CN113834934A - 免疫层析试纸条及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种免疫层析试纸条及其制备方法。所述试纸条包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫和底板，所述NC膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次粘贴在底板上；其中，结合垫上喷涂有示踪物标记的非生物素化抗体2；检测线包被有链霉亲和素与生物素化抗体1；质控线包被有羊抗鼠二抗；抗体1、抗体2分别结合抗原的不同表位。本发明利用生物素‑亲和素交联形成的网状结构，包被抗体（抗原）结合位点充分暴露，检测灵敏度大大提高；结构稳定，重复性好，试纸条稳定性好。

Description

免疫层析试纸条及其制备方法
技术领域
本发明涉及免疫分析技术领域，具体地说，涉及一种免疫层析试纸条及其制备方法。
背景技术
免疫层析技术出现于20世纪末，结合了免疫技术和色谱层析技术。最初以纳米金作为标记物，形成第一代胶体金技术，目前仍广泛应用于各个领域。经过科技的发展，各种标记物不断涌现，逐渐形成了第二代免疫荧光层析，第三代上转发光技术和量子点荧光技术和第四代的磁定量技术，逐渐从之前的定性检测，发展为现在的半定量或定量检测。免疫层析技术在即时检测(POCT)中应用极为广泛。
免疫层析由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、吸水纸、聚氯乙烯底板（PVC底板）五部分组成。其中NC膜上有质控线和检测线（C线和T线），液体样本从样品垫加入，向吸水纸一侧流动，经过结合垫时，结合垫上的免疫标记物（胶体金，彩色微球，荧光微球等）被释放，在流动过程中与样本中的待测物发生免疫反应，这种复合物上的待测物再被固定在NC膜上T线处的结合物捕获聚集，免疫标记物本身可与NC膜上C线处的结合物捕获聚集，从而形成光学信号。其原理示意图见图1。
在免疫层析技术的实际应用中，常因检测灵敏度低导致漏检，这时需要在大批原料中筛选出最高灵敏度的抗体配对，但有时在现有原料基础上，仍不能达到理想的检测灵敏度，为此需要优化实验方案，以提高检测灵敏度。
发明内容
本发明的目的是提供一种免疫层析试纸条及其制备方法。
本发明构思如下：常规包被方式是将包被抗体（抗原）直接划膜至NC膜检测线位置，包被抗体（抗原）之间相互独立，散乱分布于检测线，结合位点可能暴露不完全，导致结合效率低，灵敏度低。将包被抗体（抗原）生物素化后按一定比例与链霉亲和素预混划膜，其中每个链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，每条肽链都能结合一个生物素化抗体，这样形成四聚体结构或网状结构，此结构如同支架作用将包被抗体（抗原）有序排列到一起，结合位点充分暴露，且抗体排列有序聚集，从而提高检测灵敏度。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种免疫层析试纸条，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫和底板，所述NC膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次粘贴在底板上。
其中，所述结合垫上喷涂有示踪物标记的非生物素化抗体2；所述检测线包被有链霉亲和素与生物素化抗体1；所述质控线包被有羊抗鼠二抗；抗体1、抗体2分别结合抗原的不同表位。
所述结合垫上包被的抗体2的终浓度为0.5-2mg/mL，出液量为2-5μL/cm，喷液速度为50mm/s。
所述NC膜的检测线上包被的链霉亲和素的终浓度为0.1-1mg/mL，生物素化抗体1的终浓度为1-2mg/mL；所述NC膜的质控线上包被的羊抗鼠二抗的终浓度为1-2mg/mL；划线出液量为1-1.2μL/cm，划线速度为50mm/s。
所述底板可以是PVC板。
所述样品垫的材料可以是玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，其处理方法为：将样品垫浸泡在含0.5-5%海藻糖，0.5-2% BSA，0.05-0.2% PC-300的pH7.4的TBS溶液中，浸泡0.5-1h后取出，放入干燥箱中过夜烘干。
所述结合垫的材料可以是玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，其处理方法为：将结合垫浸泡在含0.5-5%海藻糖，0.5-2% BSA，0.5-2%吐温20的pH7.4的PBS溶液中，浸泡0.5-1h后取出，放入干燥箱中过夜烘干。
所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次以2-3mm的间距交互层叠黏贴到所述底板上，所述试纸条宽度为2.5-5mm，长度为60-80mm，检测线与质控线之间间距为4-10mm。
优选地，所述抗原为新冠病毒核衣壳蛋白Nucleocapsid（GenBank: YP_009724397.2），抗体1、抗体2分别为抗新冠Nucleocapsid的抗体AM221和AM222（购自Acrobiosystems），抗体1生物素化后命名为ABLM221。
第二方面，本发明提供免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：
（1）NC膜的制备：将NC膜贴到PVC底板中间，将链霉亲和素与生物素化抗体1混合作为检测线，将羊抗鼠二抗作为质控线，所述检测线与质控线之间间距为4-10mm；用划膜仪将对应抗体划至NC膜上，在37℃干燥箱中烘4-6h；
（2）结合垫的制备：将示踪物标记的非生物素化抗体2喷涂到结合垫上，在37℃干燥箱中烘2-4h；
（3）试纸条的组装：将所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次搭接地粘贴在PVC底板上，裁切成合适大小，即得免疫层析试纸条。
进一步地，步骤（1）包括：用含0-0.5%海藻糖pH为7.4的PBS溶液将生物素化抗体1与链霉亲和素混合，生物素化抗体1的终浓度为1-2mg/mL，链霉亲和素的终浓度为0.1-1mg/mL，以此混合液作为检测线；将羊抗鼠二抗稀释至1-2mg/mL，作为质控线，然后按1-1.2μL/cm的速度划线包被于NC膜上。
进一步地，步骤（2）包括：
1）胶体金溶液的配制
分别配制1%氯金酸水溶液和10%柠檬酸三钠水溶液，用0.22μm滤器过滤；向1000mL超纯水中加入20g 1%氯金酸水溶液，在磁力搅拌器上加热至沸腾，迅速加入2.35mL 10%柠檬酸三钠水溶液，持续加热搅拌煮沸7-8分钟至溶液呈透明的紫红色，停止加热，冷却至室温；
2）标记喷金
用0.1-0.2M K2CO3溶液将步骤1）配制的胶体金溶液调pH至抗体2的等电点附近，向1mL胶体金溶液中加入20-40μg抗体2，室温混匀20-30min，加入1% BSA封闭液封闭，室温混匀30min；然后4℃ 10000rpm离心20min，弃上清，加入复溶液复溶至30μL，然后按2-5μL/cm的喷量喷涂至结合垫上，干燥后即得结合垫。
进一步地，步骤（3）包括：将所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次以2-3mm的间距交互层叠黏贴到所述底板上，所述试纸条宽度为2.5-5mm，长度为60-80mm。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
利用生物素-亲和素交联形成的网状结构，包被抗体（抗原）结合位点充分暴露，检测灵敏度大大提高；结构稳定，重复性好，试纸条稳定性好。
附图说明
图1为本发明较佳实施例中免疫层析试纸条检测原理与组成。
图2为本发明较佳实施例中两种试纸条检测抗原结果。
具体实施方式
本发明提供一种免疫层析试纸条（胶体金试纸条），包括PVC底板、样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸（吸水垫），按图1依次黏贴在PVC底板上。其中NC膜上有质控线与检测线，检测线包被按一定比例混合的链霉亲和素与生物素化抗体1，结合垫上喷涂有胶体金标记非生物素化抗体2，抗体1和抗体2分别结合抗原的不同表位。当待检样本中含有一定量的抗原时，经样品垫流经结合垫，与结合垫上的抗体2结合形成复合物，然后流经NC膜上的检测线时，进一步结合检测线上的抗体2，形成抗体1-抗原-金标抗体2夹心物，一段时间后，NC膜检测线上出现一条紫红色线条；当检测样本中没有抗原时，结合垫上的抗体2无法与NC膜检测线上的抗体1形成夹心结构，此时检测线空白。
本发明生物素标记可以采用体内单点定点标记方式，也可以多点定点标记，也可以采用体外化学标记。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
以下实施例所用抗原为新冠病毒核衣壳蛋白Nucleocapsid，抗体1、抗体2分别为抗新冠Nucleocapsid的抗体AM221与AM222，抗体1生物素化后命名为ABLM221。
实施例1 免疫层析试纸条的制备
1、实验材料及试剂的准备
（1）胶体金溶液的配制
分别配制1%氯金酸（HAuCl4）水溶液和10%柠檬酸三钠水溶液，0.22μm滤器过滤备用。准确量取1000mL超纯水，加入20g 1%氯金酸水溶液，加热磁力搅拌器上加热至沸腾，迅速加入2.35mL 10%柠檬酸三钠水溶液，持续加热搅拌煮沸7-8分钟至溶液呈透明的紫红色，停止加热，冷却至室温。
（2）结合垫与样品垫预处理
将样品垫浸泡在含1%海藻糖，1% BSA，0.1% PC-300的pH7.4的TBS溶液中，将结合垫浸泡在含1%海藻糖，1% BSA，0.5%吐温20的pH7.4的PBS溶液中，半小时后取出沥干，置于37℃恒温鼓风干燥箱中，干燥24h，密封后置于低湿（相对湿度<20%）环境中。
2、试纸条的制作
将NC膜贴到PVC板中间位置。
（1）包被划膜：将羊抗鼠抗体稀释至1mg/mL，加入划膜仪1号泵中；将抗体ABLM221与链霉亲和素SA按摩尔比1:1混合，抗体ABLM221终浓度为1mg/mL，SA终浓度为0.36mg/mL，加入划膜仪3号泵中，划膜速度调为1μL/cm，在NC膜上分别包被质控线（C线）和检测线（T线）。将NC膜置于37℃恒温鼓风干燥箱中，烘干4h。另贴一张新的NC膜至PVC板，质控线与上述一致，将1mg/mL抗体AM221包被至检测线，作为对照。
（2）标记喷金：先用0.2M K2CO3溶液将胶体金溶液调至合适pH，1mL胶体金溶液加入20μg抗体AM222，室温充分混匀30min，加入1% BSA封闭液封闭，室温充分混匀30min。4℃10000rpm离心20min，弃上清，加复溶液（购自Acrobiosystems）复溶至30μL，用喷金仪按2μL/cm喷至结合垫上，按10mm×300mm裁剪，放37℃恒温鼓风干燥箱中，烘干2h。
（3）组装：将样品垫裁至25mm×300mm，吸水纸裁至27mm×300mm，按图1顺序组装后切条装卡。
实施例2 生物素抗体-亲和素不同组合方式对比
将抗体AM221、AM222生物素化后，分别命名为ABLM221、ABLM222。按表1组合，组装好试剂条后，检测高中低浓度及阴性抗原，用胶体金读数仪测定实验结果。胶体金读数结果见表2：
表1 生物素化抗体与亲和素不同组合方式
Figure 66047DEST_PATH_IMAGE001
表2 生物素抗体与亲和素不同组合方式胶体金读数仪结果
Figure 622930DEST_PATH_IMAGE002
从表2可以看出，与组合1（对照组）相比，组合7检测灵敏度提高最明显，其余方案无明显改善或灵敏度降低。组合2、组合6与组合1结果一致，说明将包被抗体与胶体金标记抗体生物化后不影响最终的灵敏度；组合3、组合5与组合1结果一致，说明胶体金标记的生物素化后抗体，加一个喷涂有Streptavidin（胶体金标记或未标记）的结合垫，此模式无法提高灵敏度；组合4与组合8较组合1灵敏度大大降低，这是由于间接法检测灵敏度较直接法低。
实施例3 SA与生物素化抗体混合比例的优化
保持生物素化抗体终浓度为1mg/mL，通过调整SA的量改变SA与生物素化抗体的预混比例，分别设置SA终浓度为45μg/mL、90μg/mL、180μg/mL、360μg/mL、720μg/mL、1440μg/mL、2880μg/mL，其他条件不变，分别制成试纸条，检测高中低浓度及阴性抗原。检测结果见表3：
表3 SA与生物素化抗体不同预混比例试纸条测抗原胶体金读数仪结果
Figure 411387DEST_PATH_IMAGE003
从表3可以看出，一定范围内，随着SA浓度不断升高，检测灵敏度不断增强，当SA浓度为360μg/mL时，灵敏度比包被不加SA的普通试纸条高4倍以上，灵敏度最强，之后随SA浓度提高，灵敏度无明显增强。因此最终选择SA浓度为360μg/mL为最佳。
实施例4 试纸条检测限测试
将抗原用稀释液（1×PBS，pH7.4）从100ng/mL按二倍梯度稀释，分别检测普通试纸条（对照组）与优化后试纸条（实验组），采用人工判读与胶体金读数仪两种方式判定实验结果。人工判读如图2所示，胶体金读数仪结果见表4：
表4 两种试纸条测抗原胶体金读数仪结果
Figure 547970DEST_PATH_IMAGE004
从图2可以看出，同一浓度的抗原，实验组T线颜色明显深于对照组，从表4可看出，对照组的检测检测限为1.56ng/mL，实验组检测限为0.39ng/mL，实验组灵敏度比对照组高4倍以上。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.免疫层析试纸条，其特征在于，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫和底板，所述NC膜上设有检测线和质控线，所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次粘贴在底板上；
其中，所述结合垫上喷涂有示踪物标记的非生物素化抗体2；所述检测线包被有链霉亲和素与生物素化抗体1；所述质控线包被有羊抗鼠二抗；抗体1、抗体2分别结合抗原的不同表位。
2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述示踪物为胶体金、彩色微球或荧光微球。
3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述抗体1、抗体2分别为AM221和AM222。
4.根据权利要求3所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述结合垫上喷涂的示踪物标记的抗体2的终浓度为0.5-2mg/mL，出液量为2-5μL/cm，喷液速度为50mm/s；和/或，
所述NC膜的检测线上包被的链霉亲和素的终浓度为0.1-1mg/mL，生物素化抗体1的终浓度为1-2mg/mL；所述NC膜的质控线上包被的羊抗鼠二抗的终浓度为1-2mg/mL；划线出液量为1-1.2μL/cm，划线速度为50mm/s。
5.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述底板为PVC板；和/或，
所述样品垫的材料为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，其处理方法为：将样品垫浸泡在含0.5-5%海藻糖，0.5-2% BSA，0.05-0.2% PC-300的pH7.4的TBS溶液中，浸泡0.5-1h后取出，放入干燥箱中过夜烘干；和/或，
所述结合垫的材料为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，其处理方法为：将结合垫浸泡在含0.5-5%海藻糖，0.5-2% BSA，0.5-2%吐温20的pH7.4的PBS溶液中，浸泡0.5-1h后取出，放入干燥箱中过夜烘干。
6.根据权利要求1-5任一项所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次以2-3mm的间距交互层叠黏贴到所述底板上，所述试纸条宽度为2.5-5mm，长度为60-80mm，检测线与质控线之间间距为4-10mm。
7.免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）NC膜的制备：将NC膜贴到PVC底板中间，将链霉亲和素与生物素化抗体1混合作为检测线，将羊抗鼠二抗作为质控线，所述检测线与质控线之间间距为4-10mm；用划膜仪将对应抗体划至NC膜上，在37℃干燥箱中烘4-6h；
（2）结合垫的制备：将示踪物标记的非生物素化抗体2喷涂到结合垫上，在37℃干燥箱中烘2-4h；
（3）试纸条的组装：将所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次搭接地粘贴在PVC底板上，裁切成合适大小，即得免疫层析试纸条。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（1）包括：用含0-0.5%海藻糖pH为7.4的PBS溶液将生物素化抗体1与链霉亲和素混合，生物素化抗体1的终浓度为1-2mg/mL，链霉亲和素的终浓度为0.1-1mg/mL，以该混合液作为检测线；将羊抗鼠二抗稀释至1-2mg/mL，作为质控线，然后按1-1.2μL/cm的速度划线包被于NC膜上。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（2）包括：
1）胶体金溶液的配制
分别配制1%氯金酸水溶液和10%柠檬酸三钠水溶液，用0.22μm滤器过滤；向1000mL超纯水中加入20g 1%氯金酸水溶液，在磁力搅拌器上加热至沸腾，迅速加入2.35mL 10%柠檬酸三钠水溶液，持续加热搅拌煮沸7-8分钟至溶液呈透明的紫红色，停止加热，冷却至室温；
2）标记喷金
用0.1-0.2M K2CO3溶液将步骤1）配制的胶体金溶液调pH至抗体2的等电点，向1mL胶体金溶液中加入20-40μg抗体2，室温混匀20-30min，加入1% BSA封闭液封闭，室温混匀20-30min；然后4℃ 10000rpm离心20min，弃上清，加入复溶液复溶至30μL，然后按2-5μL/cm的喷量喷涂至结合垫上，干燥后即得结合垫。
10.根据权利要求7-9任一项所述的方法，其特征在于，步骤（3）包括：将所述样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次以2-3mm的间距交互层叠黏贴到所述底板上，所述试纸条宽度为2.5-5mm，长度为60-80mm。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116400070A (zh) * 2023-06-07 2023-07-07 济南德亨医学科技有限公司 高通量定量检测过敏原特异性IgE抗体试剂的制备方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101566631A (zh) * 2008-04-24 2009-10-28 北京科美东雅生物技术有限公司 一种联合检测hiv-1+2抗体和p24抗原的磁性免疫层析试纸条及其制备方法
CN102103145A (zh) * 2011-02-24 2011-06-22 南京基蛋生物科技有限公司 一种双放大系统的胶体金试纸条及其制备方法
CN108181468A (zh) * 2018-02-02 2018-06-19 江苏维尔生物科技有限公司 用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸及其制备方法和使用方法
CN108196050A (zh) * 2018-02-02 2018-06-22 江苏维尔生物科技有限公司 用于检测唾液中人类免疫缺陷病毒抗体和梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸及其制备和使用方法
CN208607233U (zh) * 2018-06-29 2019-03-15 江苏达骏生物科技有限公司 同时定量检测喹诺酮、四环素和磺胺的试剂条和试纸卡
US20190219569A1 (en) * 2016-12-30 2019-07-18 Wuhan Newcando Biotechnology Co., Ltd. Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof
CN111521805A (zh) * 2020-05-12 2020-08-11 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 一种2019新型冠状病毒抗原检测试剂及其制备方法
CN112114140A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒
CN112114139A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgM-IgA-IgG抗体胶体金检测试剂盒
AU2021104366A4 (en) * 2021-07-21 2021-09-16 Hangzhou Zheda Dixun Biological Gene Engineering Co., Ltd. KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE)

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101566631A (zh) * 2008-04-24 2009-10-28 北京科美东雅生物技术有限公司 一种联合检测hiv-1+2抗体和p24抗原的磁性免疫层析试纸条及其制备方法
CN102103145A (zh) * 2011-02-24 2011-06-22 南京基蛋生物科技有限公司 一种双放大系统的胶体金试纸条及其制备方法
US20190219569A1 (en) * 2016-12-30 2019-07-18 Wuhan Newcando Biotechnology Co., Ltd. Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof
CN108181468A (zh) * 2018-02-02 2018-06-19 江苏维尔生物科技有限公司 用于检测唾液中梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸及其制备方法和使用方法
CN108196050A (zh) * 2018-02-02 2018-06-22 江苏维尔生物科技有限公司 用于检测唾液中人类免疫缺陷病毒抗体和梅毒螺旋体抗体的胶体金试纸及其制备和使用方法
CN208607233U (zh) * 2018-06-29 2019-03-15 江苏达骏生物科技有限公司 同时定量检测喹诺酮、四环素和磺胺的试剂条和试纸卡
CN111521805A (zh) * 2020-05-12 2020-08-11 北京倍肯恒业科技发展股份有限公司 一种2019新型冠状病毒抗原检测试剂及其制备方法
CN112114140A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgA抗体胶体金检测试剂盒
CN112114139A (zh) * 2020-09-11 2020-12-22 博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 一种新型冠状病毒IgM-IgA-IgG抗体胶体金检测试剂盒
AU2021104366A4 (en) * 2021-07-21 2021-09-16 Hangzhou Zheda Dixun Biological Gene Engineering Co., Ltd. KIT FOR DETECTING DUST MITE COMPONENT-SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN E (sIgE)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116400070A (zh) * 2023-06-07 2023-07-07 济南德亨医学科技有限公司 高通量定量检测过敏原特异性IgE抗体试剂的制备方法
CN116400070B (zh) * 2023-06-07 2023-08-18 济南德亨医学科技有限公司 高通量定量检测过敏原特异性IgE抗体试剂的制备方法

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