CN113930444A

CN113930444A - 水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用

Info

Publication number: CN113930444A
Application number: CN202010600108.XA
Authority: CN
Inventors: 程祝宽; 刘长振; 覃宝祥; 李亚非; 唐丁; 沈懿; 杜桂杰
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2020-06-28
Filing date: 2020-06-28
Publication date: 2022-01-14

Abstract

本发明公开了水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。本发明克隆了水稻OsRDR6基因并详细研究了该基因在减数分裂过程中的作用，为植物育性的控制提供了新的理论依据和途径。该基因的克隆有助于了解水稻的减数分裂过程，并为人工控制水稻花粉育性提供理论基础。结合组织特异性启动子的应用，该基因有可能作为不育基因用于水稻杂交种子生产和育性控制，因此在水稻育种上具有重要意义，可以为增加水稻产量，提高水稻品质提供重要生物资源。

Description

水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。

背景技术

水稻是三大粮食作物之一，世界约1/3人口以水稻作为主粮。在我国，也约有8亿人口会以水稻作为口粮。因此，如何解决水稻长久稳定增收，仍将是未来水稻研究的主要方向。

经过20世纪60年代的矮化育种使我国水稻单产首次实现飞跃。20世纪70年代，我国开创了水稻杂种优势利用研究，以发掘不育细胞质源为突破口、以回交转育质核互作不育系为主要方法使籼型杂交稻率先在中国获得成功。杂交水稻的研制成功是当代世界农业发展史上的重大事件，使水稻单产获得了大幅度提高，创造了巨大的社会效益和经济效益。雄性不育系的利用在杂交水稻的制备和选育过程中起到了至关重要的作用，但是自然界里的自然雄性不育植株极少，鉴定困难，需耗费大量人力物力。因此，通过人工的基因工程途径获得雄性不育水稻成为一个上好的选择。

雄性不育主要是通过花粉败育而表现的。花粉的发育是一个复杂生物学的过程，由胞原细胞发育到花粉这一过程中涉及到减数分裂、有丝分裂等过程，以及绒毡层和花粉外壁等的正常发育，在这一过程中有大量的基因参与作用。CRISPR-Cas9基因组编辑技术通过向导RNA的介导和Cas9蛋白的切割来实现对靶基因的定点编辑，该技术以其简便、高效的特点，目前已经成为动植物中广泛使用的基因组编辑工具。因此可以通过CRISPR-Cas9定点编辑的方法来完全阻断或者降低相关基因的表达，从而使花粉败育。

发明内容

本发明的目的是提供水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用。

为了实现上述目的，本发明首先提供了OsRDR6蛋白质的新用途。

本发明提供了OsRDR6蛋白质在调控植物雄性育性中的应用；

所述OsRDR6蛋白质是如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：

A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

A2)在序列表中序列1所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白；

A3)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且功能相同的蛋白质；

A4)与A1)-A3)中任一所限定的氨基酸序列具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同源性且具有相同功能的蛋白质。

为了实现上述目的，本发明还提供了与OsRDR6蛋白质相关的生物材料的新用途。

本发明提供了与OsRDR6蛋白质相关的生物材料在如下B1)-B4)任一种中的应用：

B1)调控植物雄性育性；

B2)培育雄性不育植物；

B3)培育雄性可育植物；

B4)植物育种；

所述与OsRDR6蛋白质相关的生物材料为下述C1)至C8)中的任一种：

C1)编码OsRDR6蛋白质的核酸分子；

C2)含有C1)所述核酸分子的表达盒；

C3)含有C1)所述核酸分子的重组载体；

C4)含有C2)所述表达盒的重组载体；

C5)含有C1)所述核酸分子的重组微生物；

C6)含有C2)所述表达盒的重组微生物；

C7)含有C3)所述重组载体的重组微生物；

C8)含有C4)所述重组载体的重组微生物。

上述应用中，C1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

3)来源于水稻的与1)或2)限定的DNA序列具有98％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

4)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子；

5)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码植物雄性育性相关蛋白的DNA分子。

上述应用中，所述调控植物雄性育性为使植物雄性可育或使植物雄性不育，具体体现在：当植物中含有OsRDR6蛋白质时，所述植物为雄性可育，当植物中不含有OsRDR6蛋白质时，所述植物为雄性不育。

为了实现上述目的，本发明还提供了抑制OsRDR6蛋白质活性的物质或抑制OsRDR6蛋白质编码基因表达的物质或敲除OsRDR6蛋白质编码基因的物质的新用途。

本发明提供了抑制OsRDR6蛋白质活性的物质或抑制OsRDR6蛋白质编码基因表达的物质或敲除OsRDR6蛋白质编码基因的物质在培育雄性不育植物中的应用。

进一步的，所述物质为CRISPR-Cas9系统，所述CRISPR-Cas9系统包括Cas9蛋白质和sgRNA，所述sgRNA的靶序列如序列表的序列6所示。

更进一步的，所述CRISPR-Cas9系统为重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA；所述重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA为在pCAMBIA1300-cas9载体的BamHI和KpnI酶切位点之间插入了序列表的序列5所示的DNA分子后得到的载体。

为了实现上述目的，本发明还提供了一种培育雄性不育植物的方法。

本发明提供的培育雄性不育植物的方法为如下D1)或D2)：

D1)包括如下步骤：抑制目的植物中OsRDR6蛋白质的活性，得到雄性不育植物；

D2)包括如下步骤：抑制目的植物中OsRDR6蛋白质编码基因的表达或敲除目的植物中OsRDR6蛋白质编码基因，得到雄性不育植物。

进一步的，所述OsRDR6蛋白质编码基因为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

为了实现上述目的，本发明最后提供了一种培育雄性可育植物的方法。

本发明提供的培育雄性可育植物的方法为提高目的植物中OsRDR6蛋白质的活性和/或含量，得到雄性可育植物。

进一步的，所述提高目的植物中OsRDR6蛋白质的活性和/或含量为在目的植物中过表达OsRDR6蛋白质。

更进一步的，所述过表达的方法为将OsRDR6蛋白质编码基因导入目的植物。

在本发明的具体实施例中，所述OsRDR6蛋白质编码基因通过pCAMBIA1300-OsRAD6导入目的植物。所述pCAMBIA1300-OsRAD6为将序列4所示的DNA分子插入pCAMBIA1300互补载体的Sac1酶切位点间后得到的载体。

上述sgRNA或CRISPR-Cas9系统及其在培育雄性不育植物或植物育种中的应用也属于本发明的保护范围。

以上任一所述雄性可育体现为所有花粉完全可育。

以上任一所述雄性不育体现为所有花粉完全败育。

以上任一所述植物为单子叶植物或双子叶植物。所述单子叶植物为禾本科植物。所述禾本科植物为稻属植物。所述稻属植物为水稻。所述水稻具体可为盐稻8号或OsRDR6基因突变体。所述OsRDR6基因突变体具体为Osrdr6-mei突变体。

本发明克隆了水稻OsRDR6基因并详细研究了该基因在减数分裂过程中的作用，为植物育性的控制提供了新的理论依据和途径。该基因的克隆有助于了解水稻的减数分裂过程，并为人工控制水稻花粉育性提供理论基础。结合组织特异性启动子的应用，该基因有可能作为不育基因用于水稻杂交种子生产和育性控制，因此在水稻育种上具有重要意义，可以为增加水稻产量，提高水稻品质提供重要生物资源。

附图说明

图1为突变体基本表型的观察。上排为野生型的植株、去掉颖壳的小花、花粉和雌配子胚囊；下排为突变体的植株、去掉颖壳的小花、花粉和雌配子胚囊。从图中可以看出，Osrdr6-mei突变体不能产生花粉，且胚囊未正常发育。

图2为野生型及Osrdr6-mei突变体花粉母细胞的染色体压片观察(A)以及花药的半薄切片观察(B)。

图3为OsRDR6基因的图位克隆。

图4为Osrdr6-mei突变体的遗传互补结果。

图5为Osrdr6-bi突变体的染色体行为。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

籼稻品种中籼3037：记载于“Wang,K.,Tang,D.,Hong,L.,Xu,W.,Huang,J.,Li,M.,Gu,M.,Xue,Y.and Cheng,Z.(2010)DEP and AFO Regulate Reproductive Habit inRice.Plos Genetics,6”一文中的“Zhongxian 3037”，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得。

粳稻品种盐稻8号：常规的水稻栽培品种，可以从江苏省盐城市明天种业科技有限公司购买。

pCAMBIA1300是北京鼎国昌盛生物技术有限公司的产品，货号为MCV033。

SK-gRNA载体和pC1300-Cas9载体(又称为pCAMBIA1300-cas9)均记载于“Wang,C.,Shen,L.,Fu,Y.,Yan,C.,Wang,K.(2015)A Simple CRISPR/Cas9 System for MultiplexGenome Editing in Rice.Journal of Genetics and Genomics 42(2015)703-706”。

根癌农杆菌EHA105：北京天恩泽生物技术有限公司，产品目录号：140383。

AAM液体培养基：CaCl₂·2H₂O 440mg，MgSO₄·7H₂O 370mg，KH₂PO₄170mg，KCl2940mg，KI 0.83mg，H₃BO₃ 6.2mg，MnSO₄·4H₂O 22.3mg，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg，CuSO₄·5H₂O 0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.03mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.5mg，VB11mg，VB6 0.5mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O₃7.3mg，蔗糖68.5g，葡萄糖36g，谷氨酰胺0.877g，水解酪蛋白0.5g，天冬氨酸0.266g，精氨酸0.228g，甘氨酸0.075g,去离子水加至1L，pH为5.2。

NB培养基：(NH4)₂SO₄ 463mg，KNO₃ 2830mg，CaCl₂·2H₂O 166mg，MgSO₄·7H₂O185mg，KH₂PO₄400mg，KI 0.8mg，H₃BO₃ 1.6mg，MnSO₄·4H₂O 4.4mg，ZnSO₄·7H₂O 1.5mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.5mg，VB1 1mg，VB6 0.5mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O37.3mg，蔗糖30g，植物胶2.5g，2,4-D 2mg，水解酪蛋白0.5g，去离子水加至1L，pH为5.8。

NBC培养基：(NH4)₂SO₄ 463mg，KNO₃ 2830mg，CaCl₂·2H₂O 166mg，MgSO₄·7H₂O185mg，KH₂PO₄400mg，KI 0.8mg，H₃BO₃ 1.6mg，MnSO₄·4H₂O 4.4mg，ZnSO₄·7H₂O 1.5mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.5mg，VB1 1mg，VB6 0.5mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O37.3mg，蔗糖30g，葡萄糖10g，植物胶2.5g，2,4-D 2mg，水解酪蛋白0.5g，去离子水加至1L，pH为5.2。倒平板之前加入乙酰丁香酮(AS)并使其浓度为100μM。

NBCS1培养基：NH₄NO₃ 640mg，KNO₃ 1212mg，CaCl₂·2H₂O 588mg，MgSO₄·7H₂O247mg，KH₂PO₄136mg，KI 0.83mg，H₃BO₃ 3.1mg，MnSO₄·4H₂O 11.2mg，ZnSO₄·7H₂O5.76mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24mg，CuSO₄·5H₂O 0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.03mg，肌醇90mg，甘氨酸2mg，烟酸6mg，VB1 8.5mg，VB6 1mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg，甘露醇36.43g，蔗糖20g，植物胶2.5g，2,4-D 2mg，水解酪蛋白0.5g，去离子水加至1L，pH为5.8。倒平板之前加入G418并使其浓度为100mg/l。

NBCS2培养基：NH₄NO₃ 640mg，KNO₃ 1212mg，CaCl₂·2H₂O 588mg，MgSO₄·7H₂O247mg，KH₂PO₄136mg，KI 0.83mg，H₃BO₃ 3.1mg，MnSO₄·4H₂O 11.2mg，ZnSO₄·7H₂O 5.76mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24mg，CuSO₄·5H₂O 0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.03mg，肌醇90mg，甘氨酸2mg，烟酸6mg，VB1 8.5mg，VB6 1mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg，甘露醇36.43g，蔗糖20g，植物胶2.5g，2,4-D 2mg，水解酪蛋白0.5g，去离子水加至1L，pH为5.8。倒平板之前加入G418并使其浓度为200mg/l。

NBA分化培养基：NH₄NO₃ 640mg，KNO₃ 1212mg，CaCl₂·2H₂O 588mg，MgSO₄·7H₂O247mg，KH₂PO₄136mg，KI 0.83mg，H₃BO₃ 3.1mg，MnSO₄·4H₂O 11.2mg，ZnSO₄·7H₂O 5.76mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24mg，CuSO₄·5H₂O 0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.03mg，肌醇90mg，甘氨酸2mg，烟酸6mg，VB1 8.5mg，VB6 1mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg，麦芽糖20g，脱落酸(ABA)5mg，植物胶3g，2,4-D 2mg，6-BA 2mg，萘乙酸(NAA)1mg，水解酪蛋白0.3g，去离子水加至1L，pH为5.8。倒平板之前加入G418并使其浓度为200mg/l。

1/2MS培养基：NH₄NO₃ 825mg，KNO₃ 950mg，CaCl₂·2H₂O 220mg，MgSO₄·7H₂O185mg，KH₂PO₄85mg，KI 0.83mg，H₃BO₃ 6.2mg，MnSO₄·4H₂O 22.3mg，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg，CuSO₄·5H₂O 0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.03mg，肌醇100mg，甘氨酸2mg，烟酸0.5mg，VB1 0.1mg，VB6 0.5mg，FeSO₄·7H₂O 27.8mg，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg，蔗糖30g，多效唑(MET)6mg，植物胶2g，萘乙酸(NAA)1mg，水解酪蛋白0.3g，去离子水加至1L，pH为5.8。

实施例1、Osrdr6-mei突变体的获取及OsRDR6基因的图位克隆

一、Osrdr6-mei突变体的获取及表型分析

1、Osrdr6-mei突变体的获取

以籼稻品种中籼3037种子为出发材料，经过Co⁶⁰辐射诱导，获得一个水稻减数分裂异常并导致不育的突变体，将其记作Osrdr6-mei突变体。

2、Osrdr6-mei突变体的表型分析及细胞学表型观察

1)Osrdr6-mei突变体的表型分析

分别在营养生长阶段和生殖生长阶段观察野生型籼稻品种中籼3037和Osrdr6-mei突变体。

结果表明：在营养生长阶段，Osrdr6-mei突变体与野生型籼稻品种中籼3037相比未发现明显异常，株高及分蘖数量均与野生型籼稻品种中籼3037类似。在生殖生长阶段，Osrdr6-mei突变体表现出完全败育的表型，花药颜色偏淡且不能正常产生花粉，同时突变体中无法产生正常的雌配子胚囊(图1)。

2)Osrdr6-mei突变体的细胞学表型观察

观察野生型籼稻品种中籼3037和Osrdr6-mei突变体花粉母细胞减数分裂细胞学表型，具体方法如下：

2-1)取待测样本，用卡诺氏固定液(无水乙醇：冰醋酸＝3：1；体积比)固定24h。

2-2)用解剖针将花药拨出至载玻片上，加少许醋酸洋红，用解剖针迅速将花药敲碎，使花粉母细胞游离出来，盖上盖玻片。

2-3)取载玻片，在盖玻片一侧加适量45％醋酸水溶液，在另一侧放置一张大小合适的滤纸条，反复重复此步骤，直到将载玻片上的醋酸洋红清除干净，然后将载玻片放入液氮中浸泡20sec，迅速取出，用刀片揭去盖玻片。

2-4)取载玻片，依次放入70％乙醇水溶液、90％乙醇水溶液和100％乙醇中浸泡各5min，进行梯度脱水，干燥后滴加4’,6-Diamidino-2-phenylindole(DAPI)，然后用荧光显微镜观察染色体表型。

结果表明：Osrdr6-mei突变体花粉母细胞粗线期存在不能配对的同源染色体，终变期时存在单价体。在粗线期，Osrdr6-mei突变体的花药各层细胞与野生型相比无明显差异，花粉母细胞的外观也正常。随着花药的发育，野生型产生小孢子时，突变体内没有小孢子的产生(图2)。

二、Osrdr6-mei突变体的图位克隆

将杂合的Osrdr6-mei突变体植株(后代存在育性分离的单株)与粳稻品种盐稻8号进行杂交，构建得到相应的图位克隆群体，利用对F2以及F3代所有不育植株的图位克隆分析，发现Osrdr6-mei突变体中编码水稻RDR6蛋白的LOC_Os01g34350基因编码区发生了一个G-T的突变，并造成蛋白质序列的改变(图3)。

三、OsRDR6蛋白及其编码基因的获得

提取籼稻品种中籼3037的总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板，分别进行ORF扩增、5’RACE和3’RACE，拼接后得到全长序列。全长序列编码序列表的序列1所示的蛋白质。

将序列表的序列1所示的蛋白质命名为OsRAD6蛋白，由1218个氨基酸残基组成。将编码OsRAD6蛋白的基因命名为OsRAD6基因，OsRAD6基因的开放阅读框如序列表的序列2所示。Osrdr6-mei突变体中的OsRAD6基因的开放阅读框如序列表的序列3所示。

实施例2、转OsRDR6水稻的获得及花粉育性分析

为了确认OsRDR6基因的突变是造成突变体不育的原因，将野生型OsRDR6基因通过转基因技术导入Osrdr6-mei突变体植株(OsRAD6基因纯合突变体)，并进一步观察突变体的育性是否可以完全恢复。具体步骤如下：

一、重组表达载体的构建

将序列4所示的DNA分子插入pCAMBIA1300互补载体的Sac1酶切位点间，得到重组表达载体pCAMBIA1300-OsRAD6。序列4所示的DNA分子包含OsRDR6基因的编码序列，同时包含OsRDR6基因ATG上游约2.1kb的DNA序列，以及终止密码子下游约3.8kb的DNA序列。

二、农杆菌介导的遗传转化

1、取步骤一得到的重组表达载体pCAMBIA1300-OsRAD6，将其导入根癌农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、将步骤1得到的重组农组菌的单菌落接种于3mL含50mg/L卡那霉素和10mg/L利福平的YEB液体培养基中，28℃、150rpm振荡培养直至OD_600nm为0.6-0.8，用含有200μM乙酰丁香酮的AAM液体培养基重悬菌体，将OD_600nm值调为0.8-1.0，得到菌悬液。

3、选取饱满的Osrdr6-mei突变体植株(OsRAD6基因杂合突变体)上结的成熟种子，小心去除颖壳(避免胚受到损伤)。用70％酒精浸泡消毒2min后，使用0.1％HgCl₂水溶液浸泡12min，无菌水冲洗5次，每次5min。

4、将经过步骤3处理后的种子在NB培养基中26℃避光培养14天以诱导愈伤组织。

5、将步骤4挑选的愈伤组织浸泡于步骤2制备的菌悬液中，侵染20min，侵染后将菌悬液倒掉，取愈伤组织，用无菌滤纸吸干水分，然后转入NBC培养基，26℃避光培养3天。

6、将步骤5培养的愈伤组织转入NBCS1培养基，26℃避光培养14天。

7、将步骤6培养的愈伤组织转入NBCS2培养基，26℃避光培养14天。

8、将步骤7生长状态较好的愈伤组织转入NBA分化培养基，26℃光照培养20天。

9、将步骤8分化出的幼苗转入1/2MS培养基，26℃光照培养至生根。

10、完成步骤9后，取出幼苗，洗净培养基，将幼苗用清水浸泡，26℃光照培养2天，然后移入大田，常规栽培管理。

11、采用pCAMBIA1300空载体替代重组表达载体pCAMBIA1300-OsRAD6按照步骤1-10进行操作。

三、转基因植株的PCR鉴定

1、取步骤二的10获得的植株，提取具有潮霉素抗性的植株的基因组DNA，用引物P1300F和P1300-R进行PCR鉴定。可以扩出约629bp大小条带的植株为转基因植株，命名为转OsRDR6植株。

P1300-F：CCTTATCTGGGAACTACTCA；

P1300-R：GTGTATCACTGGCAAACTGT。

所有阳性植株中，Osrdr6-mei突变体植株(OsRAD6基因纯合突变体)的鉴定采用Osrdr6-mei-F和Osrdr6-mei-R引物扩增后测序确定。对该对引物扩增的约3990bp片段进行检测，序列2第1727位为碱基T时，则该互补阳性植株为OsRAD6基因纯合突变体。

Osrdr6-mei-F：AAGCAGGGAACTAACTTGTGC；

Osrdr6-mei-R：GTACTCATTATGCACAACATC。

2、取步骤二的11获得的植株，提取具有潮霉素抗性的植株的DNA，用引物P1300F和P1300-R进行PCR鉴定。可以扩出约629bp大小条带的植株为转空载体植株。

四、转基因植株的性状分析

按照实施例1中的方法对籼稻品种中籼3037、转OsRDR6植株、转空载体植株、Osrdr6-mei突变体进行表型分析及细胞学表型观察。

结果表明：通过在Osrdr6-mei纯合突变体中导入OsRAD6基因成功恢复了Osrdr6-mei突变体的花粉育性(图4，其中，WT为籼稻品种中籼3037，Osrdr6-mei为OsRAD6基因纯合突变体，Com为转OsRDR6植株)，而转空载体植株花粉育性没有恢复。

实施例3、Osrdr6-bi突变体的获得及花粉育性分析

为了进一步确认OsRDR6基因的突变是造成突变体不育的原因，对OsRDR6进行了CRISPR-Cas9定点突变，并进一步观察定点突变植株的表型是否影响植株的育性。具体步骤如下：

一、重组载体的构建

1、分别合成单链DNA分子Cas9-Osrdr6-edi-F和单链DNA分子Cas9-Osrdr6-edi-R，然后将它们一起退火，得到两端具有粘末端的双链DNA分子。

Cas9-Osrdr6-edi-F：GGCAAGTTAAGGGACAAGTCAGCT；

Cas9-Osrdr6-edi-R：AAACAGCTGACTTGTCCCTTAACT。

2、用限制性内切酶AarI酶切SK-gRNA载体，回收线性化载体骨架。

3、将步骤1得到的双链DNA分子与步骤2得到的线性化载体骨架连接，得到重组载体。

4、取步骤3得到的重组载体，用限制性内切酶BamHI和KpnI双酶切，回收小片段。

5、取pCAMBIA1300-cas9载体，用制性内切酶BamHI和KpnI双酶切，回收大片段。

6、将步骤4得到的小片段和步骤5得到的大片段连接，得到重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA。对重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA进行测序鉴定，根据测序结果，对重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA进行结构描述如下：在pCAMBIA1300-cas9载体的BamHI和KpnI酶切位点之间插入了序列表的序列5所示的DNA分子，表达sgRNA。sgRNA的靶序列如下：AGTTAAGGGACAAGTCAGCT(序列6)。

二、突变株的获得

1、采用电击法将步骤一获得的重组载体pCAMBIA1300-cas9-gRNA导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌，然后用重组农杆菌侵染野生型粳稻品种盐稻8号的胚性愈伤组织，再将其培育，获得植株，即为T0代植株。

2、提取T0代植株的基因组DNA，采用P1300F和P1300R引物对转基因株系进行鉴定。PCR扩增获得大小为629bp的植株为阳性植株。

P1300F：GAGGCTGAAGAAGGCACT；

P1300FR：AGAATCCTGGCTGGAACT。

3、测序

对PCR鉴定为阳性的T0代转基因株系进行全基因组测序。通过全基因组测序，鉴定结果显示，从15株T0代植株中获得3株在OsRDR6基因中发生突变且为杂合型突变的植株。与对作为遗传转化受体的盐稻8号植株相比，该突变植株的基因组序列均在编码OsRDR6蛋白质的基因序列中存在一个碱基A的插入(即发生了一个插入突变且为杂合型，该插入的碱基位于开放阅读框的1629位和1630位之间)(即序列2的第1629-1630位之间)，并将该突变体命名为Osrdr6-edi突变体。

4、杂交

将步骤3获得的Osrdr6-edi突变体植株与Osrdr6-mei突变体植株(OsRAD6基因杂合突变体)进行杂交(以Osrdr6-edi为母本，以Osrdr6-mei为父本)，获得杂交子代，并对杂交子代进行全基因组测序，获得Osrdr6-bi突变体。

与盐稻8号相比，Osrdr6-bi突变体的基因组序列的差异仅在于在编码OsRDR6蛋白的基因序列中，一条染色体上发生了一个碱基A的插入，该碱基的插入位置位于序列2第1629和1630位之间，另一条染色体上发生了一个碱基的突变，该突变的形式为由碱基G突变为碱基T，该突变的位置位于序列2第1727位。

三、育性分析

按照实施例1中的方法对野生型盐稻8号、Osrdr6-bi突变体进行表型分析及细胞学表型观察。

结果表明：Osrdr6-bi突变体植株营养生长正常，但植株成熟时不结种子。进一步染色体分析表明，Osrdr6-bi突变体花粉母细胞的染色体表型和Osrdr6-mei基本一致(图5)，主要表现为终变期存在大量单价体，单价体的存在最终导致植株败育。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110>中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120>水稻OsRDR6蛋白质及其编码基因在调控植物雄性育性中的应用

<160>6

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>1218

<212>PRT

<213>Artificial Sequence

<400>1

Met Arg Ser Pro Arg Gly Gly Ala Ala Ala Gln Pro Ser Gly Arg Arg

1 5 10 15

Gly Asp Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly Asp Leu Val Thr Thr Gln Val

20 25 30

Ser Leu Gly Gly Phe Asp Ala Gly Val Ala Ala Gly Asp Leu Ala Asp

35 40 45

Phe Leu Glu His Glu Val Gly Leu Val Trp Arg Cys Arg Val Lys Thr

50 55 60

Ser Trp Thr Pro Pro Asp Ser Tyr Pro Asp Phe Ala Leu Pro Thr Ala

65 70 75 80

Pro Ala Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Pro Pro Arg Tyr Asp Arg Val

85 90 95

Pro Pro His Ala Phe Val His Phe Ala Arg Pro Glu Gly Ala Arg Arg

100 105 110

Ala Ala Asp Leu Ala Gly Glu Thr Arg Leu Ile Leu Arg Gly Lys Pro

115 120 125

Leu Arg Val Ala Ser Ala Pro Asp Ser Ser Leu Arg Val Ser Arg Arg

130 135 140

Ser Ser Ile Ala Pro Phe Arg Phe Pro Asp Val Arg Leu Glu Val Gly

145 150 155 160

Ala Leu Pro Ser Pro Gly Ala Phe Leu Ala Ala Trp Arg Gly Pro Asp

165 170 175

Ala Gly Leu Asp Leu Ser Val Asp Pro Phe Asp Gly Cys Cys Arg Leu

180 185 190

Val Phe Thr Arg Asp Thr Ala Phe Thr Phe Pro Gly Phe Arg Glu Val

195 200 205

Ala Ala Ile Arg Cys Asp Val Lys Leu Glu Phe Pro Val Arg Asp Val

210 215 220

Leu Glu Val Arg Leu Tyr Arg Leu Asp Cys Ser Leu Leu Leu Arg Leu

225 230 235 240

Ala Ala Ala Pro Leu Val His Tyr Arg Thr Ala Asp Asp Asp Phe His

245 250 255

Glu Pro Val Pro Phe Asp Leu Leu Asp Asp Asp Asp Pro Trp Ile Arg

260 265 270

Thr Thr Asp Ile Thr Pro Ser Gly Ala Ile Gly Arg Cys Gly Val Tyr

275 280 285

Arg Ile Ser Phe Ser Ala Arg Phe Trp Pro Lys Met Asp Arg Ala Leu

290 295 300

Asp Tyr Met Arg Glu Arg Arg Val Ala Ile Val Asp Cys Gly Gly Gly

305 310 315 320

Trp Gly Pro Arg Arg Gly Leu Thr Val Arg Asp Glu Leu Glu Phe Gly

325 330 335

Glu Pro Met Gln Asp Val Phe Phe Cys Leu Gln His Ala Glu Gly Leu

340 345 350

Lys Phe Pro Leu Leu Phe Met Val Asn Ala Leu Val His Lys Gly Ile

355 360 365

Ile Asn Gln His Gln Leu Thr Pro Glu Phe Phe Ser Leu Leu Gly Arg

370 375 380

Ser Glu Glu Asn Val Asn Val Ala Ala Leu Arg Asp Phe Trp Gly Asp

385 390 395 400

Lys Phe Pro Val Phe Asp Ala Cys Gly Arg Leu Lys Lys Ala Leu Asn

405 410 415

Arg Val Ala Arg Asn Pro Lys Leu Leu Cys Ser Lys Val Gly Asp Asp

420 425 430

His Ala Glu Val Arg Arg Leu Val Ile Thr Pro Thr Arg Ala Tyr Cys

435 440 445

Leu Pro Pro Glu Val Glu Arg Ser Asn Arg Val Leu Arg His Tyr His

450 455 460

Glu Val Ala Asp Arg Phe Leu Arg Val Thr Phe Met Asp Glu Gly Met

465 470 475 480

Gln Val Leu Asn Asn Asn Val Leu Asn Ser Phe Thr Ala Pro Ile Val

485 490 495

Lys Asp Leu Met Ser Asn Phe Phe Gln Gln Lys Thr Thr Val Tyr Lys

500 505 510

Arg Val Arg Met Leu Leu Thr Glu Gly Phe His Met Cys Gly Arg Lys

515 520 525

Tyr Ser Phe Leu Ala Phe Ser Ser Asn Gln Leu Arg Asp Lys Ser Ala

530 535 540

Trp Phe Phe Ala Glu Asp Arg Lys Thr Thr Val Glu Ala Ile Arg Lys

545 550 555 560

Trp Met Gly Arg Phe Thr Ser Lys Asn Val Ala Lys His Ala Ala Arg

565 570 575

Met Gly Gln Cys Phe Ser Ser Thr Tyr Ala Thr Val Thr Met Arg Pro

580 585 590

Asp Glu Val Asp Glu Ser Phe Asp Asp Val Val His Asn Glu Tyr Ile

595 600 605

Phe Ser Asp Gly Ile Gly Lys Ile Thr Pro Asp Leu Ala Leu Glu Val

610 615 620

Ala Glu Arg Leu Gln Leu Thr Asp Asn Pro Pro Ser Ala Tyr Gln Ile

625 630 635 640

Arg Phe Ala Gly Phe Lys Gly Val Ile Ala Val Trp Gln Gly His Gly

645 650 655

Asp Gly Thr Arg Leu Phe Leu Arg Pro Ser Met Arg Lys Phe Glu Ser

660 665 670

Asn His Leu Val Leu Glu Val Val Ser Trp Thr Lys Phe Gln Pro Gly

675 680 685

Phe Leu Asn Arg Gln Ile Ile Ile Leu Leu Ser Ser Leu Asn Val Pro

690 695 700

Asp Ser Ile Phe Trp Gln Met Gln Glu Thr Met Leu Ser Asn Leu Asn

705 710 715 720

Asn Ile Leu Ser Asp Arg Asp Val Ala Phe Glu Val Leu Thr Thr Ser

725 730 735

Cys Ala Asp Asp Gly Asn Thr Ala Ala Leu Met Leu Ser Ala Gly Phe

740 745 750

Glu Pro Arg Thr Glu Pro His Leu Lys Ala Met Leu Leu Ala Ile Arg

755 760 765

Ser Ala Gln Leu Gln Asp Leu Leu Glu Lys Ala Arg Ile Phe Val Pro

770 775 780

Lys Gly Arg Trp Leu Met Gly Cys Leu Asp Glu Leu Gly Val Leu Glu

785 790 795 800

Gln Gly Gln Cys Phe Ile Arg Ala Thr Val Pro Ser Leu Asn Ser Tyr

805 810 815

Phe Val Lys His Gly Ser Arg Phe Ser Ser Thr Asp Lys Asn Thr Glu

820 825 830

Val Ile Leu Gly Thr Val Val Ile Ala Lys Asn Pro Cys Leu His Pro

835 840 845

Gly Asp Val Arg Ile Leu Glu Ala Val Asp Val Pro Glu Leu His His

850 855 860

Leu Val Asp Cys Leu Val Phe Pro Gln Lys Gly Glu Arg Pro His Ala

865 870 875 880

Asn Glu Ala Ser Gly Ser Asp Leu Asp Gly Asp Leu Tyr Phe Val Thr

885 890 895

Trp Asp Glu Lys Leu Ile Pro Pro Gly Lys Lys Ser Trp Asn Pro Met

900 905 910

Asp Tyr Ser Pro Pro Glu Ala Lys Gln Leu Pro Arg Gln Val Ser Gln

915 920 925

His Asp Ile Ile Asp Phe Phe Leu Lys Asn Met Ile Ser Glu Asn Leu

930 935 940

Gly Arg Ile Cys Asn Ala His Val Val His Ala Asp Leu Ser Glu Tyr

945 950 955 960

Gly Ala Met Asp Glu Lys Cys Ile His Leu Ala Glu Leu Ala Ala Thr

965 970 975

Ala Val Asp Phe Pro Lys Thr Gly Lys Leu Ala Ile Met Pro Pro His

980 985 990

Leu Lys Pro Lys Val Tyr Pro Asp Phe Met Gly Lys Glu Asp Gly Gln

995 1000 1005

Ser Tyr Lys Ser Glu Lys Ile Leu Gly Arg Leu Tyr Arg Ser Ile

1010 1015 1020

Gln Glu Ala Ser Asn Gly Asp Val Val Ser Gln Glu Val Cys Thr

1025 1030 1035

Pro Asn Asp Leu Pro Tyr Asp Ile Asp Leu Glu Val Pro Gly Ala

1040 1045 1050

Ser Asp Phe Leu Ala Ser Ala Trp Gln Cys Lys Cys Ser Tyr Asp

1055 1060 1065

Ala Gln Leu Ser Ala Leu Leu Ser Gln Tyr Arg Val Arg Thr Glu

1070 1075 1080

Ala Glu Leu Val Thr Gly His Ile Thr Phe Leu Val Lys Asn Ser

1085 1090 1095

Ser Lys Lys Gln Gly Asp Ile Lys Asp Arg Leu Lys Thr Ala Tyr

1100 1105 1110

Ser Ala Leu Arg Lys Glu Phe Lys Ser Thr Phe Glu Ser Ile Ala

1115 1120 1125

Ser Asp Gln Cys Glu Ile Gly Asp Asp Glu Lys Asn Leu Leu Tyr

1130 1135 1140

Glu Met Lys Ala Ser Ala Trp Tyr Gln Val Thr Tyr His Pro Lys

1145 1150 1155

Trp Val Glu Lys Ser Arg Gly Ile Leu Gly Pro Asp Gly Glu Glu

1160 1165 1170

Ile Pro Ala Ser Leu Ser Phe Ala Trp Ile Pro Val Asp Tyr Leu

1175 1180 1185

Ala Arg Ile Lys Leu Arg Cys His Gly Lys Val Arg Val Glu Gly

1190 1195 1200

Gln Lys Pro Val Glu Arg Leu Ala Ala Tyr Ile Ser Glu Arg Ile

1205 1210 1215

<210>2

<211>3657

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<400>2

atgcgatcgc cgcgcggcgg ggcggccgcg cagccgtcgg ggcggcgcgg cgacacgacg 60

gcggcggcgg cgggcgatct ggtgacgacg caggtcagcc ttggcggctt cgacgccggc 120

gtcgccgcgg gggacctcgc cgacttcctg gagcacgagg tcggcctggt ctggcgctgc 180

cgcgtcaaga cctcctggac gccgccggac tcctacccgg acttcgccct ccccaccgcc 240

cccgcctccg cctcggccgc ggccgcgccg ccgcggtacg accgggtgcc cccgcacgcg 300

tttgtccact tcgcgcgccc ggagggggcg cgccgcgccg cggacctcgc gggggagacc 360

aggctcatcc tgagggggaa gcccctgcgc gtcgcgtccg cgccggacag ctcgctccgc 420

gtgtcccgcc gcagcagcat cgcgccgttc cggttccccg acgtgcgcct cgaggtcggg 480

gcgctcccgt cgcccggcgc gttcctcgcc gcctggcgcg ggccggacgc cgggctcgac 540

ctctccgtcg accccttcga cgggtgctgc cgcctcgtgt tcacccgcga caccgccttc 600

acgttcccgg gcttccgcga ggtcgccgcc atacgctgcg acgtcaagct ggagttcccc 660

gtgcgcgacg tcctggaggt ccgcctgtac cgcctcgact gctcgctgct cctccgcctc 720

gccgccgcgc cgctggtgca ctaccgcacc gccgacgacg acttccacga gccggtcccc 780

ttcgacctgc tcgacgacga cgacccgtgg atacggacca cggacatcac cccgagcggc 840

gccatcgggc ggtgcggggt gtacaggatc tccttctcgg cgcgattctg gcccaagatg 900

gaccgcgcgc tggactacat gagggagagg agggtggcga tcgtcgattg cggcggcgga 960

tgggggccgc ggcgggggct cacagtgcgc gacgagctgg agttcgggga gccaatgcag 1020

gacgtcttct tctgcctgca gcacgccgag gggctcaagt tcccgctcct cttcatggtg 1080

aacgcgttgg tgcacaaggg aatcatcaac cagcaccagc tcacgcctga attcttcagc 1140

ctgctgggga gaagcgagga gaacgtcaat gtggctgcat tgagggattt ctggggggac 1200

aagttcccag tgtttgatgc gtgcgggagg ctgaagaagg cactgaatcg ggtggccagg 1260

aaccccaaac ttctctgcag caaggtcggg gatgaccacg cggaggtgcg gaggctggtg 1320

atcacgccca ccagggctta ttgtctgcct ccagaagtgg agcgctcaaa ccgtgttctt 1380

cggcattacc atgaggtggc tgacaggttt ttgagggtca cttttatgga cgagggtatg 1440

caggtgctga acaacaatgt gctcaactcc ttcactgcac caattgtcaa agacttgatg 1500

tcgaattttt tccagcagaa gacaacggtg tacaagcgtg tcaggatgtt gttgacggag 1560

ggtttccaca tgtgtggaag gaagtactca tttctcgcat tctcatcgaa ccagttaagg 1620

gacaagtcag cttggttctt tgccgaggac agaaagacaa cggtggaagc aattaggaag 1680

tggatgggac ggttcacaag taagaatgtt gcgaagcatg ctgctcgaat ggggcagtgc 1740

ttctcatcca catatgcaac tgtgacaatg cggccggatg aggttgatga gagttttgat 1800

gatgttgtgc ataatgagta cattttctcc gatggaattg gcaaaattac cccagatctt 1860

gcattggaag ttgccgagag gctgcagctg acagataacc cgccatctgc ttatcagatc 1920

aggtttgctg gcttcaaggg tgtcatagct gtctggcaag gacatggtga tgggacacgg 1980

cttttcctga ggccaagcat gaggaagttt gagtctaacc atttggtgtt agaggtggtc 2040

tcctggacaa agttccagcc aggattctta aatcgacaga ttataatatt gctatcctca 2100

ctgaatgtcc cagattctat cttttggcaa atgcaagaga ccatgctttc taacctcaac 2160

aatattctat cagacagaga tgttgctttt gaggttttaa caacttcatg tgctgatgat 2220

ggaaacactg cagcattgat gctcagtgct ggctttgaac ctagaactga accacacttg 2280

aaagcaatgc tcttggctat aaggtctgca caattgcagg atcttttgga aaaagcaagg 2340

atatttgtgc caaagggaag gtggttgatg ggctgtcttg atgagcttgg ggttcttgag 2400

caagggcagt gctttattcg ggcaacagtt ccatcattga atagttattt tgttaagcat 2460

gggtcaagat tttcatcaac agataaaaac acagaggtca ttttgggtac tgtggtaata 2520

gcaaagaatc cctgtcttca tccaggggat gtccgcatcc ttgaagcagt tgatgtgccc 2580

gaactgcatc atctggttga ttgtttggtg ttcccccaga aaggtgagag gccacatgct 2640

aacgaggcat ctgggagcga tcttgatggg gatctctact ttgtgacatg ggatgagaaa 2700

cttatacctc caggcaagaa gagctggaac cctatggact actccccacc tgaagcaaaa 2760

caacttccgc gccaagtatc tcaacatgat atcattgatt tcttcttaaa gaacatgata 2820

agtgagaatc ttggtaggat ctgtaatgct catgttgttc atgctgatct tagcgagtat 2880

ggtgcaatgg atgagaagtg tattcactta gctgagctag cagcaactgc cgtggacttc 2940

cccaagactg gcaaacttgc gataatgcca ccacacctta aaccaaaagt ctaccctgac 3000

ttcatgggaa aggaagatgg acaatcttat aaatcagaaa agattcttgg aaggctttat 3060

cgttcaatcc aagaggcctc caatggtgat gtggtgtcac aagaggtttg cactccaaat 3120

gatctgcctt atgacataga tctggaagtt cctggtgcat cagatttcct cgcgagtgct 3180

tggcaatgca agtgttcata cgacgcgcag ctgagtgcgc tgctcagtca gtacagggtc 3240

cgcactgaag ctgaacttgt gacagggcac ataacgttcc ttgttaagaa cagcagcaag 3300

aagcaaggcg acataaagga caggctgaag actgcttact ctgcactacg caaggagttc 3360

aaaagtacct ttgagagcat agcatcggat caatgcgaga ttggtgatga cgagaagaat 3420

ctgctgtacg agatgaaggc ctctgcctgg taccaggtga cctatcaccc caaatgggtg 3480

gagaagtcga ggggcattct gggcccagat ggtgaggaaa taccggcaag ccttagcttt 3540

gcatggatcc cggtggatta cttggcgcgg ataaagctaa ggtgccatgg taaagtgaga 3600

gttgaaggcc aaaagcctgt tgaaaggctt gcagcataca tctccgagag gatatga 3657

<210>3

<211>3657

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<400>3

atgcgatcgc cgcgcggcgg ggcggccgcg cagccgtcgg ggcggcgcgg cgacacgacg 60

gcggcggcgg cgggcgatct ggtgacgacg caggtcagcc ttggcggctt cgacgccggc 120

gtcgccgcgg gggacctcgc cgacttcctg gagcacgagg tcggcctggt ctggcgctgc 180

cgcgtcaaga cctcctggac gccgccggac tcctacccgg acttcgccct ccccaccgcc 240

cccgcctccg cctcggccgc ggccgcgccg ccgcggtacg accgggtgcc cccgcacgcg 300

tttgtccact tcgcgcgccc ggagggggcg cgccgcgccg cggacctcgc gggggagacc 360

aggctcatcc tgagggggaa gcccctgcgc gtcgcgtccg cgccggacag ctcgctccgc 420

gtgtcccgcc gcagcagcat cgcgccgttc cggttccccg acgtgcgcct cgaggtcggg 480

gcgctcccgt cgcccggcgc gttcctcgcc gcctggcgcg ggccggacgc cgggctcgac 540

ctctccgtcg accccttcga cgggtgctgc cgcctcgtgt tcacccgcga caccgccttc 600

acgttcccgg gcttccgcga ggtcgccgcc atacgctgcg acgtcaagct ggagttcccc 660

gtgcgcgacg tcctggaggt ccgcctgtac cgcctcgact gctcgctgct cctccgcctc 720

gccgccgcgc cgctggtgca ctaccgcacc gccgacgacg acttccacga gccggtcccc 780

ttcgacctgc tcgacgacga cgacccgtgg atacggacca cggacatcac cccgagcggc 840

gccatcgggc ggtgcggggt gtacaggatc tccttctcgg cgcgattctg gcccaagatg 900

gaccgcgcgc tggactacat gagggagagg agggtggcga tcgtcgattg cggcggcgga 960

tgggggccgc ggcgggggct cacagtgcgc gacgagctgg agttcgggga gccaatgcag 1020

gacgtcttct tctgcctgca gcacgccgag gggctcaagt tcccgctcct cttcatggtg 1080

aacgcgttgg tgcacaaggg aatcatcaac cagcaccagc tcacgcctga attcttcagc 1140

ctgctgggga gaagcgagga gaacgtcaat gtggctgcat tgagggattt ctggggggac 1200

aagttcccag tgtttgatgc gtgcgggagg ctgaagaagg cactgaatcg ggtggccagg 1260

aaccccaaac ttctctgcag caaggtcggg gatgaccacg cggaggtgcg gaggctggtg 1320

atcacgccca ccagggctta ttgtctgcct ccagaagtgg agcgctcaaa ccgtgttctt 1380

cggcattacc atgaggtggc tgacaggttt ttgagggtca cttttatgga cgagggtatg 1440

caggtgctga acaacaatgt gctcaactcc ttcactgcac caattgtcaa agacttgatg 1500

tcgaattttt tccagcagaa gacaacggtg tacaagcgtg tcaggatgtt gttgacggag 1560

ggtttccaca tgtgtggaag gaagtactca tttctcgcat tctcatcgaa ccagttaagg 1620

gacaagtcag cttggttctt tgccgaggac agaaagacaa cggtggaagc aattaggaag 1680

tggatgggac ggttcacaag taagaatgtt gcgaagcatg ctgctctaat ggggcagtgc 1740

ttctcatcca catatgcaac tgtgacaatg cggccggatg aggttgatga gagttttgat 1800

gatgttgtgc ataatgagta cattttctcc gatggaattg gcaaaattac cccagatctt 1860

gcattggaag ttgccgagag gctgcagctg acagataacc cgccatctgc ttatcagatc 1920

aggtttgctg gcttcaaggg tgtcatagct gtctggcaag gacatggtga tgggacacgg 1980

cttttcctga ggccaagcat gaggaagttt gagtctaacc atttggtgtt agaggtggtc 2040

tcctggacaa agttccagcc aggattctta aatcgacaga ttataatatt gctatcctca 2100

ctgaatgtcc cagattctat cttttggcaa atgcaagaga ccatgctttc taacctcaac 2160

aatattctat cagacagaga tgttgctttt gaggttttaa caacttcatg tgctgatgat 2220

ggaaacactg cagcattgat gctcagtgct ggctttgaac ctagaactga accacacttg 2280

aaagcaatgc tcttggctat aaggtctgca caattgcagg atcttttgga aaaagcaagg 2340

atatttgtgc caaagggaag gtggttgatg ggctgtcttg atgagcttgg ggttcttgag 2400

caagggcagt gctttattcg ggcaacagtt ccatcattga atagttattt tgttaagcat 2460

gggtcaagat tttcatcaac agataaaaac acagaggtca ttttgggtac tgtggtaata 2520

gcaaagaatc cctgtcttca tccaggggat gtccgcatcc ttgaagcagt tgatgtgccc 2580

gaactgcatc atctggttga ttgtttggtg ttcccccaga aaggtgagag gccacatgct 2640

aacgaggcat ctgggagcga tcttgatggg gatctctact ttgtgacatg ggatgagaaa 2700

cttatacctc caggcaagaa gagctggaac cctatggact actccccacc tgaagcaaaa 2760

caacttccgc gccaagtatc tcaacatgat atcattgatt tcttcttaaa gaacatgata 2820

agtgagaatc ttggtaggat ctgtaatgct catgttgttc atgctgatct tagcgagtat 2880

ggtgcaatgg atgagaagtg tattcactta gctgagctag cagcaactgc cgtggacttc 2940

cccaagactg gcaaacttgc gataatgcca ccacacctta aaccaaaagt ctaccctgac 3000

ttcatgggaa aggaagatgg acaatcttat aaatcagaaa agattcttgg aaggctttat 3060

cgttcaatcc aagaggcctc caatggtgat gtggtgtcac aagaggtttg cactccaaat 3120

gatctgcctt atgacataga tctggaagtt cctggtgcat cagatttcct cgcgagtgct 3180

tggcaatgca agtgttcata cgacgcgcag ctgagtgcgc tgctcagtca gtacagggtc 3240

cgcactgaag ctgaacttgt gacagggcac ataacgttcc ttgttaagaa cagcagcaag 3300

aagcaaggcg acataaagga caggctgaag actgcttact ctgcactacg caaggagttc 3360

aaaagtacct ttgagagcat agcatcggat caatgcgaga ttggtgatga cgagaagaat 3420

ctgctgtacg agatgaaggc ctctgcctgg taccaggtga cctatcaccc caaatgggtg 3480

gagaagtcga ggggcattct gggcccagat ggtgaggaaa taccggcaag ccttagcttt 3540

gcatggatcc cggtggatta cttggcgcgg ataaagctaa ggtgccatgg taaagtgaga 3600

gttgaaggcc aaaagcctgt tgaaaggctt gcagcataca tctccgagag gatatga 3657

<210>4

<211>10793

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<400>4

gagctctgcc ttgtgattgc tttgaggatc cctccccctt ctgtcgctcc ttctgccacg 60

cgagccactg ctcctccatg aggaagagct ggcctccagc tggagtagtt gtcggcgatg 120

aatttggctg tcgttcctcc accttgggac gcccaatgac gtcatcgatg gtgagtgtcg 180

aaagatccaa caaggtctca atcgacactg tgatttggga gaatcactct gggacgacgt 240

gcaggaactt cccgatgatg tttctgctcc tcgatctgtt ctaatgtcca aagctgagac 300

actaggcttg tgagccacag ggcgaagtag tcgatcgatt ctccatcata gaatgagatg 360

gattcatgtt cccagcgcgc cgatgtgaat cactttgatg gcatcccaga cgtccttcac 420

ggattcattg gtggctcgtt gcagtcacca tactccaccg cgtcccaaag gtcgcgggct 480

tgcagcatca ccttcatcaa cagcgaccac tcgatgtagt tagttcgcgt gagggtgggg 540

aaagcagcag cgccgccaac ctccctgaca gtccgctgca caacaatctc tagaacagta 600

gcgcctcgac ctcgtccttg ctgtgctttt ggcgatagcg agtgacagcg gcctcagtgt 660

tgtggcgacc tagaagcatt ggctcccaca tctggtactt catctctttc acactccttt 720

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gaactgaatc tgaaatatga gctgaaaagc ttactaacgc aagaagggta catgtccttt 840

tataggactt ttaagttgtg ctacagtaac cagcatgatg ttcagacggc tgtttgcata 900

taaagtaaaa tctaaatttg ctccagcatg atgttcagac ggctgtttgc agataaagta 960

aaatctaaat ttgctacagt aactggcata cttcctaagg aaccagttga ctgcagcccg 1020

caaggattat actaacaaag aggactagcg tctggatcgg agcccgcatc agccccgcct 1080

taggccaccg tcgcatgaat attttgtttg aaaaacatcg atcaaacgtg tgcattggag 1140

actgaagatg ccctaaagac aagtagaaaa agaaaagagt tagtacttca gtagttggat 1200

tgattttaca tccaaatgtt tttattatat attgaccaaa atgttgcttt tatattgttt 1260

tgcctctgca atgccttccc ttttagtttt tctttaaatc cacactcgaa ctgcctcatt 1320

tatttgtttc tgaatatgtg ctatccatta ccaaagccta tggatctgct gcagattcta 1380

agtgaatatt taatgtgtta aagagacact ggctataatt aatgtgctga tggtgttcaa 1440

tgtatatact ctttatatga agtaatgatt gaacttggac tcgcctccta ttgcagagga 1500

ttagtctgaa cacttgctag atggaaattt gtgggccttt ggtacttgaa tctttaaatt 1560

ttggtgttac cgtgcttcgg cagatatctg atttctgaag tgtgaacatc tagtaaactg 1620

acccttattt tctgtcgtac agtaatgctg aaactacctt cttgtttggc ccagctttct 1680

cacaagattt ctctttgatt tcagctcgaa tgtaacgcct gtggacactc gtggttctcg 1740

tccagagatg ccatcacaac cctgacagtg gatactccaa caagtgctgg tgggagcgtg 1800

ggcacggcac catgggcaac agccaagttc gatgtcatgg agaagcagct cacgagccca 1860

cgggatcatc agccggacaa gccgttggcc gatgctctcc acaagagcgc ggcaccgtac 1920

atgcccacgc tggagaagca gaaatcgttc ggcaagcaca agccagacga gccctcgtcg 1980

gcgccagcag ctggccacga gtagatcaga cggtccacac gcactacacc tctcgtcaga 2040

actagtagct agctagacac gattagaaga gcacgcgcac ccacggttcg catcgtcatt 2100

agggagtttc agagattacg tgtacagatg taattgtgtt ttgtatgtcg tgtactacca 2160

tctgagggag gctgagcaga tcagacaaac tctaggttgg catcctcctg tcgcctctaa 2220

tcgtgtgttt taacttgcat cactgtcaat gcatttcagt gctgtggacg cagccggtac 2280

tcctgtacat cgtgagggtg tcaatggatc gtttttggct actgctcatg ttttgtgtgt 2340

gtacttccca tcaattctgc tcgagctgta tctgtttgta cccaaatgat acgggcatca 2400

ggagtatgca acccaactat gaccaataaa aaaaattccc tgcccaagca gcttatgtct 2460

agaattttgc atgccaaatg ggacaacaaa atgatactct ctgtcccaaa ataaccttat 2520

ttacagccct atagaaattt ttaaaacaat ttttctataa aaatttttta agcaccgttt 2580

aataatttgg gaagggtgcc catagaaaag aagaaagtga actcggcctt aaaccatcat 2640

cactcttgtg gttatgtggt atgctgttgt gccccttttt tctaaaaaaa aaaagagggc 2700

aaaaactgtc ttgtactccc tccgtattcg taaagaaagt cgttcaggac aatgtttaag 2760

tcaaaccttg ggaatataaa tcatgaataa ctctcaagtt attgagtttg aaaatgtaaa 2820

aattatatga atagatttgt cttgaaaaac attttcataa aagtatacat atcacttttt 2880

aataaatatt ttttatagaa ataagaagtc aaagttgtgt tttgaagacc gtgtcgctgt 2940

ccaaaacgac tttctttatg aatacggagg gagtatatac aagacttgat cagagatacg 3000

agatcatcat taacaacgag tgggcaatga gaagcattcc agtcacttca ctttgactgt 3060

gtttagttcg gcctaaagtt tagaatttag ttgaaattgg agacgatgtg actgaaaagt 3120

tgtgtgtgta tgaaagattt gatgtgatag aaagttggaa gtttggaaaa aaactttgga 3180

actaaacagc gcttttagca acattactct gcacaatttg gtgtcgctgc agtacccgtt 3240

tttacccagg gacatcccat caacaaccgc agccccatct tctagagatg aaaacggtga 3300

cgaagaaaat tacgggccga cttgggtcgt ttctatataa gtggtacgtt ttcaattctg 3360

gctttctttt ttgttttttc taatttgttt tagcgccata ttacaatcgc cgctttaagt 3420

acttaatatg gtacatagga ttaatgtaca acggactaat agaacagttc tcatagagat 3480

gctacctttt tcgacagttt ttgttgccct catctggggc acaaataagg agacgcacaa 3540

cctgaacttg aaatattgcc aaaagctgca ggcagcgtat atttgtgcat ttcataatat 3600

agacagccct caactgaaac gtacagtttt tcaggcttga ggggcatgta agaaggaaca 3660

aaagcacact gaaacattcg ggagatcaag ttcagtgaag tgaacaaaaa tgaaaagaaa 3720

aaaaaactca gatattttgt acgcatgccc tttgaaccgg cattacgaat ggcagagtgg 3780

tcttactgcg acctttgcat tgtttcatca tatcctctcg gagatgtatg ctgcaagcct 3840

ttcaacaggc ttttggcctt caactctcac tttaccatgg caccttagct ttatccgcgc 3900

caagtaatcc accgggatcc atgcaaagct aaggcttgcc ggtatttcct caccatctgg 3960

gcccagaatg cccctcgact tctccaccca tttggggtga taggtcacct ggtaccaggc 4020

agaggccttc atctcgtaca gcagattctt ctcgtcatca ccaatctcgc attgatccga 4080

tgctatgctc tcaaaggtac ttttgaactc cttgcgtagt gcagagtaag cagtcttcag 4140

cctgtccttt atgtcgcctt gcttcttgct gctgttctta acaaggaacg ttatgtgccc 4200

tgtcacaagt tcagcttcag tgcggaccct gtactgactg agcagcgcac tcagctgcgc 4260

gtcgtatgaa cacttgcatt gccaagcact cgcgaggaaa tctgatgcac caggaacttc 4320

cagatctatg tcataaggca gatcatttgg agtgcaaacc tcttgtgaca ccacatcacc 4380

attggaggcc tcttggattg aacgataaag ccttccaaga atcttttctg atttataaga 4440

ttgtccatct tcctttccca tgaagtcagg gtagactttt ggtttaaggt gtggtggcat 4500

tatcgcaagt ttgccagtct tggggaagtc cacggcagtt gctgctagct cagctaagtg 4560

aatacacttc tcatccattg caccatactc gctaagatca gcatgaacaa catgagcatt 4620

acagatccta ccaagattct cacttatcat gttctttaag aagaaatcaa tgatatcctg 4680

ttacaaaaac aagatctagt caatgatatg cattatagca atagatactt gcccacaaat 4740

caagaaatct acaatttgca gaaactaggg gaattaatat gagtcagttt tttaagcagc 4800

tatatgcata tgcgattgga gaaaatgtat caccaatgcc agatttcaaa tccaaataac 4860

aatctacatg gtaacaactt tgtaaataca tcaccatatt ccaatttgaa gttggcagct 4920

tgccaagtag gaatatatga taacatgagg taaattcaga tggtgaataa aatgagcgct 4980

aaccaaccat gctatgctaa tagtttgcta aagcttaact tcgtaaatat cacaaaacca 5040

tactaaaact atgaaggaaa ccacaaccat tacttgttga cagctagaaa ccacaaatag 5100

tataaccaaa taataaaata acaaggaaga tgaaaatcat tacttctaaa tttgcattag 5160

aatatggaca gtgcaagaaa gaaagggtat aagaaaccct gaatacaaaa cacgatctaa 5220

gaaccaagca tgtccacgac caagtcaacc acacactcga ccaagactag agactagttg 5280

cccagcgttt gagcaagcga taacctgcta gttacatgca aattatcagg gttcatatgg 5340

atatgcatca aaagctctta gataggacag agcacccaac tccaatcaag gatttccttg 5400

gatccaggtg tgaggcccta aatggttgaa aatgttatgt ttgatgtttt ttcaggggtg 5460

atttggacag gtagaaacac agatggcaat taatcatgta ctccttcaac agctggttga 5520

tttaaacttt atataaagtt gtaattgcag aaacggaagg taatgctacg taaagaagat 5580

agggaagtca caaatgtgaa gaaatggcct cggtagttca gcagggagat gatgcctata 5640

aggtttacaa atgctaggag gacctctctg gtttggactt aattttgatt gctgtaatat 5700

atctgagatt ctaaagctat tccctgtttt tgctggtgtg ccagtgtgcc cgaccatagc 5760

ttgcgtttaa tttctttatc tcagttctgt aaagaaaacc catatatgct tccaatgaaa 5820

ggagggttat ccatcgtata aaaaggacat gtatgtagga aacaaaaaat tatgggacat 5880

tgctgacatc tcaagagtta ttgaacttac atgttgagat acttggcgcg gaagttgttt 5940

tgcttcaggt ggggagtagt ccatagggtt ccagctcttc ttgcctggag gtataagttt 6000

ctcatcccat gtcacaaagt agagatcccc atcaagatcg ctcccagatg cctcgttagc 6060

atgtggcctc tcacctttct gggggaacac caaacaatca accagatgat gcagttcggg 6120

cacatcaact gcttcaagga tgcggacatc ccctggatga agacagggat tctttgctat 6180

taccacagta cccaaaatga cctctgtgtt tttatctgtt gatgaaaatc ttgacccatg 6240

cttaacaaaa taactattca atgatggaac tgttgcccga ataaagcact gcccttgctc 6300

aagaacccca agctcatcaa gacagcccat caaccacctt ccctttggca caaatatcct 6360

tgctttttcc aaaagatcct gcaattgtgc agaccttata gccaagagca ttgctttcaa 6420

gtgtggttca gttctaggtt caaagccagc actgagcatc aatgctgcag tgtttccatc 6480

atcagcacat gaagttgtta aaacctcaaa agcaacatct ctgtctgata gaatattgtt 6540

gaggttagaa agcatggtct cttgcatttg ccaaaagata gaatctggga cattcagtga 6600

ggatagcaat attataatct gtcgatttaa gaatcctggc tggaactttg tccaggagac 6660

cacctctaac accaaatggt tagactcaaa cttcctcatg cttggcctca ggaaaagccg 6720

tgtcccatca ccatgtcctt gccagacagc tatgacaccc ttgaagccag caaacctgat 6780

ctgataagca gatggcgggt tatctgtcag ctgcagcctc tcggcaactt ccaatgcaag 6840

atctggggta attttgccaa ttccatcgga gaaaatgtac tcattatgca caacatcatc 6900

aaaactctca tcaacctcat ccggccgcat tgtcacagtt gcatatgtgg atgagaagca 6960

ctgccccatt cgagcagcat gcttcgcaac attcttactt gtgaaccgtc ccatccactt 7020

cctaattgct tccaccgttg tctttctgtc ctcggcaaag aaccaagctg acttgtccct 7080

taactggttc gatgagaatg cgagaaatga gtacttcctt ccacacatgt ggaaaccctc 7140

cgtcaacaac atcctgacac gcttgtacac cgttgtcttc tgctggaaaa aattcgacat 7200

caagtctttg acaattggtg cagtgaagga gttgagcaca ttgttgttca gcacctgcat 7260

accctcgtcc ataaaagtga ccctcaaaaa cctgtcagcc acctcatggt aatgccgaag 7320

aacacggttt gagcgctcca cttctggagg cagacaataa gccctggtgg gcgtgatcac 7380

cagcctccgc acctccgcgt ggtcatcccc gaccttgctg cagagaagtt tggggttcct 7440

ggccacccga ttcagtgcct tcttcagcct cccgcacgca tcaaacactg ggaacttgtc 7500

cccccagaaa tccctcaatg cagccacatt gacgttctcc tcgcttctcc ccagcaggct 7560

gaagaattca ggcgtgagct ggtgctggtt gatgattccc ttgtgcacca acgcgttcac 7620

catgaagagg agcgggaact tgagcccctc ggcgtgctgc aggcagaaga agacgtcctg 7680

cattggctcc ccgaactcca gctcgtcgcg cactgtgagc ccccgccgcg gcccccatcc 7740

gccgccgcaa tcgacgatcg ccaccctcct ctccctcatg tagtccagcg cgcggtccat 7800

cttgggccag aatcgcgccg agaaggagat cctgtacacc ccgcaccgcc cgatggcgcc 7860

gctcggggtg atgtccgtgg tccgtatcca cgggtcgtcg tcgtcgagca ggtcgaaggg 7920

gaccggctcg tggaagtcgt cgtcggcggt gcggtagtgc accagcggcg cggcggcgag 7980

gcggaggagc agcgagcagt cgaggcggta caggcggacc tccaggacgt cgcgcacggg 8040

gaactccagc ttgacgtcgc agcgtatggc ggcgacctcg cggaagcccg ggaacgtgaa 8100

ggcggtgtcg cgggtgaaca cgaggcggca gcacccgtcg aaggggtcga cggagaggtc 8160

gagcccggcg tccggcccgc gccaggcggc gaggaacgcg ccgggcgacg ggagcgcccc 8220

gacctcgagg cgcacgtcgg ggaaccggaa cggcgcgatg ctgctgcggc gggacacgcg 8280

gagcgagctg tccggcgcgg acgcgacgcg caggggcttc cccctcagga tgagcctggt 8340

ctcccccgcg aggtccgcgg cgcggcgcgc cccctccggg cgcgcgaagt ggacaaacgc 8400

gtgcgggggc acccggtcgt accgcggcgg cgcggccgcg gccgaggcgg aggcgggggc 8460

ggtggggagg gcgaagtccg ggtaggagtc cggcggcgtc caggaggtct tgacgcggca 8520

gcgccagacc aggccgacct cgtgctccag gaagtcggcg aggtcccccg cggcgacgcc 8580

ggcgtcgaag ccgccaaggc tgacctgcgt cgtcaccaga tcgcccgccg ccgccgccgt 8640

cgtgtcgccg cgccgccccg acggctgcgc ggccgccccg ccgcgcggcg atcgcatggc 8700

ttgggtggtt gggtgggagc tgggaggagt gagagagaga gagagagggg aagatcaatc 8760

ggattcggtt attaaatttt tgatgagtaa ataaatttcg gaggggttta agcgagggga 8820

caccaacgaa gaggacgggt gcgaactgtg tgtctggccc cacatgtcag tgtttagtgc 8880

agtactggag agtagagacg atttaattgc gtgtttaaat tattattatt ttagttataa 8940

ttgtacggtt atgtttatca ccgggagtaa aaagctttta aaggatgttg tatttttgtc 9000

aaattaagat tggtatatca ttatttgaaa agagaggaag ttttttgttt gcaatttttt 9060

ttaaaaaaaa gttcttattt attaagaaga gtgatgagtg attagtttaa ttgtttagca 9120

tcaggaggat gagaagggag ttaatgcatg gagcaagaaa gatggtgaga agcactgaag 9180

agatctcttt ttcaggagga atcactgaag acatctgatg tttaattgca aggttggaag 9240

ctgaaggggc cgcttgtttt gtactacagt actcctatct tttaccaagc caaaagaaat 9300

atcaacgtaa atgctgatag atactccact cttcttctgt ttggttctga gattgtggaa 9360

attttggcaa gccgtacgtg tttgccatca gagcaagttc aataggatag ccaactacta 9420

actccaattc atctatagct aatctaatag cttagaatag ttacatacta cactattaat 9480

acctggtccc acctgtcata gacacactgc gtcttggagt ccatgctgca gctggctaca 9540

aatctgtagc ccgctgccat tctctctcct catttatcta cttaaaatat gtttgcagct 9600

ggcttatagt ctgctattat acccgctctc aggtgttagg aaccattgca cataaaacga 9660

aacagcggat taatacaaga ttaattaagt attatctaaa ataataaaaa aagagtaata 9720

tggtttttta aaacaatcat tttataactt ttttttaaaa aaaaatatgc cgttagcggt 9780

tcagaaagtg tgcgcatgga aaataaactt gagataaggg acttctaaat gaagtctaaa 9840

atatgagtac aaccaaacaa cttctaaatt ttagaatatt actttatcaa aattttggca 9900

atgctataac atctatttat atcactggtg gagaaagcgt ttgtagtccc ggttcgtaac 9960

ctccctttag tcccgatttc caaaccggga ctaccaatcc gagactaaag atcgctatct 10020

ttagtccggg gtgaaataac cgggactagc cacgtggccg gctaagccat ctttactccc 10080

ggttggtgtt accaaccggg actaaagatc gagctgacct tttttttttt gcatggccct 10140

gttgctgcat ggtttatata tatatattta aaccatgcat atatatgttt caatacatat 10200

atatgtatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatattg 10260

tattatattt atatatgttt caatacatat gtacatgcat aatatatatg tatttataca 10320

tatatatgtt atgcaaatgc atatgtgtgt gtgtgtatat atatatatat atatatatat 10380

atatatatat atatatatat atatatatat atatatatga ccaaaatata tatttacatt 10440

atagaaaatg tgtacacatg catatagaaa catatgtagt catgtattaa ttacaatcca 10500

ttatatgtcc tagctagcta cgatttcgac gtagtagtag tcgctacctc agaagctaag 10560

gacccatgaa ttgtgtttcc gtcgtagtag aattcaccct tgggatcaag gatttgttcg 10620

ttgatgaatc ccatgagttg ttcttgaacc gccgcgataa attccttgtg tgtgatcagg 10680

ttatccctca tgcgaataaa ctatatgaat gtatgaaatt gattagtaat taaacaacaa 10740

atcgatacgt aatgaaattt tgaatttatt tgtacataca tcgagctgag ctc 10793

<210>5

<211>530

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<400>5

ggatccgtcg acgattaagg aatctttaaa catacgaaca gatcacttaa agttcttctg 60

aagcaactta aagttatcag gcatgcatgg atcttggagg aatcagatgt gcagtcaggg 120

accatagcac aagacaggcg tcttctactg gtgctaccag caaatgctgg aagccgggaa 180

cactgggtac gtcggaaacc acgtgatgtg aagaagtaag ataaactgta ggagaaaagc 240

atttcgtagt gggccatgaa gcctttcagg acatgtattg cagtatgggc cggcccatta 300

cgcaattgga cgacaacaaa gactagtatt agtaccacct cggctatcca catagatcaa 360

agctgattta aaagagttgt gcagatgatc cgtggcaagt taagggacaa gtcagctgtt 420

ttagagctag aaatagcaag ttaaaataag gctagtccgt tatcaacttg aaaaagtggc 480

accgagtcgg tgcttttttt ccacataatc tctagaagat cttcggtacc 530

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>Artificial Sequence

<400>6

agttaaggga caagtcagct 20

Claims

1.OsRDR6蛋白质在调控植物雄性育性中的应用；

所述OsRDR6蛋白质是如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：

A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2.与OsRDR6蛋白质相关的生物材料在如下B1)-B4)任一种中的应用：

B1)调控植物雄性育性；

B2)培育雄性不育植物；

B3)培育雄性可育植物；

B4)植物育种；

C1)编码权利要求1中所述的OsRDR6蛋白质的核酸分子；

C2)含有C1)所述核酸分子的表达盒；

C3)含有C1)所述核酸分子的重组载体；

C4)含有C2)所述表达盒的重组载体；

C5)含有C1)所述核酸分子的重组微生物；

C6)含有C2)所述表达盒的重组微生物；

C7)含有C3)所述重组载体的重组微生物；

C8)含有C4)所述重组载体的重组微生物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：C1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

4.抑制OsRDR6蛋白质活性的物质在培育雄性不育植物中的应用；

或，抑制OsRDR6蛋白质编码基因表达的物质或敲除OsRDR6蛋白质编码基因的物质在培育雄性不育植物中的应用；

所述OsRDR6蛋白质是如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：

A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述物质为CRISPR-Cas9系统，所述CRISPR-Cas9系统包括Cas9蛋白质和sgRNA，所述sgRNA的靶序列如序列表的序列6所示。

6.一种培育雄性不育植物的方法，为如下D1)或D2)：

D2)包括如下步骤：抑制目的植物中OsRDR6蛋白质编码基因的表达或敲除目的植物中OsRDR6蛋白质编码基因，得到雄性不育植物：

所述OsRDR6蛋白质是如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：

A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述OsRDR6蛋白质编码基因为如下1)或2)或3)或4)或5)的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列4所示的DNA分子；

8.一种培育雄性可育植物的方法，包括如下步骤：提高目的植物中OsRDR6蛋白质的活性和/或含量，得到雄性可育植物；

所述OsRDR6蛋白质是如下A1)或A2)或A3)或A4)任一所示蛋白质：

A1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

9.一种sgRNA，其靶序列如序列表的序列6所示；

或，一种CRISPR-Cas9系统，其包括Cas9蛋白质和权利要求9所述的sgRNA。

10.权利要求9所述的sgRNA或CRISPR-Cas9系统在培育雄性不育植物或植物育种中的应用。