgaccc tgaggctgtg gtcttcccga 3660
gctaaacgag gctcaggcgc gacgaacttt agtttgctga agcaagctgg ggatgtagag 3720
gaaaatccgg gtcccatggc cacaggcagc agaacatctc tgctgctggc cttcggactg 3780
ctgtgcctgc cttgtctgca agagggatct gccggtgctg tggtgtctca gcacccttct 3840
tgggtcatct gcaagtccgg caccagcgtg aagatcgagt gcagaagcct ggacttccag 3900
gccaccacca tgttctggta cagacagttc cccaagcaga gcctgatgct gatggccacc 3960
tctaacgagg gcagcaaggc cacatatgag cagggcgtcg agaaggacaa gttcctgatc 4020
aaccacgcca gcctgacact gagcaccctg acagtgacaa gcgcccatcc tgaggacagc 4080
agcttctaca tctgcagcgc cagaggaccc agaatcaccg acagcagcac cgacacacag 4140
tacttcggcc ctggcaccag actgacagtt ctggaggacc tacgtaacgt gacccctccc 4200
aaggtgtccc tgttcgagcc tagcaaggcc gagatcgcca acaagcagaa ggccacactc 4260
gtctgcctgg ctagaggctt cttcccagac cacgtggagc tgtcttggtg ggtgaacggc 4320
aaggaggtgc actcaggagt gtctaccgac cctcaggcct acaaggagag caactacagc 4380
tactgcctgt cctccagact cagggtctgc gccacctttt ggcacaaccc tcggaaccac 4440
ttccgctgtc aggtccagtt ccacggcctg tccgaggaag acaagtggcc agagggctct 4500
cctaagccag tgacacagaa catcagcgcc gaggcttggg gaagagccga ttgcggaatc 4560
accagcgcct cttaccagca gggagtgctg tcagctacca tcctgtacga gatcctgctg 4620
ggcaaggcca cactgtacgc agtgctggtg tccactctgg tcgtgatggc tatggtgaag 4680
cggaagaaca gctaggaatt cgagcatctt accgccattt attcccatat ttgttctgtt 4740
tttcttgatt tgggtataca tttaaatgtt aataaaacaa aatggtgggg caatcattta 4800
cattttatgg gatatgtaat tactagttca ggtgtattgc cacaagacaa acatgttaag 4860
aaactttccc gttatttacg ctctgttcct gttaatcaac ctctggatta caaaatttgt 4920
gaaagattga ctgatattct taactatgtt gctcctttta cgctgtgtgg atatgctgct 4980
ttaatgcctc tgtatcatgc tattgcttcc cgtacggctt tcgttttctc ctccttgtat 5040
aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg ttgtccgtca acgtggcgtg 5100
gtgtgctctg tgtttgctga cgcaaccccc actggctggg gcattgccac cacctgtcaa 5160
ctcctttctg ggactttcgc tttccccctc ccgatcgcca cggcagaact catcgccgcc 5220
tgccttgccc gctgctggac aggggctagg ttgctgggca ctgataattc cgtggtgttg 5280
tcggggaaat catcgtcctt tccttggctg ctcgcctgtg ttgccaactg gatcctgcgc 5340
gggacgtcct tctgctacgt cccttcggct ctcaatccag cggacctccc ttcccgaggc 5400
cttctgccgg ttctgcggcc tctcccgcgt cttcgctttc ggcctccgac gagtcggatc 5460
tccctttggg ccgcctcccc gcctgtttcg cctcggcgtc cggtccgtgt tgcttggtcg 5520
tcacctgtgc agaattgcga accatggatt ccaccgtgaa ctttgtctcc tggcatgcaa 5580
atcgtcaact tggcatgcca agaataattc ggatccaagc ttaggcctgc tcgctttctt 5640
gctgtcccat ttctattaaa ggttcctttg ttccctaagt ccaactacta aactggggga 5700
tattatgaag ggccttgagc atctggattc tgcctagcgc taagcttaac acgagccata 5760
gatagaataa aagattttat ttagtctcca gaaaaagggg ggaatgaaag accccacctg 5820
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agaatagaga agttcagatc aaggttagga acagagagac agcagaatat gggccaaaca 5940
ggatatctgt ggtaagcagt tcctgccccg gctcagggcc aagaacagtt ggaacagcag 6000
aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca gggccaagaa 6060
cagatggtcc ccagatgcgg tcccgccctc agcagtttct agagaaccat cagatgtttc 6120
cagggtgccc caaggacctg aaatgaccct gtgccttatt tgaactaacc aatcagttcg 6180
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tcactcggcg cgccagtcct ccgatagact gcgtcgcccg ggtacccgtg ttctcaataa 6300
accctcttgc agttgcatcc gactcgtggt ctcgctgttc cttgggaggg tctcctctga 6360
gtgattgact gcccacctcg ggggtctttc attctcgagc agcttggcgt aatcatggtc 6420
atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg 6480
aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc taactcacat taattgcgtt 6540
gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg 6600
ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga 6660
ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat 6720
acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca 6780
aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc 6840
tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata 6900
aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc 6960
gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc 7020
acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga 7080
accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc 7140
ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag 7200
gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag 7260
aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagt 7314
<210> 14
<211> 7263
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 60
gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 120
gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 180
aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 240
atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc 300
gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat 360
acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc 420
ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc 480
tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag 540
ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg 600
ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg 660
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catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga 840
atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc 900
acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc 960
aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc 1020
ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc 1080
cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca 1140
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ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt 1260
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gggtgttggc gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag 1500
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gcgccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg cgatcggtgc gggcctcttc 1620
gctattacgc cagctggcga aagggggatg tgctgcaagg cgattaagtt gggtaacgcc 1680
agggttttcc cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt gaattagtac tctagcttaa 1740
gtaacgccat tttgcaaggc atggaaaata cataactgag aatagagaag ttcagatcaa 1800
ggttaggaac agagagacag cagaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc 1860
ctgccccggc tcagggccaa gaacagttgg aacagcagaa tatgggccaa acaggatatc 1920
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gccgcgcgtc ttgtctgctg cagcatcgtt ctgtgttgtc tctgtctgac tgtgtttctg 2760
tatttgtctg aaaattagct cgacaaagtt aagtaatagt ccctctctcc aagctcactt 2820
acaggcggcc gcgccaccat gatcagcctg agagtgctgc tggtcatcct gtggctgcag 2880
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cctgaaggcg ccaccgtggc cttcaactgc acctacagca atagcgccag ccagagcttc 3000
ttctggtaca gacaggactg ccggaaagaa cccaagctgc tgatgagcgt gtacagcagc 3060
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ctgatccggg atagcaagct gagcgatagc gccacctacc tgtgtgtcgt gcggggctac 3180
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gccggattca acctgctgat gaccctgagg ctgtggtctt cccgagctaa acgaggctca 3660
ggcgcgacga actttagttt gctgaagcaa gctggggatg tagaggaaaa tccgggtccc 3720
atgctgctgc tcctgctgct tctcggacct ggatctggac tgggagctgt ggtgtctcag 3780
cacccctcta gagtgatctg caagagcggc accagcgtga agatcgagtg cagaagcctg 3840
gacttccagg ccaccaccat gttctggtac agacagttcc ccaagcagag cctgatgctg 3900
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tatgctgctt taatgcctct gtatcatgct attgcttccc gtacggcttt cgttttctcc 4980
tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt tgtggcccgt tgtccgtcaa 5040
cgtggcgtgg tgtgctctgt gtttgctgac gcaaccccca ctggctgggg cattgccacc 5100
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cgctttcttg ctgtcccatt tctattaaag gttcctttgt tccctaagtc caactactaa 5640
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gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 6960
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 7020
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 7080
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 7140
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 7200
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 7260
agt 7263
Claims (3)
1.一种引物对，其特征在于，所述引物对为L24-49位点的引物对；
所述L24-49位点的引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的一种引物对，其特征在于，所述引物对针对分型为HLA A24、表位点为IYVLVMLVL的患者体内EBV病毒抗原肽段的TCR所设计。
3.权利要求1~2任意一项所述的引物对在质粒克隆中的应用。
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