CN113832155B

CN113832155B - 一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用

Info

Publication number: CN113832155B
Application number: CN202111221030.1A
Authority: CN
Inventors: 廖卫捷; 张雅鸥
Original assignee: Shenzhen International Graduate School of Tsinghua University
Current assignee: Shenzhen International Graduate School of Tsinghua University
Priority date: 2021-10-20
Filing date: 2021-10-20
Publication date: 2024-01-02
Anticipated expiration: 2041-10-20
Also published as: CN113832155A

Abstract

本发明公开了生物技术领域的一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用。本发明提供肝癌相关的肿瘤标志物为LncRNA，命名为LncC2orf49‑DT，其具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。LncC2orf49‑DT的高表达与肝癌患者的不良预后密切相关，将LncC2orf49‑DT作为肝癌的标志物，为肝癌的预后评估及疗效监测提供有效信息，可作为指导肝癌治疗的新生物靶点。本发明提供的LncC2orf49‑DT表达抑制剂siRNA，在用于LncC2orf49‑DT的表达抑制时，干扰效果好，具有临床应用潜力。

Description

一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用。

背景技术

2020年最新的全球癌症统计数据显示，肝癌是极为常见的恶性肿瘤之一，其发病率居第6位，死亡率居第4位。肝癌严重危害居民的健康，我国肝癌患者的5年生存率仅为14.1％。目前，手术切除联合放化疗被认为是治疗早期肝癌的最有效手段。但其疗效仍十分有限，术后复发率较高，导致肝癌患者的总体预后极差。因此，进一步寻找肝癌治疗的新型靶标迫在眉睫。

长链非编码RNA(Long noncoding RNA,LncRNA)是指超过200个核苷酸但没有蛋白编码功能的的非编码RNA，但其可参与多种表观遗传调控过程，如基因印迹、转录调控及染色质修饰等。近年来，LncRNA被发现与恶性肿瘤相关。已有多个LncRNA被揭示参与恶性肿瘤的发生发展，例如LncRNA H19在食管癌中高表达，介导癌细胞的EMT进程，而促进其转移；LncRNA HOTAIR在乳腺癌中显著高表达，上调HOXD10、PCDH等原癌基因的表达，促进了癌细胞的增殖及转移能力。LncC2orf49-DT是一个新发现的长链非编码RNA。但LncC2orf49-DT是否参与恶性肿瘤的发生发展的过程及是否可以作为一种新的治疗靶点应用于肝癌的治疗至今未见有报道。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用。具体地：

本发明第一方面提供一种肝癌相关的肿瘤标志物，其为LncRNA,命名为LncC2orf49-DT，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。编码该LncC2orf49-DT的基因GenBank号为100506473，2021年7月24号。

本发明第二方面提供一种所述肝癌相关的肿瘤标志物的检测引物对，所述引物对具有如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，或如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。

具体地，肝癌相关的肿瘤标志物的检测引物对如下：

引物对1：

正向引物：5’-TTGAAAGAAAGGAGGAGGG-3’；(SEQ ID NO.2)

反向引物：5’-TGTTGAGTGCGTTATGGTT-3’。(SEQ ID NO.3)

引物对2：

正向引物：5’-AAGGTTACTCCCGCTACAC-3’；(SEQ ID NO.4)

反向引物：5’-GTCCCAGAGGAACTCACAA-3’。(SEQ ID NO.5)

本发明第三方面提供所述的肿瘤标志物在制备肝癌辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。

本发明第四方面提供一种肝癌辅助诊断试剂，包括检测所述LncC2orf49-DT的特异性引物对和内参基因的特异性引物对；

优选地，所述检测LncC2orf49-DT的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，或如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示；

优选地，所述内参基因为ACTB；

优选地，所述ACTB的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

具体地，LncC2orf49-DT的特异性引物对、ACTB的特异性引物对如下：

LncC2orf49-DT的特异性引物对：

引物对1：

正向引物：5’-TTGAAAGAAAGGAGGAGGG-3’；(SEQ ID NO.2)

反向引物：5’-TGTTGAGTGCGTTATGGTT-3’。(SEQ ID NO.3)

引物对2：

正向引物：5’-AAGGTTACTCCCGCTACAC-3’；(SEQ ID NO.4)

反向引物：5’-GTCCCAGAGGAACTCACAA-3’。(SEQ ID NO.5)

ACTB的特异性引物对：

正向引物：5’-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3’；(SEQ ID NO.6)

反向引物：5’-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3’。(SEQ ID NO.7)

本发明第五方面提供一种肝癌辅助诊断试剂盒，包括所述的肝癌辅助诊断试剂。

本发明第六方面提供一种LncC2orf49-DT表达抑制剂，所述表达抑制剂为抑制LncC2orf49-DT表达的siRNA或shRNA；

优选地，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，或如SEQ IDNO.10和SEQ ID NO.11所示；

优选地，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示，或如SEQID NO.14和SEQ ID NO.15所示；

优选地，所述shRNA连接在质粒表达载体或病毒表达载体上。

具体地，所述siRNA的核苷酸序列为：

siRNA-1序列：

正义链5’-GCUACACUAUCAUCUGUAA-3’,(SEQ ID NO.8)

反义链5’-UUACAGAUGAUAGUGUAGC-3’；(SEQ ID NO.9)

siRNA-2序列：

正义链5’-GGAGAGUUCUUGUAUCCUA-3’,(SEQ ID NO.10)

反义链5’-UAGGAUACAAGAACUCUCC-3’。(SEQ ID NO.11)

所述shRNA的核苷酸序列为：

shLncC2orf49-DT-1序列：

正义链5’-CCGGGCTACACTATCATCTGTAACTCGAGTTACAGATGATAGTGTAGCTTTTTG-3’,(SEQ ID NO.12)

反义链5’-AATTCAAAAAGCTACACTATCATCTGTAACTCGAGTTACAGATGATAGTGTAGC-3’；(SEQ ID NO.13)

shLncC2orf49-DT-2序列：

正义链5’-CCGGGGAGAGTTCTTGTATCCTACTCGAGTAGGATACAAGAACTCTCCTTTTTG-3’,(SEQ ID NO.14)

反义链5’-AATTCAAAAAGGAGAGTTCTTGTATCCTACTCGAGTAGGATACAAGAACTCTCC-3’。(SEQ ID NO.15)

本发明第七方面提供LncC2orf49-DT表达抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用。

本发明第八方面提供一种治疗肝癌的药物组合物，包括LncC2orf49-DT表达抑制剂。

进一步地，所述的药物组合物中，所述LncC2orf49-DT表达抑制剂为siRNA，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，或如SEQ ID NO.10和SEQ IDNO.11所示。

本发明的有益效果为：

1、本发明发现肝癌中LncC2orf49-DT表达较癌旁组织显著升高(P<0.001)，LncC2orf49-DT高表达不利于肝癌患者的总体生存(P＝0.0011)，且敲低LncC2orf49-DT时，肝癌细胞HepG2的克隆形成和迁移显著被抑制。LncC2orf49-DT的高表达与肝癌患者的不良预后密切相关，提示LncC2orf49-DT可以作为肝癌的预后标志物，为肝癌的预后评估及疗效监测提供有效信息。因此，LncC2orf49-DT可作为指导肝癌治疗的新生物靶点。

2、本发明提供的LncC2orf49-DT表达抑制剂siRNA，在用于LncC2orf49-DT的表达抑制时，干扰效果好，具有临床应用潜力。

附图说明

图1示出了TCGA数据分析肝癌中LncC2orf49-DT的表达。肝癌组织中LncC2orf49-DT的表达量显著高于正常组织(P<0.001)，LncC2orf49-DT的表达量与病人病程进展(stageI-II-III)显著相关(P<0.05)。

图2示出了TCGA数据分析LncC2orf49-DT高表达对肝癌患者生存的影响。LncC2orf49-DT高表达不利于肝癌患者的总体生存(P＝0.0011)。

图3示出了稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株中LncC2orf49-DT的RNA水平显著降低。

图4示出了敲低LncC2orf49-DT后，HepG2细胞的增殖显著下降。

图5示出了敲低LncC2orf49-DT后，HepG2细胞的迁移能力显著下降。

具体实施方式

为了更清楚地理解本发明，现参照下列实施例及附图进一步描述本发明。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本发明。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。

实施例1

本实施例用于说明TCGA数据分析肝癌中LncC2orf49-DT的表达量变化。

1.TCGA数据分析过程:

进入TCGA官网(https://cancergenome.nih.gov)，使用官网的GDC client工具下载肝癌(LIHC)RNA-Seq中的HTSeq-FPKM数据，获得包含样本编号和基因HTSeq-FPKM数据的表达矩阵。使用GraphPad Prism 8.0分析肝癌组织和癌旁组织的HTSeq-FPKM矩阵中LncC2orf49-DT的表达数据并绘图，统计分析方法为Mann-Whitney U检验。

进入TCGA官网(https://cancergenome.nih.gov)，使用GDC client工具下载肝癌(LIHC)的临床数据(clinical)获得样本编号与各项临床数据的矩阵。提取各样本中LncC2orf49-DT的HTSeq-FPKM数据和肿瘤TNM分期数据中的stage(T)数据。使用GraphPadPrism 8.0分析不同肿瘤分期的肝癌组织的HTSeq-FPKM矩阵中LncC2orf49-DT的表达量并绘图，统计分析方法为one way ANONA。

2.结果：肝癌组织中LncC2orf49-DT的表达量显著高于正常组织(P<0.001)，如图1中的A所示。随着肿瘤发展的进程，LncC2orf49-DT的表达量逐渐升高(p<0.05)，如图1中的B所示。表明LncC2orf49-DT的表达量的升高与肝癌的发生和发展相关。

实施例2

本实施例用于说明TCGA数据分析表明LncC2orf49-DT高表达与肝癌患者的预后关系。

1.TCGA数据分析过程：

进入TCGA官网(https://cancergenome.nih.gov)，使用GDC client工具下载肝癌(LIHC)的临床数据(clinical)获得样本编号与各项临床数据的矩阵。提取各样本中LncC2orf49-DT的HTSeq-FPKM数据，样本的生存状态及生存天数数据。使用Kaplan-Meier法获得生存曲线，log-rank检验生存曲线差异，P＜0.05表明具有统计学意义。

2.结果：LncC2orf49-DT的高表达不利于肝癌患者的总体生存(P＜0.01)，如图2所示。

实施例3

本实施例提供一种稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株的构建方法，细胞株具体的为HepG2肝癌细胞株。HepG2肝癌细胞购于美国ATCC公司，用含有10％胎牛血清的DMEM培养基(购于Thermo Fisher Scientific公司)置于37℃、5％的CO₂条件下进行培养。

1.构建方法为：

(1)设计用于阴性对照shRNA和干扰LncC2orf49-DT表达的和2个shRNA

阴性对照shRNAshNC序列：

正义链5’-CCGGTTCTCCGAACGTGTCACGTCTCGAGACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTG-3’；(SEQ ID NO.16)

反义链5’-AATTCAAAAATTCTCCGAACGTGTCACGTCTCGAGACGTGACACGTTCGGAGAA-3’。(SEQ ID NO.17)

shLncC2orf49-DT-1序列：

shLncC2orf49-DT-2序列：

(2)利用shRNA法构建可稳定过表达LncC2orf49-DT特异性siRNA的HepG2细胞系

分别将上述(1)中的shNC、shLncC2orf49-DT-1和shLncC2orf49-DT-2的正义链和反义链退火后插入到pLKO.1载体(购自addgene公司)的限制性内切酶Agel和EcoRl识别位点之间得到shNC、shLncC2orf49-DT-1和shLncC2orf49-DT-2的shRNA质粒。将上述质粒分别用Lipofectamine3000转染至HepG2细胞系，48小时后开始用2ug/ml的嘌呤霉素筛选，存活的细胞即为可以表达阴性对照shNC和干扰LncC2orf49-DT的表达的shLncC2orf49-DT-1和shLncC2orf49-DT-2细胞系。

(3)基因敲低效果检测

使用RNAiso plus(购于TaKaRa公司)提取的(2)中细胞的总RNA，然后用ReverTraAceqPCR RT试剂盒(购于TOYOBO公司)反转录成cDNA。使用SYBR Green RealTimePCRMaster Mix(购于TOYOBO公司)进行荧光定量PCR，以β-actin(ACTB)作为内参基因，每实验重复三次。

用于实时荧光定量检测LncC2orf49-DT表达的引物对为以下两对中的任意一对：

引物对1：

正向引物：5’-TTGAAAGAAAGGAGGAGGG-3’；(SEQ ID NO.2)

反向引物：5’-TGTTGAGTGCGTTATGGTT-3’。(SEQ ID NO.3)

引物对2：

正向引物：5’-AAGGTTACTCCCGCTACAC-3’；(SEQ ID NO.4)

反向引物：5’-GTCCCAGAGGAACTCACAA-3’。(SEQ ID NO.5)

内参基因ACTB PCR引物对：

正向引物：5’-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3’；(SEQ ID NO.6)

反向引物：5’-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3’。(SEQ ID NO.7)

2.结果：图3显示稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株(shLncC2orf49-DT-1和shLncC2orf49-DT-2)与对照细胞株(shNC)中LncC2orf49-DT的RNA表达情况，由图3可知，与对照组细胞相比，构建的稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株中LncC2orf49-DT的表达量下降约60％，说明细胞株中LncC2orf49-DT敲低成功，该方法可筛选得到LncC2orf49-DT稳定低表达的肝癌细胞。

实验例4

本实施例利用实施例3中构建的稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株，检测LncC2orf49-DT对肝癌细胞增殖及迁移的影响。

1.具体检测内容为：

(1)细胞克隆形成实验

将shNC细胞和shLncC2orf49-DTsh-1以及shLncC2orf49-DT-2细胞制成浓度为5×10³个/ml的悬液，加入2ml于6孔板中。待细胞长到大小肉眼可见的细胞团后，去除培养基，用甲醇固定15分钟，然后用PBS洗两次，晾干。随后加入0.5％的结晶紫溶液染色10分钟，在用超纯水洗干净，晾干后拍照。

(2)细胞迁移实验

实验前48h，将肿瘤细胞接种于10cm的培养皿中(以2×10⁶/皿)。采用胰酶消化使细胞浓度为2×10⁵/ml。将3×10⁴个细胞(于150μl无血清DMEM中)接种到24孔小室中进行迁移实验，下室加入650ul的含血清的DMEM中。常规条件培养24h后，使用甲醇固定5min，再用0.5％结晶紫染色15分钟，自来水清洗，用棉签去除未迁移的细胞。室温晾干，在光学显微镜下拍照观察。

2.结果：图4显示稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株与对照细胞株的细胞增殖检测结果。由图4可知，LncC2orf49-DT的表达对肝癌细胞的增殖有显著影响。图5显示稳定敲低LncC2orf49-DT的细胞株与对照细胞株的细胞迁移检测结果。由图5可知，肝癌细胞在敲低LncC2orf49-DT后，其迁移能力明显降低，表明肝癌细胞的迁移与LncC2orf49-DT的表达显著相关。说明LncC2orf49-DT参与肝癌的发生发展，可作为临床对肝癌的疗效监测、预后评估的指标，为肝癌的诊断及靶向治疗提供有力依据，提高患者的生存率。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

SEQUENCE LISTING

<110> 清华大学深圳国际研究生院

<120> 一种肝癌相关的肿瘤标志物及其应用

<130> CP121011027C

<160> 17

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 3449

<212> RNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

augccgggcu ccuucucucg cugcugguuc ggguguuggg gccugguccc gcuugcaaaa 60

gcucccacgg accagagaaa agaggaggau gucagacgua gaaacaaaug gcgugucaag 120

uuucgcagga agagagggaa gagugaagcu ccgggagcca gccacgauua gucgcgccuu 180

cugugacguc caauggcaga ggucaaaggg auuccugggg caaccucgag ggaaagaauu 240

cuggcuccga gggccggugu acagugcuuu aaauauggca gugguuaugu gugaaauuau 300

cguguuuuuc uguuuaaccu guuucuuguc ucuucaucgc cuuucuauau aauguaagac 360

cagaggcuuu auguagugaa uucccuguaa ccccggcugc uuggacagau agguauucaa 420

guauuuguuu cuugaaguaa uccucugaau uaacuugcuc acauguaaaa aauaauaacg 480

ggcugggaaa cgccaguaau agccgccaaa cguuuguuag acauuuacag ugugccaggg 540

acugcauuuu acguguauua ucacauuccu cagaacagcc uaaugaggua uauauuacua 600

gaaugccuau uuuucagaug aggaaacuga ugcauagaaa ggauaauuua cucaagagcg 660

aggaaguagc aagcauaaaa uccgaguaca uuuuuuucug cauguauuaa uagguacaau 720

gaaguaacuu uuuaaauugc uguagguauc aaucauaguc uuaauuccca guaauucacu 780

uacuaagaaa uauuuucugc uucucuuuca ucauucaugg gagagauaca uaucccuaaa 840

uauuuugcac auuuaaaacu uaaacuuggg uaugguggcu uaugccugua aucacggcgu 900

uuugggaggc ucagguggga ggauugcuug aguccaggag uuccaggcca gccugggcca 960

cauaguaaga ccccguaucu acaaaaaaua aaaaaaaaau uaaccgggca ugguaguguc 1020

ucuguaguac uagcuacucg ggaggcugag gugguaggau cacuggcgcc cagcaauucc 1080

agccugcagu uaggauuacc acacugcacu ucagccugag cggcagaaug ggaccauguc 1140

ugaaaaaaua aauaaaaaau aaaacuugca gguauguucu gaauguuuau uguaugcauc 1200

cucuaugagg uaucauuuua uuggaaauua uugcauuguc uacaaaaaua ugaagaacuc 1260

ugaagaugcc aaaagauaaa ccgugaaaga guacuagaag ugagcuccuc aaaaagauaa 1320

agcugagaag uguuucccaa uuuuucuuac ucauuuaugu auguaauacu uuaugucuag 1380

aaacugaauu ucagagcugg gagggaacuu aaaaguuagu ccaguucuuu cauguuagug 1440

ccaagaaagc ugaucagaaa gagauuaaau gacuugccca aaauugaaua gucuuaaauc 1500

ugagcugagg caggcgucug aaugucuuaa auuggaguua aauguauuag cgucauagua 1560

uuaacaucau cauauuccau aucucucaaa ucugauuuga uuuucauuac aauagagaaa 1620

uaagugugau uaguauuauc cccauuuccu ucaccgggag gcacauuguu uuaguaucaa 1680

aagcagcuac cuugggagaa uccggggcua gaaaccugac uucauuucaa guuuuacucu 1740

uguugcacca aaaccuuggg ugaguuaguu ucucagccuc aguccccuca ucaggaaaau 1800

gcuguguuag cacuuucugu gaagaaugau caaaggagug gagauuaugg agauuauaaa 1860

cacacuugac acaguaagug uuuaagaacu gguagcugau uuuuacaaag uuauggguca 1920

uagaaggcag uuuagagaaa agggcaggcu uuggaguagc ucaguuguau uauaaccuug 1980

gcuucuuuac ucaccuagga cauacauucu cucuuuagcu guagcuuccu cccuucugag 2040

auggaaauua uaagccaucu cacaguguug ugaggauugg agcucaagug uguaaaaugc 2100

cuccucugug ggcucuccuu ggagaguucu uguauccuau ugauugucau caaaggaaaa 2160

aaguggcagg augauggcau aagugggaag aaccuugagu uuaauagucu gaaaaagugg 2220

uuacagguuc uugcuaugcu uuuccucucu gugguuuucu gaacccaucg ccuaaccuga 2280

agccuuaaac uucaucugca aaaauguuuu guggcaggua agaugucuuu uuuuucuucc 2340

aguacuuccc aguuuaaaac uaagaguacu uccuugcuua uaacuaauuc uauuaauauu 2400

auucuaggug acucugaagc agaacucuug agauggaagg auugucaucu gaggaaaaaa 2460

aaucaagauu aagagaggag gaacuagaau gagauucaca uaccgucucu ccuccaaggg 2520

aaggagagag uggugaugcc ugcccacucc uuccugggca gaacauuugu agcauggaac 2580

auuggagaau uugcagucug cugacuuucu gauuuaggag guugaugggg aggccuuaua 2640

auuugcauuu cuaacaaguu cugaggugau gcuucaagua uguccaggca gaagggcugc 2700

cucacagaga auucugccau accacauggg aauugaaguc acagacaucu cuaacccuca 2760

agccugaaac caaaagacug aaaaccaaca cuacagugga caaagaacau cucugaacuu 2820

guguggggac cagugacaca aggaccuaag gucucucucu ucucaucuug gcacuucaga 2880

agucucccca aucuugacaa agcccuggag aaagggccgg gccucccguu gauaagaaua 2940

ucacugcaga uaaauggagg uuucaaauug aaagaaagga ggagggccuc cuguugauaa 3000

gauuauuguc acugcaggua aauggaggcu ucaaauagaa auacauuuca guuacagaaa 3060

aaaaaauuau cuuuguuaca cauuugaguu ugcaggccua agguuacucc cgcuacacua 3120

ucaucuguaa ccauaacgca cucaacauuu uaagcuaacu auaaggauug uugcuucacu 3180

caaagauccu gagguuuuau ucacuaacau uuuuauuugg ugacuauagu ugacaagaac 3240

aaagcugugg ggaaccaaca aacacugcaa ugccuggcau ugucaccuca cuagauugug 3300

aguuccucug ggacaggguc cguacauuuu cuuagaaucc cucacuuagc cauuagccug 3360

cacagugcuu guacuuagua agugcucagu aaauguuugu ggaaugaaug caugaugaac 3420

aaaauauaua cugaggacuc uugguguug 3449

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ttgaaagaaa ggaggaggg 19

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

tgttgagtgc gttatggtt 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

aaggttactc ccgctacac 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

gtcccagagg aactcacaa 19

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

tgacgtggac atccgcaaag 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

ctggaaggtg gacagcgagg 20

<210> 8

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 8

gcuacacuau caucuguaa 19

<210> 9

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 9

uuacagauga uaguguagc 19

<210> 10

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 10

ggagaguucu uguauccua 19

<210> 11

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<400> 11

uaggauacaa gaacucucc 19

<210> 12

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ccgggctaca ctatcatctg taactcgagt tacagatgat agtgtagctt tttg 54

<210> 13

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

aattcaaaaa gctacactat catctgtaac tcgagttaca gatgatagtg tagc 54

<210> 14

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ccggggagag ttcttgtatc ctactcgagt aggatacaag aactctcctt tttg 54

<210> 15

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

aattcaaaaa ggagagttct tgtatcctac tcgagtagga tacaagaact ctcc 54

<210> 16

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

ccggttctcc gaacgtgtca cgtctcgaga cgtgacacgt tcggagaatt tttg 54

<210> 17

<211> 54

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

aattcaaaaa ttctccgaac gtgtcacgtc tcgagacgtg acacgttcgg agaa 54

Claims

1.肿瘤标志物在制备肝癌辅助诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述肿瘤标志物为LncRNA，命名为LncC2orf49-DT，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝癌辅助诊断试剂包括检测所述LncC2orf49-DT的特异性引物对和内参基因的特异性引物对。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测LncC2orf49-DT的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，或如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示；

所述内参基因为ACTB；

所述ACTB的特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝癌辅助诊断试剂盒包括所述的肝癌辅助诊断试剂。

5.LncC2orf49-DT表达抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述LncC2orf49-DT的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述LncC2orf49-DT表达抑制剂为抑制LncC2orf49-DT表达的siRNA或shRNA。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示，或如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示；

所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示，或如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示；

所述shRNA连接在质粒表达载体或病毒表达载体上。