CN113957151A

CN113957151A - 人Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的应用及试剂盒

Info

Publication number: CN113957151A
Application number: CN202111519689.5A
Authority: CN
Inventors: 李佩蔚; 赵小刚; 田忠献; 罗均文; 肖兆华; 周永甲
Original assignee: Second Hospital of Shandong University
Current assignee: Second Hospital of Shandong University
Priority date: 2021-12-13
Filing date: 2021-12-13
Publication date: 2022-01-21

Abstract

本发明涉及人Hsa_circ_0001707在制备食管鳞癌诊断产品中的应用及试剂盒。本发明研究发现，Hsa_circ_0001707是在食管鳞癌组织中较癌旁正常组织表达量明显升高，且在淋巴结转移型食管鳞癌中淋巴结组织表达量也同时升高，本发明以Hsa_circ_0001707为食管鳞癌的生物标志物，提出了Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的用途，尤其是在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。本发明研究表明，较高的Hsa_circ_0001707表达量可能提示所述对象患恶性食管鳞癌的可能性增加，或者可能提示食管鳞癌预后不佳。

Description

人Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的应用及试剂盒

技术领域

本发明涉及人Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的应用及试剂盒，属于生物医学技术领域。

背景技术

我国是食管癌高发地区，每年新发病例超过22万，约占全球总发病人数的一半以上。主要有食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺癌(EAC)两种类型，食管鳞状细胞癌是中国主要的病理类型，占90％左右，其5年生存率仍然很低，仅有15％-25％。且ESCC常伴随淋巴结转移(LNM)，也是ESCC患者判断预后的重要标志。因此，寻找并鉴定与ESCC淋巴结转移相关的新型分子标志物不仅有可能作为ESCC的潜在临床诊断指标，亦可以此为靶点，在进一步深入研究ESCC淋巴结转移的分子机制，有效抑制ESCC进展。

环状RNA(CircRNA)是一种新类型的广泛存在且具有组织特异性、较线性RNA更稳定和高表达的内源性非编码RNA，一些环状RNA作为竞争性内源RNA吸附miRNA，可调节RNA结合蛋白，并且可调控靶基因可变剪切和转录过程。大量研究证实了CircRNA在多种疾病中发挥重要作用，且与肿瘤的增殖、侵袭和转移相关，CircRNAs有巨大潜力成为新的疾病诊断标志物和治疗靶点，CircRNAs在多种人类癌症中表达失调，包括喉鳞状细胞癌，胃癌，肝癌，结直肠癌，胰腺癌，非小细胞肺癌等。CircRNAs已被证明是一种潜在的新型生物标志物，有望应用于多种癌症的早期检测和筛查。

发明内容

针对现有技术中环状RNA在疾病诊断中的重要作用，本发明提供了人Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的应用及试剂盒。

本发明的技术方案如下：

人Hsa_circ_0001707在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。

根据本发明优选的，所述应用中Hsa_circ_0001707为食管鳞癌的生物标志物。

根据本发明优选的，所述Hsa_circ_0001707的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

根据本发明优选的，所述食管鳞癌诊断产品用于食管鳞癌的诊断，或鉴别食管鳞癌的良恶性，或判断食管鳞癌的预后情况。

根据本发明优选的，所述食管鳞癌诊断产品包括特异性识别Hsa_circ_0001707的物质。

进一步优选的，所述特异性识别Hsa_circ_0001707的物质选自特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对。

进一步优选的，所述特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物。

根据本发明优选的，所述食管鳞癌诊断产品的检测样本选自组织、血浆或血清。

特异性识别Hsa_circ_0001707的物质在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。

根据本发明优选的，所述特异性识别Hsa_circ_0001707的物质选自特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对。

一种食管鳞癌诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性识别Hsa_circ_0001707的物质和荧光原位杂交探针。

根据本发明优选的，所述荧光原位杂交探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

根据本发明优选的，所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR的检测试剂。

本发明有益效果有：

1、本发明研究发现，Hsa_circ_0001707是在食管鳞癌组织中较癌旁正常组织表达量明显升高，且在淋巴结转移型食管鳞癌中淋巴结组织表达量也同时升高，本发明以Hsa_circ_0001707为食管鳞癌的生物标志物，提出了Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的用途，尤其是在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。本发明研究表明，较高的Hsa_circ_0001707表达量可能提示所述对象患恶性食管鳞癌的可能性增加，或者可能提示食管鳞癌预后不佳。

2、本发明设计了特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对，可特异性有效检测Hsa_circ_0001707。

附图说明

图1为特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对与Hsa_circ_0001707的相对位置示意图(左)，DNA水平胶电泳示意图(中)，SANGER测序鉴定图(右)。

图2为74对食管鳞癌组织(Tumor)和邻近癌旁正常组织(Normal)组织芯片荧光原位杂交图。

图中：T1为癌症侵犯黏膜固有层；T2为癌侵犯固有肌层；T3为癌症侵犯外膜；T4为癌侵入局部结构；N0为无区域淋巴结转移；N1为涉及1-2个区域淋巴结转移；N2为涉及3-6个区域淋巴结转移；N3为涉及7个或以上区域淋巴结转移。

图3为74对食管鳞癌组织(Tumor)和邻近癌旁正常组织(Normal)的Hsa_circ_0001707不同分期统计散点图(图3A至图3D)，ROC曲线图(图3E)和其中58例的生存曲线图(图3F)。

图4为食管鳞癌病人成对的食管鳞癌组织、癌旁正常组织以及淋巴结组织中Hsa_circ_0001707的相对表达量散点图与风琴图。

图5为食管正常上皮细胞和食管鳞癌细胞系中Hsa_circ_0001707的相对表达量柱状图：

图6为Hsa_circ_0001707过表达后细胞系肿瘤功能学实验对比结果图。

图中：A是KYSE-410和KYSE-30划痕实验结果，图B为KYSE-30transwell实验结果，图C为KYSE-410transwell实验结果。

图7为Hsa_circ_0001707在裸鼠成瘤实验结果与肿瘤体积大小统计结果图。

图中：图A为过表达Hsa_circ_0001707的KYSE-30和KYSE-410裸鼠成瘤实验结果，图B为瘤体体积图，图C为瘤体体积统计图。

具体实施方式

下面结合实验例对本发明的技术方案作进一步描述，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的试剂与材料，若无特殊说明，均为普通市售产品。

实施例内容是经过山东大学第二医院医学伦理委员会批准，所有病例都得到了患者的知情同意。

试剂：Hsa_circ_0001707筛查引物由生工生物工程(上海)股份有限公司青岛项目部合成；Trizol试剂(货号DP424)、lncRNA cDNA第一链合成试剂盒(KR202)、Nuclease-FreeWater(货号251D)、荧光原位杂交试剂盒(货号F26501)，荧光定量检测试剂盒(货号FP402)购自TIANGEN；氯仿(货号20100927)购自北京化工；异丙醇(货号120503D)购自西陇化工；乙醇(货号101860)购自北化经销。

本发明人利用GEO数据库(GSE130078)对ESCC及癌旁正常组织(各23例)中circRNA表达谱检测，ESCC与癌旁正常组织相比，发现39个差异表达基因(Log2Fold change>2，pvalue<0.05)，其中Hsa_circ_0001707是在ESCC组织中表达升高变化最明显的circRNA。另外，通过提取16对ESCC和癌旁蜡块组织中circRNA验证发现Hsa_circ_0001707在ESCC组织中表达升高，与公共数据库表达水平一致我们预测，Hsa_circ_0001707中具有潜在的促进癌症发展进程的功能。Hsa_circ_0001707作为起源于ABCA13基因的circRNA，长427bp，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，位于人类七号染色体48541721-48542148，ABCA13是其母基因。

实施例1、特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对

特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对由生工生物工程(上海)股份有限公司青岛项目部合成，引物对的核苷酸序列如下：

上游引物F：5’-ACAGCAGTGTTCTTTTGGCA-3’(SEQ ID NO.2)，

下游引物R：5’-ACATCTGGTCTCCCATCTCG-3’(SEQ ID NO.3)，

其中，上述引物对与Hsa_circ_0001707的相对位置如图1(左)所示。

以Hsa_circ_0001707为模板，采用上游引物F和下游引物R进行PCR扩增，验证引物对的准确性，实验方法如下：

1)RNA提取

将KYSE-410细胞接种于2cm细胞培养皿中，加入1mL Trizol试剂室温混匀后静置裂解5-10min。收集于1.5mL的RNase-Free离心管中，加入200μL氯仿试剂，涡旋振荡15-30s，静置2-3min后，在13000rpm、4℃下离心15min。小心移取上清400μL转移至新1.5mL的RNase-Free离心管中并加入400μL异丙醇，室温沉淀10min后，，在13000rpm、4℃下离心15min，小心弃掉上清，保留沉淀。预冷的75％乙醇洗涤沉淀，5000rpm离心5min，重复75％乙醇洗涤一遍，弃洗涤液，通风橱晾干10-15min，30μLRNase-free水溶解。Nanodrop测算所得粗提液的OD值以及浓度。

2)cDNA逆转录

首先，配制DNA去除体系混合物：1μg RNA加入5×gDNA buffer 2μL到0.2mLPCR管中，加入RNase-freeWater补充至10μL，彻底混匀后，简短离心，置于42℃孵育3min，快速放在冰上2min。

采用lncRNA cDNA第一链合成试剂盒进行cDNA逆转录，反应体系如下：

在42℃孵育15min，95℃孵育3min，4℃保温，得cDNA。

3)PCR获取Hsa_circ_0001707扩增产物

PCR的反应体系如下：

PCR程序如下：

94℃2min；94℃30s，65℃30s，72℃30s，30个循环；72℃8min；4℃保持。

4)琼脂糖凝胶电泳及核酸胶回收

配置2％琼脂糖凝胶于TAE缓冲液中，取5μL上述PCR产物样品加入DNA上样缓冲液，120V进行电泳，电泳结果如图1(中)所示。再将PCR产物样品在紫外切胶仪上进行切割，目的片段长度185bp，之后使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(TIANGENDP219-02)进行胶回收，所得核酸产物于通风橱晾干10-15min，无酶水溶解。Nanodrop测算所得粗提液的OD值以及浓度，接着进行SANGER测序验证，测序结果如图1(右)所示。

实施例2、检测Hsa_circ_0001707基因在食管鳞癌组织和癌旁正常组织中的表达

本实施例取74例食管鳞癌病人的食管鳞癌组织和癌旁正常组织石蜡切块，由山东大学第二医院胸外科提供，制成组织芯片。

1)组织芯片RNA荧光原位杂交探针设计

荧光素标记的单链核酸为荧光原位杂交探针，序列如下：

5'-ACATTTTCTCATTCAGTAATAGGGCTGGAAGTTGAAGGCC-3'(SEQ ID NO.4)，在探针的5'端标记有Cy3荧光报告基团。本荧光原位杂交探针是按照碱基互补配对原则与待检测基因Hsa_circ_0001707进行特异性结合，从而进行定性和定量分析。

2)荧光原位杂交方法按照荧光原位杂交试剂盒进行，具体方法如下：

①脱蜡：将食管鳞癌组织和癌旁正常组织的石蜡切片在60℃烤箱中预热30min，将切片在二甲苯Ⅰ、Ⅱ中放置10min，在梯度酒精(100％、95％、90％、80％、70％)中室温孵育各10min，PBS洗切片两次，每次2min。

②蛋白酶处理：将蛋白酶K稀释预热至37℃，每张切片滴加100μL蛋白酶K稀释溶液，37℃孵育20min；每张切片滴加100μL的2×Buffer C溶液，在室温下洗切片3次，每次1min；梯度酒精(70％、80％、90％、100％)脱水，每次2分钟，空气中干燥。

③变性：在78℃下预热变性液，每张切片滴加100μL预热变性液，78℃孵育8min；梯度酒精(70％、80％、90％、100％)脱水，每次2min，空气中干燥。

④杂交：稀释荧光原位杂交探针，配制探针混合液，预热变性5min，准备湿盒，在切片上滴加100μL探针混合液，在湿盒中37℃孵育12～16小时。

⑤清洗：在43℃预热杂交后水洗，吸弃杂交溶液，每张切片滴加100μL的2*Buffer(预热至37℃)清洗两次，每次10min，再用PBS缓冲液清洗一次，时间为10min。

⑥细胞核染色：每张切片加100μL稀释后的DAPI工作液，在室温下避光孵育20min，吸弃DAPI工作液，PBS缓冲液清洗切片两次，每次2min，滴加抗猝灭剂，盖上盖玻片，于荧光显微镜下观察，观察结果如图2所示。

以上74对食管鳞癌组织(Tumor)和邻近癌旁正常组织(Normal)的Hsa_circ_0001707不同分期统计散点图如图3A至图3D所示，不同分期的ROC曲线图如图3E所示，其中58例的生存曲线图如图3F所示。

图3A至图3D结果表明食管鳞癌组织相对于癌旁正常组织Hsa_circ_0001707表达量显著增加并随临床分期由早到晚表达量升高。

图3E中Normal_Cancer ROC曲线AUC为0.8519，特异性为85.86％，敏感性74.32％；淋巴结转移ROC曲线AUC为0.7838，特异性为85.71％，敏感性65.85％；Ⅰ+Ⅱ_Ⅲ+ⅣROC曲线AUC为0.8574，特异性为86.67％，敏感性75.00％；T1+T2_T3+T4ROC曲线AUC为0.6928，特异性为77.78％，敏感性52.94％；Survive_Dead ROC曲线AUC为0.8131，特异性为81.82％，敏感性72.22％；曲线结果表明在对食管鳞癌患者血浆中Hsa_circ_0001707具有较好的诊断价值。

图3F结果表明，低表达Hsa_circ_0001707患者的生存率在60个月内从100％降低至80％，而高表达Hsa_circ_0001707患者的生存率在在20个月内从100％降低至50％，在20～60个月内降低至30％，因此Hsa_circ_0001707可以用于判断食管鳞癌的预后情况。

实施例3、检测Circ-0001707基因在食管鳞癌组织和癌旁正常组织以及淋巴结中的表达

本实施例取10对食管鳞癌病人成对的食管鳞癌组织、癌旁正常组织，以及另外3例食管鳞癌病人成对的食管鳞癌组织、癌旁正常组织以及淋巴结组织的石蜡包埋组织样品，由山东大学第二医院病理科提供。

1)RNA提取

使用石蜡包埋组织切片总RNA提取试剂盒(TIANGEN DP439)提取总RNA。将石蜡样品切成5-10μm厚的片状。然后迅速将2-8张石蜡切片置于1.5ml的RNase-Free离心管中，加入1mL二甲苯，剧烈涡旋10sec。在室温，12000rpm下离心2min，吸除上清，加入1ml无水乙醇于沉淀中，涡旋混匀。在室温，12000rpm下离心2min，吸除上清，打开管盖，室温放置10min直至残余的乙醇挥发完全。加入200μL裂解液RF以及10μL的Proteinase K于沉淀中，彻底涡旋混匀。在55℃下孵育15min之后，继续在80℃下孵育15min，在室温，12000rpm下离心5min，转移上清入新的RNase-Free离心管中。加入220μL的缓冲液RB，涡旋混匀。加入660μL的无水乙醇，涡旋混匀(可能会出现沉淀)。

转移700μL溶液和沉淀至吸附柱CR3中(吸附柱放在收集管中)，在室温，12000rpm下离心1min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。重复上一步骤，直到所有的溶液和沉淀完全通过吸附柱CR3，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。向吸附柱CR3中央加入80μL的DNase I工作液，室温放置15min。继续向吸附柱CR3中加入500μL去蛋白液RW1，在室温，12000rpm下离心30-60sec，弃废液，将吸附柱放回收集管中。向吸附柱CR3中加入500μL漂洗液RW(使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置2min，在12000rpm下离心30-60sec，弃废液，将吸附柱CR3放回收集管中。重复上一步骤。然后在室温，12000rpm下离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR3置于室温放置5～10min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱CR3转入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-100μL的RNase-Free ddH₂O，室温放置2min，在12000rpm下，离心2min，得到RNA溶液。Nanodrop测算所得粗提液的OD值以及浓度。

2)cDNA逆转录

在42℃孵育15min，95℃孵育3min，4℃保温，得cDNA。

3)qRT-PCR检测Circ-0001707基因表达量

采用荧光定量检测试剂盒进行qRT-PCR，检测Circ-0001707基因表达量，qRT-PCR的反应体系如下：

离心机1000rpm离心1min；将样品放置入qRT-PCR仪(QuantStudio 3)中运行，qRT-PCR程序如下：

95℃3min；95℃15s，55℃30s，72℃30s，40个循环。

检测结果如图4所示，实验结果表明Hsa_Circ-0001707在有淋巴结转移的食管鳞癌病人中，食管鳞癌组织、淋巴结组织中与癌旁正常组织中的表达差异较大，食管鳞癌组织和淋巴结组织相对于癌旁正常组织Hsa_Circ-0001707表达量显著增加。

实施例4、检测Hsa_circ_0001707基因在食管正常细胞和食管鳞癌细胞系中的表达

本实施例取人正常食管上皮细胞系HEEC、HET-1A，食管鳞癌细胞系KYSE-30、KYSE-150、KYSE-410、KYSE-510细胞。

1)RNA提取

将6株细胞分别接种于2cm细胞培养皿中，加入1mL Trizol试剂室温混匀后于冰上静置裂解5-10min。收集于1.5mLRNase-Free离心管中，加入200μL氯仿试剂，涡旋振荡15-30s，静置2-3min。13000rpm、4℃离心15min。小心移取上清400μL转移至新的RNase-Free1.5mL离心管中并加入400μL异丙醇，室温沉淀10min。13000rpm、4℃离心15min，小心弃掉上清，保留沉淀。预冷的75％乙醇洗涤沉淀，5000rpm离心5min，重复75％乙醇洗涤一遍，弃洗涤液，通风橱晾干10-15min，RNase-free水溶解。Nanodrop测算所得粗提液的OD值以及浓度。

2)cDNA逆转录

42℃孵育15min，95℃孵育3min，4℃保温，得cDNA。

3)qRT-PCR检测Hsa_circ_0001707基因表达量

采用荧光定量检测试剂盒进行qRT-PCR，检测Hsa_circ_0001707基因表达量，qRT-PCR的反应体系如下：

95℃3min；95℃15s，55℃30s，72℃30s，40个循环。

检测结果如图5所示，实验结果表明由实施例1中SEQ ID NO.2以及SEQ ID NO.3引物对Hsa_circ_0001707进行qRT-PCR后，与正常食管上皮细胞系相比，食管鳞癌细胞系中Hsa_circ_0001707的表达量显著增加。

实施例5、Hsa_circ_0001707基因在体外中促进细胞迁移浸润

本实施例取人食管鳞癌细胞系KYSE-30和KYSE-410细胞进行细胞划痕实验和transwell实验。

细胞划痕实验：

1)在六孔板中接种KYSE-30和KYSE-410每孔各2×10⁵个细胞，每孔总体积为2mL，大约48h后细胞可以铺满；

2)用枪头在培养孔底划横线，吸去培养上清，用PBS洗2-3次，去除划下的细胞，每孔加入2mL无血清或低血清培养基；

3)放入培养箱中培养，按0h、6h、12h取样拍照,观察细胞迁移性的变化。

本实验的结果如图6A所示。

transwell侵袭实验：

1)基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8稀释(可以直接用无血清的培养基稀释)，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃孵箱1-4h使Matrigel聚合成凝胶；

2)制作细胞悬液:细胞饥饿12～24h，然后消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1～2遍，用无血清培养基重悬；

3)接种细胞：向Transwell小室中加入200μL细胞悬液，调整细胞个数为5×10⁴，下室加入600μL含15％FBS的培养基常规培养24h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。

4)固定染色：取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS缓冲液洗2遍，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，甲醇或者甲醛固定30分钟，将小室适当风干，用0.1％结晶紫染色30～60min，用PBS缓冲液洗3遍。用棉签轻轻擦掉上室水分。

5)拍照。

本实验的结果如图6B和图6C所示。

以上实验结果表明Hsa_circ_0001707过表达后的细胞恶性程度显著增加，可以根据Hsa_circ_0001707的表达水平判断食管鳞癌的预后情况。

实施例6、Hsa_circ_0001707在体内促进裸鼠成瘤能力

将过表达Hsa_circ_0001707的KYSE-30细胞进行裸鼠成瘤实验，验证Hsa_circ_0001707成瘤能力。

裸鼠成瘤实验：

1)裸鼠成瘤：将裸鼠(4-6周龄雌鼠)随机分组，每组选用6只。收集对数生长期的各组KYSE-30细胞与过表达Hsa_circ_0001707的KYSE-30制备细胞悬液，将5.0×10⁶个细胞接种于裸鼠右腋侧皮下，每天观察接种处有无红肿破溃，以肿瘤直径0.5cm为成瘤。

2)瘤体的测量及获取：6-7周后，脱颈处死裸鼠，完整剥离瘤体并称重统计。

本实验的结果如图7所示。

以上实验结果表明Hsa_circ_0001707有显著促进裸鼠成瘤的能力，因此对Hsa_circ_0001707的表达水平进行检测具有较好的食管鳞癌诊断价值。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东大学第二医院

<120> 人 Hsa_circ_0001707在食管鳞癌中的应用及试剂盒

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 427

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

attactgaat gagaaaatgt attatgaaaa cttccaggag agggtctggc acgttgggga 60

attactaact acaggagcag tcaatcattt caccagcgag atgggagacc agatgtactc 120

tcgcctccta gatgaaaacc ctaaaagaat gacacaaatc caggaaatgt gctaaaatga 180

agggcaataa attcataaca gaagaactag gatacagaaa gcaaatatga gaacactgtt 240

tttaatcttt cagcagtgac tgtcatggtt taaggtaaga aaaggtattt atgcgacttg 300

atcaaataaa gatccaacct tggtagttta atattttatt attgagctcc ccacagaaac 360

agcagtgttc ttttggcagc ttttcactga agaatgaata gaacagaggc cttcaacttc 420

cagccct 427

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

acagcagtgt tcttttggca 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

acatctggtc tcccatctcg 20

Claims

1.人Hsa_circ_0001707在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用中Hsa_circ_0001707为食管鳞癌的生物标志物。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Hsa_circ_0001707的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞癌诊断产品用于食管鳞癌的诊断，或鉴别食管鳞癌的良恶性，或判断食管鳞癌的预后情况。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞癌诊断产品包括特异性识别Hsa_circ_0001707的物质；

所述特异性识别Hsa_circ_0001707的物质选自特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对；

所述特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ IDNO.3所示的下游引物。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管鳞癌诊断产品的检测样本选自组织、血浆或血清。

7.特异性识别Hsa_circ_0001707的物质在制备食管鳞癌诊断产品中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述特异性识别Hsa_circ_0001707的物质选自特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对；

9.一种食管鳞癌诊断试剂盒，所述试剂盒包括特异性识别Hsa_circ_0001707的物质和荧光原位杂交探针。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性识别Hsa_circ_0001707的物质选自特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对；

优选的，所述特异性扩增Hsa_circ_0001707的引物对为SEQ ID NO.2所示的上游引物和SEQ ID NO.3所示的下游引物；

优选的，所述荧光原位杂交探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

优选的，所述试剂盒还包括实时荧光定量PCR的检测试剂。