CN113862386A - 一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用 - Google Patents
一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明“一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用”，属于生物技术辅助育种领域。所述与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记相比叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的第110‑117位点存在碱基插入突变。所述与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的核苷酸序列如Seq ID No.2所示。采用本发明获得的Indel标记，可以在美洲南瓜候选材料的任何阶段判断植株是否具有叶片缺刻这一性状，该标记具有高效、限制少、准确率高的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物技术辅助育种领域，特别涉及一种与美洲南瓜Cucurbita pepoL.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用。
背景技术
美洲南瓜Cucurbita pepo L.，又名西葫芦，其作为一种重要的蔬菜作物，在全球范围内广泛栽培。人们在种植过程中为了提高产量，往往需要增加种植密度，然而美洲南瓜的叶片较大，密植栽培会带来光照不均、通风透光不良等问题，导致果实发育异常、商品性欠佳等问题。
目前，关于美洲南瓜叶片缺刻的研究报道极少，未对其遗传规律进行系统研究，也未见其基因克隆和分子标记的相关报道。
发明内容
基于上述领域的空白，本发明利用美洲南瓜叶片缺刻材料HM-S2和不缺刻材料Jin-GL，旨在开发与叶片缺刻紧密连锁的Indel标记，用于育种研究。本发明提供了与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll紧密连锁的Indel标记，并提供了其在选择美洲南瓜种质资源上的应用。
发明的技术方案如下：
一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记，其特征在于，其相比叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的第110-117位点存在碱基插入突变。
所述插入突变的碱基为CTTGCCTG。
优选地，所述与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的核苷酸序列如Seq ID No.2所示；
优选地，所述叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，其特征在于，可扩增所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记。
所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
用于鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，包括可扩增所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的引物，和/或，所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物。
所述引物包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
优选地，所述试剂盒还包括：PCR试剂，和/或，电泳试剂；
优选地，所述PCR试剂包括：dNTP，Taq酶，缓冲液，双蒸水；
优选地，所述电泳试剂包括：电泳缓冲液、Tris-HCl、SDS、丙烯酰胺、过硫酸胺、TEMED、双蒸水、银染试剂。
一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法，其特征在于，采用所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，对待测美洲南瓜材料进行检测。
所述检测包括PCR；
所述PCR体系包括：0.75ng/μl DNA模板，正向和反向引物各5ng/μl，0.5μL/μl2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)；
优选地，所述PCR体系为：7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2×3G TaqMaster Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10μl；
所述DNA模板为待测美洲南瓜材料的DNA；
优选地，所述PCR程序为：95℃预变性3分钟；以95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒为1个循环，共35个循环；72℃保温5分钟；
优选地，所述检测还包括：对PCR产物进行电泳和/或测序；
所述电泳指，将PCR产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离；
优选地，电泳条件为150V恒功率电泳分离1h10min，电泳后银染显色；
优选地，如果电泳结果为180bp和/或测序结果如Seq ID No.1所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片不缺刻基因CpDll，表现型为叶片不缺刻，
如果电泳结果为188bp和/或测序结果如Seq ID No.2所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片缺刻基因Cpdll，表现型为叶片缺刻。
一种美洲南瓜Cucurbita pepo L.高产种植方法，其特征在于，采用所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，和/或，采用所述的一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll 的美洲南瓜种质资源的方法鉴别筛选出携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源进行自交或杂交，得到含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种进行高密度种植。
所述高密度种植指将含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种的单株按种植密度 1500-1600株/亩进行种植。
本发明前期研究发现，美洲南瓜的叶片缺刻程度存在较大变异，有的材料没有缺刻，而有的材料缺刻很深。所以，叶片深度缺刻的美洲南瓜材料则为解决上述难题提供了可能。叶片缺刻材料具有更加理想的冠层结构，可有效增加通风和透光效率，减少水分蒸发。同时，叶片缺刻材料在抗病虫、抗旱和光合利用效率等方面也具有优势。因此，研究美洲南瓜叶片缺刻性状的遗传规律及分子标记，加速叶片缺刻基因的转育效率，对于选育符合市场需求的新品种具有重要意义。
本发明利用叶片不缺刻材料Jin-GL和叶片深度缺刻材料HM-S2构建了一套包含171个家系的重组自交系群体，以及一个F2大群体，遗传分析发现美洲南瓜的深度缺刻性状由一对隐性单基因控制，将该基因命名为Cpdll。本发明利用重组自交系群体完成了该基因的初步定位，进而利用F2大群体将该基因精细定位在了80kb的区间。此外，本发明还对Jin-GL和 HM-S2两个材料进行了深度重测序，期望通过序列比对获得与叶片缺刻性状紧密连锁的分子标记，为叶片缺刻性状的分子标记辅助选择奠定基础。
本发明提供的所述Indel标记扩增的与美洲南瓜叶片不缺刻基因CpDll连锁的特征条带核苷酸序列如Seq ID No.1所示，序列长度为180bp，该片段在第110个碱基存在8个碱基的缺失，表现为叶片不缺刻；所述Indel标记扩增的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的特征条带核苷酸序列如Seq ID No.2所示，序列长度为188bp，该片段在第110个碱基存在8个碱基的插入，表现为叶片缺刻。
本发明另一方面还提供所述Indel标记在筛选具有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源中的应用，其步骤如下：
(1)提取待测样品基因组DNA；
(2)以所述待测样品基因组DNA为模板，以权利要求1所述的引物进行PCR扩增；
(3)对PCR扩增片段进行测序或进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；
如果测序结果如Seq ID No.1所示，美洲南瓜材料表现为叶片不缺刻，如果测序结果如 Seq ID No.2所示，美洲南瓜材料表现为叶片缺刻；
如果电泳后片段为180bp，美洲南瓜材料表现为叶片不缺刻；如果电泳后片段为188bp，美洲南瓜材料表现为叶片缺刻。
(4)根据权利要求2所述的应用，所述PCR反应体系为:7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10ul。
(5)PCR扩增程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，10℃保存。
(6)一种用于筛选具有叶片缺刻基因Cpdll美洲南瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，包括粉状或溶液状态的核苷酸序列如下的引物：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll紧密连锁的Indel标记，其特征在于：
其核苷酸序列如下：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
所述Indel标记扩增的与美洲南瓜叶片不缺刻基因CpDll连锁的特征条带核苷酸序列如Seq ID No.1所示，序列长度为180bp，该片段在第110个碱基存在8个碱基的缺失，表现为叶片不缺刻；所述Indel标记扩增的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的特征条带核苷酸序列如Seq ID No.2所示，序列长度为188bp，该片段在第110个碱基存在8个碱基的插入，表现为叶片缺刻。
上述Indel标记在筛选美洲南瓜种质资源中的应用，其步骤如下：
(1)提取待测样品基因组DNA；
(2)以所述待测样品基因组DNA为模板，以权利要求1所述的引物进行PCR扩增；
(3)对PCR扩增片段进行测序；
如果测序结果如Seq ID No.1所示，美洲南瓜表现为叶片不缺刻，如果测序结果如Seq ID No.2所示，美洲南瓜表现为叶片缺刻；
所述PCR反应体系为：7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2×3G TaqMaster Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10ul。
所述PCR扩增程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，10℃保存。
所述凝胶电泳检测：指采用6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于150V恒功率电泳分离1h10min，最后银染显色，进行条带统计。
本发明利用叶片不缺刻材料Jin-GL和叶片缺刻材料HM-S2开发的Indel标记，通过利用包含147个单株的F2群体进行验证，结果发现CpDLL-INDEL3标记用于分子标记辅助选择的正确率为100％。
本发明不仅为美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的精细定位和分子克隆奠定了基础，同时也为利用分子标记辅助选育叶片缺刻新品种提供了高效的途径。本发明基于开发的Indel标记提供用于辅助筛选具有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜新品种的方法。该方法中，采用所述 CpDLL-INDEL3特异性引物扩增待测材料的DNA，然后对扩增产物进行测序及电泳。通过本发明提供的方法，可以在美洲南瓜候选材料的任何阶段对其进行美洲南瓜叶片缺刻情况进行筛选，具有高效、限制少、准确的优点。
附图说明
图1是本发明实验例使用的待测美洲南瓜材料Jin-GL、HM-S2、F1和部分F2群体单株的叶片缺刻情况表型。
图2是采用本发明的一个实施例提供的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记 -CpDLL-INDEL3标记检测美洲南瓜Jin-GL、HM-S2、F1和147个F2群体单株的扩增条带。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但并不限制本发明的范围。如无特殊说明，下述实施例中使用的操作均为常规方法，所采用的试剂均可以商购获得。
生物材料的来源
本发明实验例所用的试验材料为Jin-GL、HM-S2、F1和147个F2群体单株。该F2群体是申请人实验室自行配制的一个专用于研究叶片缺刻基因的美洲南瓜F2群体，该群体是以叶片不缺刻材料Jin-GL父本，以叶片缺刻材料HM-S2为母本二者杂交获得的F1代进而自交产生的。该群体材料可自本发明申请日起二十年内向公众发放用于验证实验。
主要试剂
PCR实验使用Vazyme公司的2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)；凝胶电泳使用北京酷来搏科技有限公司的40％非变性聚丙烯酰胺，将其稀释至6％后使用。测序在北京生工公司进行。
第1组实施例、本发明的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记
本组实施例提供一种与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记相比叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的第110-117位点存在碱基插入突变。
在具体的实施例中，所述插入突变的碱基为CTTGCCTG。
在一些实施例中，所述与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的核苷酸序列如 Seq ID No.2所示；
优选地，所述美洲南瓜叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的核苷酸序列如SeqID No.1 所示。
本文中，CpDLL-INDEL3标记也是指所述与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记。
本领域技术人员可根据本发明的教导，将上述Indel标记用于设计引物、并将引物用于筛选叶片缺刻基因Cpdll的种质资源。任何将上述Indel标记用于设计引物、并将引物用于筛选叶片缺刻基因Cpdll的种质资源，或将上述Indel标记直接用于筛选叶片缺刻基因Cpdll种质资源，或将上述Indel标记在筛选种质资源产品、生产或服务方面的利用，或人工合成、生产、制造、销售、许诺销售、使用上述Indel标记的行为均落入本发明的保护范围。
第2组实施例、本发明的用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物
本组实施例提供一种用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物。本组所有的实施例都具备如下共同特征：所述引物可扩增第1组实施例任一所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll 连锁的Indel标记。
在具体的实施例中，所述的用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
基于本发明记载的Indel标记特征序列设计试验中可行的特异性引物，是本领域技术人员可根据实际实验操作中的具体需求，利用本领域常见的引物设计软件以上述Indel标记序列为模板可常规调整、选择并设计得到，理论上因引物长短不一且位点各异，存在无数条引物的可能性，上述CpDLL-INDEL3-F、CpDLL-INDEL3-R仅仅是本发明设计出的其中一对引物，本发明因试验周期、篇幅等因素不能穷尽式地设计或列举所有可用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物，因此用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物不仅限于上述 CpDLL-INDEL3-F、CpDLL-INDEL3-R。任何基于本发明的Indel标记设计出的可用的引物均落入本发明的保护范围。
任何人工合成、生产、制造、销售、使用、许诺销售上述叶片缺刻基因Cpdll的引物的行为均落入本发明的保护范围。
第3组实施例、本发明的用于鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒
本组实施例提供一种用于鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒。本组所有实施例的共同特征在于，所述试剂盒包括可扩增第1组实施例任一所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的引物，和/或，第2组实施例任一项所述的用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物。
在具体的实施例中，所述引物包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
在进一步的实施例中，所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒还包括：PCR试剂，和/或，电泳试剂；
优选地，所述PCR试剂包括：dNTP，Taq酶，缓冲液，双蒸水；
优选地，所述电泳试剂包括：电泳缓冲液TBS、Tris-HCl、SDS、丙烯酰胺、过硫酸胺、TEMED、双蒸水、银染试剂。
上述试剂均为分子生物学领域的技术人员常用的实验室试剂，本领域技术人员可商购获得，也可根据实际需要进行常规选择、调整和配制。
任何人工合成、生产、制造、销售、使用、许诺销售上述用于鉴定携带有叶片缺刻基因 Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒的行为均落入本发明的保护范围。
第4组实施例、本发明鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法
本组实施例提供一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法。本组所有实施例的共同特征在于，采用第2组实施例任一项所述的用于筛选美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，第3组实施例任一所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，对待测美洲南瓜材料进行检测。
在具体的实施例中，所述检测包括PCR；
所述PCR体系包括：0.75ng/μl DNA模板，正向和反向引物各5ng/μl，0.5μL/μl2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)；
优选地，所述PCR体系为：7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2×3G TaqMaster Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10μl；
所述DNA模板为待测美洲南瓜材料的DNA；
优选地，所述PCR程序为：95℃预变性3分钟；以95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒为1个循环，共35个循环；72℃保温5分钟；
在进一步的实施例中，所述检测还包括：对PCR产物进行电泳和/或测序；
所述电泳指，将PCR产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离；
优选地，电泳条件为150V恒功率电泳分离1h10min，电泳后银染显色；
优选地，如果电泳结果为180bp和/或测序结果如Seq ID No.1所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片不缺刻基因CpDll，表现型为叶片不缺刻，
如果电泳结果为188bp和/或测序结果如Seq ID No.2所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片缺刻基因Cpdll，表现型为叶片缺刻。
第5组实施例、本发明的美洲南瓜Cucurbita pepo L.高产种植方法
本组实施例提供一种美洲南瓜Cucurbita pepo L.高产种植方法。本组所有的实施例都具备如下共同特征：采用第2组实施例任一项提供的所述用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，第3组实施例任一项提供的所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，和/或，采用第4组实施例任一项提供的所述的一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法鉴别筛选出携带有叶片缺刻基因 Cpdll的美洲南瓜种质资源进行自交或杂交，得到含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种进行高密度种植。
在具体的实施例中，所述高密度种植指将含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种的单株按种植密度1500-1600株/亩进行种植。
所述种植方法还包括美洲南瓜Cucurbita pepo L.常规的种植栽培步骤，例如：整地施肥、开沟整畦、定植、温度控制、保果处理、肥水控制、病虫防治、采收等环节，具体可参考西葫芦种植领域公知技术《西葫芦栽培技术规程》一书。
实验例1.美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll紧密连锁的Indel标记的获得
结合美洲南瓜基因组序列的数据以及Jin-GL、HM-S2重测序数据，利用生物信息学结合遗传群体的表型鉴定，分析定位该区域内的片段差异，在叶片缺刻的美洲南瓜材料HM-S2中，发现了8个碱基的插入。
基于获得的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll紧密连锁的Indel标记，开发与美洲南瓜叶片缺刻Cpdll紧密连锁的Indel标记(命名为CpDLL-INDEL3)。其中正向和反向引物分别为：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG(SEQ ID NO.3)，
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG(SEQ ID NO.4)。
由于插入Indel的关系，通过上述引物(CpDLL-INDEL3-F/CpDLL-INDEL3-R)对Jin-GL、 HM-S2、F1和147个F2群体单株进行PCR扩增，获得特异性条带，其中在材料Jin-GL(叶片不缺刻)中，获得一个180bp的条带；HM-S2(叶片缺刻)中，获得一个188bp的条带； F1(叶片不缺刻)中，同时获得一个180bp和一个188bp的杂合条带；在F2群体中，可获得上述三种类型的条带。
具体操作方法：
步骤1.DNA提取和PCR扩增
取美洲南瓜植株的嫩叶，用改良的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法提取Jin-GL、HM-S2、 F1和147个F2群体单株的基因组DNA。
Indel标记PCR反应体系为：反应体系10μL，3μL DNA(5.0ng·μL-1)，正向和反向引物 (50ng·μL-1)各1μL，5μL 2×3G Taq Master Mix for PAGE(Red Dye)(Vazyme公司产品)。
PCR扩增程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒，35 个循环；72℃保温5分钟，10℃保存。
步骤2.结果判定
PCR产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离，电泳缓冲液为0.5×TBE，150V恒功率电泳分离1h10min，电泳后银染显色，统计带型。
在材料Jin-GL(叶片不缺刻)中，获得一个180bp的条带，条带带型记为a；在材料HM-S2 (叶片缺刻)中，获得一个188bp的条带，条带带型记为b；在材料F1(叶片不缺刻)中，同时获得一个180bp和一个188bp的杂合条带，条带带型记为h；在F2群体中，可获得上述三种类型的条带。
实验例2.美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll侧翼标记的验证
利用本课题保存的147个F2群体单株材料，对实施例1获得的与基因Cpdll连锁的CpDLL-INDEL3标记进行验证，以确定该标记用于分子标记辅助选择的准确性：经和所选材料的叶片缺刻表型相比(图1)，发现该标记在147个F2群体单株中的基因型数据数据与叶片缺刻情况的表型调查结果一致(图2)，经计算正确率为100％。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
<120> 一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记及其引物、试剂盒与应用
<130> P210444/SCH
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 180
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片不缺刻基因CpDll连锁片段的序列
<400> 1
gcaaaaccca aatgagaaag aaaaacaaag aggattggga tcaacttgtg catgctcatc 60
actgctttga ctgacaacat atatgccagc cagccagcca gccagcctgc ctgcctgcct 120
gcctgcctgc ctgccttcct tcctttgctt ctttttaacc tctcctccat ctccactgct 180
<210> 2
<211> 188
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁片段的序列
<220>
<221> variation
<222> (110)..(117)
<223> Indel
<400> 2
gcaaaaccca aatgagaaag aaaaacaaag aggattggga tcaacttgtg catgctcatc 60
actgctttga ctgacaacat atatgccagc cagccagcca gccagcctgc ttgcctgcct 120
gcctgcctgc ctgcctgcct gccttccttc ctttgcttct ttttaacctc tcctccatct 180
ccactgct 188
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 引物CpDLL-INDEL3-F
<400> 3
gcaaaaccca aatgagaaag 20
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 引物CpDLL-INDEL3-R
<400> 4
agcagtggag atggaggag 19
Claims (10)
1.一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记，其特征在于，其相比叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的第110-117位点存在碱基插入突变。
2.根据权利要求1所述的一种与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记，其特征在于，所述插入突变的碱基为CTTGCCTG。
优选地，所述与美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的核苷酸序列如Seq ID No.2所示；
优选地，所述叶片不缺刻基因CpDll对应连锁片段的核苷酸序列如Seq ID No.1所示。
3.用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，其特征在于，可扩增权利要求1或2所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记。
4.根据权利要求3所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，其特征在于，包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
5.用于鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，包括可扩增权利要求1或2所述的与美洲南瓜叶片缺刻基因Cpdll连锁的Indel标记的引物，和/或，权利要求3或4所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物。
6.根据权利要求4所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，所述引物包含下述上下游引物对：
CpDLL-INDEL3-F:GCAAAACCCAAATGAGAAAG
CpDLL-INDEL3-R:AGCAGTGGAGATGGAGGAG。
优选地，所述试剂盒还包括：PCR试剂，和/或，电泳试剂；
优选地，所述PCR试剂包括：dNTP，Taq酶，缓冲液，双蒸水；
优选地，所述电泳试剂包括：电泳缓冲液、Tris-HCl、SDS、丙烯酰胺、过硫酸胺、TEMED、双蒸水、银染试剂。
7.一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法，其特征在于，采用权利要求3或4所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，权利要求5或6所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，对待测美洲南瓜材料进行检测。
8.根据权利要求9所述的一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法，其特征在于，所述检测包括PCR；
所述PCR体系包括：0.75ng/μl DNA模板，正向和反向引物各5ng/μl，0.5μL/μl2×3GTaq Master Mix for PAGE(Red Dye)；
优选地，所述PCR体系为：7.5ng DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL 2×3G TaqMaster Mix for PAGE(Red Dye)，加双蒸水至10μl；
所述DNA模板为待测美洲南瓜材料的DNA；
优选地，所述PCR程序为：95℃预变性3分钟；以95℃变性15秒，57℃退火15秒，72℃延伸30秒为1个循环，共35个循环；72℃保温5分钟；
优选地，所述检测还包括：对PCR产物进行电泳和/或测序；
所述电泳指，将PCR产物用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶分离；
优选地，电泳条件为150V恒功率电泳分离1h10min，电泳后银染显色；
优选地，如果电泳结果为180bp和/或测序结果如Seq ID No.1所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片不缺刻基因CpDll，表现型为叶片不缺刻，
如果电泳结果为188bp和/或测序结果如Seq ID No.2所示，则所测的美洲南瓜材料的基因型为叶片缺刻基因Cpdll，表现型为叶片缺刻。
9.一种美洲南瓜Cucurbita pepo L.高产种植方法，其特征在于，采用权利要求3或4所述的用于筛选美洲南瓜Cucurbita pepo L.叶片缺刻基因Cpdll的引物，和/或，权利要求5或6所述的用于鉴别携带叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的试剂盒，和/或，采用权利要求7或8所述的一种鉴定携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源的方法鉴别筛选出携带有叶片缺刻基因Cpdll的美洲南瓜种质资源进行自交或杂交，得到含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种进行高密度种植。
10.根据权利要求9所述的一种美洲南瓜Cucurbita pepo L.高产种植方法，其特征在于，所述高密度种植指将含有叶片缺刻基因Cpdll纯合体的美洲南瓜品种的单株按种植密度1500-1600株/亩进行种植。
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|---|---|---|---|---|
| WO2008135510A1 (en) * | 2007-05-02 | 2008-11-13 | Syngenta Participations Ag | Insect resistant plant |
| CN107674922A (zh) * | 2017-09-01 | 2018-02-09 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 黄瓜抗黄瓜花叶病毒病基因cmv的InDel标记及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MONTERO-PAU,J等: "Cucurbita pepo subsp. pepo cultivar mu-cu-16 chromosome LG10, ASM280686v2, whole genome shotgun sequence", GENBANK, pages 1 - 2 * |
| 周萌萌;王佳楠;田丽波;商桑;潘琼玉;邹凯茜;曾丽萍;: "葫芦科作物重要性状基因定位研究进展", 热带作物学报, no. 03 * |
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