CN113893301A - 治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 - Google Patents
治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113893301A CN113893301A CN202111368598.6A CN202111368598A CN113893301A CN 113893301 A CN113893301 A CN 113893301A CN 202111368598 A CN202111368598 A CN 202111368598A CN 113893301 A CN113893301 A CN 113893301A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- osteoporosis
- bone
- traditional chinese
- chinese medicine
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/58—Reptiles
- A61K35/586—Turtles; Tortoises, e.g. terrapins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/02—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution from inanimate materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/618—Molluscs, e.g. fresh-water molluscs, oysters, clams, squids, octopus, cuttlefish, snails or slugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
- A61K36/12—Filicopsida or Pteridopsida
- A61K36/126—Drynaria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/21—Amaranthaceae (Amaranth family), e.g. pigweed, rockwort or globe amaranth
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
- A61K36/232—Angelica
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/29—Berberidaceae (Barberry family), e.g. barberry, cohosh or mayapple
- A61K36/296—Epimedium
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/46—Eucommiaceae (Eucommia family), e.g. hardy rubber tree
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/487—Psoralea
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
- A61K36/537—Salvia (sage)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/64—Orobanchaceae (Broom-rape family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
- A61K36/804—Rehmannia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/81—Solanaceae (Potato family), e.g. tobacco, nightshade, tomato, belladonna, capsicum or jimsonweed
- A61K36/815—Lycium (desert-thorn)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
- A61K36/894—Dioscoreaceae (Yam family)
- A61K36/8945—Dioscorea, e.g. yam, Chinese yam or water yam
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及中药制剂的技术领域,尤其涉及一种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂极其制备方法。其原料药包含龟甲、枸杞子、骨碎补、补骨脂、肉苁蓉、川牛膝、淫羊霍、杜仲、黄芪、山药、熟地、当归、丹参、锻龙骨、锻牡蛎、炙甘草。本发明中药制剂针对肾虚血瘀证型的骨质疏松进行组方用药治疗,补肾活血,行气化瘀,迅速改善骨质疏松症状,预防骨质疏松性骨折,为治疗本病提供一种有效的治疗手段。
Description
技术领域
本发明涉及一种,尤其涉及一种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法。
背景技术
原发性骨质疏松症是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的致使骨的脆性增加,以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病。原发性骨质疏松症可分为绝经后骨质疏松症(Ⅰ型)和老年性骨质疏松症(Ⅱ型),是一种老年人和绝经后妇女所特有的多发病,在当今的疾病谱中排列第五名。原发性骨质疏松症的病因尚不明确,目前认为与年老、组织生理性衰退、女性绝经后雌激素减退等有关,病理基础为骨重建的负平衡,破骨细胞吸收增加,成骨细胞功能减退,即骨吸收大于骨形成,导致骨量减少。原发性骨质疏松症不但造成患者生活质量下降,而且给国家医疗卫生经济造成了巨大压力,是目前全世界医学界研究的热点。
骨质疏松属中医“骨痿”范畴。《医精经义》中论述“肾藏精,精生髓,髓生骨”,表明肾与骨密切相关。肾气充足,则骨质紧密;肾气不足,则髓枯骨萎,即骨质疏松。同时,绝经后妇女气血虚少,血液瘀滞,脏腑濡养不足,骨骼失养,发为“骨痿”。因此,中医学认为“肾虚”是骨质疏松的根本病机,血瘀是发病的关键机制,因而确立了以补肾活血化瘀为骨质疏松的根本治疗法则。
发明内容
本发明旨在解决上述缺陷,提供一种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法。
为了克服背景技术中存在的缺陷,本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:这种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂包括原料药的质量为:龟甲15g-20g、枸杞子15g-20g、骨碎补15g-20g、补骨脂15g-20g、肉苁蓉15g-20g、川牛膝12g-20g、淫羊霍15g-20g、杜仲15g-20g、黄芪12g-20g、山药12g-20g、熟地12g-20g、当归12g-20g、丹参12g-20g、锻龙骨20g-30g、锻牡蛎20g-30g、炙甘草6g-10g。
根据本发明的另一个实施例,进一步包括制备方法包括按重量抓取各味药材,放入煎煮药罐中,加入10倍量的水煎煮1h,煎煮2次,纱布滤过,水提液浓缩至1g生药量/ml。
本发明的有益效果是:这种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂针对肾虚血瘀证型的骨质疏松进行组方用药治疗,补肾活血,化瘀行气,迅速改善骨质疏松症状,预防骨质疏松性骨折,为治疗本病提供一种有效的治疗手段。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
此方是基于“本痿标痹”的病机本质深入认识拟定的临床验方,主要由川杜仲、骨碎补、补骨脂、淫羊霍、肉苁蓉、龟甲、地黄、枸杞等中药组成。该方总体立意以骨碎补、淫羊藿、川续断等补肾壮骨,配伍丹参、牛膝等中药活血通络。前期临床研究显示,该方药物安全性良好,且能显著改善老年骨质疏松症患者腰膝酸软无力、站立行走不便、头晕目眩等“骨痿”证候,也能明显缓解长期反复骨痛的“骨痹”症状。前期临床研究初步证实,本方可调节肾虚血瘀型老年骨质疏松患者Ca、P、ALP、BGP等骨代谢生化指标,抑制骨吸收速率,明显提高骨密度。
一种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂,包括原料药的质量为:龟甲15g-20g、枸杞子15g-20g、骨碎补15g-20g、补骨脂15g-20g、肉苁蓉15g-20g、川牛膝12g-20g、淫羊霍15g-20g、杜仲15g-20g、黄芪12g-20g、山药12g-20g、熟地12g-20g、当归12g-20g、丹参12g-20g、锻龙骨20g-30g、锻牡蛎20g-30g、炙甘草6g-10g。
中药制剂的制备方法,包括按重量抓取各味药材,放入煎煮药罐中,加入10倍量的水煎煮1h,煎煮2次,纱布滤过,水提液浓缩至1g生药量/ml。
实施例1和实施例2中应用的强骨合剂为本发明所述制备方法得到的煎煮液。
实施例1,临床研究:
研究对象
选取在2012年1月~2014年3月医院就诊的原发性骨质疏松症患者60例,且自愿加入临床研究,将纳入研究的患者按照就诊顺序,采用随机数字分组法随机分为食用强骨合剂治疗组和食用利塞膦酸钠对照组,每组各30例,两组患者基线资料差异无统计学差异,p>0.05。
纳入标准:临床确诊为原发性骨质疏松症;四诊符合肾虚血瘀症候表现;年龄≥50岁;排除标准:继发性骨质疏松症;原发性骨质疏松症合并严重心脑血管、肝肾和血液系统等及精神病人。中医辨证不符合肾虚血瘀型的患者。
治疗方法包括:
基础治疗:两组患者均服用碳酸钙D3咀嚼片0.5g/片,每次1片,每日两次)。
食用本发明强骨合剂的治疗组:强骨合剂药物组成为龟甲15g、枸杞子15g、骨碎补15g、补骨脂15g、肉苁蓉15g、川牛膝12g、淫羊霍15g、杜仲15g、黄芪12g、山药12g、熟地12g、当归12g、丹参12g、锻龙骨20g、锻牡蛎20g、炙甘草6g。每日一剂,水煎服。
食用利塞膦酸钠片的对照组:5mg/粒,每日1次,1次1粒。
对上述两组进行观察,观察指标包括:
1、主要症状骨痛的改善情况:VAS评分标准,0分为无痛,指数1-3为轻度疼痛,4-7中度疼痛,7-10重度疼痛;
2、骨代谢生化指标:治疗前与治疗后8周检测骨钙素(BGP)、尿吡啶酚(PYD)的变化。
疗效评判标准:显效:疼痛完全消失,骨代谢生化指标明显改善;有效:症状改善明显,骨代谢生化指标无改变;无效:症状及骨代谢生化指标均无改变。
统计学处理:所有数据多数使用SPSS 19.0软件包进行统计学处理。具体方法为:计量资料采用±s表示,组间比较采用独立样本t检验,组内自身前后比较采用配对t检验。等级资料的分析比较,用卡方检验分析,P<0.05为差异有统计学意义。
临床疗效:治疗后试验组总有效率为95%,对照组为77%,差异有统计学意义( p<0.01)。
实施例2,基础实验研究:
1、材料与方法
1.1、实验动物与分组:
SPF级3月龄雌性SD大鼠50只(230~270g),动物分笼饲养,自由进食、饮水,室温为20~25 ℃度,每日光照12h。动物适应性饲养1周后用于实验。随机分为假手术组、模型组、雌二醇组(100μg/kg),强骨合剂低剂量组(6g/kg)、强骨合剂高剂量组(12g/kg),每组10只大鼠。
1.2、药材提取:
取龟甲15g、枸杞子15g、骨碎补15g、补骨脂15g、肉苁蓉15g、川牛膝12g、淫羊霍15g、杜仲15g、黄芪12g、山药12g、熟地12g、当归12g、丹参12g、锻龙骨20g、锻牡蛎20g、炙甘草6g,加入10倍量的水煎煮1h,煎煮2次,纱布滤过,水提液浓缩至1g生药量/ml。
1.3、高效液相色谱(HPLC)分析:
取强固合剂提取液5ml,用水稀释2倍,加入10 ml乙酸乙酯萃取,取上清用蒸发皿挥发后加入2 ml甲醇复溶用于指纹图谱分析。
HPLC分析采用Waters 2695 Alliance HPLC系统(Waters Corp., Milford, MA,USA)进行,配备2998 DAD检测器和Empower软件数据处理软件。所有分析均采用waters-C18柱(250mm× 4.6mm,5um),进样量为10μl,柱温30℃,DAD检测波长为300nm。流动相由A(乙腈)和B(0.5%乙酸水溶液,v/v)组成,梯度洗脱条件如下:0-30min,5%~24%A,30-31min,24%~35%A,31-43min,35%~50%A,43-45min,50%~100%A,流动相流速1.0ml/min。采用专业软件《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004年A版),提取10批次被测样品的HPLC-DAD色谱数据并分析,评价相似度。
1.4、大鼠模型的建立:
采用双侧卵巢切除法制备大鼠模型。大鼠经氯胺酮肌肉注射麻醉后固定,皮肤消毒,从腰背部脊柱两侧切开皮肤及肌肉,切口长度约1cm,打开腹腔,找到卵巢。假手术组大鼠仅切除双侧卵巢体积皮下脂肪,实验各组行双侧卵巢切除术, 缝合并消毒。术后肌肉注射给与青霉素(80万 U:4mL 生理盐水,0. 4mL/250g),连续注射3天。术后7天开始给药,假手术组和模型组以等量的生理盐水灌胃,实验组分别灌胃给予雌二醇(100μg/kg),低剂量强骨合剂(6g/kg)和高剂量强骨合剂(12g/kg),连续给药30天。各组于最后一次给药24h后取血,处死大鼠取骨组织和子宫组织。实验期间,每周记录各组大鼠体重,并根据变化相应调整给药剂量。
1.5、子宫指数的测定:
取材时用电子天平测定各组大鼠子宫湿重,计算子宫指数。子宫指数=子宫重量(mg)/体重(g)。
1.6、大鼠骨密度测定:
处死大鼠后取出完整股骨。各组大鼠离体股骨骨密度采用双能 X 线骨密度分析仪(美国 Lunar 公司)测定。骨密度值以单位面积骨矿物质含量表示(g/cm2)。
1.7、骨生物力学检测:
采用MTS Acumen3型生物力学测试系统检测各组大鼠离体股骨生物力学性能,绘制载荷-变形曲线,计算出最大载荷、弹性模量、屈服载荷。
1.8、股骨组织病理形态检测:
各组大鼠左股骨组织用多聚甲醛固定,经10%EDTA溶液脱钙、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后,行股骨石蜡切片和HE染色。光镜下观察各组大鼠股骨组织病理形态。
1.9、大鼠骨组织VEGFR-2、CD31蛋白表达检测:
免疫荧光实验检测股骨组织内皮细胞的分子标记CD31以及血管内皮生长因子受体VEGFR-2表达情况。骨组织用4%多聚甲醛固定,经通透化处理、封闭、1% BSA 稀释的CD31和VEGFR-2抗体孵育过夜、二抗避光孵育 30 min、DAPI 染核、封片剂封片后荧光显微镜观察。
1.10、RT-PCR检测:
采用TRIzol试剂盒提取各组股骨组织总RNA,使用FastKing gDNA Dispelling RTSuperMix将RNA逆转录为cDNA,进行qPCR扩增,GAPDH作为内参。
引物序列:
Wnt3aF为5’-CGGGTTCTTCTCTGGTCCTTG-3’;
R 为 5’-CTGACAGTGGTGCAGTTCCA-3’;
β-cateninF为5’- ATCATTCTGGCCAGTGGTGG-3’;
R 为5’- GACAGCACCTTCAGCACTCT-3’;
VEGF F为5’-CAGAAGGGGAGCAGAAAGCC-3’;
R为5’-CTTCATCATTGCAGCAGCCC-3’;
OPGF为5’-CACAACCGAGTGTGCGAATG-3’;
R为5’-AAGTGAGCTGCAGTTGGTGT-3’;
GAPDH F为5’-TGGTGCTGAGTATGTCGTGG-3’;
R为5’-GGTTCACACCCATCACAAAC -3’。
反应条件:95℃变性5s,60℃退火30s,72 ℃延伸60s,共39个循环,2-△△Ct 法计算基因的相对表达量。
1.11、Western blot检测:
用RIPA裂解液提取股骨组织总蛋白。蛋白经BCA法定量后,取20 μg上样,10% SDS-PAGE分离蛋白,半干法电转膜,然后用5%脱脂奶粉封闭。分别加入抗体VEGF(1∶1 000,Abcam)、Wnt3a(1∶1 000, Abcam)、GSK3β(1∶800, Abcam)、p-GSK3β(1∶800, Abcam)、β-catenin(1∶5 000, Abcam)、lamin(1∶800, Abcam)、β-actin(1∶5 000, Abcam)孵育过夜。PBST洗涤后,加入二抗室温下孵育2 h。PBST洗涤后,加入化学发光试剂,化学发光成像系统进行显影成像,Image J软件对各检测蛋白的条带灰度值进行分析,计算相对表达量。
1.12、统计学处理:
数据采用SPSS 22.0统计软件进行分析,计量数据均以均数±标准差(x ˉ ± s)表示。两组间比较采用student-t检验,多组间比较采用one-way ANOVA分析,P<0.05或P<0.01表示差异具有统计学意义。
2、结果:
2.1 、强骨合剂HPLC指纹图谱分析。
使用10批次 样本建立 强骨合剂指纹图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行峰匹配,得到对照谱图。所有10个样品中出现的峰被定义为“共有峰”,共有10个共有峰。 根据标准品定性,指认9号峰为丹酚酸B 。10批次提取的复方指纹图谱分析结果相似度均大于0.9,表明10批样品质量稳定、相似。
2.2、强骨合剂对骨质疏松模型大鼠体重和子宫指数的影响。
与假手术组相比,大鼠行卵巢切除术后,体重显著增加,子宫指数明显下降,P <0. 01。给予雌二醇和强骨合剂干预后,与模空组相比较,各用药组大鼠体重均显著下降,子宫指数显著增加,其中阳性药雌二醇组稍优于强骨合剂高剂量组,但无统计学意义。
2.3、强骨合剂对骨质疏松模型大鼠离体股骨头骨密度和生物力学指标的影响。
各组大鼠股骨头骨密度检测结果表明,与正常组相比,模型组大鼠骨密度显著降低,P<0. 01。雌二醇和高、低剂量强骨合剂组骨密度均可有效升高大鼠骨密度,与模型组比较均具有统计学差异,P<0. 01。此外,本研究对大鼠股骨的生物力学性能进行了观察。与假手术组相比,模型组大鼠弹性模量、最大载荷、屈服载荷均有明显下降,P < 0.01。与模型组相比,雌二醇组和强骨合剂给药组大鼠弹性模量、最大载荷、屈服载荷升高,P < 0.01。该结果说明去除卵巢可明显降低大鼠股骨的生物力学性能,应用强骨合剂进行干预,可有效提高股骨干的力学强度,改善股骨干的生物力学性能。
2.4、强骨合剂对骨质疏松模型大鼠体股骨组织病理形态的影响。
假手术组大鼠骨小梁基本结构正常,网状结构清晰、排列有序;模型对照组大鼠骨小梁断裂、不完整、间距扩大,骨小梁数量明显减少;加二醇组仍可见骨小梁结构明显断裂。与模型组比较,强骨合剂低、高剂量组骨小梁结构完整、排列较规则有序,接近正常。该结果表明强骨合剂可明显改善摘除卵巢所致的股骨组织病理变化。
2.5 、强骨合剂对血管生成相关蛋白VEGFR-2 和CD31表达的影响。
VEGF作用于内皮细胞,具有促进新生血管生长的作用。血管内皮细胞生长因子受体VEGFR-2是介导内皮细胞VEGF功能的主要受体之一。本研究通过免疫荧光实验研究了VEGFR-2和内皮标记蛋白CD31的共定位变化。结果显示,骨质疏松模型大鼠CD31和VEGFR-2蛋白荧光强度较假手术组均明显减弱,而强骨合剂则可显著促进股骨组织CD31和VEGFR-2蛋白表达。
2.6 、强骨合剂对骨组织Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA水平的影响。
RT-PCR实验结果表明,与假手术组相比,模型组大鼠股骨组织中的Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG的mRNA水平明显降低;与模型组比较,各给药组的Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG的mRNA表达水平明显升高,提示强骨合剂激活骨细胞Wnt3a/β-catenin信号通路,促进VEGF表达和血管生成。
2.7、 强骨合剂对骨组织VEGF、Wnt3a、p-GSK3β、GSK3β、β-catenin、Lamin蛋白表达水平的影响。
为明确强骨合剂对血管生成以及股骨组织中Wnt3a/β-catenin信号通路相关蛋白VEGF、Wnt3a、p-GSK3β、GSK3β、β-catenin、Lamin表达的影响,我们采用Western blot法对各组相关蛋白水平进行检测。模型对照组大鼠股骨组织中VEGF、Wnt3a、p-GSK3β/ GSK3β、β-catenin/Lamin蛋白表达含量较假手术组均显著降低(P < 0.01);雌二醇组、强骨合剂高、低剂量组股骨组织中VEGF、Wnt3a、p-GSK3β/ GSK3β、β-catenin/Lamin蛋白表达含量均较模型组显著升高, P < 0.05或P < 0.01,强骨合剂高剂量组与阳性药雌二醇组蛋白表达量升高最为显著。
综上所述,本发明中药制剂可能通过Wnt3a/β-catenin信号通路调节VEGF表达,促进血管生成,从而骨密度,改善骨组织形态,进而发挥抗骨质疏松的作用。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂,其特征在于,包括原料药的质量为:龟甲15g-20g、枸杞子15g-20g、骨碎补15g-20g、补骨脂15g-20g、肉苁蓉15g-20g、川牛膝12g-20g、淫羊霍15g-20g、杜仲15g-20g、黄芪12g-20g、山药12g-20g、熟地12g-20g、当归12g-20g、丹参12g-20g、锻龙骨20g-30g、锻牡蛎20g-30g、炙甘草6g-10g。
2.如权利要求1所述的中药制剂的制备方法,其特征在于,制备方法包括按重量抓取各味药材,放入煎煮药罐中,加入10倍量的水煎煮1h,煎煮2次,纱布滤过,水提液浓缩至1g生药量/ml。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111368598.6A CN113893301A (zh) | 2021-11-18 | 2021-11-18 | 治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111368598.6A CN113893301A (zh) | 2021-11-18 | 2021-11-18 | 治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113893301A true CN113893301A (zh) | 2022-01-07 |
Family
ID=79194663
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111368598.6A Pending CN113893301A (zh) | 2021-11-18 | 2021-11-18 | 治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113893301A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115364157A (zh) * | 2022-08-26 | 2022-11-22 | 常州市武进中医医院 | 一种改善膝关节功能的中药组合物及其使用方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112807345A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-05-18 | 仇湘中 | 一种治疗骨质疏松症的中药复方及制备方法 |
-
2021
- 2021-11-18 CN CN202111368598.6A patent/CN113893301A/zh active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112807345A (zh) * | 2021-03-12 | 2021-05-18 | 仇湘中 | 一种治疗骨质疏松症的中药复方及制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
王雨辰等: "强骨合剂治疗肾虚血瘀型原发性骨质疏松症", 《长春中医药大学学报》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115364157A (zh) * | 2022-08-26 | 2022-11-22 | 常州市武进中医医院 | 一种改善膝关节功能的中药组合物及其使用方法 |
CN115364157B (zh) * | 2022-08-26 | 2024-01-05 | 常州市武进中医医院 | 一种改善膝关节功能的中药组合物及其使用方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2009515977A (ja) | 癌の治療のためのScutellariabarbata抽出物 | |
CN103222988A (zh) | 一种美洲大蠊提取物及其制备方法和应用 | |
KR101497276B1 (ko) | 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 관절염 및 척추디스크의 예방과 치료용 약학조성물 | |
CN115337356A (zh) | 一种治疗类风湿关节炎的药物组合物及其制备方法 | |
JP2011503237A (ja) | Scutellariabarbatad.donの精製抽出物を作製するためのプロセス | |
CN113893301A (zh) | 治疗肾虚血瘀证型骨质疏松的中药制剂及其制备方法 | |
Iljazović et al. | Efficacy in treatment of cervical HRHPV infection by combination of beta interferon, and herbal therapy in woman with different cervical lesions | |
CN109718273A (zh) | 紫苏叶提取物在预防或治疗骨性关节炎中的应用 | |
KR101193540B1 (ko) | 황기,계지 및 황백의 혼합생약재 추출물을 포함하는 골다공증 및 골질환 예방 및 치료용 조성물 | |
CN102048841B (zh) | 一种具有催乳作用的中药组合物及其制备工艺 | |
EP2296680A1 (en) | Labisia pumila extracts for reducing the risk of cardiovascular diseases | |
CN106963803B (zh) | 绞股蓝总黄酮在制备防治心肌肥厚的药物中的应用 | |
CN104189349A (zh) | 一种治疗月经量少的中药组合物 | |
CN110742935B (zh) | 一种中药组合物在制备治疗慢性酒精性脂肪性肝炎的药物中的应用 | |
CN114615975B (zh) | 欧当归内酯a在制备治疗或预防肾病药物中的用途 | |
Jiao et al. | Glycosides of Buyang Huanwu decoction inhibits inflammation associated with cerebral ischemia-reperfusion via the PINK1/Parkin mitophagy pathway | |
CN110302380B (zh) | 一种荔枝草水提取物放疗增敏剂的应用 | |
CN115025198B (zh) | 一种中药组合物及其在治疗围绝经期综合征中的应用 | |
KR102609296B1 (ko) | 백수오 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물 | |
JP6842782B2 (ja) | 更年期女性の低エストロゲン症の改善及び予防用機能性組成物 | |
CN116059292B (zh) | 治疗心力衰竭的中药组合物及制备工艺 | |
WO2021190588A1 (zh) | 泽兰提取物、其制备方法及用途 | |
KR100528398B1 (ko) | 지방세포 분화를 저해하는 팥꽃나무 추출물 | |
WO2021160104A1 (zh) | 罗布麻叶提取物、其制备方法及用途 | |
KR20230002103A (ko) | 칡 추출물을 유효성분으로 포함하는 갱년기 증상 예방 또는 개선용 조성물, 이를 이용한 건강 기능 식품 및 이의 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20220107 |