CN113827701B - 抑制烫伤病菌的多肽在制备化妆品或药物组合物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抑制烫伤病菌的多肽在制备化妆品或药物组合物中的用途。本发明通过计算机模拟预筛选并通过抑菌实验筛选获得了2个即能针对耐药金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌具有较好抑制活性同时还有一定抗氧化活性的多肽,所述多肽在针对小鼠模型进行活性验证,证明了具有较好的促进皮肤修复的效果,它可以用作化妆品防腐剂,因为它与目前在将来普遍使用的化妆品防腐剂组分相比表现出高得多的抗菌效果,也可以用于制备抗菌药物组合物,具有较好的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品或者药物领域,具体的涉及一种抑制烫伤病菌的多肽在制备化妆品或药物组合物中的用途。
背景技术
皮肤覆盖于人体表面,形成人体的第一道保护屏障,阻挡病原体及异物的侵入,并防止体液流失;同时,皮肤还具有代谢、调节体温等作用,是人不可或缺的组织器官。而一旦皮肤遭到破坏,原有的组织结构受损,则皮肤的保护作用、代谢作用、调节体温作用等均消失。如果皮肤破坏比较严重,则患者还有生命危险。由此可见,保护皮肤免受伤害非常重要。然而,在现实生产、生活及工作中,人们常因疏忽而发生烧伤,身体皮肤在热力作用下发生不同程度的损坏。烧伤事件发生之后,第一要义是减轻损伤,所以,除了事发当时的急救处理之外,还需对烧伤皮肤进行修复治疗,防止烧伤创面出现瘢痕增生、挛缩,提高患者的生命质量。
中药对烧伤的治疗和研究报道较多,历代古人总结出许多治疗烧伤的药方,根据作用大致分为抗菌消炎药、收敛结痂药、脱痂药、生肌收口药等。例如解毒烧伤膏是根据紫草膏、生肌玉红膏方剂加减而制成的一种纯中药外用软膏剂,丰要由生地、大黄、黄柏、地榆、丹皮等中药组成,具有凉血、解毒、活血止痛、祛腐生肌、促进组织修复的作用。现代药理研究表明,其主要成份之一大黄有良好的活血、止血、退热、抑菌、消炎、抗病毒、消除外毒素、增强细胞免疫、稳定机体内环境等作用。但是中药成分复杂,机理不明。
近年来,干细胞研究理论逐渐成熟,在此基础上出现的干细胞治疗法也得到越来越多的应用。目前,临床中应用的干细胞治疗方法主要包括表皮干细胞移植等。其中,表皮干细胞移植、胚胎干细胞移植、富血小板血浆等细胞移植可使皮肤微环境、毛发再生,骨镛间质干细胞移植可以促进创面愈合、减少瘢痕形成,胚胎干细胞具有无限的增生能力,将其植入人体可以使受损的神经存活、再生。需要指出的是,干细胞治疗技术目前还处于完善阶段,仍存在一些争议,但
目前在烧伤治疗中常用的药物主要是以抗感染为主的药物。如磺胺嘧啶银、磺胺嘧啶锌、磺胺米隆、硝酸银、硝酸铈、喹诺酮类银盐等,这些药已得到广泛应用,抗感染作用确切。磺胺嘧啶银杀菌范围广泛,对革兰阴性菌作用强,尤其对铜绿假单胞菌、变形杆菌和大肠杆菌效果更为显著,对真菌也有一定作用。为了治疗面部烧伤创面有关人员研制了磺胺嘧啶银软膏面膜,效果较好。抗菌肽是一种小分子的多肽类物质,具有广谱抗菌活性,且只对原核生物有作用,而对真核生物无害。抗菌肽是生物防御系统中产生的一类对抗外源性病原体的肽类物质,是生物天生的、非特异性防御系统的重要组成部分。抗菌肽可与革兰阴性菌外膜的脂多糖或革兰阳性菌表面的肽聚糖结合,使其被破坏而形成穿膜通道,胞内离子大量流出,细胞因高渗破裂而死亡,不易产生耐药性。另外它还具有免疫调节、促进损伤皮肤修复、中和内毒素及对抗脓毒性休克的作用。
目前,采用多肽类治疗烫伤的药物还不够多,提供的治疗烫伤的可选择类型也不够多,是目前急需解决的问题。
发明内容
本发明涉及一种皮肤损伤修复的治疗药物或者美容产品。
一方面,本发明提供一种能够促进创面愈合的多肽,所述多肽为SX-22,其氨基酸如SEQ ID NO:1所示。
在本发明的优选实施方案中,所述SX-22肽针对金黄色葡萄球菌ATCC29213(耐药菌,MRSA),铜绿假单胞菌ATCC27853(耐药菌,RPA,大肠埃希菌ATCC25922(耐药菌,RECO)表现出更强的抗菌活性。
在本发明的又一个实施方案中,提供了包含所述抗菌肽SX-22的化妆品组合物的化妆品。
所述化妆品组合物的制剂可在本领域常规制备的任何制剂中制备,可作为皮肤外用软膏,奶油,柔软化妆水,营养化妆水,包装,香精,生发剂,洗发剂,漂洗,护发素,头发处理,凝胶,皮肤洗剂,一种乳洗液,保湿洗液,营养洗液,按摩膏,营养膏,冰淇淋,保湿膏,护手霜,粉底,营养精华,防晒霜,肥皂,清洁泡沫,清洁洗液,清洁膏,沐浴露和身体清洁剂。这些制剂中的每一种的组合物可以包含对于制剂是必需的和合适的各种碱和添加剂,并且这些组分的类型和量可以由本领域技术人员容易地选择。
当制剂为糊剂时,乳膏或凝胶,动物油,植物油,蜡,石蜡,淀粉,着色剂,纤维素衍生物,聚乙二醇,硅氧烷,膨润土,二氧化硅,滑石,氧化锌等可用作载体组分。
当制剂是粉末或喷雾剂时,乳糖,滑石,二氧化硅,氢氧化铝,硅酸钙或聚酰胺粉末可以用作载体组分,特别是当制剂是喷雾剂时,并且可以另外包含推进剂,例如氯氟烃,丙烷/丁烷或二甲醚。
当制剂为溶液或乳剂时,使用溶剂,增溶剂或乳化剂作为载体组分,如水,乙醇,异丙醇,碳酸乙酯,乙酸乙酯,苯甲醇,苯甲酸苄酯,丙二醇,1,3-丁二醇油,甘油脂肪酸酯,聚乙二醇或失水山梨糖醇的脂肪酸酯。
本发明另外一方面,提供一种具有抗氧化同时抗菌作用的药物组合物,所述药物组合物中含有SX-22的多肽,所述多肽的序列如SEQ ID NO:1所示。
进一步的,所述药物组合物中还含有药学上可接受的载体。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂,分散介质,涂层,抗菌剂和抗真菌剂,等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和试剂用于药物活性物质的用途在本领域中是众所周知的。除了任何常规的介质或试剂与活性成分不相容之外,本发明还涉及其在本文所公开的治疗组合物中的用途。补充活性成分也可以被掺入到药物组合物中。
另一方面,本发明还涉及一种或多种所公开的多肽在制备药物中的用途。在一些实施方案中,使用合适的递送方法,单独或与任何其它所需治疗剂联合给予多肽。所公开的治疗有用的药剂可以通过例如以下途径之一给药:口服,例如以糖衣,包衣片剂,丸剂,半固体物质,软胶囊或硬胶囊,溶液,乳剂或悬浮液的形式;胃肠外,例如,以可注射溶液的形式;直肠栓剂形式;通过吸入,例如,以粉末制剂或喷雾剂的形式;和/或经皮或鼻内。用于制备这种片剂,丸剂,半固体物质,包衣片剂,锭剂和硬明胶胶囊,该可治疗产品可与药理学惰性,无机或有机药物载体物质混合,例如与乳糖,蔗糖,葡萄糖,明胶,麦芽,硅胶,淀粉或其衍生物,滑石,硬脂酸或其盐,脱脂奶粉等混合。为了制备软胶囊,可以使用药物载体物质,例如植物油,石油,动物油或合成油,蜡,脂肪和多元醇。为了制备液体溶液和糖浆,可以使用药物载体物质,例如水,醇,盐水水溶液,右旋糖水溶液,多元醇,甘油,植物油,石油和动物或合成油。对于栓剂,可以使用药物载体物质,例如植物油,石油,动物油或合成油,蜡,脂肪和多元醇。对于气溶胶制剂,可以使用适于此目的的压缩气体,例如氧,氮和二氧化碳。药学上可接受的试剂还可以包括用于保存和稳定的添加剂,乳化剂,甜味剂,香料环,用于改变渗透压的盐,缓冲剂,包封添加剂和/或抗氧化剂。对于本领域技术人员来说,在考虑了本发明的公开内容后,许多构造和变化将是显而易见的。
有利的效果
本发明通过计算机模拟预筛选并通过抑菌实验筛选获得了2个即能针对耐药金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌具有较好抑制活性同时还有一定抗氧化活性的多肽,所述多肽在针对小鼠模型进行活性验证,证明了具有较好的促进皮肤修复的效果,它可以用作化妆品防腐剂,因为它与目前在将来普遍使用的化妆品防腐剂组分相比表现出高得多的抗菌效果,也可以用于制备抗菌药物组合物,具有较好的应用价值。
附图说明
图1创面抑菌功能测定结果图
图2创面愈合检测结果图
具体实施例方式
应当理解,可以使用其它实施例,并且可以在不脱离本发明的范围的情况下进行逻辑改变。因此,下面的详细描述不应被认为是限制性的,本发明的范围由所附权利要求限定。下面提供的实施例进一步说明和举例说明了这里提供的多肽。应当理解,本公开的范围不以任何方式受到以下实施例和制备的范围的限制。在以下实施例中,除非另有说明,所有的组分可通过本领域技术人员已知的方法获得。
实施例1抗菌肽的设计与鉴定
抗菌肽库的设计:将抗菌肽长度设定在7-18个氨基酸范围内、选择抗菌肽常见的优势氨基酸作为基础,以半衰期相对较长的N端氨基酸残基为N端氨基酸,设计了多肽库。基于烧伤治疗中常见的三种致病菌烧伤创面感染耐药金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌进行计算机结合模拟筛选,初步筛选40个多肽进行人工合成。
抗菌肽效果鉴定:
金黄色葡萄球菌ATCC29213(耐药菌,MRSA),铜绿假单胞菌ATCC27853(耐药菌,RPA,大肠埃希菌ATCC25922(耐药菌,RECO)均购于南京便诊生物科技有限公司。
菌株经MH琼脂平板过夜培养后,分别以接种环挑取单个耐药金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、耐药铜绿假单胞菌(Resistantpseudo-monas aeruginosa,RPA)以及耐药大肠埃希菌(resistant escherichia coli,RECO)菌落,于2mLMH肉汤接种,恒温培养箱培养48h(35℃)。各自于肉汤液体培养基(5mL)中加入10mg/mL的多肽溶液200μl(药物组),随之于上述溶液中加入100μl指示菌(MRSA、RPA和REC0浓度1010CFU/L菌龄18-24h),混均。另外,于肉汤液体培养基(5mL中加入1mL灭菌生理盐水混均作为空白调零。各个样品于37℃培养箱培养24h后,测定吸光值(波长570mn),各样品重复测定3次,计算各自抑菌率。具体结果如表1所示。
表1多肽抑菌率结果
从表1的结果可以看出,SX-4、SX-16、SX-22、SX-32以及SX-37对三种病原菌的抑制效果均较好,可以作为备用多肽应用。
实施例2抗氧化活性多肽筛选
由于在烧伤治疗过程中,除了抑制三种病原菌之外,抗菌肽如能展现抗氧化的活性对于治疗也是有益的,因此,选择即能抑制病原菌也能具有抗氧化活性的多肽。
DPPH测定过程中试剂的加量见表2,其中待测样为各多肽采用脂肪酸蔗糖酯配置9成1mg/mL的乳浊液。
10表2DPPH测定过程中试剂的加量
各项 | 11Ac | Ad | Ak |
DPPH | 3mL | - | 3mL |
待测样 | 1mL | 1mL | - |
乙醇 | - | 3mL | - |
样品溶剂 | - | - | 1mL |
按照表2加入配好的试剂,摇匀后室温避光反应30min,517nm测定其吸光度。按照公式进行清除率计算。清除率/%=【1-(Ac-Ad)/Ak】×100公式(1)式中:Ac表示3mL DPPH与1mL待测样避光反应30min,517nm测定的吸光度;Ad表示1mL待测样与3mL乙醇避光反应30min,517nm测定的吸光度;Ak表示3mL DPPH与1mL样品溶剂脂肪酸蔗糖酯避光反应30min,517nm测定的吸光度。
结果如表3所示。
从表3的结果可以看出,SX-16和SX-22具有较好的抗氧化能力。
实施例3 SX-22多肽治疗烫伤小鼠模型的治疗实验
小鼠经10%水和氯醛腹腔麻醉,8%硫化钠背部脱毛,常规消毒。采用自制水浴烫伤板,沸水停留10s,在背部腰椎正中的左右两侧烫取直径0.85cm圆形创面各一个(皮肤病理切片证实为Ⅱ度烫伤),两相邻创面相距1cm。创面涂抹绿脓杆菌0.05mL(1×108CFU/mL)。烫伤模型小鼠随机分4组,每组10只。于伤后2h在实验组创面均匀滴注0.05mL的多肽(50mg/L),对照组分别滴注0.05mL的PBS、hEGF(100μg/L)、强列烧烫伤膏0.05mL(50mg/L),作用5min后用灭菌纱布包扎,每日给一次至伤后第10天。
(1)创面抑菌功能测定:于伤后10d处死小鼠,每组取3只。无菌条件下剪取创面表层组织1g左右,称重并加入等渗盐水lmL,匀浆。倍比稀释后接种在LB固体琼脂平板上,置于37℃温箱中孵育24h。计数平板菌落数并计算每克组织的克隆形成单位(CFU)。含菌量(CFU/g)=平皿菌落数×稀释倍数÷10μL/组织重量(g)。结果如图1所示。
在给药处理的第0天,小鼠烫伤创面绿脓杆菌菌落数大约345*106CFU/g,经过10d的治疗后,从图1可以看出,使用SX-22多肽组治疗后小鼠创面菌落数显著降低只有(2.8±0.5)*106CFU/g,与PBS对照组差异极显著(P<0.01),与烫伤膏组小鼠创面菌落数相比,也有增强的治疗效果。
(2)创面愈合检测:于烫伤第1天开始,记录小鼠创伤面的面积,于烫伤第10天,记录小鼠创伤面的面积。每组取平均值,以每组平均面积的减小程度来反映创面面积愈合情况,计算创面愈合率。创面愈合率(%)=(原始创面面积–第10d愈合创面面积)/原始创面面积。结果如图2所示。
由图2可见,至第10天时,与PBS组相比,各药物组小鼠创面随着时间推移,均得到缩小,都有较好的愈合率。其中SX-22多肽组小鼠创面直径显著小于PBS组,其创面愈合率达到了95.0±3.5%,结果显示SX-22可以促进小鼠皮肤创面愈合,缩短愈合时间。
在第10d时检测小鼠皮肤状况以及整体状况,小鼠精神正常,所述多肽无明显的毒副作用。
虽然在附图和前面的描述中详细说明和描述了本发明,相同的内容被认为是说明性的,而不是限制性的,应当理解,仅示出和描述了一些实施例,并且希望保护落入本发明精神之内的所有改变和修改。应当理解,虽然使用诸如优选的词,优选地,以上描述中使用的更优选或示例性的特征表明,这样描述的特征可能是更期望的或特征性的,然而,可能不是必需的,并且可以将缺少该实施例的实施例考虑为在本发明的范围内,该范围由随后的权利要求限定。在阅读权利要求书时,意欲当使用诸如“一个”,“一个”,“至少一个”或“至少一个部分”之类的词语时,除非在权利要求书中具体说明相反,否则不打算将权利要求书限制为仅一个项目。
虽然以上仅详细描述了几个示例性实施例,但是在考虑了本说明书和公开了本发明优选实施例的附图之后,本领域技术人员将会明白本发明的许多改变,修改,变化和其它用途和应用。所有这些不脱离本发明的精神和范围的改变,修改,变化和其它用途和应用被认为被本发明所覆盖,本发明仅由所附权利要求书所限定。
序列表
<110> 北京戴域生物技术有限公司
<120> 抑制烫伤病菌的多肽在制备化妆品或药物组合物中的用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Arg Trp Tyr Gly Glu Asp Glu Met Leu Leu Leu Asp His Leu
1 5 10 15
Claims (6)
1.一种SX-22多肽在制备烫伤后抑制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌的药物组合物中的用途,其特征在于SX-22多肽的序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于所述药物组合物中还含有药学上可接受的载体。
3.如权利要求2所述的用途,其特征在于所述药物组合物通过以下途径给药:皮肤表面给药。
4.一种SX-22多肽在制备烫伤后皮肤美容的化妆品中的用途,其特征在于SX-22多肽的序列如SEQ ID NO:1所示,所述皮肤美容是通过抑制铜绿假单胞菌的增殖,进而促进创面愈合。
5.如权利要求4所述的用途,其特征在于所述化妆品为外用软膏。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于所述化妆品含有植物油和滑石。
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TA01 | Transfer of patent application right | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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