CN113893330A - 启动细胞基因血清因子用于修复器官皮肤 - Google Patents

Abstract

启动细胞基因血清因子用于修复器官皮肤，经过加工纯化的血清包含多种生长因子高分子物质从而促进细胞生长的物质，是具有刺激细胞生长活性的细胞因子，一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的物质，血清因子小于细胞200倍，80秒钟到达细胞内部，直接作用于细胞内部，促进不同类型细胞增殖分裂生长、修复衰老细胞，包括皮肤细胞，骨细胞、各种免疫、消化细胞、红细胞、白细胞等，进而增强骨骼、消化、皮肤、免疫、造血、排毒等系统，促进新陈代谢它修复我们身体衰老的细胞、激活我们身体的免疫机制，增强人体各个组织器官的功能，从根本上延缓衰老。

Description

启动细胞基因血清因子用于修复器官皮肤

技术领域

此项发明是根据细胞生物学，分子生物学技术领域的研究成果。

背景技术

（血液)是流动在人的血管和心脏中的一种红色不透明的黏稠液体。血液由血浆和血细胞组成，一升血浆中含有900-910克的水，65—85克的蛋白质和20克的低分子物质，低分子物质中有多种电解质和有机化合物，血细胞包括红细胞和白细胞和血小板三类细胞。红细胞平均寿命为120天，白细胞寿命为9—13天，血小板寿命为8—9天。一般情况下，每人每天都有40ml的血细胞衰老死亡。同时，也有相应数量的细胞新生。血液的功能包含血细胞功能和血浆功能两部分，有运输、调节人体温度、防御、调节人体渗透压和酸碱平衡四个功能。血液中含有各种营养成分，如无机盐、氧以及细胞代谢产物、激素、酶和抗体等，有营养组织、调节器官活动和防御有害物质的作用。(血浆)的主要作用是运载血细胞，运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。血浆相当于结缔组织的细胞间质。血浆是血液的重要组成部分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。血浆的化学成分中，水分占90~92%，其他10%以溶质血浆蛋白为主，并含有电解质、营养素（nutrients）、酶类（enzymes）、激素类（hormones）、胆固醇（cholesterol）和其他重要组成部分。血浆蛋白是多种蛋白质的总称，用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。血浆是血液的细胞外基质。血浆的组成极其复杂，包括蛋白质、脂类、无机盐、糖、氨基酸、代谢废物以及大量的水。血浆蛋白是血液中最重要的基质蛋白。(血清)，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。(细胞信号通路)是指当细胞里要发生某种反应时，信号从细胞外到细胞内传递了一种信息，细胞要根据这种信息来做出反应的现象。信号通路是指能将细胞外的分子信号经细胞膜传入细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路。这些细胞外的分子信号（称为配体，ligand）包括激素、生长因子、细胞因子、神经递质以及其它小分子化合物等。(蛋白质的分离纯化）在生物化学研究应用中使用广泛，是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质，一些含量十分丰富，一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质，必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化出来蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异。

发明内容

原理与过程：加工血清里分离纯化提取物组合血清因子包含：血小板生长因子、表皮生长因子、成纤细胞生长因子、神经生长因子、类胰岛素生长因子、。这些提取组合血清因子是一类调节微生物正常生长代谢所必需，一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合，调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的多肽类物质。存在于血小板和各种成体与胚胎组织及血液中，对不同种类细胞具有一定的专一性。通常培养细胞的生长需要多种生长因子顺序的协调作用。彻底：直接到达细胞核，修复基因，促进细胞分裂繁殖、新生。从根本上治疗疾病，提升身体机能，延长寿命，美化容颜。快速：是基因工程和纳米技术的最高阶段成果，小于细胞200倍，90秒钟到达细胞内部。全面：人体固有，与生俱来，伴随生命始终，控制人体全方位，影响生命全过程，是生命活动的必须物质，是生命活动的总司令，是人体生命的主宰，直接命令和调控人的八大系统，激活八大系统细胞达到最佳的代谢水平，使人体器官达到最佳的运转机能，提升生命质量。一、 (血小板衍生生长因子英文缩写PDGF)附图说明：图1是血小板生长因子的分子结构图，一种刺激结缔组织等组织细胞增长肽类调节因子，因其来源于血小板而得名，正常生理状态下存在于血小板的α颗粒内，当血液凝固时由崩解的血小板释放出来并且被激活，具有刺激特定细胞趋化与促进特定细胞生长的生物活性。此外，在组织受到损伤时巨噬细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、胚胎干细胞等也可以合成并释放PDGF。肝脏受损时，巨噬细胞、血小板、浸润的炎细胞、受损的内皮细胞及激活的肝星形细胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式发挥作用。结合的PDGF是分子量为30KD的热稳定糖蛋白，是靠二硫键相连的A、B两条多肽链组合成的二聚体。PDGF受体是一种跨膜糖蛋白，具有酪氨酸蛋白激酶活性，由细胞外N端与PDGF特异识别的结构域、单链顺序跨膜的中间疏水结构域和细胞内C端具有酪氨酸蛋白激酶活性的肽段结构域组成。当受体与其配体结合后促使两个受体分子形成二聚体，激活细胞内结构域酪氨酸残基自身磷酸化，或促使激活特殊靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化，从而将信号传入细胞内，经级联式放大瀑布效应调控细胞的生命活动，包括靶细胞的分裂增殖。实验证明PDGF是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力。肝受损时，大量分泌的PDGF刺激间质星形细胞增殖，转化为肌纤维样母细胞，并促使星形细胞迁移，聚集于炎症受损区。而肌纤维样母细胞合成大量细胞外基质沉积于肝细胞胞间质，促进肝纤维化发生。 PDGF能够促进肌纤维母细胞产生胶原，尤其是I型及Ⅲ型胶原。Isbrucker在体外培养的实验中证明，PDGF可促使未融合猪肝肌纤维样母细胞增殖，使已融合的细胞产生胶原，但对其细胞数量无影响。PDGF还可通过上调组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-1抑制胶原酶的作用，以减少细胞外基质的降解。PDGF是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力，促进纤维母细胞的生成，从而修复由于衰老和损伤造成的真皮层胶原纤维断裂与变形，促进真皮层生长与弹性提升，使皱纹自然长平。、PDGF促进胶原蛋白在真皮层直接合成，更有效延缓衰老。补充胶原蛋白几乎是现在每个爱美人士都知道的常识。然而，如何让人体更充分的吸收胶原蛋白一直是个难解之题。PDGF可以促进成纤维母细胞的活性与促进分泌胶原蛋白。通过PDGF促进成纤维母细胞生成的胶原蛋白比直接涂抹或食用胶原蛋白更能有效延缓皮肤衰老。PDGF促进胶原蛋白在真皮层直接合成，更有效延缓衰老。补充胶原蛋白几乎是现在每个爱美人士都知道的常识。然而，如何让人体更充分的吸收胶原蛋白一直是个难解之题。PDGF可以促进成纤维母细胞的活性与促进分泌胶原蛋白。通过PDGF促进成纤维母细胞生成的胶原蛋白比直接涂抹或食用胶原蛋白更能有效延缓皮肤衰老。 PDGF促进皮下毛细血管形成，修复皮下血液微循环系统，为皮肤提供充足营养。皮肤衰老一个重要的原因就是皮下血管萎缩，从而导致皮肤供血不足，故细胞缺乏营养，致使皱纹的产生。许多生长因子参与血管生成的生理调节。它们各自在其中起至关紧要作用。其中PDGF的再生血管功能对于延缓衰老有明显疗效。PDGF促进皮肤细胞的生长与更新，提升皮肤组织的生理活性与新陈代谢水平，增强皮肤细胞的免疫力与自我修复能力，修复由于日光、严寒、化学物质与机械磨损伤害造成的红血丝与敏感肌肤，使皮肤细胞更加白皙润泽，鲜活饱满，让面部色斑暗沉，枯黄干燥的衰老面貌焕然一新。二、(表皮细胞生长因子英文缩写EGF)附图说明：图2是表皮生长因子的分子结构图，是人体内分泌的一种重要细胞生长因子，有很强的生理活性。 EGF是人体内存在的一种生长因子，它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂。：极微量的EGF能强烈刺激细胞生长，抑制衰老基因表达，阻止皮肤衰老，使皮肤各组成份保持最佳生理状态。此外，它还能刺激细胞外的一些大分子（如透明质酸和胶原蛋白等）的合成与分泌，滋润皮肤，是决定皮肤活力和健康的关键因素。EGF的发现，揭示了人体皮肤衰老的奥秘，是人类第一次认识到皮肤的衰老可以逆转，皮肤可以再变年轻。EGF能促进上皮细胞、成纤维细胞的增殖；增强表皮细胞的活力；延缓表皮细胞的老化，使肌肤各组成成份保持最佳生理状态。高活性的EGF才能促进皮肤细胞的分裂和生长，此外它还能刺激细胞外一些大分子（如透明质酸和胶原白等）的合成与分泌、滋润皮肤，是决定肌肤活力和健康的源泉。表皮生长因子，大量存在于人体上皮细胞内，它可刺激上皮细胞和内皮细胞生长，使新的表皮细胞不断长成，将死皮层推动并逐渐脱落，保持肌肤细嫩光滑。同时促进皮肤各种细胞的新陈代谢，增强细胞吸收营养物质。促使胶原及胶原酶合成，分泌胶原物质、透明质酸和糖蛋白，调节胶原纤维，具有滋润皮肤、增强皮肤弹性，减少皮肤皱纹和防止皮肤衰老的作用。三 (成纤维细胞生长因子英文缩写FGF)附图说明：图3是成纤维细胞生长因子分子结构图，在动脉硬化灶中起作用的主要是FGF可以由内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞分泌。它的作用是促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖，不能使平滑肌细胞游走。能够促进新血管形成，修复损害的内皮细胞，能促进成纤维细胞 有丝分裂、中胚层细胞的生长，还可刺激血管形成，在创伤愈合及肢体再生中发挥作用。人体作用对骨骼系统的作用：促进生成大量的成骨细胞、抑制破骨细胞。治疗骨质疏松、股骨头坏死、关节炎、风湿病和因钙缺乏导致的疾病。对消化系统的作用：加强胃肠功能，促进消化酶的分解，增进食欲，治疗慢性胃炎。对血液系统的作用：加强骨髓造血功能，促进干细胞生成，进而生成大量红细胞和白细胞。加强左心室厚度，增强心肌弹性力，高效治疗心脏病。有效清除血液中低密度蛋白，防止在血管壁沉积，治疗血栓。四(类胰岛素生长因子英文缩写IGF)附图说明：图4是类胰岛素生长因子的分子结构图，是生长激素在肝脏内合成的中间产物，可以认为是生长激素的活性形式，目前检查的类胰岛素生长因子高于正常考虑与外源性补充生长激素有关系。考虑偏高不是生长激素的禁忌症。类胰岛素生长因子是一组具有促生长作用的多肽类物质，其分泌细胞广泛分布在人体肝、肾、肺、心、脑和肠等组织中。IGF的产生更依赖于GH，其促生长作用强，是儿童期的重要生长因子。各组织中合成的IGF多以自分泌或旁分泌方式发挥其促生长的作用，而肝脏所合成的IGF则进入血循环，以内分泌方式作用于靶细胞。体内IGF水平受GH的调控，IGF对GH的分泌亦具有负反馈调节作用，IGF可能是中枢神经系统发育时期重要的自分泌和旁分泌信号分子。可作为肌源性神经营养因子刺激肌内神经突起生长。五 、(神经生长因子英文缩写NGF)附图说明：图5是神经生长因子的分子结构图，能促进中枢和外周神经元的生长、发育、分化、成熟，维持神经系统的正常功能，加快神经系统损伤后的修复。NGF广泛分布于机体各组织器官中（包括脑），在靶组织中的浓度与交感神经和感觉神经在靶区分支的密度和mRNA的含量有关。保护神经当NGF的效应神经元受到损伤时，如外伤、药物损害，甚至缺血、缺氧等，神经元将发生一系列的病理改变，包括死亡。NGF抑制上述神经损伤的作用，可能的机制有：抑制毒性氨基酸的释放；抑制钙离子超载；抑制超氧自由基的释放；抑制细胞凋亡等机制而明显减轻或防止这些继发性病理损害的发生。促进神经再生长在切断轴突后给予NGF将减少某些神经元的变性与死亡，无疑这将有助于提高轴突再生的可能性。同时它还影响轴突再生开始的时间和参与再生的神经元数目以及再生神经的质量和速度。

制作血清因子的实验方法

一(采血)选择体形较大、广泛存在、和人类基因组接近的兽类动物，猪和牛就是合适选择，年幼的哺乳动物血液质量越好，采血的多少根据体重决定一般25千克可采100ML。一般30千克以下的猪，相对来讲，其体重、体型都比较小一点，采取仰卧保定方式。一助手抓握两后肢，尽量向后牵扯引，另一助手用手将下颌骨下压，使头部贴地，并使两前肢与体中线基本垂直。此时，两侧第一对肋骨与胸骨结合处的前侧方呈两个明显的凹陷窝。消毒皮肤后，采血持装有9号针头的一次性采血袋(10～30千克小猪，选择9×25毫米针头;10千克以下乳猪，选择9#×20毫米针头)，向右侧凹陷窝处，由上而下，稍偏向中央及胸腔方向刺入，见有回血，即可采血，一般50～100毫升，采血完毕，左手拿酒精棉球紧压针孔处，右手迅速拔出采血针管，为防止出血，应压迫片刻，并涂擦碘酒消毒。二(血液释放血清因子催化反应)血液释放血清因子的过程也是血液凝固的过程，一般有很多采血袋和采血管都有抗凝血剂，选择没有抗凝血剂的采血袋采血管，因为抗凝血剂会破坏血液释放血清因子的反应链，采血袋里的血液从流动的液体状态变成不能流动的胶冻状凝块的过程需要4小时以上，由凝血因子参与的一系列蛋白质有限水解的过程，释放血清因子。血液凝固的关键过程是血浆中的纤维蛋白原转变为不溶的纤维蛋白。多聚体纤维蛋白交织成网，将很多血细胞网罗其中形成血凝块。在血液凝固过程后1~2小时，血凝块在血小板的作用下发生收缩并析出的淡黄色液体，这种液体被称为血清。与血浆相比，血清缺乏纤维蛋白原和少量参与血凝的其他血浆蛋白质，又增添了少量血凝时由血小板释放出来的物质。三(使用离心机提取血清因子)整个过程需要无菌操作，离心前使用搅拌设备，每分钟300转将凝固血液搅拌成液体状态，倒入PRP专用采血管放入离心机，离心转速采用4000转每分钟，离心20分钟，离心结束后拿出采血管，这时候会看到明显分层，上层为血清，中间是血小板，下层为红色的红细胞。抽取及上层血清，拿起离心后的PRP采血管，用注射器连接抽取血清、中间红细胞层有明显分界线富含血清因子全部抽取，到红细胞底层以下不要，将抽取的混合液收集起来分离纯化。四(分离纯化血清因子去除无用的蛋白物质)整个过程需要无菌操作，透析即用半透膜透析袋将大分子蛋白质分离出来。生物小分子杂质和浓缩样品，透析法最简便。把透析袋剪成适当长度（15cm左右）的小段。取适量透析袋处理液（Fast-Tre Solution）稀释100倍，将透析袋放于其中煮沸10分钟。取出用蒸馏水彻底清洗透析袋。浸泡在透析袋储存液中的透析袋取出使用前，须将透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净，冲洗三次即可，使用时，一端用下沉透析袋夹子夹紧，灌满水后，适当加压，检查不漏在倒出测试用水，透析袋方可装入血清透析，透析容器使用生理盐水。透析袋通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，袋外的生理盐水过量进入袋内将袋涨破。装完血清后，用上浮夹子夹紧袋口，以使透析袋处于悬浮状态，即可进行透析。为了加快透析速度，还可使用搅拌器。透析的容器要大一些。五(浓缩透析的血清因子)使用8X100ML的离心机，将透析液倒入离心管中，2500转每分钟，离心15分钟，取出离心管国定好整个过程不可晃荡，使用注射器由上到下截取离心管2.5厘米以上没有用的液体，底部为浓缩的血清因子，倒入输液瓶中-20度保存，也可以注射给动物，根据动物血量注射，血量和血清因子10：1注射量，每个月一次，一年时间可以观察动物体质变化效果。

预期实验报告本发明和PRP抗衰老治疗类似，PRP是利用自身血液制作的富含血小板的高浓度血浆。PRP抗衰老修复的原理，是根据生长因子的强大再生力量，促使肌肤新生而成。本发明和PRP都是利用血清因子来达到抗衰老治疗效果，不同的是PRP采用自体血液分离纯化工艺简单，自体血量有限不能大量获取血清因子，只能针对某个部位的皮肤进行治疗，老年人的血液质量下降效果不佳等缺点，本发明采用畜兽的血液分离纯化工艺更复杂要求更高，可以获得大量优质血清因子，可以进行整个身体的抗衰老治疗。PRP自体血清，在医疗美容行业中已经得到了广泛的应用已得到欧洲CE认证、美国FDA及其他地区的广泛医学临床验证和ISO、SQS认证。本发明和PRP抗衰老本质相同其治疗效果也相同。实验报告本人2018年采购了实验用的设备开始实验，使用采取兽类动物猪和牛血液，以上所述实验方法，对小白鼠进行注射实验，每周注射一次，实验目的是外源猪和牛的血清因子，对小白鼠是否构成健康影响，外源血清因子是否安全，一年后未发现外源血清因子，对小白鼠健康构成影像，并且小鼠很活跃，又对实验用的人源皮肤细胞继续实验，提取两个同样细胞数量分别放入两个培养皿中，一个加入制备好的血清因子，一个不加入，使用无生长因子的培养液继续培养，观察两个培养皿细胞的变化，一个月后加入血清因子的细胞明显数量更多，细胞分裂的更多，这说明猪和牛的血清因子，对人类细胞依然有信号通路作用，具备治疗效果。

实施方式血清因子用于中老年人抗衰老、增强体质，改善皮肤的治疗，人的衰老和形态表观的变化，是受基因组、血液因子、干细胞分化的调控的结果，老年人的血液和青年人的血液对比各种内分泌激素和生长因子浓度下降，通过人工提取的血清因子来补充老年人血液因子的浓度，达到青年人的血液浓度，就能改善血液因子的调控结果，达到抗衰老、体质增强、皮肤改善等治疗效果，提取的血清因子达到生产环境标准，药物安全的标准，临床实验成功后，可以通过静脉注射或输液的方式来进行治疗，用注射器抽取血清因子，排尽空气。、选择合适的静脉为穿刺部位，扎止血带，消毒局部皮肤，进行静脉穿刺。、见回血后，证明针头已经进入静脉，可再顺静脉走行进针少许，松开止血带，固定针头。、将已配好的血清因子缓慢注入血管中。、注射过程中，要试抽回血，以检查针头是否在静脉内。注射完毕，迅速拔出针头，用干棉签按压穿刺点至不再出血，每月注射或输液400ML的血清因子就可以达到抗衰老的治疗效果。

Claims (4)

1.一种从兽类动物血液分离提取的组合血清因子。

2.根据权利1所述制作方法：使用采血袋提取兽类动物血液，血液凝固反应后释放血小板生长因子，搅拌成液体，离心提取红细胞上层血清，透析袋分离血清因子到生理盐水中，离心浓缩血清因子去除多余生理盐水，零下20℃保存。

3.根据权利1权利2所述：制作的血清因子其中包括：血小板生长因子，表皮生长因子，成纤细胞生长因子，神经生长因子，类胰岛素生长因。

4.根据权利1权利2所述制作成蛋白质药物用于治疗衰老，增强体质，改善皮肤医疗用途。

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