CN113957020A - 一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用，所述烟草育苗菌剂包括：体积比为(1～3)：(1～3)的Bacillus velezensis EM‑1和Pseudomonas rhodesiae MTD4‑1，其中，所述Pseudomonas rhodesiae MTD4‑1的保藏编号为CGMCC NO.20079；所述Bacillus velezensis EM‑1的保藏编号为CGMCC NO.21131；体积比为(1～3)：(1～3)的Bacillus velezensis EM‑1和Pseudomonas rhodesiae MTD4‑1，混匀后添加到育苗基质中有效提升色素含量并促进烟苗根系和茎秆发育。

Description

一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及肥料技术领域，特别涉及一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用。
背景技术
烟草育苗是烟草生产过程中的关键环节，出苗率高，烟苗整齐、健壮、抗性好，苗龄适宜，是获得高效、优质、适产、低成本烟叶的前提条件。供应适量的养分及微量元素， 加强烟草育苗养分管理，是促进烟苗生长发育，培育壮苗，提高烟苗抗性的关键。目前， 为了让烟苗更好的生长，农户多是采用农药或化肥，这不仅仅是造成了农药的过渡使用， 往往效果也不理想。因此，迫切需要开发一种新的烟草育苗菌剂。
发明内容
本发明目的是提供一种烟草育苗菌剂及其制备方法与应用，该烟草育苗菌剂可以有效 提升烟苗叶片色素含量，促进烟苗根和茎的发育。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
在本发明的第一方面，提供了一种烟草育苗菌剂，其特征在于，包括：体积比为(1～3)： (1～3)的Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其中，所述 Pseudomonas rhodesiae MTD4-1的保藏编号为CGMCC NO.20079；所述Bacillusvelezensis EM-1的保藏编号为CGMCC NO.21131；
进一步地，Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1的体积比为1：1。
在本发明的第二方面，提供了所述烟草育苗菌剂的制备方法，所述方法包括：
将冷冻保存的菌株Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1分别接种 至NA固体培养基上培养，后转接至NB液体培养基上进行活化，获EM-1活化菌液和 MTD4-1活化菌液；
取所述EM-1活化菌液和MTD4-1活化菌液分别以1％的接种量接种到新的NB培养基中，振荡培养，获得EM-1菌液和MTD4-1菌液；
将所述EM-1菌液和所述MTD4-1菌液以体积比为(1～3)：(1～3)混匀，获得烟草 育苗菌剂。
进一步地，所述NA培养基的配方为：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L， 琼脂粉20.0g/L。
进一步地，所述NB培养基的配方为：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L。
在本发明的第三方面，提供了所述烟草育苗菌剂在有效提升烟苗叶片色素含量并促进 根和茎的发育中的应用。
进一步地，所述应用中，将(1～3)×107cfu/g的Bacillus velezensis EM-1和(1～3)× 107cfu/g的Pseudomonas rhodesiae MTD4-1混匀后添加到育苗基质中。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
本发明提供的一种烟草育苗菌剂为体积比为(1～3)：(1～3)的BacillusvelezensisEM-1 和Pseudomonas rhodesiaeMTD4-1，混匀后添加到育苗基质中有效提升烟苗叶片色素含量并 促进根和茎的发育。
本发明的Bacillus velezensisEM-1的保藏日期为2020年11月9日，保藏编号为CGMCC NO.21131。其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，保藏单位名称为中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编： 100101。
本发明的Pseudomonas rhodesiaeMTD4-1的保藏日期为2020年6月15日，保藏编号为CGMCC NO.20079。其分类命名为Pseudomonas rhodesiae，保藏单位名称为中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的 附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领 域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附 图。
图1为五叶一心时期茎高；
图2为五叶一心时期茎直径；
图3为成苗期茎高；
图4为成苗期茎直径。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本发明，本发明的优点和各种效果将由 此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本发 明，而非限制本发明。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使 用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域 技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市 场购买获得或者可通过现有方法获得。
下面将结合实施例、对比例及实验数据对本申请的一种烟草育苗菌剂及其制备方法与 应用进行详细说明。
实施例1
1、一种烟草育苗菌剂，包括体积比为1：1的Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其中，所述Pseudomonas rhodesiae MTD4-1的保藏编号为CGMCC NO. 20079；所述Bacillus velezensis EM-1的保藏编号为CGMCC NO.21131；具体地，Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1分别为107cfu/g。
2、一种预防细菌性角斑病或病毒病的方法，所述方法包括：
步骤S1：将冷冻保存的菌株EM-1和MTD4-1接种至NA固体培养基上，置于28℃培 养箱培养48h，转接至NB液体培养基上进行活化。
步骤S2：取新鲜的菌液以1％的接种量接种到新的NB培养基中，28℃，180rmp/min振荡培养24h。
步骤S3：将107cfu/g的Bacillus velezensis EM-1和107cfu/g的Pseudomonasrhodesiae MTD4-1混匀后添加到育苗基质中。
实施例2
1、一种烟草育苗菌剂，包括体积比为1：3的Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其中，所述Pseudomonas rhodesiae MTD4-1的保藏编号为CGMCC NO. 20079；所述Bacillus velezensis EM-1的保藏编号为CGMCC NO.21131；具体地，Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1分别为107cfu/g。
2、一种预防细菌性角斑病或病毒病的方法，所述方法包括：
步骤S1：将冷冻保存的菌株EM-1和MTD4-1接种至NA固体培养基上，置于28℃培 养箱培养48h，转接至NB液体培养基上进行活化。
步骤S2：取新鲜的菌液以1％的接种量接种到新的NB培养基中，28℃，180rmp/min振荡培养24h。
步骤S3：将107cfu/g的Bacillus velezensis EM-1和3×107cfu/g的Pseudomonasrhodesiae MTD4-1混匀后添加到育苗基质中。
实施例3
1、一种烟草育苗菌剂，包括体积比为3：1的Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其中，所述Pseudomonas rhodesiae MTD4-1的保藏编号为CGMCC NO. 20079；所述Bacillus velezensis EM-1的保藏编号为CGMCC NO.21131；具体地，Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1分别为107cfu/g。
2、一种预防细菌性角斑病或病毒病的方法，所述方法包括：
步骤S1：将冷冻保存的菌株EM-1和MTD4-1接种至NA固体培养基上，置于28℃培 养箱培养48h，转接至NB液体培养基上进行活化。
步骤S2：取新鲜的菌液以1％的接种量接种到新的NB培养基中，28℃，180rmp/min振荡培养24h。
步骤S3：将3×107cfu/g的Bacillus velezensis EM-1和107cfu/g的Pseudomonasrhodesiae MTD4-1混匀后添加到育苗基质中。
对比例1
该对比例1中只使用Bacillus velezensis EM-1，其他均同实施例1。
对比例2
该对比例2中只使用Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其他均同实施例1。
实验例1
本研究通过向育苗基质中添加不同菌剂，根据烟苗农艺性状、根系发育情况筛选可用 于实际生产的菌剂以用于营养体研发。
1、试验设计
试验于米易黄龙村进行，试验共设3个处理，对照CK(育苗基质添加同等量的水)、对比例1(育苗基质添加107cfu/g菌剂Bacillus siamensis EM-1)、对比例2(育苗基质添加107cfu/g菌剂Pseudomonas rhodesiae MTD4-1)。菌剂稀释50倍使用，菌剂和基质混合均匀后装入育苗盘，每个处理3个重复。
2、试验调查
于五叶一心和成苗期调查叶片色素含量、苗高、茎直径、根干重、根系构型及根系活 力。
3、试验结果
3.1微生物菌剂对烟苗色素含量的影响
表1五叶一心期烟苗叶片色素含量(mg/g)
Figure BDA0003395809910000041
Figure BDA0003395809910000051
由表1可知，五叶一心时的烟苗叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素均为实施例1、2、3显著大于对比例1、2和CK，对比例1、2显著大于CK；实施例之间差异不显著，对比例 之间差异不显著。烟苗总叶绿素对比例2和实施例1、2、3显著大于对比例1和CK，对比 例1显著大于CK。因此，在育苗基质中添加一种菌剂可以显著提升五叶一心时烟苗的色素 含量，两种菌剂配施比单独添加一种菌剂效果更好。
表2成苗期烟苗叶片色素含量(mg/g)
Figure BDA0003395809910000052
由表2可知，成苗期实施例1、2、3烟苗叶片叶绿素a和总叶绿素含量显著大于对比例 1、2和CK，对比例1和2显著大于CK；实施例和对比例之间差异不显著；实施例1、2、 3烟苗叶片叶绿素b和类胡萝卜素显著大于对比例1和CK，对比例1和2显著大于CK； 对比例2和实施例1、2、3之间差异不显著。因此，在育苗基质中添加一种菌剂可以显著 提升成苗期烟苗的色素含量，两种菌剂配施比单独添加一种菌剂效果更好。
3.2微生物菌剂对烟苗茎发育的影响
由图1可知，五叶一心时，实施例1、2、3茎高显著高于对比例1、2和CK，对比例1 和2显著高于CK，对比例之间、实施例之间差异不显著。
由图2可知，五叶一心时，实施例1、2、3茎直径显著高于对比例1、2和CK，对比 例1和2显著高于CK，对比例之间、实施例之间差异不显著。
由图3可知，成苗期，实施例1、2、3茎高显著高于对比例1、2和CK，对比例1和2 显著高于CK，对比例之间、实施例之间差异不显著。
由图4可知，成苗期，实施例1、2、3茎直径显著高于对比例1、2和CK，对比例1 和2显著高于CK，对比例之间、实施例之间差异不显著。
3.3微生物菌剂对烟苗根系发育的影响
表3五叶一心期烟苗根系发育情况
Figure BDA0003395809910000053
Figure BDA0003395809910000061
由表3可知，在五叶一心时期，与CK相比，对比例1、2，实施例1、2、3的根干重 显著大于CK；对比例1、2和实施例1、2、3之间差异不显著。实施例1、2、3总根长、 根总表面积、平均直径、根总体积显著大于对比例1、2和CK，对比例1和2显著大于CK； 对比例1、2之间，实施例1、2、3之间差异不显著。实施例1、2、3根系活力显著大于对 比例1和CK，对比例1显著大于CK；对比例2和对比例1、实施例1、2、3之间差异不 显著，对比例1、2之间差异不显著。
表4成苗期烟苗根系发育情况
Figure BDA0003395809910000062
由表4可知，成苗期实施例1、2、3的根干重、总根长、平均直径、根总体积和根系 活力显著大于对比例1、2和CK；对比例1、2显著大于CK；实施例1、2、3之间，对比 例1、2之间差异不显著。根总表面积实施例1、2、3和对比例2显著大于对比例1、对比 例1显著大于CK，实施例1、2、3和对比例2之间差异不显著。
4.小结
与对照相比，在育苗基质中添加EM-1菌剂和MTD4-1菌剂可以显著促进烟苗五叶一心 和成苗期根和茎的发育并促进叶片色素合成；EM-1菌剂和MTD4-1菌剂以体积比为(1～3): (1～3)混匀作为菌肥，在该体积比范围内EM-1菌剂和MTD4-1菌剂相互不会产生制约的负影响，而且能结合两者的优势。在育苗基质中，按(1～3):(1～3)比例混合，可以进一 步促进烟苗五叶一心和成苗期根和茎的发育并促进叶片色素合成。
最后，还需要说明的是，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的 包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还 包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的 要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概 念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选 实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和 范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内， 则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (7)

1.一种烟草育苗菌剂，其特征在于，包括：体积比为(1～3)：(1～3)的Bacillusvelezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1，其中，所述Pseudomonas rhodesiaeMTD4-1的保藏编号为CGMCC NO.20079；所述Bacillus velezensis EM-1的保藏编号为CGMCC NO.21131。
2.根据权利要求1所述的一种烟草育苗菌剂，其特征在于，包括：体积比为1：1的Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1。
3.一种权利要求1-2任一项所述烟草育苗菌剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
将冷冻保存的菌株Bacillus velezensis EM-1和Pseudomonas rhodesiae MTD4-1分别接种至NA固体培养基上培养，后转接至NB液体培养基上进行活化，获EM-1活化菌液和MTD4-1活化菌液；
取所述EM-1活化菌液和MTD4-1活化菌液分别以1％的接种量接种到新的NB培养基中，振荡培养，获得EM-1菌液和MTD4-1菌液；
将所述EM-1菌液和所述MTD4-1菌液以体积比为(1～3)：(1～3)混匀，获得烟草育苗菌剂。
4.根据权利要求3所述的所述烟草育苗菌剂的制备方法，其特征在于，所述NA培养基的配方为：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂粉20.0g/L。
5.根据权利要求3所述的所述烟草育苗菌剂的制备方法，其特征在于，所述NB培养基的配方为：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏3.0g/L，氯化钠5.0g/L。
6.权利要求1-2任一项所述烟草育苗菌剂在有效提升烟苗叶片色素含量并促进烟苗根和茎的发育中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用中，将(1～3)×107cfu/g的Bacillus velezensis EM-1和(1～3)×107cfu/g的Pseudomonas rhodesiae MTD4-1混匀后添加到育苗基质中。
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