CN113861157B - 一种具有抗病毒活性的环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有抗病毒活性的环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于医药技术领域,涉及一种具有抗病毒活性的环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用。本发明从巴戟天地上部分中首次提取制备了1个新的环烯醚萜类化合物‑化合物1,通过HR‑ESIMS、NMR、IR、UV等现代波谱学手段确定了其化学结构、理化性质,并命名为Officinaloside C。本发明的化合物1具有抗HSV‑1病毒的活性,表现出优良的抗病毒作用;化合物1可以呈浓度依赖性地抑制HSV‑1病毒的复制和mRNA的表达,具有较强的体外抗病毒作用。本发明充分利用巴戟天中药资源,变废为宝,具有开发成为新的抗病毒药物的潜力,可将化合物1作为研制新型抗病毒药物的先导化合物,开发为药物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种具有抗病毒活性的环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
单纯疱疹病毒I型(Herpes simple virus type I,HSV-1)是一种重要的人类致病原,感染后可在神经细胞间顺行或逆行传播,常引发不同程度的多种疾病,从轻度的皮肤感染到致命性的脑炎,反复发作给机体带来极大的疼痛与伤害。作为引起疱疹性脑炎的主要病原体,HSV-1也是致死性脑炎、脑膜炎中最常见的病原体,主要感染于中枢神经系统、口、唇、皮肤及粘膜。目前,临床上常用的抗HSV-1是阿昔洛韦、泛昔洛韦等核苷类药物,由于用药种类单一,此类药物多具有诱变性,长期服用出现耐药性,缺乏代替药物的患者往往承受极大的痛苦,寻找可用于临床的具有良好抗病毒活性和低毒性的新药显得愈发迫切。
中药巴戟天Morinda officinalis How中含有蒽醌类、糖类、环烯醚萜类等化合物,现有技术中虽然公开了某些环烯醚萜类化合物可以抗病毒,比如,中国发明专利CN104510747A公开了环烯醚萜苷化合物--京尼平-1-β-D龙胆双糖苷及其与其他成分配伍形成的组合物作为有效成分用于制备抗病毒药物,但是并非所有的环烯醚萜类化合物均有抗病毒的作用;目前关于利用巴戟天的提取物进行抗病毒的研究也比较少,关于巴戟天地上部分提取物的抗病毒研究更是少有,这严重限制了巴戟天地上部分利用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有巴戟天地上部分资源的研究和开发的不足,提供了一种具有抗病毒活性的环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用,该环烯醚萜类化合物从巴戟天地上部分获得,具有很好抗HSV-1病毒的效果,具有良好的抗病毒活性和医药用途。本发明不仅丰富了巴戟天植物的化学成分,为具有抗病毒活性的先导化合物的发现提供了思路,同时也为巴戟天地上部分资源的开发和利用提供了一定的参考依据。
本发明的目的在于提供一种环烯醚萜类化合物,该化合物具有抗病毒的活性。
本发明的目的还在于提供环烯醚萜类化合物的制备方法。
本发明的目的还在于提供所述的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐或混合物在制备抗病毒药物中的应用。
本发明的目的还在于提供一种具有抗病毒活性的药物。
本发明的上述目的通过以下技术手段实现:
本发明提供了一种环烯醚萜类化合物,其结构式如式(Ⅰ)所示:
(Ⅰ)。
优选地,所述环烯醚萜类化合物其结构式如式(II)所示:
(II)
结构式如式(II)所示的化合物为officinaloside C,即化合物1。
所述的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐或混合物在制备抗病毒药物中的应用,也在本发明的保护范围之内。
优选地,所述应用为以下一种或几种:
在制备用于预防、缓解或治疗疱疹病毒或其同源变异病毒所引起的疾病的药物中的应用;
在制备用于预防、缓解或治疗疱疹病毒或其同源变异病毒感染的药物中的应用;
在作为疱疹病毒抑制剂中的应用;
在制备用于抑制疱疹病毒感染细胞的复制或繁殖的药物或抑制疱疹病毒产生细胞病变效应的药物中的应用。
更优选地,所述疾病为单纯性疱疹病毒的皮肤或粘膜感染、带状疱疹病毒感染或细胞病变所致的视网膜炎、疱疹性脑炎、唇疱疹、生殖器疱疹、病毒性食管炎、病毒性角膜炎中的一种或多种。
更优选地,所述细胞为哺乳动物细胞、鱼类动物细胞、鸟类动物或两栖动物细胞。
更优选地,所述疱疹病毒为HSV-1。
更优选地,所述应用为以下一种或几种:
在制备用于预防、缓解或治疗HSV-1或其同源变异病毒所引起的疾病的药物中的应用;
在制备用于预防、缓解或治疗HSV-1或其同源变异病毒感染的药物中的应用;
在作为HSV-1抑制剂中的应用;
在制备用于抑制HSV-1感染细胞的复制或繁殖的药物中的应用;
在制备抑制HSV-1产生细胞病变效应的药物中的应用。
本发明还要求保护一种具有抗病毒活性的药物,包括所述的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐或混合物。
优选地,所述抗病毒活性的药物为抗HSV-1病毒活性的药物。
优选地,所述药物为固体制剂、半固体制剂或液体制剂。
进一步优选地,所述固体制剂为片剂、丸剂、冻干剂、胶囊、颗粒剂或冲剂;半固体制剂为乳剂或软膏剂;所述液体制剂为霜剂型、混悬剂、缓蚀剂、注射药剂或喷剂。
上述环烯醚萜类化合物的制备方法,包括如下步骤:
S1. 用体积分数为70~95%的乙醇水溶液浸提巴戟天药材,浸提后残余固体再回流提取,合并提取液并除去乙醇,得到总浸膏;
S2. 将步骤S1的总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,再分别除去萃取液中的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇,得到石油醚萃取物浸膏、乙酸乙酯萃取物浸膏和正丁醇萃取物浸膏;
S3. 将步骤S2的正丁醇萃取物浸膏经硅胶柱色谱分离,以二氯甲烷和甲醇混合液为洗脱液进行梯度洗脱,以二氯甲烷:甲醇体积比为20:1洗脱得到组分B;
S4. 将步骤S3的组分B经硅胶柱色谱分离,以石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱液进行梯度洗脱,以石油醚:乙酸乙酯体积比为10:1洗脱得到组成B3;然后将组分B3经ODS柱色谱分离,以甲醇和水混合液为洗脱液进行梯度洗脱,以甲醇:水体积比为6:4洗脱得到组分B3-4;将组分B3-4经硅胶柱色谱分离,以二氯甲烷:乙酸乙酯体积比为10:1混合液为洗脱剂进行洗脱,得化合物1,即环烯醚萜类化合物。
优选地,步骤S1所述巴戟天药材为巴戟天地上部分。
优选地,步骤S1所述乙醇水溶液的体积分数为80~95%。
更优选地,步骤S1所述乙醇水溶液的体积分数为95%。
优选地,步骤S1所述回流提取是在50~60℃进行。
更优选地,步骤S1所述回流提取是在60℃进行。
优选地,步骤S2所述萃取是将总浸膏用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。
优选地,二氯甲烷:甲醇体积比的梯度为20:0、20:1、10:1、5:1、3:1、0:1;石油醚:乙酸乙酯体积比的梯度为20:0、20:1、10:1、5:1;甲醇:水梯体积比的梯度为2:8、4:6、5:5、6:4、10:0。
优选地,所述步骤S3的硅胶柱为100~200目;步骤S4硅胶柱为300~400目。
相比现有技术,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明从巴戟天地上部分中首次提取制备了1个新的环烯醚萜类化合物-化合物1,通过HR-ESIMS、NMR、IR、UV等现代波谱学手段确证了其化学结构、理化性质,并命名为Officinaloside C。本发明新的环烯醚萜类化合物-化合物1具有抗HSV-1病毒活性,表现出了优良的抗病毒作用;化合物1可通过抑制HSV-1病毒的复制和基因的表达,从而发挥抗HSV-1病毒活性,且其抗病毒作用与化合物1呈浓度依赖性,具有较强的体外抗病毒作用。
(2)本发明的环烯醚萜类化合物来源于巴戟天地上部分,其制备方法简单、方便,可快速获得化合物1,不仅可以提高巴戟天的资源利用率,而且可以减轻因资源废弃产生的环境污染问题;可将化合物1作为研制新型抗病毒药物的先导化合物,开发为药物。
附图说明
图1为化合物1的1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 图谱。
图2为化合物1的13C-NMR (100 MHz, DMSO-d 6) 图谱。
图3为化合物1的DEPT135°(100 MHz, DMSO-d 6) 图谱。
图4为化合物1在DMSO-d 6溶剂中的1H-1H COSY图谱。
图5为化合物1在DMSO-d 6溶剂中的HSQC图谱。
图6为化合物1在DMSO-d 6溶剂中的HMBC图谱。
图7为化合物1在DMSO-d 6溶剂中的NOESY图谱。
图8为化合物1的HRESIMS质谱图。
图9为化合物1的IR红外光谱图。
图10为化合物1的关键1H-1H COSY,HMBC和NOSEY相关的示意图。
图11不同浓度化合物1下HSV-1感染Vero空斑情况。
图12不同浓度化合物1下HSV-1感染Vero的空斑抑制率。
图13 25 μM化合物1对HSV-1病毒立即早期(UL54)、早期(UL52)、晚期(UL27)基因表达变化的影响。
图14不同浓度化合物1下感染HSV-1绿色荧光蛋白荧光镜检图。
图15不同浓度化合物1下感染HSV-1绿色荧光蛋白的荧光强度。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
Bruker-Avance III 400型核磁共振谱仪(德国Bruker公司);AB Sciex TripleTOF 5600+型高分辨质谱仪 (美国AB Sciex公司);LC-20AT型半制备高效液相 (日本岛津公司);N-1100型旋转蒸发仪 (上海爱朗公司);SHZ-DIII型循环水多用真空泵 (上海亚荣生化公司);Sartorius电子分析天平 (精度 = 0.1 mg,瑞士Sartorius公司);CQ-200超声波清洗器 (功率250 W,频率80 kHz,上海音波声电科技公司);Sephadex LH-20葡聚糖凝胶(瑞士GE Healthcare公司);分析柱 YMC ODS-AQ (250 mm × 4.6 mm,5 μM,日本YMC公司);半制备柱YMC ODS-AQ (250 mm×10 mm,5 μM,日本YMC公司);100-200目、300-400目柱层析硅胶、200×200 mm,0.20-0.25 mm硅胶板GF254 (青岛海洋化工厂);生物安全柜(美国BIO-RAD公司);恒温CO2细胞培养箱 (德国Heraeus公司);多功能酶标仪 (美国BIO-RAD公司);倒置显微镜 (德国LEICA公司);DMEM 高糖培养基 (美国Gibco公司,批号:8120186);澳洲胎牛血清 (FBS,美国Gibco公司,批号:42Q5084K);磷酸盐缓冲液(PBS,碧云天生物技术公司);一氧化氮试剂盒 (碧云天生物技术公司);Cell Counting Kit-8 (美国GLP Bio公司);LPS O55:B5 (美国Sigma-Aldrich公司,批号039M4004V);常规试剂均为分析纯 (天津富宇精细化工);洁净工作台(苏州安泰空气技术有限公司);电热恒温水浴锅(上海博迅实业有限公司);普通PCR扩增仪、实时荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司);Trizol裂解液(天根生化科技);超微量分光光度计(德国IMPLEN公司);4℃冷冻离心机(德国Hettich公司);Cell Counting Kit-8 (批号 GK100013)(美国GLP Bio公司);SYBRGreenPro Taq HS预混型qPCR试剂盒Ⅱ (批号 AG11702)、Evo M-MLV 反转录试剂预混液(批号 AG11706)(湖南艾科瑞生物)。
实施例1 巴戟天中环烯醚萜类化合物的提取与分离
1. 实验材料
巴戟天地上部分(茎和叶)于2019 年7~8月份采集于广东省肇庆市德庆县巴戟天GAP种植基地,经广州中医药大学丁平研究员鉴定为茜草科巴戟天属植物巴戟天Morinda officinalis How 的地上部分的茎和叶,凭证标本 (20190731001) 存放于广州中医药大学中药资源教研室。
2. 实验方法和结果
巴戟天地上部分晾干后,取10.0 kg剪断,用95%乙醇常温浸提三次(10 L×3),每次七天,将提取后残渣在60℃再次用95%乙醇进行回流提取,以充分提取其中的有效成分。合并滤液并减压回收过滤至无醇味,到约410.1 g浸膏。将浸膏用1 L水混悬,混悬均匀后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,各三次,得到石油醚萃取物浸膏178.3 g,乙酸乙酯萃取物浸膏66.7 g,正丁醇萃取物浸膏65.9 g,水相萃取物浸膏156.9 g。
将正丁醇萃取物浸膏(65.9 g),经100~200目硅胶柱色谱分离,以二氯甲烷:甲醇体积比为20:0、20:1、10:1、5:1、3:1、0:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱,得到6个组分A~F;收集二氯甲烷:甲醇体积比为20:1的洗脱液并浓缩得组分B(857.0 mg),组分B经200~300目硅胶柱色谱分离,以石油醚:乙酸乙酯体积比为20:0、20:1、10:1、5:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱,得到4个组分B1~B4;收集石油醚:乙酸乙酯体积比为10:1的洗脱液浓缩得组分B3(536.0 mg),组分B3经ODS柱色谱分离,以甲醇:水体积比为2:8、4:6、5:5、6:4、10:0的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱,得到5个组分B3-1~B3-5;收集甲醇:水体积比为6:4的洗脱液浓缩得组分B3-4(26.0 mg),组分B3-4经过硅胶柱色谱分离,以二氯甲烷:乙酸乙酯体积比为10:1的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱,洗脱液浓缩得到化合物1(4.2 mg)。
实施例2 环烯醚萜类化合物的结构鉴定
利用Bruker-Avance III 400型核磁共振谱仪和AB Sciex Triple TOF 5600+型高分辨质谱仪等,通过HR-ESIMS、NMR、IR、UV等现代波谱学手段测定新化合物1的化学结构和理化性质,测定的结果如图1~9。
新化合物1为无色油状物,旋光度为[α]25 D - 11 (c 1.3, MeOH),紫外分光光度法测得其最大吸收波长为UV (MeOH) λmax 296 nm;从图9红外光谱图可知IR (KBr) νmax3384,2925,1722,1463,1183,1027 cm−1;从图8的HRESIMS质谱图可知,化合物1 的离子峰为m/z [M + Na] + 295.1381 (calcd for C14H22O5Na,293.1359);图1~图7关于化合物1在DMSO-d6溶剂中的1H谱和13C谱数据如表1所示:
表1 化合物1(DMSO-d6)的1H谱和13C谱数据
结合图8离子峰数据和图2的13C NMR图谱数据可判断化合物1的分子式为C14H22O5,不饱和度为4。根据图1~图4的1H NMR、13C-NMR、DEPT135°和1H-1H COSY和表1的数据可知,化合物1为包括1个酯羰基δ C 174.1 (C-11);1对双键质子δ C 128.9 (C-7),147.4 (C-8);4个连氧亚甲基δ C 619 (C-1),69.9 (C-3),60.8 (C-10),65.4 (C-12);1个连氧次甲基δ C 87.5(C-6);3个次甲基δ C 46.2 (C-4),47.4 (C-5),48.8 (C-9),化合物1的NMR数据可知其为典型的环烯醚萜类化合物,该结构与macedonine的结构十分相似。区别在于macedonine的C-11为羧基,羧基被取代后得到化合物1。正丁基的连接位置由图6HMBC谱中H2-12与C-11,H2-14与C-12,H2-15与C-13的相关以及图51H-1H COSY谱中H2-12,H2-13,H2-14和H3-15相关得到;在HMBC 谱中,H-4与 C-6,C-3和C-9相关,H-5与C-6,C-7和C-8相关,H-1,H-9和H-10与C-8相关,H-3,H-4和H2-12与C-11相关,依上所述化合物1的平面结构得以确认。该结构C-1位没有糖苷取代,而且3,4位上缺少双键,是十分罕见的环烯醚萜类结;
根据图7的NOESY谱可知,化合物1的大偶合常数J 5,6 (J = 6.4 Hz)以及J 5,9 (J =7.2 Hz)证实了H-5,H-9和H-6共平面,而H-4和H-5之间的小耦合常数J 4,5 (J = 2.8, 4.0Hz)表明它们不在相同平面,因此,确认化合物1的H-5、H-6和H-9为b构型,H-4为α构型,化合物1为没有报道过的化合物,命名为Officinaloside C。化合物1的关键1H-1H COSY,HMBC和NOSEY相关的示意图如图10。
实施例3 HSV-1病毒的培养
1. 将非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)在T75细胞培养瓶中生长成致密的单层,准备接种HSV-1病毒;培养瓶中细胞生长液为DMEM+10%胎牛血清(FBS)+1%双抗。
2. 吸弃T75细胞培养瓶的细胞生长液,加入PBS清洗一遍Vero细胞,接种浓度为10^7 TCID50/100uL HSV-1病毒1 mL,然后将培养瓶放入培养箱中使病毒吸附。培养2h后,加入10 mL细胞维持液,继续培养24 h;细胞维持液为DMEM+2%FBS+1%双抗。
3. 观察Vero细胞病变情况,当Vero细胞完全病变却又未脱落时将培养瓶转移到-80℃冰箱,反复冻融三次,使Vero细胞破碎释放HSV-1病毒,并于生物安全柜中分装HSV-1病毒,-80℃保存待用。
实施例4 HSV-1病毒滴度的测定
1. 实验方法
(1)将生长状态良好的Vero细胞悬液以1×106个/孔铺在96孔板中,每孔加入100μL细胞悬液,细胞培养至单层后,吸弃培养基,并用PBS洗涤一次。
(2)实验组细胞加入10-1~10-10梯度稀释的实施例3的HSV-1病毒液100 μL,对照组细胞只加培养基,将培养板置于培养箱中继续培养。
(3)每天记录病变的情况,当细胞病变情况不再改变后,统计每个病毒稀释浓度下细胞病变的培养孔的数目。
(4)用Reed-Muench公式计算病毒滴度LgTCID50=-[CPE>50%倍数]+[(>50%的百分数-50%)/(>50%的百分数-<50%的百分数)]×(-1)(CPE>50%倍数为稀释度的指数)。
2. 实验结果
最终选用病毒滴度为10^6.5 TCID50/100uL进行实验。
实施例5 环烯醚萜类化合物的抗病毒活性
1. 病毒HSV-1空斑减数实验
1.1 实验方法
(1)病毒覆盖液的配制:称取2.0 g的羧甲基纤维素钠粉末,置于烧杯中,加入200mL的PBS溶解,搅拌后灭菌,冷却后放入4℃冰箱。1%羧甲基纤维素钠溶液与2×DMEM培养基等体积混匀,加入胎牛血清至终浓度为2 %,加入双抗至终浓度为1 %,4℃保存。
(2)结晶紫染色液的配制:称取5.0 g结晶紫颗粒,将其研磨至粉末,于烧杯中加入100 mL的无水乙醇,搅拌使之溶解后过滤,得到5 %的结晶紫母液,室温避光保存。临用前吸取10 mL结晶紫母液,加入100 mL 4 %甲醛后充分混匀即得1 %结晶紫染色液工作液。
(3)将生长状态良好的Vero细胞以1×105个/孔的密度铺在24孔板中,置培养箱中培养,待细胞长至80%左右的密度时,弃培养液,PBS洗1遍,同时加入浓度为0、6.25、12.5、25和50 μM的化合物1与30 PFU/孔的HSV-1病毒稀释液各100 µL,化合物1用二甲基亚砜(DMSO)配成50 mM的母液然后用DMEM培养基稀释成需要的倍数;病毒对照组只加等体积的30 PFU/孔的HSV-1病毒稀释液,正常细胞对照组只加等体积DMEM培养基。
(4)将Vero细胞置于培养箱培养2 h,期间每隔15 min轻微摇晃24孔板,使病毒均匀吸附Vero细胞。病毒吸附2 h后,吸弃培养板中的病毒稀释液,沿孔壁缓慢加入1 mL覆盖液,培养中继续培养72 h,期间在显微镜下连续观察细胞是否产生空斑,直至空斑个数稳定。
(5)从培养箱中取出24孔板,吸弃覆盖液,沿孔壁加入PBS清洗,静置2 min后吸弃PBS,每孔加入300 μL 4 %多聚甲醛,固定15 min。吸弃多聚甲醛溶液,PBS清洗二遍,加入500 μL 1 %结晶紫染色30 min,回收结晶紫染色液,将24孔板用水冲洗,置于干燥处晾干。
(6)清点空斑数,计算空斑抑制率。病毒抑制率(%VI)的计算公式为:%VI = (病毒对照组平均空斑个数-药物处理组平均空斑个数)/病毒对照组平均空斑个数×100 %。
1.2 实验结果
不同浓度药物下空斑情况如图11所示,不同浓度药物下空斑抑制率如图12所示。
空斑试验是病毒学研究中的经典指标,可定量反应病毒的感染程度。从图11可以看出,没有药物干预的对照组中,空斑数目最多,随着给药浓度的增加,空斑的数目逐渐减少;从图12可以看出,与对照组相比,化合物1在浓度为6.25~50μM的范围内,病毒HSV-1空斑抑制率均明显下降;化合物1呈浓度依赖性的减少被病毒感染的空斑数,随着化合物1浓度的增加,空斑抑制率下降,在浓度为25 μM时空斑抑制率显著下降,说明化合物1具有显著的抗HSV-1病毒的活性。
2. HSV-1病毒DNA的提取与基因拷贝数的检测
2.1 实验方法
(1)将生长状态良好Vero细胞以2×105个/孔的密度铺在6孔板培养。
(2)待细胞贴壁后,吸弃培养基,用PBS润洗两遍后吸弃PBS,用细胞维持液配置化合物1药物稀释液,将DMSO溶解的50 μM的化合物1与HSV-1(感染复数MOI=0.2)等体积混合,即得25 μM化合物1的混合液;取500 mL混合液加入12孔板中,放培养箱中培养,每隔15 min轻轻摇晃。
(3)病毒感染后 2 h 后,吸弃培养基,PBS润洗两遍,加入500 mL 25 μM的化合物1,继续培养。分别在感染后 3 hpi./6 hpi./9 hpi.的时间点,将12孔板分别放入-80 ℃冰箱,反复冻融三次,收集上清,利用病毒DNA试剂盒提取病毒基因组。
(4)将提取完毕的病毒DNA用DEPC水稀释5倍,利用RT-qPCR检测HSV-1病毒感染后3 h对立即早期(UL54)、感染6 h后对早期(UL52)、感染9 h后对晚期(UL27)基因的表达。
2.2 实验结果
为了检测化合物1对感染病毒后不同时期代表基因表达的影响,分别于感染后 3h对UL54、感染6 h后对UL52、感染9 h后对UL27表达水平的变化进行检测。25 μM化合物1对HSV-1病毒立即早期(UL54)、早期(UL52)、晚期(UL27)基因表达变化的影响如图13所示,25μM下化合物1对不同时期的UL54、UL52和UL27基因的表达均具有显著性的抑制作用,说明化合物1可通过抑制病毒复制的全过程而发挥抗HSV-1病毒活性。
3. 荧光报告实验
3.1 实验方法
(1)将生长状态良好Vero细胞以2.5×105个/孔的密度铺在6孔板培养。
(2)待细胞贴壁后,加入HSV-1 (MOI=0.2)和感染HSV-1的绿色荧光蛋白,同时加入浓度为0、0.4、2、10、50 μM的化合物1。
(3)感染48 h后,利用荧光显微镜检测荧光信号值。
3.2 实验结果
不同浓度药物下荧光显微镜检测结果如图14,不同浓度药物下的荧光强度如图15。从图14和图15中可以看出,感染HSV-1病毒和绿色荧光蛋白(GFP)48 h后,在没有化合物1干预的情况下,即化合物1浓度为0 μM时,HSV-1的GFP荧光信号很强,且广泛分布在视野范围中;在浓度为0.4、2、10、50 μM的化合物1干预时,HSV-1的GFP荧光信号明显减弱,且荧光信号随着化合物1浓度的增加而降低,化合物1浓度为0.4 μM时,与对照组相比具有显著性差异,说明化合物1具有良好的抗HSV-1病毒的活性。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,对于本领域的普通技术人员来说,在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动,这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (5)
2.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述应用为:在制备用于预防、缓解或治疗HSV-1病毒所引起的疾病的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述应用,其特征在于,所述疾病为HSV-1病毒的皮肤或粘膜感染或细胞病变所致的视网膜炎、疱疹性脑炎、唇疱疹、生殖器疱疹、病毒性食管炎、病毒性角膜炎中的一种或多种。
4.根据权利要求1或2所述应用,其特征在于,所述应用为:在制备用于抑制HSV-1病毒感染细胞的复制或繁殖的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述应用,其特征在于,所述应用为:在制备抑制HSV-1病毒产生细胞病变效应的药物中的应用。
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