CN113933405A - 一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，包括：将参比样和待检测样分别制备成参比样溶液和待检测样溶液，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯；将所述参比样溶液注入到液相色谱仪中检测，得到所述参比样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程；将所述待检测样溶液注入到所述液相色谱仪中检测，得到所述待检测样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积；根据所述回归方程计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的浓度，根据所述浓度计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。利用该方法可以准确地检测出油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量，填补了油脂中茶多酚棕榈酯检测方法的空白。

Description

一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法
技术领域
本发明涉及化学定量检测技术领域，尤其涉及一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法。
背景技术
茶多酚棕榈酸酯是一种无毒的脂溶性抗氧化剂，在油脂领域有很好的应用前景，但是目前还没有的检测方法可以准确检测油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，用于解决现有的对油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量不能准确测量的问题。
本发明提供一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，包括：
将参比样和待检测样分别制备成参比样溶液和待检测样溶液，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯；
将所述参比样溶液注入到液相色谱仪中检测，得到所述参比样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程；
将所述待检测样溶液注入到所述液相色谱仪中检测，得到所述待检测样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积；
根据所述回归方程计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量浓度，根据所述浓度计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述待检测样为含有茶多酚棕榈酸酯的油脂，所述待检测样溶液的溶剂为有机溶剂。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述参比样溶液的浓度梯度依次为10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述参比样溶液的溶剂为成品棕榈液油。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述液相色谱仪流动相A为乙腈；流动相B为1％的乙酸水溶液；所述流动相A与所述流动相B的体积比为50-70:30-50；柱温箱温度为30-40℃；检测波长为292nm；进样量为20-30μL。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述流动相A与所述流动相B的体积比为60:40；柱温箱温度为35℃，进样量为20μL。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述将待检测样制备成待检测样溶液具体包括：将待检测样与有机溶剂进行混合后离心，取上清液经膜过滤得到待检测样溶液。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述膜为0.22um微孔膜。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述回归方程为Y＝5.39975X-26.69001，相关性为0.99969，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度。
可选地，所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其中，所述有机溶剂选自乙腈、氯仿、环己烷、石油醚和乙酸乙酯中的至少一种。
有益效果：本发明实施例提供一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，通过将参比样溶液注入液相色谱仪得到茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，计算出回归方程。将待检测样溶液注入液相色谱仪得到待测液的吸收峰面积，根据所述回归方程，计算得到待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。利用该方法可以准确地检测出油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量，填补了油脂中茶多酚棕榈酯检测方法的空白。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法的流程示意图；
图2为棕榈油中茶多酚棕榈酸酯在292nm波长下的色谱图；
图3为茶多酚棕榈酸酯校准曲线图。
具体实施方式
本发明提供一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。
本发明所使用的试剂均为市售分析纯及色谱纯试剂。
茶多酚棕榈酸酯是一种无毒的脂溶性抗氧化剂，在油脂领域有很好的应用前景，但是目前还没有的检测方法可以准确检测油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量。
如图1所示，为了解决上述技术问题，本发明实施例提供了一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，所述方法包括：
S10、将参比样和待检测样分别制备成参比样溶液和待检测样溶液，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯。
具体来说，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯，该茶多酚棕榈酸酯是指茶多酚棕榈酸酯标准储备样，其中，茶多酚棕榈酸酯标准储备样的浓度为1000mg/kg。示例性地，所述浓度为1000mg/kg的茶多酚棕榈酸酯标准储备样的配置过程为：准确称取200mg(精确至0.1mg)茶多酚棕榈酸酯，用199.8g成品棕榈超级液油充分溶解(常温下茶多酚棕榈酸酯溶解较慢，可使用90℃水浴加热快速溶解)，得到浓度为1000mg/kg的茶多酚棕榈酸酯标准储备样。
其中，所述将参比样制备成参比样溶液具体包括：用成品棕榈超级液油采用称量法将茶多酚棕榈酸酯标准储备样稀释至预定浓度。
示例性地，可以将茶多酚棕榈酸酯标准储备样逐级稀释至10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg。即形成一个浓度梯度，将具有该浓度梯度的参比样作为制备标准曲线的标准样。
其中，所述待检测样为含有茶多酚棕榈酸酯的棕榈油，当然也可以是其他成品油脂，其中含有茶多酚棕榈酸酯杂质，所述将待检测样制备成待检测样溶液具体包括：称取一定量的棕榈油样品，向其中加入有机溶剂，经离心后，取上清液过滤后得到。
示例性地，准确称取2g棕榈油样品于10mL离心管中，加入2mL乙腈，漩涡震荡1min，4000r/min离心5min(或静置30min)，取上清液，经0.22um微孔膜过滤，得到待检测棕榈油溶液。
S20、将所述参比样溶液注入到液相色谱仪中检测，得到所述参比样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程。
具体来说，分别将具有浓度梯度的茶多酚棕榈酸酯标准储备样注入到液相色谱仪中，测定出相应的色谱峰，以所述具有浓度梯度的茶多酚棕榈酸酯标准储备样的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，得到所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程。其中，所述回归方程为Y＝mX+b，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度，m为系数，b为常数。需要说明的是，所述液相色谱仪流动相A为乙腈；流动相B为1％的乙酸水溶液；所述流动相A与所述流动相B的体积比可以是，50:50,60:40,65:35,70:30等等；柱温箱温度为30--40℃；检测波长为275-300nm；进样量为20μL，25μL，30μL等。
S30、将所述待检测样溶液注入到所述液相色谱仪中检测，得到所述待检测样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积。
具体来说，将含有茶多酚棕榈酸酯的棕榈油溶液注入到液相色谱仪中，测定出相应的色谱峰，得到色谱峰的峰面积。容易理解的是，液相色谱仪的参数设置与步骤S20中液相色谱仪的参数设置相同或者相近。
S40、根据所述回归方程计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的浓度，根据所述浓度计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。
具体来说，将所得到的茶多酚棕榈酸酯的浓度带入到回归方程中，可以得出其浓度，再结合含量计算公式可以计算出待检测样品中茶多酚棕榈酸酯的含量。
在本实施例中，通过配置具有梯度浓度的参比样溶液和待检测样溶液，分别将所配置好的参比样溶液注入到液相色谱仪中，得到参比样的标准曲线，计算得出该标准曲线的回归方程。将待检测溶液注入到液相色谱仪中，得到相应的峰面积，将峰面积带入到回归方程中，得到待检测样品的浓度，再结合含量计算公式：
Figure BDA0003243053890000051
便可以计算出待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量X(mg/kg)。其中，ρ由标准曲线得到的待检测样溶液的浓度，单位为毫克每千克；V为待检测样溶液的体积，单位为毫升；m为待检测样的质量，单位为克。
该检测方法具有检测精度高，操作相对简单的特点。
下面通过具体的实施例来对本发明所提供的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法做进一步的解释说明。
实施例1
试剂与耗材
1.1乙腈，HPLC级；
1.2水，一级水；
1.3乙酸，HPLC级；
1.4 1％乙酸水溶液：取10ml乙酸于1L容量瓶中，用水稀释后定容至刻度线，摇匀后备用。
1.5茶多酚棕榈酸酯标准品：取食品添加剂级茶多酚棕榈酸酯并鉴别、测定茶多酚棕榈酸酯的准确含量。
1.6茶多酚棕榈酸酯标准储备样(1000mg/kg)：准确称取200mg(精确至0.1mg)茶多酚棕榈酸酯，用199.8g成品棕榈超级液油充分溶解；(常温下茶多酚棕榈酸酯溶解较慢，可使用90℃水浴加热快速溶解。)
1.7茶多酚棕榈酸酯标准曲线：用成品棕榈超级液油采用称量法将标准储备样逐级稀释至10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg，备用。
2仪器与设备
2.1液相色谱仪，配紫外检测器；
2.2容量瓶，10mL，100mL，1L；
2.3塑料离心管，10mL；
2.4漩涡混合器；
2.5离心机，转速≥4000转/分钟；
2.6电子天平，感量0.0001g，0.01mg；
2.7样品瓶，500mL。
3分析步骤
3.1液相色谱参考条件
3.1.1色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm；
3.1.2流动相：乙腈：1％乙酸水溶液(60：40)；
3.1.4流速：1.0mL/min；
3.1.5紫外检测器波长：292nm；
3.1.6柱温：35℃；
3.1.7进样量：20μL。
3.2样品前处理
准确称取2g油脂样品于10mL离心管中，加入2mL乙腈，漩涡震荡1min，4000r/min离心5min(或静置30min)，取上清液，0.22um微孔膜过滤，待液相色谱分析。
3.3标准曲线的制作
将上述1.7系列标样按3.2进行处理，分别注入液相色谱仪中,测定相应的色谱峰,以系列标样的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得到标准曲线回归方程。色谱图如图2所示，标准曲线如图3，其中，回归方程为Y＝5.39975X-26.69001，相关性为0.99969，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度。
3.4含量计算
将油脂样品的峰面积带入到所述回归方程中，得到油脂样品的浓度，再利用公式
Figure BDA0003243053890000071
计算出油脂样品中的多酚棕榈酸酯的含量。
实施例2
试剂与耗材、仪器与设备同实施例1。
3分析步骤
3.1液相色谱参考条件
3.1.1色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm；
3.1.2流动相：乙腈：1％乙酸水溶液(50：50)；
3.1.4流速：1.5mL/min；
3.1.5紫外检测器波长：293nm；
3.1.6柱温：30℃；
3.1.7进样量：30μL。
3.2样品前处理
准确称取2g油脂样品于10mL离心管中，加入2mL氯仿，漩涡震荡2min，5000r/min离心5min(或静置30min)，取上清液，经0.22um微孔膜过滤，待液相色谱分析。
3.3标准曲线的制作
将上述1.7系列标样按3.2进行处理，分别注入液相色谱仪中,测定相应的色谱峰,以系列标样的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得到标准曲线回归方程。其中，回归方程为Y＝5.39975X-26.69001，相关性为0.99969，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度。
3.4含量计算
将油脂样品的峰面积带入到所述回归方程中，得到油脂样品的浓度，再利用公式
Figure BDA0003243053890000081
计算出油脂样品中的多酚棕榈酸酯的含量。
实施例3
试剂与耗材、仪器与设备同实施例1。
3分析步骤
3.1液相色谱参考条件
3.1.1色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm；
3.1.2流动相：乙腈：1％乙酸水溶液(70：30)；
3.1.4流速：1mL/min；
3.1.5紫外检测器波长：292nm；
3.1.6柱温：35℃；
3.1.7进样量：20μL。
3.2样品前处理
准确称取2g油脂样品于10mL离心管中，加入2mL乙腈，漩涡震荡2min，4000r/min离心5min(或静置30min)，取上清液，经0.22um微孔膜过滤，待液相色谱分析。
3.3标准曲线的制作
将上述1.7系列标样按3.2进行处理，分别注入液相色谱仪中,测定相应的色谱峰,以系列标样的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得到标准曲线回归方程。其中，回归方程为Y＝5.39975X-26.69001，相关性为0.99969，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度。
3.4含量计算
将油脂样品的峰面积带入到所述回归方程中，得到油脂样品的浓度，再利用公式
Figure BDA0003243053890000091
计算出油脂样品中的多酚棕榈酸酯的含量。
综上所述，本发明提供了一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，将参比样和待检测样分别制备成参比样溶液和待检测样溶液，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯；将所述参比样溶液注入到液相色谱仪中检测，得到所述参比样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程；将所述待检测样溶液注入到所述液相色谱仪中检测，得到所述待检测样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积；根据所述回归方程计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的浓度，根据所述浓度计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。利用该方法可以准确地检测出油脂中茶多酚棕榈酸酯的含量，填补了油脂中茶多酚棕榈酯检测方法的空白。
应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.一种基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，包括：
将参比样和待检测样分别制备成参比样溶液和待检测样溶液，所述参比样为茶多酚棕榈酸酯；
将所述参比样溶液注入到液相色谱仪中检测，得到所述参比样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积与绝对浓度之间的标准曲线，并计算所述标准曲线的回归方程；
将所述待检测样溶液注入到所述液相色谱仪中检测，得到所述待检测样溶液中所述茶多酚棕榈酸酯吸收峰面积；
根据所述回归方程计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的浓度，根据所述浓度计算出所述待检测样中茶多酚棕榈酸酯的含量。
2.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述待检测样为含有茶多酚棕榈酸酯的油脂，所述待检测样溶液的溶剂为有机溶剂。
3.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述参比样溶液的浓度梯度依次为10mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg。
4.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述参比样溶液的溶剂为成品棕榈液油。
5.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述液相色谱仪流动相A为乙腈；流动相B为1％的乙酸水溶液；所述流动相A与所述流动相B的体积比为60-70:40-50；柱温箱温度为30-40℃；检测波长为292nm；进样量为20-30μL。
6.根据权利要求5所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述流动相A与所述流动相B的体积比为60:40；柱温箱温度为35℃，进样量为20μL。
7.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述将待检测样制备成待检测样溶液具体包括：将待检测样与有机溶剂进行混合后离心，取上清液经膜过滤得到待检测样溶液。
8.根据权利要求7所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述膜为0.22um微孔膜。
9.根据权利要求1所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述回归方程为Y＝5.39975X-26.69001，相关性为0.99969，Y为所述参比样的吸收峰面积，所述X为所述参比样的浓度。
10.根据权利要求2所述的基于液相色谱仪检测茶多酚棕榈酸酯含量的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自乙腈、氯仿、环己烷、石油醚和乙酸乙酯中的至少一种。
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