CN113943742B - 一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用 - Google Patents

一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物基因工程技术领域，具体公开了一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24，核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明还公开了基因DcCIPK24编码的蛋白激酶，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。本发明还公开了一种植物表达载体，以及基因DcCIPK24在提高植物耐旱性和耐盐性中的应用。本发明通过转化单个基因DcCIPK24可同时提高植物耐旱性和耐盐性，对于通过构建转基因植株来提高植物耐旱性和耐盐性提供了分子生物学原理上的支撑，为植物的抗性改良提供基因资源，在培育出具有优良抗性的植物方面具有良好的应用前景。

Description

一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用
技术领域
本发明属于生物基因工程技术领域，尤其涉及一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24 及其应用。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium catenatum Lindl.)是兰科石斛属多年生草本植物，主要化学成分为多糖、生物碱、芪类和氨基酸等，有增强免疫、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、解热等药理作用，是中国传统名贵珍稀中药材，市场需求和市场价值高。
以往报道的研究大多集中于单个基因提高植物的单一抗性，例如申请公开号为CN111500604A 的中国发明专利申请公开了铁皮石斛DcCSLA8基因及其在促进植物多糖的合成中的应用，铁皮石斛 DcCSLA8基因可促进植物多糖的合成。
目前通过转化一个基因来提高植物的多种抗性的报道较少，进一步寻找并且研究能够提高植物多种抗性的单个基因，在培育出具有优良抗性的植物方面具有良好的应用前景。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用，以解决上述技术问题。
本发明的目的之一在于提供：一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24，核苷酸序列为 SEQ ID NO:1。
本发明的目的之二在于提供：基因DcCIPK24编码的蛋白激酶，氨基酸序列为SEQID NO:2。
本发明的目的之三在于提供：一种植物表达载体，包括可提高植物耐旱性和耐盐性的基因 DcCIPK24。
本发明的目的之四在于提供：上植物表达载体的构建方法，将基因DcCIPK24连接到 pCAMBIA1300载体的Sal I和Kpn I之间。
本发明的目的之五在于提供：基因DcCIPK24在提高植物耐旱性和耐盐性中的应用。
优选地，所述植物为拟南芥。
本发明的有益效果在于：
本发明从铁皮石斛中克隆得到蛋白激酶基因DcCIPK24。构建含有基因DcCIPK24的植物表达载体，转化到模式植物拟南芥中发现该基因不仅能提高拟南芥的耐旱性，还可以提高拟南芥的耐盐性。本发明通过转化单个基因可同时提高植物耐旱性和耐盐性，对于通过构建转基因植株来提高植物耐旱性和耐盐性提供了分子生物学原理上的支撑，为植物的抗性改良提供基因资源，在培育出具有优良抗性的植物方面具有良好的应用前景。
附图说明
图1为采用电泳检测铁皮石斛RNA的结果图，图中1-7分别为干旱胁迫处理根后0、3、6、9、 12、24、48h的RNA样品；
图2为采用琼脂糖凝胶电泳检测产物DcCIPK24基因的结果图，图中M为DL2000marker；
图3中A为CIPK24蛋白激酶的结构分析；图3中B为蛋白激酶的NAF/FISL保守结构域分析；
图4为干旱胁迫和盐胁迫下DcCIPK24基因的相对表达量；
图5中A为DcCIPK24构建到植物表达载体pCAMBIA1300的模式图；图5中B为转基因拟南芥的DNA检测，引物为DcCIPK24基因引物，WT为野生型拟南芥(未检测到DcCIPK24基因)， 1-12分别为不同的转基因株系，M为DL2000 marker；
图6为转基因拟南芥的抗逆性分析；图中，A为转基因拟南芥的抗逆性表型分析；B为正常条件和干旱处理12天后的野生型拟南芥和转基因拟南芥的鲜重；C为正常条件和盐处理12天后的野生型拟南芥和转基因拟南芥的鲜重。Control：对照，Drought：干旱处理，NaCl：200mM NaCl盐处理； WT：野生型拟南芥，OE-6：转DcCIPK24拟南芥株系6，OE-12：转DcCIPK24拟南芥株系12；
图7为处理前后转基因拟南芥的生理指标变化，图中，A为DAB染色图；B为NBT染色图；C 为干旱处理下植物叶片中的MDA含量；D为盐处理植物叶片中的MDA含量；WT为野生型拟南芥， OE-6为转DcCIPK24拟南芥株系6，OE-12为转DcCIPK24拟南芥株系12。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1-一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24
一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24，核苷酸序列为SEQ ID NO:1。
图3中A为CIPK24蛋白激酶的结构分析图，图3中B为蛋白激酶的NAF/FISL保守结构域图。如图3所示，该基因具有植物体丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶CIPK的保守结构域和NAF/FISL保守基元，因此基因DcCIPK24编码蛋白属于蛋白激酶，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
具体地，基因DcCIPK24通过以下步骤克隆获得：
S1、铁皮石斛总RNA的提取；
本实施例所用到的铁皮石斛选自云南广南种，以铁皮石斛组培苗作为实验材料，培养温度为 25℃，光照/黑暗时长为12h/12h。生长3个月后，分别用20％PEG8 000和200mMNaCl溶液模拟干旱胁迫和盐胁迫，选择长势一致、生长健壮的组培苗进行处理，在处理后0、3、6、9、12、24、 48h，分别随机取5株组培苗的根、茎、叶分别进行混合，放入液氮中速冻后置于-80℃冰箱中保存，以未处理的组培苗为对照。
总RNA提取采用植物总RNA提取试剂盒进行，具体购买自天根生化科技(北京)有限公司，目录号为DP432。具体步骤如下：
(1)匀浆处理：取50-100mg铁皮石斛样品于液氮中迅速研磨成粉末，加入500μL提前加入β- 巯基乙醇的裂解液SL，立即涡旋震荡混匀；12 000rpm离心2min；
(2)将上清液转移至过滤柱CS上，12 000rpm离心2min，吸取收集管中的上清液至新的 RNase-Free的离心管中；
(3)缓慢加入0.4倍体积的无水乙醇，混匀，将可能得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中， 12 000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；
(4)向吸附柱CR3中加入350μL去蛋白液RW1，12 000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；
(5)向吸附柱中CR3中央加入80μL DNaseⅠ工作液，室温放置15min；
配制DNaseⅠ工作液：取10μL DNaseⅠ储存液至新的RNase-Free的离心管中，加入70μL RDD 缓冲液，轻柔混匀；
(6)向吸附柱CR3中央加入350μL去蛋白液RW1，12 000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；
(7)向吸附柱CR3中加入500μL已提前加入无水乙醇的漂洗液RW2，12 000rpm离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中；
(8)重复步骤(7)一次；
(9)12 000rpm离心2min，将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加30-50μL RNase-Free ddH2O，室温放置2min，12 000rpm离心2min，得到铁皮石斛总 RNA溶液。
S2、铁皮石斛总RNA检测；
以干旱胁迫下根中的样品为例，对铁皮石斛总RNA进行电泳检测，检测结果如图1所示。
S3、合成cDNA第一链；
用TaKaRa公司的去基因组DNA的反转录试剂盒先将基因组DNA去除，再进行反转录。
去基因组DNA的反转录试剂盒购买自宝生物工程(大连)有限公司，货号为RR047A。
(1)基因组DNA的去除反应，具体反应体系如表1所示：
表1基因组DNA去除反应的反应体系
Figure BDA0003344703790000041
(2)反转录反应：
先在冰上预先配制Master Mix，每个反应10μL：
表2 Master Mix的反应体系
Figure BDA0003344703790000042
待(1)中反应结束后，将(2)中预先配好的混合液加入到(1)中的反应液中，共计20μL体系，混匀；反转录条件为：42℃，30min；85℃，5sec；结束后即得cDNA。
将反转录得到的cDNA做模板，设计DcCIPK24基因的全长引物，具体引物信息如下：
F(SEQ ID NO:3)：ATGGTTACGAGGAAAGTTG；
R(SEQ ID NO:4)：CTACATGTCCGTTTTCAGAATAC。
采用2×TaqMaster Mix进行扩增，获得了基因DcCIPK24，扩增后使用琼脂糖凝胶电泳检测产物，具体结果如图2所示。
2×TaqMaster Mix购买自南京诺唯赞生物科技有限公司，货号为P112。
实施例2-干旱胁迫和盐胁迫下DcCIPK24基因的表达
(1)设计DcCIPK24基因的荧光定量引物，引物具体信息如下：
DcCIPK24-qRT-F(SEQ ID NO:5)：GATGGCTGGCTATCTTCCTTTC；
DcCIPK24-qRT-R(SEQ ID NO:6)：GTACACGGGTTCTAGGATTTGGAT。
内标基因选用Actin基因，引物为：
F(SEQ ID NO:7)：TTGTGTTGGATTCTGGTGATGGTGT；
R(SEQ ID NO:8)：TTTCCCGTTCTGCTGTTGTTGTGAA。
荧光定量PCR采用TaKaRa公司SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)试剂盒(Code:DRR820A)，在ABI 7900HT Fast Real-Time PCR System仪器上运行，反应体系如下：
表3荧光定量PCR反应体系
Figure BDA0003344703790000051
实时荧光定量PCR反应条件：95℃预变性30sec，94℃变性5sec，60℃退火延伸30sec，45个循环，结束后读取荧光信号：95℃15sec，60℃15sec，95℃15sec，进行熔解曲线分析。
计算相对表达量：
采用比较CT法来计算目的基因的相对表达量，目的基因的相对表达量＝2-△△Ct，其中△△Ct＝(Ct 目的基因-Ct看家基因)实验组-(Ct目的基因-Ct看家基因)对照。实验结果设3个重复，取平均值进行作图分析。
(2)实验结果：
利用实时荧光定量PCR技术研究了干旱胁迫和盐胁迫下DcCIPK24基因的相对表达量，发现 DcCIPK24基因在这两种胁迫下均能上调表达，具体实验结果如图4所示。
实施例3-构建包含基因DcCIPK24的植物表达载体，并转化拟南芥
(1)构建包含基因DcCIPK24的植物表达载体，具体实验步骤如下：
以cDNA为模板，用表达载体构建引物扩增目的基因，引物具体信息如下：
DcCIPK24-1300-F SalI(SEQ ID NO:9)：ataGTCGACATGGTTACGAGGAAAGTTG；
DcCIPK24-1300-R KpnI(SEQ ID NO:10)：cggGGTACCCTACATGTCCGTTTTCAGAATAC。
为了便于连接，基因的上下游引物分别引入Sal I和Kpn I酶切位点。用2×TaqMaster Mix进行扩增，扩增产物经纯化、双酶切后，用T4 DNA连接酶(NewEngland Biolabs,M0202)连接到植物表达载体pCAMBIA1300上，获得重组质粒1300-DcCIPK24。2×Taq MasterMix购买自南京诺唯赞生物科技有限公司，货号为P112。
图5中A为DcCIPK24构建到植物表达载体pCAMBIA1300的模式图；图5中B为转基因拟南芥的DNA检测图。
(2)重组质粒转化农杆菌，具体实验步骤如下：
①制备农杆菌感受态细胞；
A、将农杆菌菌株GV3101在YEP+Rif(25μg/mL)平板上划线，30℃培养48h至菌斑出现；
B、用无菌枪头挑取单菌落于3mL YEP+Rif培养基中，30℃培养48h；
C、吸取上述菌液以2％的接种量接种到50mL YEP+Rif培养基中，至OD600＝0.4-0.6；
D、5 000r/min，4℃，离心10min；
E、去除上清后，重复4)一次；
F、用5mL预冷的0.2mol/L CaCl2溶液洗涤菌液，5 000r/min，4℃，离心10min；
G、重复步骤F一次，并彻底去上清；
H、用5mL等体积的0.02mol/L CaCl2溶液和40％甘油的混合物溶解沉淀，即得农杆菌感受态细胞，分装后放于-80℃备用。
②重组质粒转化农杆菌；
A、取制备好的GV3101农杆菌感受态细胞置于冰上，在超净工作台中加入5μL重组质粒 1300-DcCIPK24；
B、迅速放入液氮中冷冻5min，37℃热击5min，冰浴5min；
C、加入600μL YEP培养基，28℃振荡培养3-4h；
D、吸取上述菌液100μL涂于YEP+Rif(25μg/mL)+Kana(100μg/mL)的固体培养基上，30℃培养2-3d；
E、挑取单克隆，经菌液PCR鉴定后，扩大培养，保存菌液留待后续转化拟南芥。
(3)转化拟南芥，具体实验步骤如下：
①真空渗入法转化拟南芥；
A、将上述保存的菌液扩大培养至500mL YEP+Rif+Kana培养基中，28℃培养至OD600＝0.8-1.0；
B、收集农杆菌细胞，6 000r/min，离心10min，弃上清；
C、将农杆菌沉淀用真空渗透液(1×微量元素，1×B5有机，1×铁盐，0.5×大量元素，0.5×CaCl2， 5％蔗糖，10μg/mL 6-BA。转化前加入0.1％(V/V)的Tween 20以提高转化效率)溶解，并调整溶解的 OD600值1.0左右；
D、剪去生长1月左右的拟南芥sos1突变体中已开花的花序，浸入到渗透液中，真空抽15min，压强一般不超过0.085MPa；
E、取出拟南芥，将花盆平置于保湿、遮光的容器中，过夜放置；
F、将拟南芥移入21℃光照培养箱，长日照、相对湿度80％条件下培养。
②筛选拟南芥抗性苗；
A、取15-20mg拟南芥T1代种子于无菌1.5mL离心管中；
B、70％酒精杀菌3分钟(期间可振荡混匀)，10 000r/min离心1分钟，去上清，并用无菌水清洗3-4次；
C、10％次氯酸钠杀菌10分钟(期间可振荡混匀)，10 000r/min离心1分钟，去上清，并用无菌水清洗4-5次；
D、用移液枪将种子均匀平铺在MS+50μg/mL Hygromycin B培养基上；
E、春化处理：4℃处理2-4天，转到人工气候箱中培养(22℃，短日照：光照8h/d，光强4 000 LX)。
③转基因拟南芥的鉴定；
A、提取T3代拟南芥转基因苗叶片DNA；
B、以提取的基因组DNA为模板，进行PCR鉴定，鉴定引物同上述构建表达载体的引物(SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10)。
(4)将转基因拟南芥分别进行干旱胁迫和盐胁迫处理，具体实验步骤如下：
分别将春化后的转基因和野生型拟南芥种子点至1/2MS培养基上，放于人工气候箱中培养8天 (22℃，短日照：光照8h/d，光强4 000LX)，选取生长状态、大小一致的幼苗移入蛭石：营养土＝2： 1的混合基质中培养，30天后选取生长状态一致的野生型和转基因拟南芥成苗进行胁迫处理：
①对照组(Control组)：以正常培养的苗作为干旱和盐处理的对照，每5天浇一次水；
②干旱处理(Drought组)：不浇水；
③盐处理(NaCl组)：以200mMNaCl溶液代替浇水，处理期间每5天浇一次NaCl；
处理12天后，对正常条件、干旱处理和盐处理下的拟南芥进行拍照记录，并测量鲜重。
实验结果：
图6为转基因拟南芥的抗逆性分析，图6中A为转基因拟南芥的抗逆性表型分析图；图6中B 正常条件和干旱处理12天后的野生型拟南芥和转基因拟南芥的鲜重图；图6中C正常条件和盐处理 12天后的野生型拟南芥和转基因拟南芥的鲜重图。图中，WT为野生型拟南芥，OE-6为转DcCIPK24 拟南芥株系6，OE-12为转DcCIPK24拟南芥株系12。
如图6所示，发现转基因拟南芥在胁迫条件下仍能正常生长，而野生型拟南芥出现萎蔫，植株鲜重测定也发现转基因植株在干旱胁迫和盐胁迫下的鲜重高于野生型拟南芥，说明在胁迫条件下转基因植株长势较好。
(5)对正常生长和胁迫处理后的拟南芥进行生理指标测定
①采用3,3-二氨基苄胺(DAB)染色法测定植物中过氧化氢(H2O2)含量，步骤如下：
A、DAB染色液配制：称取45mg DAB粉末于50mL容量管中，加入45mL无菌水，使终浓度为1mg/mL(避光保存)；用0.2M HCl调pH＝3.0；加入25μL Tween 20和2.5mL 200mmol/L的Na2HPO4；
B、染色：分别剪取正常条件、干旱处理、盐处理下的野生型和转基因拟南芥叶片各3-5片，放入50mL离心管或大培养皿中，加入适量DAB染色液(保证染色液没过叶片)；抽真空5min；用锡伯纸包住离心管，80-100rpm震荡培养4-8h；
C、脱色：吸去染色液，换成漂白液(乙醇:乙酸:甘油＝3:1:1)；90-95℃沸水中放置15min，更换漂洗液，室温放置30min后即可观察。
②采用氯化硝基四氮唑蓝液(NBT)染色法测定超氧阴离子(O2 -)，具体步骤如下：
A、配制NBT染色液：称取61.3mg NBT粉末，溶于100mL蒸馏水即可；
B、染色：分别剪取正常条件、干旱处理、盐处理下的野生型和转基因拟南芥叶片各3-5片，放入50mL离心管或大培养皿中，加入适量NBT染色液(保证染色液没过叶片)；抽真空10min；用锡伯纸包住离心管，室温放置10-60min，期间可用80-100rpm转速震荡培养；
C、脱色：吸去染色液，换成漂白液(乙醇:乙酸:甘油＝3:1:1)；90-95℃沸水中放置15min，更换漂洗液，室温放置30min后即可观察。
③采用苏州科铭生物技术有限公司丙二醛(MDA)含量试剂盒(货号：BC0020)测定丙二醛(MDA) 含量，具体步骤如下：
A、制备样品：称取0.1g拟南芥叶片于研钵中，加入1mL提取液，在冰上充分研磨，8000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
B、测定：吸取0.6mL试剂一于1.5mL离心管中，加入0.2mL样本，混匀；95℃水浴保温30min，置于冰上冷却，10 000g，25℃离心10min；吸取上清液于1mL玻璃比色皿中，测定532nm和600 nm处的吸光度，记为A532和A600，△A＝A532-A600。
③含量计算方法：
MDA含量(nmol/g)＝[△A×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)＝25.8×△A÷W；
图7中 A为DAB染色图；图7中B为NBT染色图；图7中C为干旱处理下植物叶片中的MDA 含量图；图7中D为盐处理植物叶片中的MDA含量图；WT为野生型拟南芥，OE-6为转DcCIPK24 拟南芥株系6，OE-12为转DcCIPK24拟南芥株系12。
实验结果：发现转基因拟南芥在胁迫条件下被DAB和NBT染色较浅，说明胁迫后积累的H2O2与O2 -较少，即植株受损伤较轻(图7中A，7中B)，丙二醛含量测定也发现转基因植株在干旱胁迫和盐胁迫下积累的丙二醛含量较低(图7中C，7中D)，说明在胁迫条件下转基因植株受到的膜伤害较轻。
综上结果说明，DcCIPK24可以提高植物的耐旱性和耐盐性，对于通过构建转基因植株来提高植物耐旱性和耐盐性提供了分子生物学原理上的支撑，为植物的抗性改良提供基因资源，在培育出具有优良抗性的植物方面具有良好的应用前景。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
序列表
<110>海南大学
<120>一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用
<160>10
<170>Patentln version 3.5
<210>1
<211>1332
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>1
atggttacga ggaaagttgg caaatatgag gtcgggagaa ctattggaga gggtactttc 60
gctaaggtta agtttgcaag aaacaccgag actggagagg ccgttgcaat gaaagttctc 120
gcaaaaagca cgatcctgaa gcataggatg gtcaatcaga ttaggagaga aatttccatc 180
atgaaaatcg taagacatcc caacattgtc aggctgcatg aggttttggc tagcagcaca 240
aagatataca tcattctgga atttgtcact ggaggagaac tctttgataa aattgttcac 300
caaggaaagc ttcctgagaa tgaaaccagg caatattttc agcaacttat cgatgcggtt 360
gattattgtc atagtagggg tgtcttccac agggatttga agcctgagaa ccttcttctt 420
gattcccaag ggaacttgaa aatttcagat tttggcctaa gtgcattgcc tcagcagggg 480
gttggccttc ttcatacaac atgtggtacg ccaaattatg ttgcacctga ggtactcagc 540
caccaaggtt atgttggttc tgctgccgat gtgtggtcat gtggagtcat actttatgtt 600
ttgatggctg gctatcttcc tttcgaggag gctgatcttt caaccttata cagaaagatt 660
aatgcagctg aattttcttg tccttcatgg ttttctgctg gtgccaagtc attgatatgc 720
agaatccttg atccaaatcc tagaacccgt gtacatattg aaggaatacg aaatgatgta 780
tggttcacga ggaattatgt tcctgttaga tatagtgaag ctcaagaagt caatctggat 840
gacatccatg ctgtttttaa tgacattgag gatcagtttg taactgagca agtagagaac 900
agtgaacgtc gtcctcttat aatgaacgca tttgagatgt ttacgttgtc ccaagggctg 960
aatctttcag cattatttga cagacagcag gattatgtga agcggcaaac tcgttttgtc 1020
tcacgccatc ctgcaaaagc aattattgca aatattgaag cagtagcaga gtcctacaga 1080
cttaaggttc attcacagaa ttacaagatg agactagaag gagtttcacc gaacaagatg 1140
agccagtttg ctgttgtgct tgaggttttt gaagttgctc cttcactgtt catggtagat 1200
gttcggaagg ctgctgggga aactcttcag taccacaggt tctacaagaa tctctgtagt 1260
aagctggagc atattatttg gaaaccagca gatggagctg ataaatctgg tattctgaaa 1320
acggacatgt ag 1332
<210>2
<211>443
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>2
MVTRKVGKYE VGRTIGEGTF AKVKFARNTE TGEAVAMKVL AKSTILKHRM VNQIRREISI 60
MKIVRHPNIV RLHEVLASST KIYIILEFVT GGELFDKIVH QGKLPENETR QYFQQLIDAV 120
DYCHSRGVFH RDLKPENLLL DSQGNLKISD FGLSALPQQG VGLLHTTCGT PNYVAPEVLS 180
HQGYVGSAAD VWSCGVILYV LMAGYLPFEE ADLSTLYRKI NAAEFSCPSW FSAGAKSLIC 240
RILDPNPRTR VHIEGIRNDV WFTRNYVPVR YSEAQEVNLD DIHAVFNDIE DQFVTEQVEN 300
SERRPLIMNA FEMFTLSQGL NLSALFDRQQ DYVKRQTRFV SRHPAKAIIA NIEAVAESYR 360
LKVHSQNYKM RLEGVSPNKM SQFAVVLEVF EVAPSLFMVD VRKAAGETLQ YHRFYKNLCS 420
KLEHIIWKPA DGADKSGILK TDM 443
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<211>19
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>3
atggttacga ggaaagttg 19
<210>4
<211>23
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>4
ctacatgtcc gttttcagaa tac 23
<210>5
<211>22
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>5
gatggctggc tatcttcctt tc 22
<210>6
<211>24
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>6
gtacacgggt tctaggattt ggat 24
<210>7
<211>25
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>7
ttgtgttgga ttctggtgat ggtgt 25
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<211>25
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>8
tttcccgttc tgctgttgtt gtgaa 25
<210>9
<211>28
<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>9
atagtcgaca tggttacgag gaaagttg 28
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<212>DNA
<213>铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)
<400>10
cggggtaccc tacatgtccg ttttcagaat ac 32

Claims (1)

1.基因DcCIPK24在提高植物耐旱性和耐盐性中的应用，其特征在于，所述基因DcCIPK24的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，氨基酸序列为SEQ ID NO:2，所述植物为拟南芥。
CN202111319442.9A 2021-11-09 2021-11-09 一种可提高植物耐旱性和耐盐性的基因DcCIPK24及其应用 Active CN113943742B (zh)

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