CN113848321A - 一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 - Google Patents
一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113848321A CN113848321A CN202111131460.4A CN202111131460A CN113848321A CN 113848321 A CN113848321 A CN 113848321A CN 202111131460 A CN202111131460 A CN 202111131460A CN 113848321 A CN113848321 A CN 113848321A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pancreatin
- tpck
- antibody
- influenza vaccine
- washing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 title claims abstract description 82
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 25
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 19
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 15
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N N-tosyl-L-phenylalanyl chloromethyl ketone Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(=O)CCl)CC1=CC=CC=C1 MQUQNUAYKLCRME-INIZCTEOSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 9
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 8
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 6
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 5
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 5
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004907 flux Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 8
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 4
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 4
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 4
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 4
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 208000022120 Jeavons syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- -1 pH 2.5-3.0 Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M sodium bicarbonate Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L sodium carbonate Substances [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/581—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/994—Pancreatin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及一种流感疫苗TPCK‑胰酶残量检测试剂盒。所述试剂盒包括包被TPCK‑胰酶抗体的酶标板和HRP‑TPCK‑胰酶抗体，所述抗体使用TPCK‑胰酶免疫家兔获取抗血清经纯化所得。本发明具有定量、线性范围大、灵敏度高、特异性强、准确度高、重复性好、耐用性好、高通量等优点，可快速对MDCK细胞基质流感疫苗中的TPCK‑胰酶残量进行定量，为流感疫苗生产提供一种质控方法。
Description
技术领域
本发明属于医疗器械技术领域，具体的，涉及一种流感疫苗TPCK-胰酶残量检测试剂盒。
背景技术
流感病毒在世界范围内引起大流行和季节性流行病，接种疫苗仍然是预防流感和降低相关死亡率的主要措施。流感感染常伴有细菌感染，可导致流感相关肺炎，据估计全球每年有5％～15％的人口发生上呼吸道感染，并造成25万～50万死亡病例。目前，大多数季节性流感疫苗是在鸡胚中生产的，基于鸡胚生产的流感疫苗最大的缺陷是在流感大流行时不能立即、迅速、大规模生产所需的疫苗。鸡胚的供应也可能是不确定的，并面临着禽流感在产蛋鸡群中传播的风险。1995年，WHO建议开发替代基于鸡胚的流感病毒培养体系，特别推荐的是基于哺乳动物细胞培养体系。2007年6月，欧洲药品管理局(EMEA)批准了诺华疫苗公司生产的一种由Madin Darby犬肾细胞(MDCK)培养的流感疫苗
基于细胞基质的流感疫苗有许多好处：不需要长时间的鸡胚生产系统，更涉及闭路循环生物反应器的生产过程控制，降低微生物污染的风险，避免了鸡胚传代中流感病毒的抗原变化，同时也为对鸡胚过敏人群提供了一个替代选项。
血凝素(hemagglutinin，HA)是流感病毒的主要糖蛋白，HA必须在蛋白酶水解作用下裂解精氨酸而活化为由二硫键连接的HA1和HA2后，才能形成病毒的感染性(HA1是病毒与红细胞、宿主细胞受体唾液酸连接的部位，病毒吸附与感染有关，HA2具有膜融合活性，参与病毒包膜与细胞膜融合并释放核衣壳的过程)。但是流感病毒HA不能被宿主细胞内的蛋白酶裂解，因此在病毒培养时需要添加适量外源性胰蛋白酶，即TPCK-胰酶。
TPCK-胰酶是蛋白质肽段分析重要的工具，能够专一性地切割蛋白质分子中精氨酸和赖氨酸位点。在病毒培养液中加入适量TPCK-胰酶的目的是为了提高流感病毒在MDCK细胞中的复制能力。TPCK-胰酶对各亚型流感病毒的增值均有提高作用，在进行流感病毒细胞培养中，需要加入适量的TPCK-胰酶。TPCK-胰酶虽然有助于基于MDCK细胞基质流感疫苗的生产，但始终为疫苗外来物质(非疫苗有效成分)，其安全性有待进一步研究。目前《中国药典》(2020年版)因为没有MDCK细胞基质的流感疫苗，亦无TPCK胰酶相关规范。长远来看，建立TPCK-胰酶残留量检测方法对MDCK基质流感疫苗的生产以及质量控制具有重要意义。
发明内容
本发明首先涉及一种检测流感疫苗中TPCK-胰酶残量的检测试剂，所述的检测试剂为多克隆抗体，所述的流感疫苗为采用MDCK细胞基质生产的流感疫苗；
所述的多克隆抗体的制备方法为：由TPCK胰酶免疫家兔后获取的抗血清，再经Protein A/G亲和层析法纯化；
(1)所述的TPCK胰酶为采用MDCK细胞基质生产流感疫苗时使用的胰酶；
(2)所述的免疫家兔后获取的抗血清的步骤为：
初次免疫使用300μg TPCK-胰酶并按体积1：1加入弗氏完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫；
然后每间隔1周，使用400μg TPCK-胰酶，并按体积1：1加入弗氏不完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫，免疫4次；
最后一次免疫后10天颈动脉采血，将获取的兔全血在37℃环境放置2h后，25℃2500rpm离心15min，吸取上层血清；
(3)所述的Protein A/G亲和层析法的步骤为：
选择血清效价最高的抗血清(效价为64000)，滤纸过滤去除脂质；
使用结合/洗涤缓冲液(0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 8.0)对血清进行1：1稀释；
用5倍体积的结合/洗涤缓冲液平衡Protein A/G亲和层，缓慢流速将稀释后血清注入柱内，待柱内液体完全流出；
使用15倍柱体积的结合/洗涤缓冲液洗脱非特异性吸附的干扰抗体，待柱内液体完全流出；
用5倍体积的洗脱缓冲液(0.1M柠檬酸pH2.5～3.0)洗脱抗体，收集流出液，即目的抗体组分。
本发明还涉及使用所述的TPCK-胰酶残量检测试剂制备的ELISA双抗夹心检测试剂盒，所述的试剂盒包括：
(1)捕获抗体：前述方法制备获得的多克隆抗体；
(2)标记抗体：用过碘酸钠法对前述方法制备的多克隆抗体进行HRP标记，制备得到的HRP-TPCK-胰酶抗体；
(3)必要的对照品和试剂。
优选的，所述捕获抗体的包被量为8μg/mL。
优选的，所述标记抗体的稀释度为1：800。
优选的，所述的试剂包括：
封闭液为含有5％BSA的10mM pH 7.2的PBS；
洗涤液为含有0.01％Tween-20的10mM pH 7.2的PBS；
稀释液为含有1％BSA的洗涤液；
终止液为2M H2SO4。
本发明还涉及使用所述的ELISA双抗夹心检测试剂盒检测流感疫苗中TPCK-胰酶残量的方法，所述的方法包括如下步骤：
(1)使用pH 9.6的包被液将TPCK-胰酶抗体稀释为8μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜；
(2)洗板2～4次后加入封闭液，每孔200μL，37℃反应1h；
(3)洗板2～4次后加入待试品，每孔100μL，37℃反应1h；
(5)洗板2～4次后加入显色液，每孔50μL，室温避光反应10～30min；
(6)加入终止液，每孔50μL，轻微振荡混匀，使用酶标仪测定OD450值；
(7)将测得待试品的OD450值代入标准曲线方程计算出TPCK-胰酶浓度。
所述的流感疫苗为采用MDCK细胞基质生产的流感疫苗。
本发明的有益效果在于，
本发明利用ELISA双抗体夹心法对流感疫苗中的TPCK-胰酶残量定量检测，本发明具有定量准、线性范围大、灵敏度高、特异性强、准确度高、重复性好、高通量等优点，可快速对流感疫苗以及其上游各阶段工艺样品中的TPCK-胰酶残量进行定量，为流感疫苗生产提供了一种质控方法。
附图说明
图1、TPCK胰酶和纯化后TPCK胰酶抗体SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝染色结果；
图2、TPCK胰酶免疫印迹结果；
图3、BCA法测定TPCK-胰酶和TPCK-胰酶抗体浓度的标准曲线；
图4、ELISA双抗体夹心法标准曲线。
具体实施方式
主要试剂耗材与仪器
结合/洗涤缓冲液：0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 8.0；
洗脱缓冲液：0.1M柠檬酸pH2.5～3.0；
TPCK-胰酶为我司生产用胰酶(购自美国Sigma-Aldrich公司，货号：4370285)。
检测样品与实验动物
检测样品包括：
(1)MDCK细胞基质四价流感裂解疫苗成品及各单价上游工艺过程样品(病毒收获液、超滤透洗液和原液)由武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究二室提供；
(2)鸡胚基质四价流感裂解疫苗由武汉生物制品研究所流感疫苗室提供；
(3)清洁级家兔由武汉生物制品研究所动物房提供。
ELISA相关溶液配制
PBS(pH 7.2～7.4)：137mM NaCl、2.7mM KCl、10mM Na2HPO4、2mM KH2PO4，超纯水配制；
包被液(pH 9.6)：1.59g Na2CO3和2.93gNaHCO3溶于超纯水中，调节pH至9.6，4℃保存；
封闭液：含有5％BSA的PBS；
洗涤液：含有0.01％Tween-20的PBS；
稀释液：含有1％BSA的洗涤液；
显色液：显色底物A液与显色底物B液等体积混合，避光，现配现用；
终止液：2M H2SO4。
抗体纯化相关溶液配制
结合/洗涤缓冲液：0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 8.0，超纯水配制；
洗脱缓冲液：0.1M柠檬酸，pH 2.5～3.0，超纯水配制。
以下以具体实施条件对本发明进一步说明。
实施例1、TPCK-胰酶抗体制备
1)免疫家兔
使用TPCK-胰酶(美国Sigma-Aldrich公司，货号：4370285)免疫家兔，免疫之前耳缘动脉采集免前血清备用，共免疫6只家兔，初次免疫使用300μg TPCK-胰酶并按体积1：1加入弗氏完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫，然后每间隔1周，使用400μg TPCK-胰酶，并按体积1：1加入弗氏不完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫，免疫4次，最后一次免疫后10天颈动脉采血。
2)分离血清
将获取的兔全血在37℃环境放置2h后，25℃2500rap离心15min，吸取上层血清，-80℃保存备用。
3)血清效价测定
采用ELISA间接法测定血清效价，将TPCK-胰酶使用包被液稀释为10μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜。拍干，每孔200μL封闭液，37℃封闭1h。洗涤2次，拍干，依次加入1：1000～1：128000倍比稀释的抗血清以及1：1000稀释的免前血清，每孔100μL，37℃温育1h。洗涤3次，拍干，加入1：8000的HRP-兔抗羊IgG，每孔100μL，37℃温育1h。洗涤5次，拍干，每孔加入100μL显色液，室温避光显色15min，然后每孔加入50μL终止液，使用酶标仪读取OD450值。选取大于免前血清的2.1倍的OD450值对应的最大稀释倍数作为血清效价结果见下表1。
表1、家兔抗血清ELISA效价
| 家兔编号 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# |
| 血清效价 | 32000 | 64000 | 16000 | 8000 | 16000 | 8000 |
4)抗体纯化
血清效价最高的2#兔抗血清进行Protein A/G亲和层析法纯化，常温复溶血清，经过滤纸过滤去除脂质，使用结合/洗涤缓冲液对血清进行1：1稀释；使柱垂直放置，用5倍体积的结合/洗涤缓冲液进行平衡，缓慢流速将稀释后血清注入柱内，待柱内液体完全流出；使用15倍柱体积的结合/洗涤缓冲液洗脱非特异性吸附的干扰抗体，待柱内液体完全流出；用5倍体积的洗脱缓冲液洗脱抗体，收集流出液，即目的蛋白组分，-80℃保存备用。
5)抗体纯度与浓度分析
将纯化所得抗体进行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色，使用Quantity One软件对考染结果进行纯度分析，纯度为95％(图1右)；BCA法对抗体进行定量分析，BCA法标准曲线(图3)，浓度为1.32mg/mL。
实施例2、HRP-TPCK-胰酶抗体及TPCK-胰酶参考品制备制备
1、HRP-TPCK-胰酶抗体的制备
(1)取500μL HRP溶液于2mL离心管中，加入200μL HRP活化液，25℃反应30min；
(2)再加入200μL HRP偶联缓冲液，室温放置30min左右，待溶液缓慢变为棕黄色；
(3)加入1～2mg/mL待偶联的TPCK-胰酶抗体1mL，移液器吹打混匀；
(4)将液体转入透析袋后，置于偶联透析液中室温透洗2～3h；
(5)透洗结束后，将透洗袋中液体转移到新的2mL离心管，加入100μL还原剂，25℃放置2h，完成偶联；
(6)加入等体积的甘油，-20℃保存备用。
2、TPCK-胰酶参考品制备
(1)将TPCK-胰酶进行SDS-PAGE电泳，考马斯亮蓝染色，使用Quantity One软件对考染结果进行纯度分析，纯度为94％(图1左)；
(2)BCA法对TPCK-胰酶进行定量分析，BCA法标准曲线(图3)，浓度为1.00mg/mL；
(3)TPCK-胰酶进行SDS-PAGE电泳、转膜、封闭、孵育一抗(TPCK-胰酶抗体)、孵育二抗(HRP-羊抗兔IgG)，DBA法显色(图2)。
实施例3、双抗体夹心ELISA方法建立
1、包被抗体与显示抗体工作浓度确定
采用方阵滴定法确定包被抗体(TPCK-胰酶抗体)和显示抗体(HRP-TPCK-胰酶抗体)工作浓度：
(1)将包被抗体用包被液稀释为32、16、8、4、2、1μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜；
(2)拍干，每孔加入200μL封闭液，37℃封闭1h；
(3)洗涤2次，拍干，向96孔板中加入100ng/mL的TPCK-胰酶以及阴性对照PBS，每孔100μL，37℃温育1h；
(4)洗涤3次，拍干，显示抗体用稀释液做1：100稀释，然后从上至下做倍比稀释至1：12800，每孔100μL，37℃温育1h；
(4)洗涤4次，拍干，每孔加入100μL显色液，室温避光显色15min，然后每孔加入50μL终止液，轻轻振荡混匀，使用酶标仪读取OD450值，并计算样本孔与阴性对照孔比值(P/N值)，结果见表3和表4。
表3方阵滴定OD450检测结果
表4方阵滴定P/N值
从表4可知，当包被抗体浓度为8μg/mL，显示抗体为1：800时，P/N值最高。因此，选择8μg/mL为包被抗体工作浓度，1：800为显示抗体工作稀释度。
2、线性范围确定以及标准曲线制备
(1)将包被抗体用包被液稀释8μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜。
(2)拍干，每孔200μL封闭液，37℃封闭1h。洗涤2次，拍干，依次加入400、200、100、50、25、12.5ng/mL的TPCK-胰酶以及阴性对照PBS，做2个复孔，每孔100μL，37℃温育1h。
(3)洗涤3次，拍干，加入1：800稀释的显示抗体，每孔100μL，37℃温育1h。
(4)洗涤4次，拍干，每孔加入100μL显色液，室温避光显色15min，然后每孔加入50μL终止液，轻轻振荡混匀，使用酶标仪读取OD450值，使用已知TPCK-胰酶的浓度对相应OD450值做直线方程，结果见图4。
从图4可知，TPCK胰酶浓度在12.5～400ng/mL时，与OD450值呈良好线性关系，R2>0.99，
线性公式为y＝0.0014x+0.533(y为OD450读数，x为TPCK-胰酶的浓度(ng/mL))
因此确定该方法线性范围为12.5～400ng/mL，检测限即灵敏度为12.5ng/mL。
3、准确度验证
将参考品TPCK-胰酶稀释为高(300ng/mL)、中(150ng/mL)、低(75ng/mL)3种浓度，应用上述方法进行检测，每个样品平行检测8孔，试验重复2次，计算样品回收率，结果见表5。
表5、准确度验证结果
从表5可知，3种浓度的样品回收率分别为93.8％～110.6％、87.7％～110.9％、90.00％～11.7％，表明此方法准确度良好。
4、精密度验证
将参考品TPCK-胰酶稀释为高(300ng/mL)、中(150ng/mL)、低(75ng/mL)3种浓度，每个样品平行检测6孔，不同实验员重复1次该试验，计算均数和标准差以及变异系数(CV)，结果见表6。
表6、精密度验证结果
从表6可知，300ng/mL参考品CV为3.1％，150ng/ml参考品CV为4.0％，75ng/mL参考品CV为4.3％，重复性检测结果的CV小于4.3％表明此方法精密度良好。
5、耐用性
将建立的ELISA方法，改变单一条件，包括将抗原孵育时间或酶标二抗孵育时间上下浮动10min，整个反应体系温度上下浮动5℃等，分别检测300ng/mL、150ng/mL、75ng/mLTPCK-胰酶3种浓度，并计算回收率。结果见表7。
表7、耐用性检测结果
从表7可知，改变部分反映条件，300ng/mL、150ng/mL、75ng/mL 3种浓度的参考品回收率分别为95.6％～110.8％、89.5％～107.4％、87.0％～104.5％，说明此试剂盒及方法耐用性良好。
实施例5试剂盒检测步骤以及应用
1、试剂盒检测步骤
S1.包被与封闭：将所述的TPCK-胰酶用包被液稀释至8μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜后，弃去孔内液体，每孔加入200μL封闭液，37℃封闭1h；
S2.加样：洗涤2～4次，拍干，加入系列稀释的参考品、待检样品以及PBS，每孔100μL，37℃温育1h；
S3.二抗：洗涤2～4次，拍干，每孔加入HRP-TPCK-胰酶抗体100μL，37℃反应1h；
S4.显色：洗涤2～4次，拍干，每孔加入显色液100μL，室温避光显色15min后，每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀；
S5.结果：使用酶标板测定每孔OD450值，制作标准曲线，将样品OD450值代入方程，计算出样品中TPCK-胰酶含量。
2、方法应用
利用上述试剂盒方法，对MDCK细胞基质流感疫苗以及各单价的其上游工艺样品(病毒收获液、超滤透析液和原液)，以及鸡胚基质的流感疫苗中的TPCK-胰酶残量进行检测，检测结果见表8。
表8、样品检测结果
注：细胞基质流感疫苗及其单价疫苗上游样品是采用MDCK细胞基质生产，鸡胚基质的流感疫苗生产过程中未使用TPCK胰酶，因此鸡胚基质流感疫苗作为阴性对照。
从表8结果可知，MDCK四价流感裂解疫苗及其各单价原液TPCK-胰酶残量均小于50ng/mL，单价病毒收获液检测出较高TPCK-胰酶残量，超滤透洗液也检出一定的TPCK-胰酶残量，TPCK-胰酶残量在各阶段的降低原因可能是各种工艺阶段损失TPCK-胰酶。
最后需要说明的是，以上实施例仅帮助本领域技术人员理解本发明的实质，不用于限定本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种检测流感疫苗中TPCK-胰酶残量的检测试剂，所述的检测试剂为多克隆抗体，其特征在于，
所述的流感疫苗为采用MDCK细胞基质生产的流感疫苗，
所述的多克隆抗体的制备方法为：由TPCK胰酶免疫家兔后获取抗血清，再经ProteinA/G亲和层析法纯化。
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，
(1)所述的TPCK胰酶为采用MDCK细胞基质生产流感疫苗时使用的胰酶；
(2)所述的免疫家兔后获取的抗血清的步骤为：
初次免疫使用300μg TPCK-胰酶并按体积1：1加入弗氏完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫；
然后每间隔1周，使用400μg TPCK-胰酶，并按体积1：1加入弗氏不完全佐剂充分乳化后，背部皮下多点免疫，免疫4次；
最后一次免疫后10天颈动脉采血，将获取的兔全血在37℃环境放置2h后，25℃2500rpm离心15min，吸取上层血清；
(3)所述的Protein A/G亲和层析法的步骤为：
血清效价最高的抗血清(效价为64000)，滤纸过滤去除脂质；
使用结合/洗涤缓冲液(0.15M NaCl，20mM Na2HPO4，pH 8.0)对血清进行1：1稀释；
用5倍体积的结合/洗涤缓冲液平衡Protein A/G亲和层，缓慢流速将稀释后血清注入柱内，待柱内液体完全流出；
使用15倍柱体积的结合/洗涤缓冲液洗脱非特异性吸附的干扰抗体，待柱内液体完全流出；
用5倍体积的洗脱缓冲液(0.1M柠檬酸pH2.5～3.0)洗脱抗体，收集流出液，即目的抗体组分。
3.使用权利要求1或2所述的检测试剂制备的ELISA双抗夹心检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括：
(1)捕获抗体：前述方法制备获得的多克隆抗体；
(2)标记抗体：用过碘酸钠法对前述方法制备的多克隆抗体进行HRP标记，制备得到的HRP-TPCK-胰酶抗体；
(3)必要的对照品和试剂。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，
所述捕获抗体的包被量为8μg/mL‘
所述标记抗体的稀释度为1：800。
5.根据权利要求3或4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂包括：
封闭液：含有5％BSA的10mM pH 7.2的PBS；
洗涤液：含有0.01％Tween-20的10mM pH 7.2的PBS；
稀释液：含有1％BSA的洗涤液；
终止液：2M H2SO4。
6.使用所述的权利要求1-5任一所述的检测试剂或检测试剂盒在检测流感疫苗中TPCK-胰酶残量中的应用，所述的流感疫苗为采用MDCK细胞基质生产的流感疫苗。
7.使用权利要求4或5所述的检测试剂盒检测流感疫苗中TPCK-胰酶残量的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：
(1)使用pH 9.6的包被液将TPCK-胰酶抗体稀释为8μg/mL，每孔100μL，4℃包被过夜；
(2)洗板2～4次后加入封闭液，每孔200μL，37℃反应1h；
(3)洗板2～4次后加入待试品，每孔100μL，37℃反应1h；
(5)洗板2～4次后加入显色液，每孔50μL，室温避光反应10～30min；
(6)加入终止液，每孔50μL，轻微振荡混匀，使用酶标仪测定OD450值；
(7)将测得待试品的OD450值代入标准曲线方程计算出TPCK-胰酶浓度；
所述的流感疫苗为采用MDCK细胞基质生产的流感疫苗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111131460.4A CN113848321B (zh) | 2021-09-26 | 2021-09-26 | 一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111131460.4A CN113848321B (zh) | 2021-09-26 | 2021-09-26 | 一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113848321A true CN113848321A (zh) | 2021-12-28 |
| CN113848321B CN113848321B (zh) | 2023-12-05 |
Family
ID=78980263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111131460.4A Active CN113848321B (zh) | 2021-09-26 | 2021-09-26 | 一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113848321B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103792366A (zh) * | 2014-01-21 | 2014-05-14 | 内蒙古必威安泰生物科技有限公司 | 口蹄疫疫苗宿主细胞蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒及使用方法 |
| WO2017107974A1 (zh) * | 2015-12-23 | 2017-06-29 | 中国人民解放军第二军医大学 | 血清psmd4蛋白的检测试剂盒及其检测方法与应用 |
| CN108103002A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-06-01 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | Mdck细胞宿主残留蛋白的制备及其用途 |
| US20200319174A1 (en) * | 2019-04-17 | 2020-10-08 | Jiangnan University | Method for Detecting Human Soluble Asialoglycoprotein Receptor |
| CN112760294A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-05-07 | 中国农业科学院特产研究所 | 犬i型腺病毒单克隆抗体/多克隆抗体、双抗夹心elisa试剂盒和应用 |
| CN113092758A (zh) * | 2021-04-01 | 2021-07-09 | 山西集创生物科技有限公司 | 用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用 |
-
2021
- 2021-09-26 CN CN202111131460.4A patent/CN113848321B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103792366A (zh) * | 2014-01-21 | 2014-05-14 | 内蒙古必威安泰生物科技有限公司 | 口蹄疫疫苗宿主细胞蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒及使用方法 |
| WO2017107974A1 (zh) * | 2015-12-23 | 2017-06-29 | 中国人民解放军第二军医大学 | 血清psmd4蛋白的检测试剂盒及其检测方法与应用 |
| CN108103002A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-06-01 | 武汉生物制品研究所有限责任公司 | Mdck细胞宿主残留蛋白的制备及其用途 |
| US20200319174A1 (en) * | 2019-04-17 | 2020-10-08 | Jiangnan University | Method for Detecting Human Soluble Asialoglycoprotein Receptor |
| CN112760294A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-05-07 | 中国农业科学院特产研究所 | 犬i型腺病毒单克隆抗体/多克隆抗体、双抗夹心elisa试剂盒和应用 |
| CN113092758A (zh) * | 2021-04-01 | 2021-07-09 | 山西集创生物科技有限公司 | 用于检测胰蛋白酶类似物TrypLE的双抗夹心ELISA检测试剂盒及检测方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113848321B (zh) | 2023-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5351418B2 (ja) | Ａ型インフルエンザウイルスｈ５亜型の検出法 | |
| EP2833147B1 (en) | Detection kit for influenza a virus | |
| US20100267006A1 (en) | Method for detection of cirulent strain of influenza type-a virus | |
| JP5435844B2 (ja) | インフルエンザウイルスｈ５亜型の免疫検出法 | |
| CN110531072A (zh) | 一种快速检测磷酸化Tau蛋白的免疫层析检测卡及其制备方法 | |
| Solano et al. | Quantification of influenza neuraminidase activity by ultra-high performance liquid chromatography and isotope dilution mass spectrometry | |
| CN113614539A (zh) | 一种粘液病毒抗性蛋白1的定量试剂盒 | |
| CN108103002B (zh) | Mdck细胞宿主残留蛋白的制备及其用途 | |
| CN104749372B (zh) | H9n2流感病毒血凝素蛋白elisa试剂盒 | |
| JP2010261912A (ja) | ヒトインフルエンザウイルスｈ３亜型の免疫学的検出法 | |
| He et al. | Downstream processing of Vero cell-derived human influenza A virus (H1N1) grown in serum-free medium | |
| CN101788562A (zh) | 甲型h1n1流感病毒总抗体快速检测试纸 | |
| JP2011069800A (ja) | ヒトインフルエンザウイルスｈ１亜型の免疫学的鑑別検出法 | |
| CN101210926A (zh) | 一种检测人血清中组织激肽释放酶的试剂盒及其制备方法 | |
| CN113848321B (zh) | 一种流感疫苗tpck-胰酶残量检测试剂盒 | |
| CN110320364A (zh) | 一种双抗夹心胶体金检测试剂盒、及其制备方法与应用 | |
| CN109856397A (zh) | 一种快速检测兔瘟病毒的胶体金检测卡及其制备方法 | |
| CN113740534A (zh) | 新型冠状病毒中和抗体检测卡及制备方法 | |
| KR101329344B1 (ko) | 돼지인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌 검출용 항체 및 이의 용도 | |
| JP2009523239A (ja) | ウイルス粒子／ウイルス抗原の濃度を測定する方法 | |
| JP2023016530A (ja) | イムノクロマト試験片 | |
| CN101788561A (zh) | 甲型H1N1流感病毒IgM和总抗体快速检测试纸 | |
| CN111289751A (zh) | 鹅星状病毒Capsid蛋白抗原ELISA检测试剂盒及检测方法和应用 | |
| CN201637744U (zh) | 甲型h1n1流感病毒总抗体检测试纸 | |
| TWI507688B (zh) | 流感病毒之凝血素之測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |