CN113855714A - 一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法和应用，该萃取物是通过以下方法制备得到的：取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35‑40Mpa、萃取温度35‑40℃、萃取时间2.5‑3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。本发明克服市场灵芝提取物功效的局限性，提供一种具有预防脑卒中的功效的灵芝子实体萃取物，该产品效果显著，增加了市场竞争力。

Description

一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法和应用。
背景技术
脑中风是一组以脑部缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病，又称脑卒中或脑血管意外，具有极高的病死率和致残率，主要分为出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)和缺血性脑中风(脑梗塞、脑血栓形成)两大类。脑中风发病急，病死率高，是世界上最重要的致死性疾病之一。高死亡率及逐年递增的防治费用成为危害人民健康最为严重的疾病之一，给社会、家庭造成巨大的经济负担和精神压力，已成为严重影响国计民生的重要公共卫生问题。因此，研究有效治疗药物对社会意义重大。
灵芝孢子、菌丝体和子实体是其生长的不同阶段，孢子似植物的种子，种子萌发后长出菌丝，而子实体则是灵芝的果实，也可称为担子果。从《神农本草经》到《中华人民共和国药典》所叙述的灵芝均是指灵芝子实体。
灵芝是非常名贵的药材，常常用来进补身体，起到保健的作用。灵芝作为药用已经有两千多年的历史，除了日常保健以外，医学研究上也在深入研究，灵芝能否在癌症领域有很好地疗效。所谓灵芝提取物，就是在适当的时候采摘成熟的新鲜子实体，通过一些加工手段，例如热水浸泡或者酒精提取等等工艺提取的灵芝精华，这就是灵芝提取物。一般说来，灵芝提取物就被称之为灵芝精粉。虽然两者都是通过摘取灵芝的精华进补身体，但是两者还是有一定的区别。灵芝提取物是选取了灵芝后，经过固态发酵来提取精华成分，而灵芝精华则是干燥后粉碎而成。两者都可以说是灵芝提取物，只是提取的方式和形态不一样而已。日常生活中我们常说的灵芝保健品，其实就是灵芝提取物，只有进行了提取精华后，灵芝的营养成分才能够被吸收。
本发明的目的是探索一种有效预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法，是具有显著的意义的。
发明内容
本发明的目的是克服上述不足之处提供一种有效预防脑卒中的灵芝子实体萃取物及其制备方法，尽可能的提高三萜含量。
本发明的另一目的是提供该萃取物在制备预防脑卒中的药物中的应用。
本发明的目的具体是通过以下方式实现的：
一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物，该萃取物是通过以下方法制备得到的：取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35-40Mpa、萃取温度35-40℃、萃取时间2.5-3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。
优选取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35MPa、萃取温度40℃、萃取时间3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体比例为6∶1(mL/g)。
优选上述灵芝子实体粒度10目。
优选所述的夹带剂为95％乙醇。
上述预防脑卒中的灵芝子实体萃取物的制备方法包括以下步骤：取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35-40Mpa、萃取温度35-40℃、萃取时间2.5-3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。
本发明采用超临界CO2(SFE-CO2)技术萃取灵芝(Ganoderma lucidum)子实体中的三萜成分，通过单因素试验确定最佳条件，具体如下：
1、萃取温度的考察
将灵芝子实体粉碎后过10目筛，取100g置于萃取釜中，设定压力25Mpa、CO2流量35g/min、夹带剂(95％乙醇)500mL，时间1.5h，选取10个不同梯度的温度(32℃、34℃、36℃、38℃、40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃)进行考察，萃取完成后，将萃取液于60℃减压蒸馏得灵芝子实体粗提物，60℃烘箱干燥，称量浸膏，计算粗提物的萃取率。精密称取SFE-CO2粗提物0.03g于25mL的容量瓶中，加入乙醇溶解、定容，摇匀得待测液，以齐敦果酸为标品，用香草醛－冰醋酸法测定总三萜的含量，计算总三萜的萃取率和萃取物中的三萜含量。
萃取物中三萜的含量＝总三萜的量/粗提物的重量×100％
本考察实验下，萃取温度40℃时，三萜含量最高。
2、萃取压力的考察
将灵芝子实体粉碎后过10目筛，取100g置于萃取釜中，设定温度40℃、CO2流量35g/min、夹带剂(95％乙醇)500mL，时间1.5h，选取8个不同梯度的压力(20MPa、25MPa、30MPa、35MPa、40MPa、45MPa、50MPa、55MPa)进行考察，同上实验计算三萜含量，以三萜含量为指标得出最优的萃取压力。
本考察实验下，萃取温度40℃，萃取压力35MPa时，灵芝三萜含量最高。
3、萃取时间的考察
将灵芝子实体粉碎后过10目筛，取100g置于萃取釜中，设定温度40℃、CO2流量35g/min、夹带剂(95％乙醇)500mL，压力35Mpa，选取8个不同梯度的时间(1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h)进行考察，同上实验计算三萜含量，以三萜含量为指标得出最优的萃取时间。
本考察实验下，萃取温度40℃，萃取压力35MPa，萃取时间3h时，三萜含量最高。
4、结果
试验表明，超临界CO2萃取灵芝子实体的最佳艺条件是：萃取釜温度40℃，萃取釜压力35MPa，萃取时间3h，在此条件下的灵芝三萜含量可达40.5％。
上述含灵芝子实体萃取物在制备预防脑卒中的药物中的应用。所述的脑卒中可以为缺血性脑卒中。
本发明所述的灵芝子实体萃取物可在制备大鼠脑缺血损伤保护的药物中应用。
本发明所述的灵芝子实体萃取物可在制备延长出血时间和凝血时间的药物中应用。
与现有技术比较本发明的有益效果：
本发明克服市场灵芝提取物功效的局限性，提供一种具有预防脑卒中的功效的灵芝子实体萃取物，该产品显著增加了市场竞争力。
附图说明
图1为2h给药局灶性脑缺血(MCAO)/再灌注大鼠脑TTC染色代表图(n＝8)
图2为3h给药局灶性脑缺血(MCAO)/再灌注大鼠脑TTC染色代表图(n＝8)
具体实施方式
以下通过具体实验对本发明进行解释说明：
实施例1
取灵芝子实体，粉碎至粒度10目，采用超临界CO2(SFE-CO2)技术萃取：夹带剂95％乙醇、萃取压力35Mpa、萃取温度40℃、萃取时间3h、CO2流量35g/min、夹带剂体积：灵芝子实体重量为6∶1(mL/g)。
实施例2
取灵芝子实体，粉碎至粒度10目，采用超临界CO2(SFE-CO2)技术萃取：夹带剂95％乙醇、萃取压力40Mpa、萃取温度35℃、萃取时间2h、CO2流量35g/min、夹带剂体积：灵芝子实体重为6∶1(mL/g)。
检测实施例1，实施例2，灵芝子实体中灵芝三萜含量，结果如下表1：
表1
组别 实施例1 实施例2 灵芝子实体
灵芝三萜含量(％) 40.5 35.8 5.5
本发明克服市场灵芝提取物功效的局限性，提供一种具有预防脑卒中的功效的灵芝子实体萃取物，增加了市场的竞争力。现经过上述实验，我们优先选择含三萜含量高的实例1方案进行功效的验证。
试验例1
1、实验目的
研究灵芝中三萜类化合物子实体萃取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的治疗作用及抗凝血作用，为子实体萃取物的进一步开发提供实验依据。
2、实验材料
2.1受试药物
实施例1灵芝子实体萃取物：按照实施例1方法制备得到，褐色泥状固体。药物配制：临用前用玉米油配成所需浓度的均匀混悬液。
2.2阳性药
氯吡格雷：性状：白色固体；批号：20191203。药物配置：临用前0.5％CMC-Na配成所需浓度的均匀混悬液。
2.3动物
SD大鼠，SPF级，雄性，由上浙江省杭州医学院提供，生产许可证号:SCXK(浙)2019-0002，合格证编号：20201010Aazz0100000536；
ICR小鼠，SPF级，雌雄各半，由浙江省杭州医学院提供，生产许可证号:SCXK(浙)2019-0002，合格证编号：20200922Abzz0100000176，20200922Abzz0100000485；
饲料：颗粒饲料，由中国药科大学动物室供给；饲养条件：空调房间，温度18-24℃，相对湿度70％。
2.4试剂
0.9％氯化钠注射液：安徽双鹤药业有限责任公司产品，批号：1808061V。
水合氯醛：上海凌峰化学试剂有限公司产品，批号：20180514，药物配制：临用前用0.9％氯化钠注射液溶解配制成浓度为3％的澄清溶液。
2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)：BioLINK公司，批号：1210Y19。配制方法：临用前用PBS缓冲液配制成浓度为1％的溶液。
羧甲基纤维素钠(CMC-Na)：国药集团化学试剂有限公司，批号：20180412，0.5％CMC-Na的配制：将2.5gCMC-Na均匀撒在500mL的超纯水表面，室温下放置过夜，摇匀后使用。
药用级玉米油：aladdin，批号：H1912097。
2.5仪器
GZX-9140MBE数显干燥箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品。
BS224s型电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司产品。
HH-4数显恒温水浴锅：国华电器有限公司产品。
BCD-254CKK25V61TI-20℃冰箱：德国SIEMENS公司产品。
3、研究方法与结果
3.1.灵芝中三萜类化合物于MCAO再灌后2h给药对大鼠脑缺血损伤的保护作用
3.1.1脑缺血再灌注模型建立
取雄性SD大鼠36只(实际需要72只，因为成模率为50％左右)，体重250-300g，按体重随机分为6组，每组6只，分为子实体萃取物高剂量组(20mg/kg)，中剂量组(10mg/kg)，低剂量组(5mg/kg)三个剂量组，阳性对照氯吡格雷组7.5mg/kg，假手术组及缺血模型对照组(均给以等容积的生理盐水)。MCAO再灌后2h开始给药，每日灌胃给药一次,连续给药7天，给药容积为0.2ml/100g体重。
大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型：造模手术前24h禁食不禁水。参考Longa等人的方法，采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型：大鼠用3％水合三氯乙醛(300mg/kg)腹腔注射(i.p)麻醉，仰卧手术台上，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，向外牵引二腹肌及胸锁乳突肌，由颈总动脉分叉处向头端依次游离，结扎并剪断颈外动脉的分支：枕骨下动脉和甲状腺上动脉。在颈外动脉远端结扎，切断颈外动脉使其主干游离备用。然后分离颈内动脉，用丝线在颈外动脉根部打一松扣，夹闭颈总动脉和颈内动脉。将渔线(长40mm，直径0.26mm)经颈外动脉主干切口，缓慢向颈内动脉入颅方向推进，当渔线进入颈内动脉后松开颈内动脉上的动脉夹。以颈总动脉分叉处为标记，推进18mm左右时感到阻力，即达到了较细的大脑前动脉内，阻断了MCA的所有血供来源，扎紧颈外动脉根部松扣。缺血后2h，拔出尼龙线，扎紧动脉残端。缝合皮肤，完成MCAO导致局灶性脑缺血-再灌模型。假手术组大鼠麻醉后，仅暴露颈内外动脉分叉，不闭塞MCA。渔线的制备：将一长40mm，直径0.26mm的渔线的一端用记号笔标记，在距离此标记端18mm处用记号笔再做一标记，置于生理盐水中备用。
3.1.2、检测指标
(1)神经功能评分：
MCAO/R后第二天、第四天及末次给药后0.5h，按Bederson的方法对动物的神经功能缺陷进行分级评分，标准如下：
0分：未观察到神经症状；
1分：提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲，肩内旋，肘外展，紧贴胸壁；
2分：将动物置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动时，阻力降低；
3分：动物自由行走时向手术对侧环转或转圈；
4分；软瘫，肢体无自发活动；
(2)脑梗塞率和含水量测定：
上述指标测定后，脱颈椎处死大鼠，取出全脑称重。在视交叉及其前后各2mm处，做冠状切四刀，切成五片后迅速将脑片置5ml含有1％TTC的磷酸缓冲溶液中，避光温孵30分钟，在温孵过程中每隔7～8分钟翻动一次，温孵30分钟后取出脑片，用数码相机拍照，之后用眼科镊分离苍白区(梗塞区)和非苍白区(正常区)，计算梗塞百分比如下：
梗塞百分比(％)＝苍白区重量/(苍白区重量+非苍白区重量)×100％
将染色后的脑组织置于110℃烘箱烘干，对照大脑湿重求出脑含水量如下：
脑组织含水量(％)＝(1-脑组织干重/脑组织湿重)×100％
数据统计所用软件为SPSS 22.0，多组间比较方差齐性时采用单因素方差分析进行数据统计，两两比较，采用ANOVA检验；两组间比较采用t检验。P﹤0.05表示有统计学意义。
结果表明，MCAO/R后第2、4、7天时，模型组大鼠均有较高的神经行为学评分，说明模型组的大鼠神经功能缺陷严重。与模型组相比，子实体萃取物高剂量组(20mg/kg)和中剂量组(20mg/kg)均能显著降低脑缺血大鼠的神经功能评分，低剂量组(10mg/kg)仅在第二天表现出神经功能改善的作用(P<0.05)；与空白组相比，模型组大鼠脑梗死面积和脑含水量均显著升高(P<0.01)，与模型组相比，子实体萃取物三个剂量组均能显著降低脑梗死面积和含水量(P<0.01，P<0.05)，且整体效果与阳性药氯吡格雷相似。结果见图1、表2-3。
表2灵芝中三萜类化合物于MCAO再灌后2h给药对大鼠神经行为学的影响(mean±S.D.，n＝6)
Figure BDA0003311246030000081
*P<0.05；**P<0.01，与模型对照组比较
表3子实体萃取物于MCAO再灌后2h给药对大鼠脑梗死率及脑含水量的影响(mean±S.D.，n＝6)
Figure BDA0003311246030000082
Figure BDA0003311246030000091
##P<0.01，与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与模型对照组比较
3.2.灵芝中三萜类化合物于MCAO再灌后3h给药对大鼠脑缺血损伤的保护作用
3.2.1脑缺血再灌注模型建立
取雄性SD大鼠36只(实际需要72只，因为成模率为50％左右)，体重250-300g，按体重随机分为6组，每组6只，分别为子实体萃取物高剂量组(20mg/kg)，中剂量组(10mg/kg)，低剂量组(5mg/kg)三个剂量组，阳性对照氯吡格雷组7.5mg/kg，假手术组及缺血模型对照组(均给以等容积的生理盐水)。MCAO再灌后2h开始给药，每日灌胃给药一次,连续给药7天，给药容积为0.2ml/100g体重。
大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型：造模手术前24h禁食不禁水。参考Longa等人的方法，采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型：大鼠用3％水合三氯乙醛(300mg/kg)腹腔注射(i.p)麻醉，仰卧手术台上，颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，向外牵引二腹肌及胸锁乳突肌，由颈总动脉分叉处向头端依次游离，结扎并剪断颈外动脉的分支：枕骨下动脉和甲状腺上动脉。在颈外动脉远端结扎，切断颈外动脉使其主干游离备用。然后分离颈内动脉，用丝线在颈外动脉根部打一松扣，夹闭颈总动脉和颈内动脉。将渔线(长40mm，直径0.26mm)经颈外动脉主干切口，缓慢向颈内动脉入颅方向推进，当渔线进入颈内动脉后松开颈内动脉上的动脉夹。以颈总动脉分叉处为标记，推进18mm左右时感到阻力，即达到了较细的大脑前动脉内，阻断了MCA的所有血供来源，扎紧颈外动脉根部松扣。缺血后2h，拔出尼龙线，扎紧动脉残端。缝合皮肤，完成MCAO导致局灶性脑缺血-再灌模型。假手术组大鼠麻醉后，仅暴露颈内外动脉分叉，不闭塞MCA。渔线的制备：将一长40mm，直径0.26mm的渔线的一端用记号笔标记，在距离此标记端18mm处用记号笔再做一标记，置于生理盐水中备用。
3.2.2、检测指标
(1)神经功能评分：
MCAO/R后第二天、第四天及末次给药后0.5h，按Bederson的方法对动物的神经功能缺陷进行分级评分，标准如下：
0分：未观察到神经症状；
1分：提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲，肩内旋，肘外展，紧贴胸壁；
2分：将动物置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动时，阻力降低；
3分：动物自由行走时向手术对侧环转或转圈；
4分；软瘫，肢体无自发活动；
(2)脑梗塞率和含水量测定：
上述指标测定后，脱颈椎处死大鼠，取出全脑称重。在视交叉及其前后各2mm处，做冠状切四刀，切成五片后迅速将脑片置5ml含有1％TTC的磷酸缓冲溶液中，避光温孵30分钟，在温孵过程中每隔7～8分钟翻动一次，温孵30分钟后取出脑片，用数码相机拍照，之后用眼科镊分离苍白区(梗塞区)和非苍白区(正常区)，计算梗塞百分比如下：
梗塞百分比(％)＝苍白区重量/(苍白区重量+非苍白区重量)×100％
将染色后的脑组织置于110℃烘箱烘干，对照大脑湿重求出脑含水量如下：
脑组织含水量(％)＝(1-脑组织干重/脑组织湿重)×100％
数据统计所用软件为SPSS 22.0，多组间比较方差齐性时采用单因素方差分析进行数据统计，两两比较，采用ANOVA检验；两组间比较采用t检验。P﹤0.05表示有统计学意义。
结果表明，MCAO/R后第2、4、7天时，模型组大鼠均有较高的神经行为学评分，说明模型组的大鼠神经功能缺陷严重。与模型组相比，子实体萃取物高剂量组(20mg/kg)(P<0.01)能显著降低脑缺血大鼠的神经功能评分，中剂量组(10mg/kg)(P<0.05)和低剂量组(5mg/kg)(P<0.05)只在第二天表现出改善行为学功能的作用；与空白组相比，模型组大鼠脑梗死面积和脑含水量均显著升高(P<0.01)，与模型组相比，子实体萃取物三个剂量组均能显著降低脑梗死面积和含水量(P<0.01，P<0.05)，且整体效果与阳性药氯吡格雷相似。结果见图2、表4-5。
表4灵芝中三萜类化合物于MCAO再灌后3h给药对大鼠神经行为学的影响(mean±S.D.，n＝6)
Figure BDA0003311246030000111
*P<0.05；**P<0.01，与模型对照组比较
表5子实体萃取物于MCAO再灌后3h给药对大鼠脑梗死率及脑含水量的影响(mean±S.D.，n＝6)
Figure BDA0003311246030000112
Figure BDA0003311246030000121
##P<0.01，与空白对照组比较；*P<0.05，**P<0.01，与模型对照组比较
3.3子实体萃取物对小鼠出血时间和凝血时间的影响
采用断尾法检测受试药对小鼠出血时间的影响：取健康清洁级ICR小鼠50只,体重18～22g，按体重随机分为5组，每组10只，分别为子实体萃取物高剂量组(40mg/kg)，中剂量组(20mg/kg)，低剂量组(10mg/kg)三个剂量组，阳性对照氯吡格雷组15mg/kg和空白组(给以等容积的生理盐水)。每天灌胃给药一次，连续给药7天，给药容积为0.2ml/10g体重。末次给药后30min，将其尾部垂直,用毫米尺测量,并在距尾尖5mm处作标记,然后用手术刀片在鼠尾标记处垂直切断,待血液自行溢出开始计时,每隔30s用滤纸吸去血滴1次,直至血液自然停止(滤纸吸时无血为止),即为出血时间，用记录出血时间。将结果进行组间t检验比较。
采用玻片法检测受试药对小鼠凝血时间的影响：动物分组、给药剂量及给药方式同出血时间测定实验。末次给药后30min,以内径为1mm的玻璃毛细管插入小鼠眼眶内，使血自动流出，弃去第一滴血，再分别滴血于清洁载玻片的两端,血滴直径为5～10mm，立即开始计时,此后每隔10s用干燥针头挑动血液1次,至针头能挑起纤维蛋白丝为止，即为凝血时间，用秒表记录凝血时间。将结果进行组间t检验比较。
注：在给药期间观察小鼠的行为学是否存在异常。
结果表明，子实体萃取物给药7天内，小鼠未出异常的行为学变化，和空白组相比。子实体萃取物高剂量组(40mg/kg)对小鼠出血时间(P﹤0.01)和凝血时间有显著的延长作用(P﹤0.05)；子实体萃取物中剂量组(20mg/kg)对小鼠凝血时间也有显著的延长作用(P﹤0.05)；阳性药氯吡格雷对小鼠出血时间和凝血时间也有显著的延长作用(P﹤0.01)，结果见表6。
表6子实体萃取物对小鼠出血时间和凝血时间的影响(mean±S.D.，n＝10)
Figure BDA0003311246030000131
*P<0.05，**P<0.01，与空白组比较
4小结
1)MCAO/R后第2、4、7天时，模型组大鼠均有较高的神经行为学评分，说明模型组的大鼠神经功能缺陷严重；与模型组相比，子实体萃取物在MCAO/R造模后2h或3h灌胃给药，子实体萃取物高剂量组(1ml/kg)和中剂量组(20mg/kg)均能显著降低脑缺血大鼠的神经功能评分；
2)与空白组相比，模型组大鼠脑梗死面积和脑含水量均显著升高(P<0.01)，说明脑缺血再灌注模型建立成功；与模型组相比，子实体萃取物在MCAO/R造模后2h或3h灌胃给药，三个剂量组均能显著降低脑梗死面积和含水量(P<0.01)，且整体效果与阳性药氯吡格雷相似；
3)子实体萃取物给药7天期间，小鼠没有出血行为学一场；与空白对照组小鼠比较，子实体萃取物高剂量组(1ml/kg)对小鼠出血时间(P﹤0.01)和凝血时间有显著的延长作用(P﹤0.05)；子实体萃取物中剂量组(20mg/kg)对小鼠出血时间和凝血时间也有显著的延长作用(P﹤0.05)；阳性药氯吡格雷对小鼠出血时间和凝血时间也有显著的延长作用(P﹤0.01)；
本次实验结果表明，MCAO/R后子实体萃取物灌胃给药7天，显著降低脑缺血再灌注大鼠的脑梗死面积和脑含水量，并改善行为学变化，并且在脑缺血再灌注后2h或3h给药均表现出与阳性药氯吡格雷相似的治疗效果；子实体萃取物灌胃给药7天期间，小鼠的行为学没有出现异常，并且子实体萃取物高剂量组(40mg/kg)能延长小鼠出血时间和凝血时间。

Claims (9)

1.一种预防脑卒中的灵芝子实体萃取物，其特征在于该萃取物是通过以下方法制备得到的：取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35-40Mpa、萃取温度35-40℃、萃取时间2.5-3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。
2.根据权利要求1所述的预防脑卒中的灵芝子实体萃取物，其特征在于取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35Mpa、萃取温度40℃、萃取时间3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。
3.根据权利要求1或2所述的灵芝子实体萃取物，其特征在于灵芝子实体粒度10目。
4.根据权利要求1或2所述的灵芝子实体萃取物，其特征在于所述的夹带剂为95％乙醇。
5.一种权利要求1所述的灵芝子实体萃取物的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：取灵芝子实体颗粒，采用超临界CO2萃取，萃取压力35-40Mpa、萃取温度35-40℃、萃取时间2.5-3h、CO2流量35g/min，夹带剂的体积与灵芝子实体重量比例为6∶1mL/g。
6.权利要求1所述的灵芝子实体萃取物在制备预防脑卒中的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述的脑卒中为缺血性脑卒中。
8.权利要求1所述的灵芝子实体萃取物在制备大鼠脑缺血损伤保护的药物中的应用。
9.权利要求1所述的灵芝子实体萃取物在制备延长出血时间和凝血时间的药物中的应用。
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