CN113913433B - Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用 - Google Patents

Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于农业害虫防控技术领域，具体涉及Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用。当抑制Jupiter基因表达时，雌虫的卵巢发育不正常，卵巢变小，卵巢管缩短，卵子处于发育早期，没有成熟卵粒或较少成熟卵粒，且排列松散。杂合雌虫和雄虫野生型交配后，产下的卵块孵化率有不同程度的降低，雌性的生殖能力显著降低，不能繁殖，从而为鳞翅目害虫的防控提供了新的靶标基因。

Description

Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用
技术领域
本发明属于农业害虫防控技术领域，具体涉及Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用。
背景技术
斜纹夜蛾(Spodoptera litura,Sl)属鳞翅目(Lepidoptera)、夜蛾科(Noctuidae)，是一种危害300多种农作物的经济害虫，广泛分布于热带亚热带地区，也严重危害我国东南地区的农作物，造成大量失收减产。除了通过直接杀灭虫体对斜纹夜蛾进行防治外，降低虫体的生殖能力也是防控斜纹夜蛾的一种新的思路。
卵巢是卵子发生和发育的场所，幼虫的卵巢白色透明，进入蛹期后可迅速发育形成卵巢管，经历乳白透明期和卵黄发育期后，到成虫则进入卵壳形成期。在成虫的卵巢管中，从端部到基部依次分布着不同发育程度的卵子，基部是成熟的卵子。
Jupiter是一类微管结合蛋白，用于示踪微管的动态变化。果蝇背板融合时，接触面的边缘细胞中伸出突起，并特异表达了Jupiter。突变Jupiter的上游基因Tkv会导致组织闭合的缺失，Jupiter在边缘细胞中的表达下调，会使微管的排列紊乱。但目前对Jupiter基因的机制研究较少，该基因在斜纹夜蛾中的功能尚不清楚，且目前尚未有关于采用Jupiter基因进行斜纹夜蛾防控的报道。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提出了Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用，当Jupiter基因被抑制后，虫体卵巢发育不正常，从而降低生殖能力，较少卵块的孵化率，最终达到防控鳞翅目害虫的目的。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
本发明提供了Jupiter基因作为靶点在鳞翅目害虫防控中的应用，所述Jupiter基因的开放阅读框序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了一种防治鳞翅目害虫的药物，所述药物包括Jupiter基因的抑制剂，所述Jupiter基因的开放阅读框序列如SEQ ID NO.3所示。
优选地，所述鳞翅目害虫为斜纹夜蛾。
优选地，所述Jupiter基因的抑制剂包括针对Jupiter基因所设计的sgRNA和Cas9蛋白。
本发明利用CRISPR/Cas9技术抑制Jupiter的表达，探究Jupiter基因对斜纹夜蛾成虫生殖能力的作用。向2小时内产出的受精卵注射Jupiter的sgRNA和Cas9蛋白的混合物，筛选出缺失5个碱基的有义突变体(杂合和纯合)，将雌性杂合体与野生型雄性交配。结果表明：杂合和纯合的雌性个体卵巢不正常，卵巢变小，卵巢管缩短，卵子处于发育早期，没有成熟卵粒或较少成熟卵粒，且排列松散。杂合雌虫和雄虫野生型交配后，产下的卵块孵化率有不同程度的降低，雌性的生殖能力显著降低，不能繁殖。提示Jupiter基因可作为斜纹夜蛾防治的新靶标基因。
具体地，所述sgRNA和Cas9蛋白的使用浓度均为1μg/μL，所述sgRNA与Cas9蛋白的用量比为1:1。
具体地，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用，当抑制Jupiter基因表达时，雌虫的卵巢发育不正常，卵巢变小，卵巢管缩短，卵子处于发育早期，没有成熟卵粒或较少成熟卵粒，且排列松散。杂合雌虫和雄虫野生型交配后，产下的卵块孵化率有不同程度的降低，雌性的生殖能力显著降低，不能繁殖，从而为鳞翅目害虫的防控提供了新的靶标基因。
附图说明
图1为斜纹夜蛾Jupiter的氨基酸序列与其他昆虫的同源性比对图(部分)；
图2为斜纹夜蛾Juppter基因的结构及sgRNA位点(剪刀处)；
图3为Jupiter在不同龄期斜纹夜蛾中的表达水平【Zygote：受精卵；L:即Larva，幼虫；L1-L6：一龄至六龄幼虫；Pupa：蛹；Moth：成虫；a-d：不同字母表示具表达差异显著性：采用ANOVA(多个处理间的两两比较)或独立样本T测验(两个样品间比较)来进行差异比较分析。若P值小于0.05时，表示差异显著】；
图4为Jupiter基因在不同龄期卵巢中的表达水平【OV：卵巢；L6D6：六龄六天；PD8：蛹期8天；PD12：蛹期12天；AD1：成虫1天；AD3：成虫3天；a-d：不同字母表示具表达差异显著性：采用ANOVA(多个处理间的两两比较)或独立样本T测验(两个样品间比较)来进行差异比较分析。若P值小于0.05时，表示差异显著】；
图5为斜纹夜蛾Jupiter纯合突变体基因型图(-5/-5：缺失5个碱基)；
图6为斜纹夜蛾Jupiter纯合突变体的卵巢形态图；
图7为斜纹夜蛾Jupiter+/-雌性与雄性Jupiter+/+交配后产卵图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
实施例1Jupiter基因克隆及时空表达模式
1材料与方法
1.1供试昆虫
实验所用斜纹夜蛾购买于淘宝“科云科技”，并于本实验室保种传代。将其置于人工培养箱饲养，温度为26℃，相对湿度为55±5％，光周期为14h：10h(白天：黑夜)。
人工培养所用的培养基配方及制作流程如下：
将14g琼脂粉溶解于900mL水中并煮沸，然后加入酵母粉40g、麦胚粉150g、山梨酸4g、维生素C4g、蔗糖4g、尼泊金甲酯4g、搅拌均匀，再加入亚油酸继续搅拌一分钟左右，最后将培养基倒入容器内，冷却后置于4℃保存。
1.2仪器设备及主要试剂
1.2.1仪器设备
高速冷冻离心机(Centrifuge 5415D:Eppendorf,德国)；PCR仪(7300 Real TimePCR System：ABI,美国)；凝胶成像系统(ImageQuant300：GE Healthcare,美国)；核酸电泳仪(Power PAC Basic：BIORAD,美国)；实时荧光定量PCR仪(QuantStudio 6 Flex：Life,美国)。
1.2.2主要试剂
RNA iso Plus和Evo-M-MLV反转录试剂盒II(含去除gDNA试剂，用于qPCR)，购自瑞真生物有限公司；PCR Mix，购自诺唯赞生物有限公司；Hipure Gel Pure DNAKits凝胶回收试剂盒，购自Magen公司；Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox)，购自翊圣生物有限公司。
1.3实验方法
1.3.1取材
取材的范围包括不同龄期的斜纹夜蛾：受精卵、一龄至六龄期幼虫、蛹、成虫的整虫以及不同龄期斜纹夜蛾的卵巢：六龄六天、蛹期8天、蛹期12天、成虫1天、成虫3天的卵巢。
选取生长状况接近的斜纹夜蛾若干置于冰上冷冻麻醉，固定在解剖盘上。用灭菌烘干后的工具将所需的组织解剖出并在DEPC水溶液中分离干净。在Ep管中加入适量的RNAiso Plus，用液氮冷冻后放入-80℃冰箱保存。
1.3.2总RNA提取
RNA的相关实验所用到的解剖工具、试剂瓶，量筒，枪头、Ep管等都需要经过高温高压蒸汽灭菌锅灭菌和120℃烘干10h以上。
根据需要，将待提取斜纹夜蛾组织材料置于离心管中，根据材料大小加入200-600μL Trizol和研磨珠在70Hz下研磨2min，置于冰上5min。加入Trizol用量1/5的氯仿/异戊醇(24：1)(50-120μL)，剧烈震荡15s,冰上放置10min后，离心(12000rpm,4℃)15min。取上清，加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀后于-20℃放置1h，离心(12000rpm,4℃)20min。弃上清，向沉淀加入预冷的75％DEPC乙醇，洗涤RNA沉淀，离心(7000rpm,4℃)5min(此步骤重复1次)。弃上清，用移液枪吸走剩余液体，在空气干燥10min使乙醇挥发干净。待沉淀刚清亮，加入适量RNA free water溶解。检测RNA浓度，大于200ng/μL为佳，电泳检测RNA质量，要求电泳条带为18S，28SrRNA完整，-80℃保存。
1.3.3反转录
采用瑞真生物有限公司的AG Evo-MLV反转录试剂盒II(含去除基因组的DNAse)，实验步骤按照说明书进行。
(1)去除基因组DNA
根据下表所示的体系配置反应液：
震荡离心后放置于PCR仪中，反应条件为42℃，2min；4℃保温。程序结束后取出在冰上冷却。
(2)反转录体系及程序
根据下表所示的体系配置反转录体系：
涡旋离心后放置于PCR仪中，反应条件为37℃，15min；85℃，5sec；4℃保温。反应结束后取出PCR管，此时获得的即为cDNA样品。
1.3.4 PCR反应
基于斜纹夜蛾在NCBI中的核苷酸序列(XP_022815365.1)设计引物(SlJupiter-F：ATGGCAACCTACGCTCAGT，SEQ ID NO.1；SlJupiter-R：CTACCAGAGGCCGGAGGAGT，SEQ IDNO.2)，扩增Jupiter基因(SlJupiter X4)。
PCR反应的体系如下表所示：
反应程序：预变性95℃，5min；变性95℃，30s；复性57℃，30s；延伸72℃，30s；32个循环。
获得PCR产物后进行电泳检测。并按照Magen公司的凝胶回收试剂盒说明书纯化电泳产物，回收完成后将产物送至生工生物有限公司进行测序，所得序列通过与NCBI中的序列比对一致后获取Jupiter基因。
对测序结果进行生物学分析：如图1所示，所述Jupiter基因在昆虫中特异表达，该基因的开放阅读框为510bp，编码169个氨基酸(SlJupiter X4)，预测分子量为18.7kDa，等电点为9.886，是未折叠的亲水性无序蛋白。如图2所示，Jupiter基因具有多种亚型，而且斜纹夜蛾的Jupiter基因的编码蛋白存在与微管结合的结构域：C端的Jupiter保守结构域(Pfam：17054)。
Jupiter基因的核苷酸序列(SlJupiter X4，SEQ ID NO.3)：
ATGGCAACCTACGCTCAGTTCAAACATGTTGAGCTCTACAAAATCGGGCACGGAAAGAACAGGGTGCCGAACGCGCCCAAGAGCTGCATTGCGGAGATCTTCAACGCGGATCAGACTGATGGCAGCCCAGTGAAGAATGGTGCCGCTAAACCTCGCGTGGTGCGCGACACGCCCACTCGCCCCCGAGACACGCACTCCAGGCTCTTCGGACAGGTGCGTCAAACACAAGGTGTAAACAACCCAGTATCTCCGATGGTGACTGACACGATCCGCAGTCACATTCAGTTTGGCGACTCTGAGATGAACGGTTCAAGCCCCACACACTCTCCTTCGAAGATGGGCAACGGTAGCGCGACCTCTACACCCAGCCGAGAAGGCAACCCAATCACCGGTGACGGCTACAAATCGATGAACGGCCAGATCAACACGGTGACGTCAATAAACGGCAATAGCCTAATGGGCAACAGTAACCGCGTGCCGCCCGGTGGCTACTCCTCCGGCCTCTGGTAG；
Jupiter的氨基酸序列(SlJupiter X4，SEQ ID NO.4)：
MATYAQFKHVELYKIGHGKNRVPNAPKSCIAEIFNADQTDGSPVKNGAAKPRVVRDTPTRPRDTHSRLFGQVRQTQGVNNPVSPMVTDTIRSHIQFGDSEMNGSSPTHSPSKMGNGSATSTPSREGNPITGDGYKSMNGQINTVTSINGNSLMGNSNRVPPGGYSSGLW。
1.3.5荧光定量PCR
qPCR扩增体系如下表所示：
其中，引物SlJupiter-qF的序列为CGAGAAGCATCGGTGATACAAGTTT，SEQ ID NO.5；SlJupiter-qR：CTGAATGTGACTGCGGATCGTGT，SEQ ID NO.6。
反应程序：预变性95℃，5min；变性95℃，10s；退火/延伸60℃，30s；40个循环。
1.4实验结果
利用qRT-PCR技术检测Jupiter基因在发育时期整虫和变态发育时期卵巢的表达量。Jupiter在胚胎期和蛹期的表达量显著高于幼虫期和成虫期，暗示Jupiter在胚胎发育和变态发育有重要作用(图3)。在幼虫六龄六天的卵巢表达量显著高于蛹期和成虫期，暗示了该基因在卵巢快速发育时，在启动发育阶段发挥重要作用(图4)。
实施例2 SlJupiter基因的功能研究
1材料与方法
1.1供试昆虫
同实施例1，成虫之间开始交配产卵，及时收集产下的卵块，排卵后用于显微注射。
1.2仪器设备及主要试剂
1.2.1仪器设备
高速冷冻离心机(Centrifuge 5415D：Eppendorf,德国)；PCR仪(7300 Real TimePCR System：ABI,美国)；电泳仪核酸电泳仪(Power PAC Basic：BIORAD,美国)；Thermo超低温冰箱(Thermo electron：Corporation,美国)；显微注射仪(Eppendorf：FemtoJet 4i；体视显微镜Olympus,日本)。
1.2.2主要试剂
PCR Mix，购自诺唯赞生物有限公司；Hipure Gel Pure DNA Kits凝胶回收试剂盒，购自Magen公司；Cas 9蛋白：购自美国PNA Bio公司；MEGA Script T7 kit体外转录试剂盒。
1.3实验方法
1.3.1 sgRNA的合成和制备
(1)根据Jupiter基因序列在http://CRISPR.dbcls.jp/网址上设计sgRNA的靶位点(如图1所示的剪刀处)，靶位点要求满足PAM序列特点：5’-GG-(N)18bp-NGG-3’，所设计的靶位点如T10-F所示：TAATACGACTCACTATAGGCGTGTCGCGCACCACGCGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC，SEQ ID NO.7。
(2)通过PCR获得sgDNA
PCR的反应体系如下表所示：
反应程序：Step 1：94℃，2min；Step 2：94℃，15s；Step 3：55℃，30s；Step 4：68℃，5min；Go to step2，35个循环；Step 5：68℃，5min；Step 6：15℃∞。
其中，sgRNA-R的序列为：
AGCACCGACTCGGTGCCACTTTTTCAAGTTGATAACGGACTAGCCTTATTTTAACTTGCTATTTCTAGCTCTAAAAC，SEQ ID NO.8。
PCR结束后采用电泳检测PCR产物大小，按照凝胶回收试剂盒说明书纯化产物，并构建pMD-18T载体(Takara公司)后进行测序，得到sgDNA，sgDNA的序列(SEQ ID NO.9)如下所示：
TAATACGACTCACTATAGGCGTGTCGCGCACCACGCGGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCT。
(3)sgDNA的纯化。通过引物T10-F和sgRNA-R进行PCR扩增获得sgDNA，向验证为单一条带的PCR原液中加入Nuclease free water补齐至500μL，加入1mL的无水乙醇和20μL的NaOAC，混匀后放置于-80℃下沉淀20min。12000rpm离心15min，弃上清，加入1mL的75％DEPC-乙醇，吹打沉淀，12000rpm离心5min。洗涤两次后，吸走多余的上清，晾干DNA,加入适量的nuclease free water溶解沉淀。
(4)体外转录
具体操作按照体外转录试剂盒的说明书进行，其反应体系如下表所示：
配置好反应体系后，将样品置于PCR仪，37℃过夜。
(5)sgRNA的纯化
往体外转录产物中加入Nuclease free water补齐至400μL，加入1mL的无水乙醇和20μL的NaOAC，混匀后放置于-80℃沉淀20min。12000rpm离心15min，弃上清，加入1mL的75％DEPC-乙醇，吹打沉淀，12000rpm离心5min。洗涤两次后，吸走多余的上清，晾干RNA，加入适量的nuclease free water溶解沉淀，使样品的浓度为1μg/μL，得到sgRNA。sgRNA的序列(SEQ ID NO.10)如下所示：
uaauacgacucacuauaggcgugucgcgcaccacgcgguuuuagagcuagaaauagcaaguuaaaauaaggcuaguccguuaucaacuugaaaaaguggcaccgagucggugcu。
1.3.2显微注射
(1)按照说明书溶解PNA公司的Cas9蛋白(1μg/μL)。按照Cas9与sgRNA的体积比为1：1的比例混合。
(2)剪下半小时内产下的卵块进行排卵，向卵的背面轻轻扎入，注入混合液。注射针的开口不宜太细，否则容易堵针，不宜太粗，否则容易造成机械损伤。
(3)将注射好的卵置于培养皿中，放回培养箱培养。
1.3.3突变体的检测
以G0代化蛹时蜕的皮为材料，提取基因组，利用检测引物(Exon2-Test-F：TTGAAGCTGAGGGTTGATAT，SEQ ID NO.11；Exon2-Test-R：TATTCCTCTGCGAGAAACTA，SEQ IDNO.12)扩增目的片段(参考1.3.4的扩增体系和程序)后送至擎科生物有限公司进行测序。测序结果为双峰的为存在突变。
对突变个体进行挑单克隆测序分型，与野生型序列比对可判断为野生、杂合和纯合个体，如图5为纯合个体。在外显子处缺失5个碱基，发生提前终止。
1.3.4表型的观察
将突变体置于人工培养箱饲养，温度为26℃，相对湿度为55±5％，光周期为14h：10h(白天：黑夜)。解剖雌蛾发现，高达98％的杂合和纯合的雌性个体卵巢不成熟，卵巢变小，卵巢管缩短，卵子处于发育早期，没有成熟卵粒或较少成熟卵粒，且排列松散(图6)。杂合雌虫和雄虫野生型交配后，产下的卵块孵化率有不同程度的降低(图7)，雌性的生殖能力显著降低，起到了防控斜纹夜蛾的效果。
综上所述可见，通过CRISPR/Cas9技术抑制Jupiter基因的表达，雌虫的卵巢发育不正常，卵巢变小，卵巢管缩短，卵子处于发育早期，没有成熟卵粒或较少成熟卵粒，且排列松散。杂合雌虫和雄虫野生型交配后，产下的卵块孵化率有不同程度的降低，雌性的生殖能力显著降低，起到了斜纹夜蛾防控的效果。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
序列表
<110> 华南师范大学
<120> Jupiter基因在鳞翅目害虫防控中的应用
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> SlJupiter-F(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcaacct acgctcagt 19
<210> 2
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> SlJupiter-R(Artificial Sequence)
<400> 2
ctaccagagg ccggaggagt 20
<210> 3
<211> 510
<212> DNA/RNA
<213> Jupiter基因的核苷酸序列(Spodoptera litura)
<400> 3
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agggtgccga acgcgcccaa gagctgcatt gcggagatct tcaacgcgga tcagactgat 120
ggcagcccag tgaagaatgg tgccgctaaa cctcgcgtgg tgcgcgacac gcccactcgc 180
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ccagtatctc cgatggtgac tgacacgatc cgcagtcaca ttcagtttgg cgactctgag 300
atgaacggtt caagccccac acactctcct tcgaagatgg gcaacggtag cgcgacctct 360
acacccagcc gagaaggcaa cccaatcacc ggtgacggct acaaatcgat gaacggccag 420
atcaacacgg tgacgtcaat aaacggcaat agcctaatgg gcaacagtaa ccgcgtgccg 480
cccggtggct actcctccgg cctctggtag 526
<210> 4
<211> 169
<212> PRT
<213> Jupiter的氨基酸序列(Spodoptera litura)
<400> 4
Met Ala Thr Tyr Ala Gln Phe Lys His Val Glu Leu Tyr Lys Ile Gly
1 5 10 15
His Gly Lys Asn Arg Val Pro Asn Ala Pro Lys Ser Cys Ile Ala Glu
20 25 30
Ile Phe Asn Ala Asp Gln Thr Asp Gly Ser Pro Val Lys Asn Gly Ala
35 40 45
Ala Lys Pro Arg Val Val Arg Asp Thr Pro Thr Arg Pro Arg Asp Thr
50 55 60
His Ser Arg Leu Phe Gly Gln Val Arg Gln Thr Gln Gly Val Asn Asn
65 70 75 80
Pro Val Ser Pro Met Val Thr Asp Thr Ile Arg Ser His Ile Gln Phe
85 90 95
Gly Asp Ser Glu Met Asn Gly Ser Ser Pro Thr His Ser Pro Ser Lys
100 105 110
Met Gly Asn Gly Ser Ala Thr Ser Thr Pro Ser Arg Glu Gly Asn Pro
115 120 125
Ile Thr Gly Asp Gly Tyr Lys Ser Met Asn Gly Gln Ile Asn Thr Val
130 135 140
Thr Ser Ile Asn Gly Asn Ser Leu Met Gly Asn Ser Asn Arg Val Pro
145 150 155 160
Pro Gly Gly Tyr Ser Ser Gly Leu Trp
165
<210> 5
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> SlJupiter-qF(Artificial Sequence)
<400> 5
cgagaagcat cggtgataca agttt 25
<210> 6
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> SlJupiter-qR(Artificial Sequence)
<400> 6
ctgaatgtga ctgcggatcg tgt 23
<210> 7
<211> 57
<212> DNA/RNA
<213> T10-F(Artificial Sequence)
<400> 7
taatacgact cactataggc gtgtcgcgca ccacgcggtt ttagagctag aaatagc 57
<210> 8
<211> 77
<212> DNA/RNA
<213> sgRNA-R(Artificial Sequence)
<400> 8
agcaccgact cggtgccact ttttcaagtt gataacggac tagccttatt ttaacttgct 60
atttctagct ctaaaac 79
<210> 9
<211> 114
<212> DNA/RNA
<213> sgDNA(Artificial Sequence)
<400> 9
taatacgact cactataggc gtgtcgcgca ccacgcggtt ttagagctag aaatagcaag 60
ttaaaataag gctagtccgt tatcaacttg aaaaagtggc accgagtcgg tgct 116
<210> 10
<211> 114
<212> DNA/RNA
<213> sgRNA(Artificial Sequence)
<400> 10
uaauacgacu cacuauaggc gugucgcgca ccacgcgguu uuagagcuag aaauagcaag 60
uuaaaauaag gcuaguccgu uaucaacuug aaaaaguggc accgagucgg ugcu 116
<210> 11
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> Exon2-Test-F(Artificial Sequence)
<400> 11
ttgaagctga gggttgatat 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> Exon2-Test-R(Artificial Sequence)
<400> 12
tattcctctg cgagaaacta 20

Claims (4)

1.Jupiter基因在调控斜纹夜蛾卵巢发育中的应用，其特征在于，所述调控为抑制或降低Jupiter基因的表达以抑制斜纹夜蛾的卵巢发育，所述Jupiter基因的开放阅读框序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种抑制斜纹夜蛾卵巢发育的方法，其特征在于，抑制或降低Jupiter基因的表达，所述Jupiter基因的开放阅读框序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求2所述的一种抑制斜纹夜蛾卵巢发育的方法，其特征在于，通过sgRNA和Cas9蛋白抑制Jupiter基因的表达，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
4.根据权利要求3所述的一种抑制斜纹夜蛾卵巢发育的方法，其特征在于，所述sgRNA和Cas9蛋白的使用浓度均为1μg/μL，所述sgRNA与Cas9蛋白的用量比为1:1。
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