CN113880948A - 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用 - Google Patents

抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113880948A
CN113880948A CN202111069682.8A CN202111069682A CN113880948A CN 113880948 A CN113880948 A CN 113880948A CN 202111069682 A CN202111069682 A CN 202111069682A CN 113880948 A CN113880948 A CN 113880948A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
ser
antigen
thr
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111069682.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113880948B (zh
Inventor
廉倩倩
徐海伟
常立峻
简·马克·玖塞夫·杜加
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Hybiome Biomedical Engineering Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Hybiome Biomedical Engineering Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Hybiome Biomedical Engineering Co Ltd filed Critical Suzhou Hybiome Biomedical Engineering Co Ltd
Priority to CN202111069682.8A priority Critical patent/CN113880948B/zh
Publication of CN113880948A publication Critical patent/CN113880948A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113880948B publication Critical patent/CN113880948B/zh
Priority to PCT/CN2022/110212 priority patent/WO2023035825A1/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本申请涉及一种新的抗CA724抗体，所述抗体能够很好地识别CA724，并具有高亲和力和特异性。所述抗体具有良好的稳定性，能够用于制备诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品，为CA724检测提供了一种新的选择。

Description

抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用
技术领域
本申请属于免疫技术领域，尤其涉及抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用。
背景技术
CA724是近几年临床常用的一个肿瘤指标，主要用于消化道肿瘤的早期筛查，属于非特异性肿瘤标志物。其本质是细胞表面黏蛋白类的高分子糖蛋白，广泛分布于上皮细胞和恶性肿瘤的细胞质内，相对分子质量为(220-400)×103，可被cc49和B72.3两种单克隆抗体识别。CA724是构成肿瘤细胞骨架成分的重要分子结构，分子结构中含有磷酸化的氨基酸序列，随着肿瘤细胞的异常增殖，可通过外分泌的方式释放入血液循环，正常人体血清中CA724<6U/mL，当组织发生癌变，则可迅速入血，血清检测水平急剧升高。因此，CA724又属于癌胚抗原性质肿瘤标志物。
目前，研究中所提供的有关CA724的检测方法主要是电化学发光法，检测仪器多源自罗氏Elecsys1010、2010、170和601免疫测定分析仪。目前多采用cc49和B72.3两种单克隆抗体检测CA724，后者是 CA724的特异性抗体，利用抗原抗体夹心法的原理，对CA724水平进行检测。
胃癌的检测目前没有一个特异性的肿瘤指标，需依靠病理和手术进行诊断。CA724是现有与胃癌相关性最高的一个指标。CA724在胃癌患者中血清水平远远大于胃部良性病变患者和健康人群，对胃癌有较大的诊断参考价值。CA724对胃癌诊断特异度优于其他指标，如 CA199和CEA等。CA724在卵巢癌、非小细胞肺癌患者血清中水平也呈明显升高，同时对于肝癌和结直肠癌份的分级诊断有较大的参考价值。因此，对CA724的检测有较大的临床意义。
目前国内用于检测CA724的单克隆抗体基本自外国采购，灵敏度、特异性上都存在缺陷，因此，有需要提供更多的CA724单克隆抗体。
发明内容
为解决现有技术中CA724抗体可选择性不够、灵敏度和特异性上存在缺陷的问题，本发明提供一方面提供了一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述抗体或其抗原结合片段具有至少一个选自SEQ ID NO：1、2、3的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQ ID NO：4、5、6的轻链CDR结构域。
在一个实施方案中，本发明的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR： SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2，和SEQ ID NO:3 所示的CDR3；所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR： SEQ ID NO:4所示的CDR1'，SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和SEQ ID NO: 6所示的CDR3'。
在一个实施方案中，本发明所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链包含4个FR区，其中至少一个FR 区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：7、8、9或10所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：7、8、9或10具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同源性的序列；所述抗体的轻链包含4个FR区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：11、12、13或 14所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：11、12、13或14具有至少 80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同源性的序列。
在一个实施方案中，本发明的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述结合蛋白还包含抗体恒定区序列；优选的，所述恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、 IgD任何其中之一，恒定区的序列；优选的，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人；优选的，所述恒定区来源于小鼠。
在一个实施方案中，本发明的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链氨基酸序列为SEQ ID NO:19。
在一个实施方案中，本发明的抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的轻链氨基酸序列为SEQ ID NO:20。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，其编码前述任一项的抗 CA724抗体或其抗原结合片段。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码前述任一项的抗体重链可变区。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码前述任一项的抗体轻链可变区。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 17所示的核苷酸序列。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 18所示的核苷酸序列。
本发明另一方面提供一种载体，其包含本发明所述的核酸，优选地所述载体是表达载体。
在一个实施方案中，载体是表达载体，例如真核表达载体。载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(YAC)。
本发明另一方面提供一种宿主细胞，其包含本发明所述的载体或核酸，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的酵母细胞或哺乳动物细胞。
本发明另一方面提供制备前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码前述任一项的抗 CA724抗体或其抗原结合片段的核酸的条件下培养前述任一项所述的宿主细胞，任选地分离所述抗体或其抗原结合片段，任选地所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗724抗体或其抗原结合片段。
本发明另一方面提供经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段。
本发明另一方面提供前述任一项抗体或其抗原结合片段与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物。
本发明另一方面提供前述任一项所述的抗体或其抗原结合片段、经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段和前述任一项偶联物在制备用于诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品中的应用。
本发明另一方面提供一种用于检测CA724蛋白的试剂盒，其特征在于包含前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段或前述任一项所述的偶联物。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种新的抗CA724抗体，所述抗体能够很好地识别CA724，并具有高亲和力和特异性。所述抗体具有良好的稳定性和批间差，能够用于制备诊断癌症的诊断剂或检测 CA724的产品，为CA724检测提供了一种新的选择。
附图说明
下面结合附图和实施例对本申请的技术方案进一步说明。
图1是本发明一个实施例中抗CA724抗体的电泳图。
具体实施方式
本发明可通过后续对于本发明一些实施方案的描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。
在进一步叙述本发明之前，应明了本发明不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制。
名词定义
“抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物。抗体的类型可以选择IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。
抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区(VL或VH)由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。构架区和CDR的范围已被精确定义，例如在Kabat(参见《免疫重要的蛋白质的序列》(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)，E.Kabat等，美国卫生与人类服务(U.S.Department of Health and HumanServices)， (1983))和Chothia中。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位和对齐CDR的作用，所述CDR主要负责与抗原的结合。
当在本文中使用时，“构架”或“FR”区意味着抗体可变结构域的排除被定义为CDR的那些区域之外的区域。每个抗体可变结构域构架可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域(FR1、FR2、FR3 和FR4)。
通常情况下，重链和轻链的可变区VL/VH可由以下编号的CDR 与FR按如下组合排列连接获得：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4
当在本文中使用时，与多肽或核酸相关联的术语“纯化的”或“分离的”是指多肽或核酸不是处于其天然介质中或天然形式下。因此，术语“分离的”包括从其原始环境，例如如果它是天然存在的，从天然环境取出的多肽或核酸。例如，分离的多肽通常不含通常与其结合或通常与其混合或在溶液中的至少某些蛋白质或其他细胞组分。分离的多肽包括细胞裂解物中包含的天然生产的所述多肽，纯化或部分纯化形式的所述多肽，重组多肽，被细胞表达或分泌的所述多肽，以及在异源宿主细胞或培养物中的所述多肽。与核酸相关联，术语分离的或纯化的指示例如所述核酸不在其天然的基因组背景中(例如在载体中，作为表达盒，连接到启动子，或人工引入到异源宿主细胞中)。
本发明的实例性实施方案
本发明一方面提供了一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段具有至少一个选自SEQ ID NO：1、2、3或与 SEQ ID NO：1、2、3具有80％序列同源性的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQ ID NO：4、5、6或与SEQ ID NO：4、5、6具有80％序列同源性的轻链CDR结构域，其中，SEQ ID NO：1-6序列如下所示：
SEQ ID NO：1：GYTFTDH(CDR-H1)
SEQ ID NO：2：SPGNDD(CDR-H2)
SEQ ID NO：3：SYYGH(CDR-H3)
SEQ ID NO：4：RASENIYSNLA(CDR-L1)
SEQ ID NO：5：AATNLAD(CDR-L2)
SEQ ID NO：6：QHFWGTPYT(CDR-L3)
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ IDNO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:2所示的CDR2，和 SEQ ID NO:3所示的CDR3；所述抗体的轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO:4所示的CDR1'，SEQ ID NO:5所示的CDR2'，和SEQ ID NO:6所示的CDR3'。
在一些实施方案中，所述抗体的重链包含4个FR区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：7、8、9或10所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：7、8、9或10具有至少80％、85％、90％、 95％、98％或99％的序列同源性的序列；所述抗体的轻链包含4个FR 区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：11、12、13 或14所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO：11、12、13或14具有至少80％、85％、90％、95％、98％或99％的序列同源性的序列，其中SEQ ID NO：7-14序列如下所示：
SEQ ID NO：7：QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKAS(HFR1)
SEQ ID NO：8：AIHWAKQKPEQGLEWIGYI(HFR2)
SEQ ID NO：9：IKYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYFCKR (HFR3)
SEQ ID NO：10：WGQGTTLTVSS(HFR4)
SEQ ID NO：11：DIQMTQSPASLSVSVGETVTITC(LFR1)
SEQ ID NO：12：WYQQKQGKSPQLLVY(LFR2)
SEQ ID NO：13：GVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYC(LFR3)
SEQ ID NO：14：FGGGTRLEIK(LFR4)
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO:15 所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，所述SEQ ID NO：15、16序列如下所示：
SEQ ID NO：15：
QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWAKQKPEQGLEWIGYI SPGNDDIKYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYFCKRSYYGHWGQ GTTLTVSS
SEQ ID NO：16：
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYAAT NLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYCQHFWGTPYTFGGGTRLEIK
本发明抗体还包括具有与本发明抗体相同功能的、包含上述CDR 区的多肽的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：一个或多个 (通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个) 氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内) 氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括本发明抗体的活性片段和活性衍生物。
该多肽的变异形式包括：同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧度条件下能与本发明抗体的编码DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗本发明抗体的抗血清获得的多肽或蛋白。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，其编码本发明所述的抗 CA724抗体或其抗原结合片段。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码本发明所述的抗体重链可变区。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码本发明所述的抗体轻链可变区。
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 17所示的核苷酸序列。SEQ ID NO：17序列如下所示：
SEQ ID NO：17：
caggtacagctccagcagagtgatgctgaactcgtaaagccgggtgcatccgtgaaaatcagtt gcaaagccagtggctatacgtttacggaccacgcgatacattgggcaaaacagaaacccgagcaggg attggagtggatagggtatatctcacctgggaacgatgatatcaagtacaacgaaaaatttaagggtaa agcgacactcaccgcagacaagagcagttccacagcttatatgcagctcaattcacttaccagcgagga ttctgctgtctacttctgcaagcggagttattacggacattggggccaaggcaccactctcacagtctcct ca
本发明另一方面提供一种分离的核酸，所述核酸具有SEQ ID NO: 18所示的核苷酸序列。SEQ ID NO：18序列如下所示：
SEQ ID NO：18：
gacatacaaatgactcaaagcccagctagtctttccgtatcagtcggtgaaacggtgactattac ttgtcgcgcttctgagaatatctacagcaatctcgcgtggtatcagcagaagcaaggtaaaagcccgca actcctggtatacgcagcaactaacttggctgatggcgtgccgagcaggttctccggcagtggaagtgg tactcaatacagcttgaaaataaattcactgcaaagtgaggacttcggttcatactactgtcaacattttt ggggaaccccttatacattcggaggaggcaccaagcttgagatcaaa
本发明另一方面提供一种宿主细胞，其包含前述任一项所述的载体或核酸，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的酵母细胞、哺乳动物细胞。
在一个实施方案中，宿主细胞是真核的。在另一个实施方案中，宿主细胞选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。例如，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是关于编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主。例如，糖基化途径已经进行“人源化”的真菌和酵母菌株导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross，Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，和Li等， Nat.Biotech.24：210-215(2006)。适于表达糖基化抗体的宿主细胞也衍生自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。也可以将脊椎动物细胞用作宿主。例如，可以使用被改造以适合于悬浮生长的哺乳动物细胞系。有用哺乳动物宿主细胞系的其它实例是用SV40转化的猴肾CV1 系(COS-7)；人胚肾系(293HEK或293细胞，如例如Graham等， J.Gen Virol.36：59(1977)中所描述的)等。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(C H O)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77：216(1980))；以及骨髓瘤细胞系如Y0， NS0和Sp2/0。关于适合产生抗体的某些哺乳动物宿主细胞系的综述见例如Yazaki和Wu，Methods inMolecular Biology，卷248(B.K.C.Lo， ed.，Humana Press，Totowa，NJ)，第255-268页(2003)。
本发明另一方面提供制备前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码前述任一项的抗 CA724抗体或其抗原结合片段的核酸的条件下培养前述任一项所述的宿主细胞，任选地分离所述抗体或其抗原结合片段，任选地所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗724抗体或其抗原结合片段。
本发明另一方面提供经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段。
本发明的抗体可以单独使用，也可与可检测标记物(为诊断目的)、治疗剂、PK(蛋白激酶)修饰部分或任何以上这些物质的组合结合或偶联。用于诊断目的的可检测标记物包括但不限于：荧光或发光标记物、放射性标记物、MRI(磁共振成像)或CT(电子计算机X射线断层扫描技术)造影剂、或能够产生可检测产物的酶。可与本发明抗体结合或偶联的治疗剂包括但不限于：1.放射性核素(Koppe等，2005，癌转移评论(Cancer metastasisreviews)24，539)；2.生物毒(Chaudhary等，1989，自然(Nature)339，394；Epel等，2002，癌症免疫学和免疫治疗 (Cancer Immunology and Immunotherapy)51，565)；3.细胞因子如IL-2等(Gillies等，1992，美国国家科学院院刊(PNAS)89，1428；Card 等，2004，癌症免疫学和免疫治疗(Cancer Immunology and Immunotherapy)53，345；Halin等，2003，癌症研究(Cancer Research)63， 3202)；4.金纳米颗粒/纳米棒(Lapotko等，2005，癌症通信(Cancerletters)239，36；Huang等，2006，美国化学学会杂志 (Journal of the AmericanChemical Society)128，2115)；5.病毒颗粒(Peng等，2004，基因治疗(Gene therapy)11，1234)；6.脂质体 (Mamot等，2005，癌症研究(Cancer research)65，11631)；7.纳米磁粒；8.前药激活酶(例如，DT-心肌黄酶(DTD)或联苯基水解酶-样蛋白质(BPHL))；10.化疗剂(例如，顺铂)或任何形式的纳米颗粒等。
本发明另一方面提供前述任一项抗体或其抗原结合片段与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物。
本发明另一方面提供前述任一项所述的抗体或其抗原结合片段、经化学标记或生物标记的前述任一项抗体或其抗原结合片段和前述任一项偶联物在制备用于诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品中的应用。
本发明另一方面提供一种试剂盒，其特征在于包含前述任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段或前述任一项所述的偶联物。
在本发明的一个优选例中，所述的试剂盒还包括容器、使用说明书、缓冲剂等。
本发明进一步设计用于检测CA724蛋白的检测试剂盒，该试剂盒包括识别CA724蛋白的抗体，检测所需的通用试剂和缓冲液，如各种缓冲液、酶联标记的二抗、检测标记、检测底物等。该检测试剂盒可以是体外诊断装置。
下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实验材料：
pcDNA3.4载体，Expi293TM表达系统包括Expi293细胞、转染试剂、培养基等均购自ThermoFisher；protein A亲和柱购自GE，其它试剂均为分析纯。
实施例一抗CA724抗体的制备
1.表达载体构建
用CA724抗原与等量免疫佐剂混合，皮下注射免疫Balb/c小鼠。小鼠初次免疫后，每两周进行一次加强免疫，共免疫6次。在最后一次免疫3天后取小鼠脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0使用聚乙二醇法进行融合，在HAT选择培养基中培养，筛选出抗CA724的阳性克隆。将筛选得到的抗CA724阳性杂交瘤细胞扩大培养，分离纯化抗CA724 单克隆抗体，并采用LCMS/MS技术对抗体进行氨基酸测序，获得抗体可变区序列并推算出基因序列。
通过标准基因克隆技术将抗CA724抗体重链可变区基因与轻链可变区基因分别克隆至pcDNA3.4载体，构建重链、轻链表达载体。其中，重链质粒包含重链可变区、小鼠IgG2αFc区；轻链质粒含轻链可变区、IgGκFc区。
所对应的抗体重链氨基酸序列为SEQ ID NO:19
QVQLQQSDAELVKPGASVKISCKASGYTFTDHAIHWAKQKPEQGLEWIGYI SPGNDDIKYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSEDSAVYFCKRSYYGHWGQ GTTLTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSS GVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEV HTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTK GRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNT QPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWE AGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPG
所对应的抗体轻链氨基酸序列为：SEQ ID NO:20
DIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENIYSNLAWYQQKQGKSPQLLVYAAT NLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYCQHFWGTPYTFGGGTRLEIKG ADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSW TDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC。
2.转染与瞬时表达
采用Expi293F表达系统，将重链载体与轻链载体共转染至 Expi293F细胞中，进行表达。用Expi293培养基培养与扩增细胞，在转染前一天，将Expi293F细胞以2.5×106mL密度接种于125mL摇瓶中，培养液体积30mL，125±5rpm，37℃，8％CO2培养过夜。第二天待细胞达到4.5–5.5×106活细胞/mL，细胞存活率达95～99％方可进行转染。用新鲜培养基调整细胞浓度为23×106mL待用。用转染试剂稀释质粒DNA，然后将质粒DNA缓慢加入到摇瓶中，至重链载体与轻链载体终浓度各为0.5ug/mL。125±5rpm，37℃，8％CO2进行培养。转染后第五天收集培养液，3000g离心20min后，取上清0.45μm过滤后，过protein A亲和柱进行抗体分离纯化。将过滤后的培养上清缓慢流过protein A柱，上样后用20mM，pH7.0的磷酸钠缓冲液清洗柱子，洗去不与protein A特异性结合的组分，用0.1M，pH2.7甘氨酸-盐酸缓冲液洗脱吸附的抗体，再用pH9.0，1M Tris-HCl缓冲液调整抗体组分至中性。将收集的抗体用8％SDS-PAGE分析，结果如图1所示。
实施例二抗CA724单克隆/重组抗体生物素或吖啶酯标记
将实施例一分离纯化得到的单克隆/重组表达的抗CA724抗体浓度调整为2mg/mL，以抗体：生物素＝1：30摩尔比加入生物素进行生物素标记，室温振荡反应30min，超滤3次，除去游离生物素。
将实施例一分离纯化得到的单克隆/重组表达的抗CA724抗体浓度调整为2mg/mL，以抗体：吖啶酯＝1：15摩尔比加入进行吖啶酯进行标记，室温振荡反应30min，超滤3次，除去游离吖啶酯。
实施例三抗CA724重组抗体反应性
将实施例二制备的生物素或吖啶酯标记的抗CA724重组抗体与抗CA724单克隆抗体(吖啶酯或生物素标记)搭配，检测不同浓度 CA724(S0～S5)。在一次性反应杯中分别加入20μL样本、生物素和吖碇酯标记抗体溶液各100μL，37℃孵育10min；加入20μL链霉亲和素磁颗粒，37℃孵育10min；PBS洗涤，依次加入激发液1 (0.1mol/lL HNO3溶解1％过氧化氢)和激发液2(0.1mol/L NaOH)，测定相对发光强度。
结果如表1所示，随CA724浓度升高，发光信号值升高，重组表达的抗CA724抗体可以识别CA724，且反应性接近单克隆抗体。
表1
Figure RE-GDA0003389800220000171
实施例四抗CA724重组抗体亲和性
选用AMQ生物传感器用于捕获实施例一制备的重组抗体或单克隆抗体抗体，然后分别与抗原进行结合或解离。
实验分析如下表：
缓冲液 20mM Hepes，150mM NaCl，0.02％Tween 20，pH7.4
测试浓度 抗原稀释10倍，抗体稀释至10μg/ml
传感器再生条件 pH 1.5glycine
动力学分析方法如下表：
Baseline 1 60s
Loading 100-180s
Baseline 2 120s
Association 300s
Dissociation 200s
Regeneration 30s
实验结果如下表，实施例一制备的重组抗体与单克隆抗体KD值接近，两个抗体的亲和力相近。
Ab KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
重组抗体 1.80E-08 6.07E+04 1.09E-03
单克隆抗体 1.64E-08 5.47E+04 8.97E-04
实施例五抗CA724重组抗体批间差
按照实施例一的方案制备三批抗CA724重组抗体，按实施例二的方案标记吖啶酯，与实施例二制备的生物素标记的抗CA724单克隆抗体搭配组成试剂，检测不同浓度CA724(S0～S5)，比对三组试剂间的反应性，结果如下表所示，不同批原料标记后反应性基本一致。
Figure RE-GDA0003389800220000181
以上述依据本申请的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项申请技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项申请的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
序列表
<110> 苏州长光华医生物医学工程有限公司
<120> 抗CA724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用
<130> 20210731
<160> 20
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
1 5
<210> 2
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ser Pro Gly Asn Asp Asp
1 5
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ser Tyr Tyr Gly His
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 8
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Ala Ile His Trp Ala Lys Gln Lys Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
1 5 10 15
Gly Tyr Ile
<210> 9
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp
1 5 10 15
Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu
20 25 30
Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Lys Arg
35 40
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 11
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Ala Ile His Trp Ala Lys Gln Lys Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Pro Gly Asn Asp Asp Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Lys Arg Ser Tyr Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 342
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
caggtacagc tccagcagag tgatgctgaa ctcgtaaagc cgggtgcatc cgtgaaaatc 60
agttgcaaag ccagtggcta tacgtttacg gaccacgcga tacattgggc aaaacagaaa 120
cccgagcagg gattggagtg gatagggtat atctcacctg ggaacgatga tatcaagtac 180
aacgaaaaat ttaagggtaa agcgacactc accgcagaca agagcagttc cacagcttat 240
atgcagctca attcacttac cagcgaggat tctgctgtct acttctgcaa gcggagttat 300
tacggacatt ggggccaagg caccactctc acagtctcct ca 342
<210> 18
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gacatacaaa tgactcaaag cccagctagt ctttccgtat cagtcggtga aacggtgact 60
attacttgtc gcgcttctga gaatatctac agcaatctcg cgtggtatca gcagaagcaa 120
ggtaaaagcc cgcaactcct ggtatacgca gcaactaact tggctgatgg cgtgccgagc 180
aggttctccg gcagtggaag tggtactcaa tacagcttga aaataaattc actgcaaagt 240
gaggacttcg gttcatacta ctgtcaacat ttttggggaa ccccttatac attcggagga 300
ggcaccaagc ttgagatcaa a 321
<210> 19
<211> 437
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Ala Ile His Trp Ala Lys Gln Lys Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Pro Gly Asn Asp Asp Ile Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Lys Arg Ser Tyr Tyr Gly His Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly
115 120 125
Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu
145 150 155 160
Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr
165 170 175
Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu
180 185 190
Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr
210 215 220
Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
225 230 235 240
Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp
245 250 255
Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp
260 265 270
Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
275 280 285
Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp
290 295 300
Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro
305 310 315 320
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala
325 330 335
Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp
340 345 350
Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile
355 360 365
Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn
370 375 380
Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys
385 390 395 400
Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys
405 410 415
Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu
420 425 430
Ser His Ser Pro Gly
435
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Ala Asp Ala Ala
100 105 110
Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile
130 135 140
Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu
145 150 155 160
Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr
180 185 190
Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210

Claims (8)

1.一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区具有如SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链可变区具有如SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列。
2.一种抗CA724抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链具有如SEQ IDNO: 19所示的氨基酸序列；所述抗体的轻链具有如SEQ ID NO: 20所示的氨基酸序列。
3.一种分离的核酸，其编码权利要求1-2任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段。
4.一种载体，其包含权利要求3的核酸。
5.一种宿主细胞，其包含权利要求3的核酸或权利要求4的载体。
6.制备权利要求1-2任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码权利要求1-2中任一项的抗CA724抗体或其抗原结合片段的核酸的条件下培养权利要求5的宿主细胞，任选地分离所述抗体或其抗原结合片段，任选地所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述抗724抗体或其抗原结合片段。
7.权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于诊断癌症的诊断剂或检测CA724的产品中的应用。
8.一种用于检测CA724蛋白的试剂盒，其特征在于包含权利要求1-2任一项所述的抗CA724抗体或其抗原结合片段。
CN202111069682.8A 2021-09-13 2021-09-13 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用 Active CN113880948B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111069682.8A CN113880948B (zh) 2021-09-13 2021-09-13 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用
PCT/CN2022/110212 WO2023035825A1 (zh) 2021-09-13 2022-08-22 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111069682.8A CN113880948B (zh) 2021-09-13 2021-09-13 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113880948A true CN113880948A (zh) 2022-01-04
CN113880948B CN113880948B (zh) 2022-04-08

Family

ID=79009167

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111069682.8A Active CN113880948B (zh) 2021-09-13 2021-09-13 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN113880948B (zh)
WO (1) WO2023035825A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023035825A1 (zh) * 2021-09-13 2023-03-16 苏州长光华医生物医学工程有限公司 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105132377A (zh) * 2015-07-25 2015-12-09 大庆麦伯康生物技术有限公司 抗ca724单克隆抗体产生的杂交瘤

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103116025A (zh) * 2012-09-20 2013-05-22 河南生生医疗器械有限公司 一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒及其应用
CN102838676A (zh) * 2012-09-26 2012-12-26 李彬 一种癌胚抗原单抗及包含该抗体的芯片以及应用
CN108414743B (zh) * 2018-03-07 2020-05-26 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种用于酶联免疫试剂盒的组合物以及肿瘤标志物检测试剂盒及其制备方法
CN111349166B (zh) * 2018-12-20 2022-11-08 东莞市朋志生物科技有限公司 一种抗人ca72-4糖蛋白的重组抗体
CN113880948B (zh) * 2021-09-13 2022-04-08 苏州长光华医生物医学工程有限公司 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105132377A (zh) * 2015-07-25 2015-12-09 大庆麦伯康生物技术有限公司 抗ca724单克隆抗体产生的杂交瘤

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023035825A1 (zh) * 2021-09-13 2023-03-16 苏州长光华医生物医学工程有限公司 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023035825A1 (zh) 2023-03-16
CN113880948B (zh) 2022-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6854322B2 (ja) ヒトプログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に結合する抗体
CN112135626B (zh) 抗tigit抗体及其用途
AU627183B2 (en) Method for producing recombinant dna proteins
EP2558501B1 (en) Monoclonal antibodies against her2 antigens, and uses therefor
RU2488593C2 (ru) Человеческое опухолеспецифическое моноклональное антитело
CN113330036B (zh) 结合pd-l1和ox40的双特异性抗体
CN113880948B (zh) 抗ca724抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用
CN109336973B (zh) 抗转铁蛋白抗体及其用途
KR20210114922A (ko) 항-인간 n-말단 프로 뇌 나트륨 이뇨 펩티드의 재조합 항체
CN112480250B (zh) 一种抗人骨桥蛋白的抗体及其应用
EP4079758A1 (en) Semg2 antibody and use thereof
CN115505043A (zh) 特异性结合糖基化ceacam5的抗体
JP3888695B2 (ja) ヒトｌｅｃｔ２に対する抗体、それを産生する細胞、その測定法及び測定用キット
CN110579610A (zh) 用于检测t细胞活化的v域免疫抑制因子的试剂盒
JP6407990B2 (ja) アウグリン免疫学的検定
EP4279505A1 (en) Human cd276-targeting monoclonal antibody and application thereof
WO2024008094A1 (zh) 抗cd20抗体的单克隆抗体及其应用
CN117700557B (zh) 一种特异性结合叶酸受体α的抗体或抗原结合片段
EP4011912A1 (en) Method and kit for detecting human alpha-defensin hd5, and antibodies used in said method and kit
MXPA01007261A (es) Anticuerpos y fragmentos fv que reconocen el antigeno ior c2.
CN114478779A (zh) 人源化的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的单克隆抗体及其应用
CA3211948A1 (en) Immunohistochemistry methods and kir3dl2-specific reagents
CN114213542A (zh) Cps-i抗体及其用途
AU2019353009A1 (en) Antibodies targeting EPN1

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant