CN113845559B - 一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113845559B CN113845559B CN202111307971.7A CN202111307971A CN113845559B CN 113845559 B CN113845559 B CN 113845559B CN 202111307971 A CN202111307971 A CN 202111307971A CN 113845559 B CN113845559 B CN 113845559B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- triptolide
- influenza
- salt
- virus
- tpdmsa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- DFBIRQPKNDILPW-CIVMWXNOSA-N Triptolide Chemical class O=C1OCC([C@@H]2C3)=C1CC[C@]2(C)[C@]12O[C@H]1[C@@H]1O[C@]1(C(C)C)[C@@H](O)[C@]21[C@H]3O1 DFBIRQPKNDILPW-CIVMWXNOSA-N 0.000 title claims abstract description 66
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 7
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 159000000008 strontium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- YKUJZZHGTWVWHA-UHFFFAOYSA-N triptolide Natural products COC12CC3OC3(C(C)C)C(O)C14OC4CC5C6=C(CCC25C)C(=O)OC6 YKUJZZHGTWVWHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 24
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 20
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- ACJPFLIEHGFXGP-UHFFFAOYSA-N 3,3-dimethyloxolane-2,5-dione Chemical compound CC1(C)CC(=O)OC1=O ACJPFLIEHGFXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 240000002505 Pogostemon cablin Species 0.000 description 3
- 235000011751 Pogostemon cablin Nutrition 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 2
- 241000713297 Influenza C virus Species 0.000 description 2
- ZSBXGIUJOOQZMP-JLNYLFASSA-N Matrine Chemical class C1CC[C@H]2CN3C(=O)CCC[C@@H]3[C@@H]3[C@H]2N1CCC3 ZSBXGIUJOOQZMP-JLNYLFASSA-N 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 241000830536 Tripterygium wilfordii Species 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000001052 heteronuclear multiple bond coherence spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000990 heteronuclear single quantum coherence spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 2
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 2
- GGHMUJBZYLPWFD-UHFFFAOYSA-N patchoulialcohol Chemical compound C1CC2(C)C3(O)CCC(C)C2CC1C3(C)C GGHMUJBZYLPWFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N pyridine-d5 Chemical compound [2H]C1=NC([2H])=C([2H])C([2H])=C1[2H] JUJWROOIHBZHMG-RALIUCGRSA-N 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 235000015398 thunder god vine Nutrition 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 235000013717 Houttuynia Nutrition 0.000 description 1
- 240000000691 Houttuynia cordata Species 0.000 description 1
- 241000192019 Human endogenous retrovirus K Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- GGHMUJBZYLPWFD-MYYUVRNCSA-N Patchouli alcohol Natural products O[C@@]12C(C)(C)[C@H]3C[C@H]([C@H](C)CC1)[C@]2(C)CC3 GGHMUJBZYLPWFD-MYYUVRNCSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 1
- -1 diterpene lactone compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 230000000312 effect on influenza Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N peramivir Chemical compound CCC(CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)C[C@H]1NC(N)=N XRQDFNLINLXZLB-CKIKVBCHSA-N 0.000 description 1
- 229960001084 peramivir Drugs 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical group [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J73/00—Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms
- C07J73/001—Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms by one hetero atom
- C07J73/003—Steroids in which the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton has been modified by substitution of one or two carbon atoms by hetero atoms by one hetero atom by oxygen as hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用，属于雷公藤甲素衍生物技术领域。雷公藤甲素具有多重细胞毒性，本发明通过对雷公藤甲素进行结构修饰，降低其细胞毒性的同时使其具有体外抗流感病毒的活性。本发明提供的雷公藤甲素衍生物具有显著的抗流感病毒活性，对流感病毒感染的细胞具有保护作用，且具有较低的细胞毒性。
Description
技术领域
本发明涉及雷公藤甲素衍生物技术领域，尤其涉及一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
雷公藤甲素(triptolide，以下简称TP)是从雷公藤中分离出的一种环氧化二萜内酯化合物。TP是雷公藤的主要活性物质之一，生物活性强、药效明确，可以治疗系统性红斑狼疮、风湿性关节炎等疾病，被Cell等论文列为最有可能开发成为现代药物的天然药用化合物之一。近年来，文献报道TP具有抗病毒作用，包括抗HIV、HPV、逆转录病毒HERV-K等，但其抗流感病毒活性还未见系统性报道。然而，TP水溶性差，体内消除快，高活性的TP可诱发多器官毒性，阻碍了其在临床中的应用。为了确保TP发挥治疗作用的同时降低其对机体的毒性，中外学者从联合用药，结构改造等方面进行了大量的尝试。
流感是由流感病毒(influenza virus)感染人体产生的一种急性呼吸道传染病，又被称为流行性感冒，具有潜伏期短、发病快、传染性强和传播速度快的特点，其临床主要表现为发热、咳嗽、炎症和全身无力等症状。目前抗流感病毒的临床药物主要是以NA为靶点的奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦等，但此类药物已经开始出现耐药株，开发新型抗流感病毒药物刻不容缓。
研究表明，中国传统中药的提取物可用于预防或者治疗流感，张薇等证实从新鲜紫色茎鱼腥草中提取到的挥发油成分对甲型流感的生命周期有明显的抑制作用(张薇,卢芳国,潘双银,等.鱼腥草中挥发油的提取分析及其抗菌抗病毒作用的研究[J].实用预防医学,2008,15(002):312-6.)；根据樊宏伟等人对苦参碱类生物碱的研究，发现这类由苦参根中提取得到的主要有效成分，对流感病毒具有直接的抑制作用(樊宏伟,卢继红,张蓉.苦参碱类生物碱的体外抑菌,抑菌病及诱生干扰素的实验研究[J].中医药信息,2000,17(004):75-6.)；近年来有研究表明广藿香挥发油成分具有明显的抗流感活性，据报道广藿香挥发油在92μg/ml时具有明显的抑制甲型H1N1的作用，抑制率达到66.67％。还有研究表明广藿香醇在体外同样表现出能提高被流感病毒感染的MDCK细胞的存活率，在较低浓度时(31.25μg/ml)就能表现出明显的抗流感活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和在制备预防和/或治疗流感药物中的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种雷公藤甲素衍生物，结构通式如下式Ⅰ所示：
所述式Ⅰ中R为R1、R2或R3，所述R1、R2、R3的结构通式如下：
其中，所述n独立的为1～8。
优选的，所述雷公藤甲素衍生物的结构式如下：
本发明还提供了一种雷公藤甲素衍生物的制备方法，以二氯甲烷为溶剂，将雷公藤甲素与2,2-二甲基琥珀酸酐在4-二甲氨基吡啶催化下反应，得到雷公藤甲素衍生物。
优选的，所述雷公藤甲素与2,2-二甲基琥珀酸酐的摩尔比为1:12～18。
优选的，所述4-二甲氨基吡啶与雷公藤甲素的摩尔比为5～6:1。
优选的，所述反应的时间为10～15h。
本发明还提供了一种由雷公藤甲素衍生物制备的盐，所述盐包括雷公藤甲素衍生物和其药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐为钠盐、钾盐、镁盐、锶盐、钙盐和有机铵盐中的一种或几种。
本发明还提供了一种雷公藤衍生物及其盐在制备预防和/或治疗流感药物中的应用，所述雷公藤甲素衍生物为结构通式Ⅰ和/或结构式Ⅱ所示的化合物：
所述结构通式Ⅰ为：
所述结构通式Ⅰ中R为R1、R2或R3，所述R1、R2、R3的结构通式如下：
其中，所述n独立的为1～8；
所述结构式Ⅱ为：
优选的，所述流感是由甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒中的一种或几种感染引起。
优选的，所述甲型流感病毒为A/WSN/33。
本发明提供的雷公藤甲素衍生物具有显著的抗流感病毒活性，对流感病毒感染的细胞具有保护作用，且具有较低的细胞毒性。本发明提供的雷公藤甲素衍生物能够通过与WSN病毒上的NP位点结合从而干扰流感病毒出核的过程来发挥抗流感病毒作用。
附图说明
图1为实施例1的雷公藤甲素衍生物TPDMSA的1H-NMR谱图；
图2为实施例1的雷公藤甲素衍生物TPDMSA的13C-NMR谱图；
图3为实施例1的雷公藤甲素衍生物TPDMSA的HSQC谱图；
图4为实施例1的雷公藤甲素衍生物TPDMSA的HMBC谱图；
图5为实施例2的雷公藤甲素衍生物TPSCAD的1H-NMR谱图；
图6为实施例4中不同组的MDCK细胞在倒置显微镜下的细胞形态；
图7为实施例5中目标蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果和不同时间段释放出的子代病毒的量；
图8为实施例6中用激光共聚焦显微镜研究TPDMSA的抗流感病毒机制时的细胞内NP与细胞核染色结果；
图9为实施例7中用细胞热位移测定法测定TPDMSA的抗流感病毒机制时雷公藤甲素衍生物与细胞内NP的结合情况。
具体实施方式
本发明提供了一种雷公藤甲素衍生物，结构通式如下式Ⅰ所示：
所述式Ⅰ中R为R1、R2或R3，所述R1、R2、R3的结构通式如下：
其中，所述n独立的为1～8。
在本发明中，所述结构通式Ⅰ中R优选为R2。
在本发明中，所述n优选为1～4，进一步优选为1～2。
优选的，所述雷公藤甲素衍生物的结构式如下：
本发明提供了一种雷公藤甲素衍生物的制备方法，以二氯甲烷为溶剂，将雷公藤甲素与2,2-二甲基琥珀酸酐在4-二甲氨基吡啶催化下反应，得到雷公藤甲素衍生物。
在本发明中，所述雷公藤甲素与2,2-二甲基琥珀酸酐的摩尔比优选为1:12～18，进一步优选为1:14～16，再进一步优选为1:15。
在本发明中，所述雷公藤甲素与二氯甲烷的质量体积比优选为100mg：12～16ml，进一步优选为100mg：14ml。
在本发明中，所述4-二甲氨基吡啶与雷公藤甲素的摩尔比优选为5～6:1，进一步优选为5.5:1。
在本发明中，所述反应的时间优选为10～15h，进一步优选为12h。
在本发明中，所述雷公藤甲素衍生物按照如下方法提纯：将制备得到的含有雷公藤甲素衍生物的反应混合物用乙酸乙酯稀释。
在本发明中，所述稀释的比例优选为2～4倍，进一步优选为稀释3倍。
稀释后，优选依次用HCl和饱和的食盐溶液萃取。
在本发明中，所述HCl的浓度优选为4～6％，进一步优选为5％。
萃取后，取有机层用无水硫酸钠干燥，并用滤纸过滤。
在本发明中，所述无水硫酸钠与有机层的质量体积比优选为8～12g:1ml，进一步优选为10mg:1ml。
过滤后，使用旋转蒸发器浓缩滤液，得到粗产物，粗产物采用硅胶柱色谱法纯化得到白色粉末状的雷公藤甲素衍生物，命名为TPDMSA。结构式如下：
本发明还提供了一种由雷公藤甲素衍生物制备的盐，所述盐包括雷公藤甲素衍生物和其药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐为钠盐、钾盐、镁盐、锶盐、钙盐和有机铵盐中的一种或几种。
在本发明中，所述药学上可接受的盐优选为钠盐、镁盐、钙盐和有机铵盐中的一种或几种，进一步优选为钠盐。
本发明还提供了一种雷公藤衍生物及其盐在制备预防和/或治疗流感药物中的应用，所述雷公藤甲素衍生物为结构通式Ⅰ和/或结构式Ⅱ所示的化合物：
所述结构通式Ⅰ为：
所述结构通式Ⅰ中R为R1、R2或R3，所述R1、R2、R3的结构通式如下：
其中，所述n独立的为1～8；
所述结构式Ⅱ为：
在本发明中，所述结构通式Ⅰ所示的化合物进一步优选为
在本发明中，所述流感优选是由甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒中的一种或几种感染引起，进一步优选是由甲型流感病毒引起的。
在本发明中，所述甲型流感病毒优选为A/WSN/33。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
2,2-二甲基琥珀酸酐(533mg，15eq)用14mL的二氯甲烷搅拌溶解，再加入雷公藤甲素(100mg，1eq)，然后加入4-二甲氨基吡啶(DMAP，186mg，5.5eq)，搅拌反应12小时，制备得到含有雷公藤甲素衍生物的反应混合液。
将反应混合液用乙酸乙酯3倍稀释，再依次用5％HCl和饱和的食盐溶液萃取。萃取得到有机层，按照质量体积比10g:1ml在有机层中加入无水硫酸钠干燥，然后用滤纸过滤，取滤液，使用旋转蒸发器浓缩滤液，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷比乙酸乙酯，4：1)纯化得到白色粉末状的雷公藤甲素衍生物TPDMSA(62.9mg，产率为46.03％)。
通过1H-NMR，13C-NMR，HSQC，HMBC和高分辨质谱确证。1H-NMR图谱、13C-NMR图谱、HSQC和HMBC图谱，分别如图1、图2、图3、图4所示。
1H NMR(400MHz,pyridine-d5)δH 5.52(s,1H,H-14),4.79–4.65(m,2H,H2-19)4.71,4.02(d,J＝3.1Hz,1H,H-11),3.78(d,J＝2.4Hz,1H,H-12),3.55(d,J＝5.6Hz,1H,H-7),3.06(d,J＝16.1Hz,1H,Ha-2'),2.96(d,J＝16.1Hz,1H,Hb-2'),2.61(d,J＝13.3Hz,1H,H-5),2.24(dd,J＝13.8,4.6Hz,1H,Ha-2),2.22–2.15(m,1H,H-15)2.18,2.07(dd,J＝9.0,3.2Hz,Hb-2),2.02–1.95(m,1H,Ha-6)1.98,1.83–1.76(m,1H,Hb-6)1.79,1.62(s,3H,H-5'),1.55(s,3H,H-6'),1.43–1.39(m,1H,Ha-1)1.41,1.17–1.04(overlap,1H,Hb-1)1.09,1.10(s,3H,H-20),1.07(d,J＝6.9Hz,3H,H-16),0.84(d,J＝6.9Hz,3H,H-17)；
13C NMR(100MHz,pyridine-d5):δC 179.8(C-4′),173.9(C-18),171.9(C-1′),161.5(C-4),125.3(C-3),71.1(C-14),70.7(C-19),64.4(C-9),64.1(C-13),62.2(C-7),60.7(C-8),56.2(C-11),55.8(C-12),44.8(C-2′),41.2(C-3′),40.8(C-5),36.3(C-10),30.1(C-1),28.7(C-15),26.7(C-5′),25.8(C-6′),23.7(C-6),18.1(C-17),17.7(C-2),17.2(C-16),14.4(C-20)；
高分辨质谱m/z489.2119[M+H]+(C26H33O9计算值为489.2119)。
本实施例制备的雷公藤甲素衍生物(TPDMSA)的结构式如下：
实施例2
琥珀酸酐(417.0mg，15eq)用10mL的二氯甲烷搅拌溶解，再加入雷公藤甲素(100mg，1eq)，然后加入4-二甲氨基吡啶(DMAP，186mg，5.5eq)，搅拌反应12小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释3倍，再依次用10％HCl和饱和的食盐溶液萃取。萃取的有机层用无水硫酸钠(10g:1ml)干燥并过滤。使用旋转蒸发器浓缩滤液，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷比乙酸乙酯，4:5)纯化得到TPSCAD(65.8mg，产率为51.09％)。
雷公藤甲素衍生物TPSCAD的结构通过1H-NMR确证，1H-NMR图谱如图5：
TPSCAD(2):white powder；1H NMR(400MHz,CDCl3)δH 5.09(s,1H,H-14),4.69(d,J＝17.1Hz,1H,Ha-19),4.65(d,J＝17.1Hz,1H,Hb-19),3.83(d,J＝3.1Hz,1H,H-11),3.53(d,J＝3.1Hz,1H,H-12),3.46(d,J＝5.6Hz,1H,H-7),2.78–2.71(m,4H,H2-2'/3')2.75,2.65–2.69(m,1H,H-5)2.67,2.32(dd,J＝18.1,5.3Hz,1H,Ha-2),2.20–2.13(m,1H,Hb-2/H-15)2.17,1.95–1.86(m,1H,H2-6)1.90,1.57(dd,J＝12.5,4.5Hz,1H,Ha-1),1.25–1.18(m,1H,Hb-1)1.22,1.05(s,3H,H3-20),0.95(d,J＝7.0Hz,1H,H3-16),0.84(d,J＝6.9Hz,3H,H3-17)；MS ESI+:461.15[M+H]+.
TPSCAD的结构式如下：
实施例3
雷公藤甲素衍生物抗流感病毒活性实验测试：
将MDCK细胞分别用含10％胎牛血清与1％青霉素-链霉素溶液的DMEM培养基(10％胎牛血清与1％青霉素-链霉素为体积百分比)，于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养，待细胞长到90％(贴壁面积)左右时，将细胞用质量百分比为0.25％的胰蛋白酶消化成单细胞悬液，采用血球计数板进行活细胞计数，调整活细胞浓度为5×105/mL接种于96孔培养板，每孔100μL。培养24h后，再分别加入不同量的药物(TPDMSA)，药物终浓度分别为100μM、50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM，置35℃，含5％CO2的培养箱中孵育48小时，48小时后取出室温(20℃)平衡30min，每孔加入CellTiter-Glo工作液100μL，摇床120转/min震荡2min后，在室温(20℃)下放置10min使发光稳定，检测荧光值，荧光值与活细胞数目成正比。
将细胞分为空白对照组、阳性对照组、阴性对照组和实验组，空白对照组为含0.1％DMSO的培养基，阳性对照组选用奥司他韦(Ost)和100TCID50的病毒，阴性对照组为只含有100TCID50的病毒，实验组为TPDMSA和100TCID50的病毒。
IC50为半数抑制有效浓度，通过SPSS计算得到。
测试结果如下表1所示，实验数据为三次平行实验后取得的平均值。
表1雷公藤甲素衍生物抗流感病毒活性实验结果
由表1可以看出，TPDMSA具有显著的抗WSN流感病毒活性。
按照上述试验方法，本实施例还检测了TP对WSN的抑制活性、细胞毒性及选择性指标，结果如表2。
表2 TP对WSN的抑制活性、细胞毒性及选择性指标
由表2可以看出，TP(雷公藤甲素)对WSN没有抑制活性并且具有较强的细胞毒性。
实施例4
对TPDMSA的抗流感病毒活性进行确认，本实施例通过倒置显微镜观察TPDMSA对流感病毒感染的MDCK细胞的保护作用：
将MDCK细胞培养于96孔板中，当其贴壁密度为70％时，加入TPDMSA(5μM)和250TCID50病毒混合液，每孔100μl，培养48小时后在倒置显微镜下观察细胞形态。
研究结果如图6所示，TPDMSA对MDCK细胞无明显毒性，对WSN感染的MDCK细胞具有显著的保护作用。
实施例5
对TPDMSA的抗流感病毒机制进行研究，本实施例通过westernblot研究其机制：
MDCK细胞每孔以3×105个接种于12孔板中培养24小时后，将250TCID50病毒与TPDMSA(10μM)的混合液加入细胞中，每孔500μl，共培养2小时后、5小时后、8小时后、10小时后，加入RIPA裂解液，置于冰上裂解细胞，离心，收集上清液，用BCA蛋白分析试剂盒测定总蛋白浓度。
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离目标蛋白，然后转移到PVDF膜上。将PVDF膜浸泡于封闭液中室温震摇2小时。接着与相应的一抗(GAPDH，NP)于4℃震摇过夜，最后加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育1小时。使用ECL化学发光底物试剂盒进行信号检测。
NP是流感病毒的核蛋白，用来标记流感病毒，胞内NP能反应细胞内流感病毒的量，上清NP能反应释放出的子代病毒的量。
检测结果如图7所示，TPDMSA处理后，在0～8小时和0～10小时的时间段里胞内外的流感病毒均显著减少，所以可以判断TPDMSA作用在流感病毒复制的后期。
实施例6
对TPDMSA的抗流感病毒机制进行研究，本实施例通过激光共聚焦显微镜研究其机制：
将MDCK细胞培养于35mm的Corning激光共聚焦培养皿中，当其贴壁密度达到70％时，将250TCID50病毒与TPDMSA(10μM)的混合液加入细胞中，每孔500μl，共培养2小时后、5小时后、8小时后、10小时后，4％多聚甲醛固定细胞15min；荧光一抗(NP)孵育过夜，PBS清洗细胞5次后，用TRITC标记的荧光二抗孵育1小时；PBS清洗3次后，用Hochest(细胞核染料)染核15min；用PBS洗涤两次，立刻用激光共焦显微镜观察。
检测结果如图8所示，在0～8小时和0～10小时的时间段里流感病毒聚集在细胞核内，无法完成出核的过程，所以可以判断TPDMSA能抑制流感病毒出核。
以上实验结果表示TPDMSA能够通过干扰流感病毒出核的过程来发挥抗流感病毒作用。
实施例7
对TPDMSA的抗流感病毒机制进行进一步的研究，本实施例通过细胞热位移测定法研究其机制：
用250TCID50病毒感染MDCK细胞8小时，加入含有蛋白酶抑制剂的裂解液，在冰上裂解30分钟，提取总蛋白。然后，在4℃下以15000r/min离心20分钟收集上清液。将上清液分成两份，其中一份添加TPDMSA，终浓度为15μM，另一份添加相同体积的DMSO，并在室温下反应30分钟。每个样品分为10管，每管50μL。在不同温度(34.4℃、37.7℃、41.6℃、45.8℃、50.2℃、54.4℃、58.3℃、62.4℃、65.7℃)下处理5min，然后在冰上快速冷却3min。加热处理后，在4℃下以15000r/min离心20min，收集上清液，用NP抗体进行western blot分析。用SPSS软件计算表观聚集温度(Tagg)值。
实验结果如图9所示，TPDMSA将NP的表观聚集温度由54.53提高到58.29℃，结果证明TPDMSA能与NP结合。
以上实验结果表示TPDMSA通过与WSN病毒上的NP位点结合从而干扰流感病毒出核的过程来发挥抗流感病毒作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种雷公藤甲素衍生物及其盐在制备预防和/或治疗流感药物中的应用，其特征在于，所述雷公藤甲素衍生物的结构式为：
所述盐包括雷公藤甲素衍生物和其药学上可接受的盐，所述药学上可接受的盐为钠盐、钾盐、镁盐、锶盐、钙盐和有机铵盐中的一种或几种；
所述流感为甲型流感病毒甲型流感病毒为A/WSN/33。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111307971.7A CN113845559B (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111307971.7A CN113845559B (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113845559A CN113845559A (zh) | 2021-12-28 |
| CN113845559B true CN113845559B (zh) | 2024-01-12 |
Family
ID=78984141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111307971.7A Active CN113845559B (zh) | 2021-11-05 | 2021-11-05 | 一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113845559B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106994129A (zh) * | 2017-05-15 | 2017-08-01 | 王晓辉 | 雷公藤甲素及其衍生物在制备治疗和/或预防肺损伤疾病的药物中的应用 |
| WO2021178437A1 (en) * | 2020-03-02 | 2021-09-10 | The Johns Hopkins University | Glucose triptolide conjugates and uses thereof |
-
2021
- 2021-11-05 CN CN202111307971.7A patent/CN113845559B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106994129A (zh) * | 2017-05-15 | 2017-08-01 | 王晓辉 | 雷公藤甲素及其衍生物在制备治疗和/或预防肺损伤疾病的药物中的应用 |
| WO2021178437A1 (en) * | 2020-03-02 | 2021-09-10 | The Johns Hopkins University | Glucose triptolide conjugates and uses thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Exploring the anti-influenza virus activity of novel triptolide derivatives targeting nucleoproteins;Na Jiang et al.;《Bioorganic Chemistry》;第129卷;第106118页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113845559A (zh) | 2021-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chauthe et al. | Biomimetic synthesis and anti-HIV activity of dimeric phloroglucinols | |
| US20110142966A1 (en) | Aqueous extracts of anoectochilus spp. kinsenoside and pharmaceutical compositions useful for hepatoprotection | |
| CN107383048B (zh) | 一种青蒿素类衍生物、其合成及应用 | |
| Chen et al. | Anti-HBV activities of Streblus asper and constituents of its roots | |
| Li et al. | Neogenkwanines A–H: daphnane-type diterpenes containing 4, 7 or 4, 6-ether groups from the flower bud of Daphne genkwa | |
| Liu et al. | Synthesis of thioether andrographolide derivatives and their inhibitory effect against cancer cells | |
| CN113845551B (zh) | 一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用 | |
| CN112741831B (zh) | 一类多环聚酮化合物在制备抗新型冠状病毒药物中的应用 | |
| CN113845559B (zh) | 一种雷公藤甲素衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN106214677B (zh) | 一种含烯丙基取代的单羰基姜黄素类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN112125920A (zh) | 一类多环苯并双呋喃化合物及其作为抗rsv药物中的应用 | |
| CN114642670B (zh) | 雷公藤甲素衍生物在制备治疗肿瘤耐药药物中的应用、治疗与肿瘤耐药相关的药物组合物 | |
| CN110857295B (zh) | 具有选择性抗肝癌作用的黄酮-川芎嗪类化合物ch-x及其制备方法和应用 | |
| CN115073406B (zh) | 一种桉烷型倍半萜内酯类tba衍生物及其用途 | |
| CN115057839B (zh) | 一种桉烷型倍半萜烯内酯化合物及其制备和用途 | |
| WO2022142160A1 (zh) | Icetexane型松香烷二萜在制备结直肠癌治疗药物中的应用 | |
| CN114890882B (zh) | 柏木醇衍生物、其制备方法及其应用 | |
| CN111606917B (zh) | 一种具c环骈合内酯环新颖骨架的松香烷类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN111202732B (zh) | Caulilexin C在制备预防或治疗甲型流感的药物中的应用 | |
| CN110526811A (zh) | 一种α-葡萄糖苷酶抑制剂及其合成方法与应用 | |
| CN115724760B (zh) | 一种三环二萜类似物及其合成和应用 | |
| CN111217824B (zh) | 4-o-芳氨丙基土甘草a衍生物及其制备及应用 | |
| CN109824655B (zh) | 穿心莲内酯化合物及其制备方法和用途 | |
| CN102796157A (zh) | 告达亭衍生物，其药物组合物及其用途 | |
| CN101293830B (zh) | 1-氧-[3-芳基取代-烯丙酰]奎尼酸类化合物及用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |