CN113827611B - 海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 - Google Patents
海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113827611B CN113827611B CN202111354480.8A CN202111354480A CN113827611B CN 113827611 B CN113827611 B CN 113827611B CN 202111354480 A CN202111354480 A CN 202111354480A CN 113827611 B CN113827611 B CN 113827611B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mice
- seaweed extract
- group
- letrozole
- ovarian
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001474374 Blennius Species 0.000 title claims abstract description 24
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 119
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 32
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 23
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 abstract description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 15
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 abstract description 14
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 abstract description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 abstract description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 abstract description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000006759 inflammatory activation Effects 0.000 abstract 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 37
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 29
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 17
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 12
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 12
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 6
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 5
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000006371 metabolic abnormality Effects 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 4
- 238000011121 vaginal smear Methods 0.000 description 4
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 3
- 201000005670 Anovulation Diseases 0.000 description 3
- 206010002659 Anovulatory cycle Diseases 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 101150051357 CYP17A1 gene Proteins 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 3
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 3
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 3
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 231100000552 anovulation Toxicity 0.000 description 3
- -1 cataplasm Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N boldenone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N dehydrotestosterone Natural products O=C1C=CC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)O)C4C3CCC2=C1 RSIHSRDYCUFFLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 description 2
- 239000003163 gonadal steroid hormone Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229930000680 A04AD01 - Scopolamine Natural products 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 102000014654 Aromatase Human genes 0.000 description 1
- 108010078554 Aromatase Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- 206010020112 Hirsutism Diseases 0.000 description 1
- 101150003077 Hsd17b3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N Hyoscine Natural products C1([C@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 206010027339 Menstruation irregular Diseases 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-scopolamin Natural products C1C(C2C3O2)N(C)C3CC1OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012352 Spearman correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 230000007131 anti Alzheimer effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000027288 circadian rhythm Effects 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004138 cluster model Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 1
- 230000008876 conformational transition Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone sulfate Chemical compound C1[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 CZWCKYRVOZZJNM-USOAJAOKSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010066 hyperandrogenism Diseases 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000008088 immune pathway Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 description 1
- 230000029849 luteinization Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 238000003012 network analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000007119 pathological manifestation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N scopolamine Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)O[C@H]2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N 0.000 description 1
- 229960002646 scopolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000007939 sustained release tablet Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- PHLBKPHSAVXXEF-UHFFFAOYSA-N trazodone Chemical compound ClC1=CC=CC(N2CCN(CCCN3C(N4C=CC=CC4=N3)=O)CC2)=C1 PHLBKPHSAVXXEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003991 trazodone Drugs 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7012—Compounds having a free or esterified carboxyl group attached, directly or through a carbon chain, to a carbon atom of the saccharide radical, e.g. glucuronic acid, neuraminic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/702—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/02—Algae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。海藻提取物GV971是酸性寡糖糖链类(AOSC)化合物，本发明实验表明GV971能够治疗多囊卵巢综合征、调节激素水平、改善生殖异常表型或调节肠道菌群。GV971可以改善来曲唑小鼠的代谢及生殖异常表型，并且这种改善作用是通过调节肠道菌群的失调，进而改善了卵巢局部炎症激活状态而实现的。海藻提取物GV971来源天然，安全可靠，无明显毒副作用，适合临床推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体地说，涉及海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。
背景技术
多囊卵巢综合征(PCOS)是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病，以慢性无排卵(排卵功能紊乱或丧失)和高雄激素血症(妇女体内男性激素产生过剩)为特征，主要临床表现为月经周期不规律、不孕、多毛和/或痤疮，是最常见的女性内分泌疾病。
海藻提取物GV971是酸性寡糖糖链类(AOSC)化合物。AOSC来源于翅藻科植物昆布(Echlonia Kurome Okam)，可对抗Aβ诱导小鼠海马神经元凋亡。合成系列AOSC衍生物，发现GV971可直接与Aβ结合，阻止Aβ诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。GV971口服吸收良好并可迅速通过血脑屏障；还可改善东莨菪碱及Aβ诱导的小鼠认知障碍。临床Ⅲ期实验显示GV971安全性良好，显著改善AD患者认知障碍，有望成为新型抗AD临床用药。
文献潘汉博,林妙满,龚一富,崔巍.海洋天然产物对抗阿尔茨海默症的研究进展[J].中国海洋药物,2019,38(02)：73-82.中公开了GV971能够改善阿尔兹海默症引起的认知功能障碍。文献Jiang Luying,Sun Quancheng,Li Li,Lu Fuping,LiuFufeng.Molecular Insights into the Inhibitory Effect of GV971ComponentsDerived from Marine Acidic Oligosaccharides against the ConformationalTransition of Aβ42Monomers.[J].ACS chemical neuroscience,2021：公开了GV971可能是通过重塑肠道菌群或对脑部HHV-1的抗病毒作用来改善阿尔兹海默症导致的认知功能下降。但是关于本发明海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用目前还未见报道。GV971结构式如下：
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
第一方面，提供了海藻提取物在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。
在本发明的另一方面，提供了海藻提取物在制备调节激素水平药物中的应用。
在本发明的另一方面，提供了海藻提取物在制备改善生殖异常表型药物中的应用。
在本发明的另一方面，提供了海藻提取物在制备调节肠道菌群药物中的应用。
优选地，所述激素为胰岛素、雄激素或黄体生成素。
优选地，所述肠道菌群为肠道菌群α或肠道菌群β。
如上任一所述的海藻提取物为GV971。
在本发明的另一方面，提供一种治疗多囊卵巢综合征的药物组合物，所述的药物组合物以海藻提取物GV971为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。
在本发明的另一方面，提供一种调节激素水平的药物组合物，所述的药物组合物以海藻提取物GV971为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。
在本发明的另一方面，提供一种改善生殖异常表型的药物组合物，所述的药物组合物以海藻提取物GV971为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。
在本发明的另一方面，提供一种调节肠道菌群的药物组合物，所述的药物组合物以海藻提取物GV971为活性成分，并进一步包含药学上可接受的载体。
如上任一所述药物组合物的剂型为外用剂型或内用剂型。
优选地，所述药物组合物的剂型为贴剂、糊剂、软膏剂、凝胶剂、涂膜剂、巴布剂、喷雾剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、口服液或注射液。
在本发明的另一方面，提供海藻提取物GV971作为靶点在筛选治疗多囊卵巢综合征药物、调节激素水平药物、改善生殖异常表型药物或调节肠道菌群药物中的应用。
本发明优点在于：
1、海藻提取物GV971治疗来曲唑诱导的多囊卵巢综合征小鼠，能够有效改善小鼠体重增加，卵巢重量增加、体脂增加以及糖耐量损害等代谢异常；改善小鼠的动情周期紊乱，降低小鼠雄激素水平，并且改善了小鼠的排卵异常，增加了小鼠的妊娠胚胎数。
2、海藻提取物GV971改善了来曲唑小鼠的卵巢多囊样变化，使黄体数量增加，囊状卵泡减少，改善了来曲唑小鼠的卵巢形态异常和排卵异常。
3、海藻提取物GV971通过调节肠道菌群的失调，使Cyp17a1的表达下调，促炎症因子IL-17rb、IL-34，以及卵巢功能基因Col6a5、Vcam1、Fads1等表达也下调，并且下调了血清促炎症因子IL-18，进而改善了卵巢局部炎症激活状态，有效治疗了来曲唑小鼠的代谢及生殖异常表型。
附图说明
图1.四组小鼠的实验终点体重统计图。
图2.四组小鼠的实验终点卵巢重量统计图。
图3.四组小鼠的实验终点脂肪垫重量统计图。
图4.四组小鼠的胰岛素抵抗实验统计图。
图5.四组小鼠的糖耐量实验统计图。
图6.安慰剂对照组小鼠的典型动情周期。
图7.来曲唑组小鼠的典型动情周期。
图8.安慰剂灌胃GV971小鼠的典型动情周期。
图9.来曲唑灌胃GV971小鼠的典型动情周期。
图10.四组小鼠的血清睾酮水平统计图。
图11.四组小鼠的血清脱氢睾雄酮水平统计图。
图12.四组小鼠的血清黄体生成素水平统计图。
图13.四组小鼠的生育力实验统计图。
图14.安慰剂小鼠的典型卵巢HE染色图。
图15.来曲唑小鼠的典型卵巢HE染色图。
图16.安慰剂小鼠GV971灌胃的典型卵巢HE染色图。
图17.来曲唑小鼠GV971灌胃的典型卵巢HE染色图。
图18.四组小鼠的卵巢黄体计数统计图。
图19.四组小鼠的卵巢囊泡计数统计图。
图20.四组小鼠的卵巢转录组测序聚类分析热图。
图21.四组小鼠的卵巢转录组测序PCA聚类模式图。
图22.C与L组小鼠的卵巢转录组测序差异基因火山图。
图23.L与LG组小鼠的卵巢转录组测序差异基因火山图。
图24.C与L组小鼠的卵巢转录组测序差异基因KEGG功能富集图。
图25.L与LG组小鼠的卵巢转录组测序差异基因KEGG功能富集图。
图26.四组小鼠的卵巢组织IL-18的表达水平统计图。
图27.四组小鼠的血清IL-18水平统计图。
图28.四组小鼠的肠道菌群α多样性统计图。
图29.四组小鼠的肠道菌群β多样性PCA聚类模式图。
图30.四组小鼠的肠道菌群LEfSe多级物种差异判别分析图。
图31.小鼠的血清IL-18水平与差异菌属的相关性分析图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1海藻提取物GV971治疗多囊卵巢综合征的动物实验
1材料与方法
1.1实验小鼠
3周龄雌性C57BL/6小鼠，购自上海杰思捷实验动物有限公司，SPF级。用于生育力实验的雄鼠为10周龄大，生育力正常的雄鼠，购自上海杰思捷实验动物有限公司，SPF级。
1.2小鼠饲养
所有小鼠饲养于上海市内分泌重点实验室动物房，3-5只/笼，饲养温度维持在21-25℃，光照时间为12L:12D的人工昼夜节律，自由摄食饮水。实验中所使用动物均经复旦附属妇产科医院动物伦理委员会审核批准。
1.3PCOS小鼠模型的建立
来曲唑动物模型，21天大小的C57BL/6雌性小鼠颈部埋置直径3mm来曲唑缓释片(50ng/d)21天，对照组埋置配套安慰剂21天。
1.4GV971的灌胃实验
与造模时间同时开始，GV971(国药准字H20190031)按100mg/kg体重灌胃，0.9wt％生理盐水配制，对照组灌胃等量生理盐水，一天一次。
实验产生四组小鼠：安慰剂对照组(C)，来曲唑组(L)，安慰剂小鼠灌胃GV971组(G)，来曲唑小鼠灌胃GV971组(LG)。
1.5小鼠动情周期检测
从造模第7天开始，每日上午9点行阴道涂片，直至造模完成。沾取：将消毒的10ul枪头吸取少量无菌生理盐水，轻轻插入小鼠的阴道内，吹吸数次。涂片：将带有阴道内含物的生理盐水置于载玻片上做成涂片，然后将涂片散在空气中自然干燥(以载玻片上发白为准)。固定：将玻片置于95％乙醇中固定30-60min。染色：吉姆萨染色法染色。结果观察：将涂片置于显微镜下，观察阴道涂片的组织学变化，确定动情周期变化的不同阶段。
动情前期(P)：显微镜下可见阴道涂片中有核上皮细胞占多数，有的是单个的，有的呈片状，可伴有少量白细胞。
动情期(E)：涂片中有很多无核的角化鳞状细胞，细胞大而扁平，边缘不整齐，视野中看不到或很少白细胞与上皮细胞。
动情后期(M)：涂片中角化上皮细胞减少，出现许多白细胞及有核上皮细胞。
动情间期(D)：小鼠阴道粘膜薄，阴道涂片中几乎全是白细胞。
1.6糖耐量试验
(1)将小鼠换入干净的笼子禁食12h(禁食期间保证正常的饮水)后，称取每只小鼠的体重，并逐一对小鼠进行标记，以便在实验过程中能快速辨认所测小鼠。
(2)用剪刀剪去小鼠尾巴末端约1-2mm，轻轻挤压尾巴让血液富集成一滴后，用血糖测试仪测定小鼠血糖水平，记为空腹血糖。
(3)向每只小鼠腹腔注射剂量为2g/kg的葡萄糖溶液。
(4)测定其空腹血糖值及注射葡萄糖后15min，30min，60min，90min，120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。
1.7胰岛素抵抗实验
(1)将小鼠换入干净的笼子禁食4h(禁食期间保证正常的饮水)后，称取每只小鼠
的体重，并逐一对小鼠进行标记，以便在实验过程中能快速辨认所测小鼠。
(2)用剪刀剪去小鼠尾巴末端约1-2mm，轻轻挤压尾巴让血液富集成一滴后，用血糖测试仪测定小鼠血糖水平，记为空腹血糖。
(3)向每只小鼠腹腔注射剂量为1.5IU/kg的胰岛素。
(4)测定其空腹血糖值及注射葡萄糖后15min，30min，60min，90min，120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。
1.8生育力检测
(1)购买10周龄大雄性C57BL/6小鼠，与无实验用途的性成熟雌鼠1:1合笼，雌鼠见栓后雌雄分开；
(2)确定雌鼠怀孕后，证明与其合笼的雄鼠性能力正常，可以使用，若不能使同笼雌鼠怀孕，则更换雄鼠；
(3)挑选出足够数目的生育力正常的雄鼠，与待检测雌鼠1:1合笼；
(4)待见栓后10天解剖雌鼠，计数子宫内胚胎数。
1.9血清激素、血清及卵巢组织的IL-18检测
将所得血液3000g离心10min，取上层血清分装后-80℃冻存，卵巢组织取出置于含蛋白酶抑制剂的PBS中研磨匀浆分装后-80℃冻存，根据睾酮定量测定试剂盒、LH定量测定试剂盒说明、DHEAS定量试剂盒说明和IL-18定量试剂盒说明，用酶联免疫吸附测定各激素含量。
1.10卵巢形态检测
取卵巢置于4％多聚甲醛中固定24h，按常规梯度脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等，步骤制备石蜡切片，37℃烤干后常温保存备用。二甲苯洗2次，每次5min。100％、95％、90％、80％、70％酒精梯度水化，每梯度5min，2次，结束后用蒸馏水洗两遍。苏木素复染15min后，蒸馏水5min洗2次；1％盐酸酒精浸30s，蒸馏水5min洗2次；1％伊红溶液染色5min后蒸馏水5min洗2次；70％、80％、90％、95％、100％酒精梯度脱水，每梯度5min，2次；二甲苯洗2次，每次5min；中性树胶封片。制片完成后，在光镜下观察卵巢形态，评估各组小鼠卵巢组织的形态结构学变化。
1.11卵巢组织总RNA提取及炎症因子聚合酶-链式反应
(1)将小鼠卵巢组织用PBS洗3次，加入1mlTrizol匀浆；使Trizol和组织充分混匀，静置5-10min，转移入1.5mlEP管，加入Trizol使总体积达到1ml。
(2)按所加Trizol的1/5体积加入氯仿200μl，颠倒混匀，剧烈震荡30s呈乳状。冰上放置5min，可以看到水相和有机相慢慢分离。
(3)4℃，12,000rpm离心10min，吸取上层水相到新的1.5mlEP管(勿接触DNA层)。
(4)按所加等体积的异丙醇混匀，充分混匀，冰上放置10min。
(5)4℃，12,000rpm离心10min，弃上清，保留管底沉淀RNA。
(6)加入75％乙醇1ml(DEPC水配制)洗涤沉淀，温和振荡离心管悬浮沉淀，4℃，12,000rpm离心5min，弃去上清，尽量减少残留液体。重复1遍。
(7)室温晾干5-10min。加入20ul无菌DEPC水溶解RNA样品。
(8)取1ul测定RNA浓度。OD值定量RNA浓度。
(9)逆转录为cDNA，加入各炎症因子引物进行聚合酶-链式反应。
1.12卵巢组织转录组测序实验
(1)提取total RNA：
从组织样品中提取total RNA，利用Nanodrop2000对所提RNA的浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。单次建库要求RNA总量≥1ug，浓度≥35ng/μL，OD260/280≥1.8，OD260/230≥1.0。
(2)Oligo dT富集mRNA：
真核生物mRNA 3’末端具有ploy A尾的结构，利用带有Oligo(dT)的磁珠与ploy A进行A-T碱基配对，可以从总RNA中分离出mRNA，用于分析转录组信息。
(3)片段化mRNA：
Illumina Novaseq 6000平台是针对短序列片段进行测序，富集得到的mRNA是完整的RNA序列，平均长度达几kb，因此需要对其进行随机打断。加入fragmentation buffer，可以将mRNA随机断裂，通过磁珠筛选分离出300bp左右的小片段。
(4)反转合成cDNA：
在逆转录酶的作用下，加入六碱基随机引物(random hexamers)，以mRNA为模板反转合成一链cDNA，随后进行二链合成，形成稳定的双链结构。
(5)连接adaptor：
双链的cDNA结构为粘性末端，加入End Repair Mix将其补成平末端，随后在3’端加上一“A”碱基，用于连接Y字形的接头。
(6)Illumina平台上机测序：
①文库富集，PCR扩增15个cycles；
②2％琼脂糖胶回收目的条带；
③TBS380(Picogreen)定量，按数据比例混合上机；
④cBot上进行桥式PCR扩增，生成clusters；
⑤Illumina平台测序(PE文库，读长2×150bp)。
1.13小鼠肠道微生物多样性测序及分析
(1)收集新鲜的小鼠粪便于1.5mlEP管中，液氮快速冷冻后-80℃冻存。
(2)微生物多样性测序：根据
soil DNA Kit(Omega Bio-Tek,Norcross,GA)进行微生物群落总DNA抽提，使用NanoDrop 2000NanoDrop UV-vis测DNA浓度、纯度；用1％琼脂糖凝胶电泳测DNA提取质量，用338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’)(SEQ ID NO:1)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)(SEQ ID NO:2)对16SrRN基因V3-V4区进行PCR扩增(GeneAmp 9700,ABI,Waltham,MA)。将同一样本的PCR产物混合后使用2％琼脂糖凝胶回收PCR产物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit进行回收产物纯化，2％琼脂糖凝胶电泳检测，并用QuantusTM Fluorometer(Promega,USA)对回收产物进行检测、定量。使用NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit进行建库。利用Illumina公司的MiseqPE300平台进行测序。
(3)序列拼接及注释：Fastp软件对原始测序序列进行质控，Flash软件进行拼接。Usearch软件根据97％的相似度对序列进行OTU聚类并剔除嵌合体。利用RDP classifier对每条序列与Silva数据库(SSU132)进行比对，设置比对阈值为70％，得到物种分类注释结果。
(4)数据分析：Alpha多样性分析、物种组成分析、物种比较分析、物种差异分析，明确特征性上调菌属。
(5)基于OTU arcsin-square根转换计数数据，使用加权基因共表达网络分析(WGCNA)生成共现网络，输入大于15个样本的数据，包括OTU根转化技术数据、体重、血清T、LH、FSH、E2、P以及DHT值，以及是否为PCOS动物模型(以0或1表示)；选择构建一个有向网络，并选择合适的power值，即要使构建的网络符合无标度网络特征；层级聚类树显示各个模块；利用定义为模块第一主成分的模块本征otu计算模块与代谢性状之间的皮尔逊相关，绘制模块之间相关性图。相关性的显著性由渐近p值决定的。使用snaR包中的gplot函数实现网络的可视化，找到与疾病相关的微生物种类biomarker。
2 实验结果
2.1 基础指标
图1至图5说明了来曲唑诱导小鼠出现了体重增加、卵巢重量增加、性腺旁脂肪垫增加、糖耐量损害以及胰岛素抵抗等代谢异常表型，在给予葡萄糖或注射胰岛素后，L组小鼠的血糖水平较对照组有明显升高，且血糖下降较慢。而通过GV971的灌胃处理后，以上代谢异常表型得到改善。(注：图1至图3，与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01，★★★P＜0.001；图4和图5，C组与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01，★★★P＜0.001，L组与LG组比较，#P＜0.05)。
2.2动情周期
图6至图9体现了四组小鼠的动情周期。安慰剂组小鼠的典型动情周期(图6)，来曲唑组小鼠的典型动情周期(图7)，安慰剂灌胃GV971组小鼠的典型动情周期(图8)，来曲唑组小鼠灌胃GV971组的典型动情周期(图9)。其中P为动情前期、E为动情期、M为动情后期、D为动情间期)。动情周期是评价小鼠性周期的一个重要指标，正常小鼠的动情为4-5天，动情前期(P)、动情期(E)、动情后期(M)及动情间期(D)重复出现，动情周期紊乱是PCOS小鼠的一个重要特征。
图7中体现出来曲唑小鼠长期处于动情间期，而经过GV971灌胃的来曲唑小鼠的动情周期表现出各个动情时期的重复出现，GV971灌胃的安慰剂组小鼠与对照组无明显差异。
2.3性激素水平
图10至图12体现了四组小鼠的血清性激素的水平。来曲唑组小鼠血清的睾酮水平明显升高(图10)，脱氢睾雄酮的水平以及黄体生成素的水平也明显升高(图11，图12)，而雄激素水平升高也是PCOS的一个重要病理表现和诊断标准。而经过GV971干预的来曲唑小鼠与来曲唑小鼠相比，睾酮水平明显降低，LH水平也显著降低。(注：与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01，★★★P＜0.001)
2.4生育力
图13体现了四组小鼠的生育力实验。来曲唑组小鼠的妊娠胚胎数较对照组显著减少，GV971的干预使来曲唑小鼠的妊娠胚胎数增加，生育力得到改善，说明GV971改善了来曲唑小鼠的卵巢排卵异常。(注：与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01)
2.5卵巢形态、卵泡数及黄体数
图14至图17体现了对照组、来曲唑组小鼠及安慰剂灌胃GV971小鼠以及来曲唑灌胃GV971小鼠的卵巢形态。图14为对照组小鼠的典型卵巢HE染色，图15为来曲唑组小鼠的典型卵巢HE染色，图16为安慰剂灌胃GV971组小鼠的典型卵巢HE染色，图17为来曲唑灌胃GV971小鼠的典型卵巢HE染色，图18为四组小鼠卵巢黄体数，图19为四组小鼠囊泡状卵泡数(其中，*表示黄体，#表示囊状卵泡，与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01)。
图14至图17中体现了来曲唑小鼠的黄体计数较对照组明显减少，而囊泡状卵泡数明显增多，说明来曲唑诱导小鼠出现了卵巢多囊样的形态变化，而经过GV971干预后，黄体数增加，囊状卵泡明显减少，说明GV971改善了PCOS模型鼠的卵巢形态异常和排卵异常。
2.6卵巢转录组测序分析
图20体现了四组小鼠的卵巢转录组测序的聚类模型的热图。可以看到LG组小鼠与L组小鼠分别都自成一个聚类，而C组和G组聚类模式相似(左侧前三列分别为样本LG1、LG3、LG6，此三列相关基因表达明显上调，呈现与另三组不同的聚类模式；可见L13、L12、L7此三组呈现相同聚类模式；C18、G22、C15、C16聚类模式更接近)。
图21体现了四组小鼠的卵巢转录组测序的聚类PCA图。可以看出LG组小鼠自成一个聚类模式。
图22和图23体现了C与L、L与LG之间的差异基因火山图。可以看出L组较C组上调表达的基因包括IL-17rb、IL-33、IL-13ra2等促炎症因子，还包括Col6a5、Col4a3、Vcam1、Fads1等与卵巢血管合成及组织增生相关的功能基因，和Hsd17b3、Cyp27a1、Cyp17a1等芳香酶类促进雄激素合成相关基因。说明来曲唑组小鼠的卵巢局部呈现免疫激活、雄激素合成激活的状态(图22)。而经过GV971的干预后的LG组Cyp17a1的表达下调，促炎症因子IL-17rb、IL-34，以及卵巢功能基因Col6a5、Vcam1、Fads1等表达也下调，说明GV971的干预改善了PCOS样小鼠卵巢局部的免疫激活状态，改善了其卵巢组织结构增生的表现(图23)。
通过图24和图25，C与L、L与LG差异基因的KEGG富集分析，体现了L组较C组的炎症及免疫相关通路激活，以及代谢通路激活(图25)；而GV971的干预使L组的卵巢局部炎症相关通路的激活改善，尤其注意其中肠道免疫通路的下调(图26)。
图26和图27体现了GV971的干预使L组的卵巢局部IL-18的表达量下调(图26)，以及血清IL-18的水平明显下调(图27)。(注：与L组比较，★P＜0.05，★★P＜0.01，★★★P＜0.001)
2.7肠道菌群
图28至图31体现了四组小鼠的肠道菌群变化情况。可以看出，来曲唑组小鼠的肠道菌群α多样性较对照组明显降低，而肠道菌群α多样性的降低是在PCOS中的变化已经达成了共识，而GV971的干预使α多样性得到了恢复(图28注：与L组比较，★P＜0.05)。来曲唑小鼠肠道菌群β多样性的聚类模式与LG组不同，而C组与G组的聚类模式大致相同，说明GV971的干预使PCOS样小鼠的肠道β多样性发生了改变(图29)。通过对四组小鼠的肠道菌群属水平的差异菌属的分析，可以看出来曲唑小鼠的norank_f_Muribaculaceae菌属的丰度较对照组升高，而GV971的干预使该菌属的丰度下调(图30注：组间差异★P＜0.05)。并且将小鼠血清IL-18与差异性菌属进行Spearman相关性分析中，发现IL-18水平与上述的norank_f_Muribaculaceae丰度水平呈现正相关性(图31注：★P＜0.05，★★P＜0.01，单元格颜色越深，说明相关性越强)。
以上结果说明，GV971可以改善来曲唑小鼠的代谢及生殖异常表型，并且这种改善作用是通过调节肠道菌群的失调，进而改善了卵巢局部炎症激活状态而实现的。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 复旦大学附属妇产科医院
<120> 海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用
<130> /
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
actcctacgg gaggcagcag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggactachvg ggtwtctaat 20
Claims (1)
1.海藻提取物GV971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111354480.8A CN113827611B (zh) | 2021-11-16 | 2021-11-16 | 海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111354480.8A CN113827611B (zh) | 2021-11-16 | 2021-11-16 | 海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113827611A CN113827611A (zh) | 2021-12-24 |
| CN113827611B true CN113827611B (zh) | 2023-04-25 |
Family
ID=78971225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111354480.8A Active CN113827611B (zh) | 2021-11-16 | 2021-11-16 | 海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113827611B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114869919A (zh) * | 2022-06-29 | 2022-08-09 | 江西中医药大学 | 海藻及其提取物在制备抗神经炎症药物上的应用及抗神经炎症药物 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101907849B1 (ko) * | 2017-04-14 | 2018-10-12 | 한국 한의학 연구원 | 감태 추출물을 유효성분으로 포함하는 다낭성 난소 증후군 관련 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
-
2021
- 2021-11-16 CN CN202111354480.8A patent/CN113827611B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113827611A (zh) | 2021-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110731955B (zh) | 衣康酸二甲酯在预防和治疗溃疡性结肠炎及其癌变中的应用 | |
| Vallvé-Juanico et al. | Macrophages display proinflammatory phenotypes in the eutopic endometrium of women with endometriosis with relevance to an infectious etiology of the disease | |
| Robison et al. | Sexual dimorphism in hepatic gene expression and the response to dietary carbohydrate manipulation in the zebrafish (Danio rerio) | |
| KR101726488B1 (ko) | 바실러스 속 세균 유래 세포밖 소포체를 포함하는 임신관련 질환 치료용 조성물 | |
| CN113827611B (zh) | 海藻提取物gv971在制备治疗多囊卵巢综合征药物中的应用 | |
| CN104846101B (zh) | 一种鉴定三七的特异引物对及方法 | |
| Manuel et al. | Immune tolerance attenuates gut dysbiosis, dysregulated uterine gene expression and high-fat diet potentiated preterm birth in mice | |
| CN112843078A (zh) | 人参皂苷Rh2在制备防治炎症性肠病药物中的应用 | |
| CN114209810B (zh) | 枸杞糖肽在制备用于预防或治疗炎性肠病的药物中的用途 | |
| CN113521176B (zh) | 一种温肾填精中药组合物 | |
| CN108079302B (zh) | Nrf2激动剂在制备治疗银屑病的药物中的应用 | |
| CN113521085A (zh) | 亚麻木酚素在制备改善多囊卵巢综合征肠道或生殖道菌群的药物中的应用 | |
| CN110801446A (zh) | 一种亚腈胺在制备治疗结肠炎药物中的应用 | |
| Han et al. | Effect and mechanism of pearl on ovarian function of rats with premature ovarian failure induced by tripterygium glycosides | |
| TWI498118B (zh) | 促進傷口癒合及血管新生的醫藥組合物與接骨木屬（蒴藋屬）（Ｓａｍｂｕｃｕｓ）植物及菘藍屬（Ｉｓａｔｉｓ）植物之萃取物用於製備促進傷口癒合及血管新生之藥物的用途 | |
| CN114306307A (zh) | Dsf在制备抗炎药物或抗氧化药物中的应用及药物 | |
| CN114081893A (zh) | 花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用 | |
| CN108478774B (zh) | 四逆汤在制备预防或治疗结肠癌的药物中的应用 | |
| Shankar | A NARRATIVE REVIEW OF PATHOGENESIS OF GESTATIONAL DIABETES MELLITUS. | |
| CN117448445B (zh) | Pten、tsc1和tsc2基因在马兜铃酸敏感性检测中的应用 | |
| Yang et al. | Modulation of the gut microbiota alleviates insulin resistance in type 2 diabetic mice by daucosterol from Eleocharis dulcis peel | |
| CN110511930A (zh) | Sal-miR-58及其在抑制血管炎性反应和动脉瘤形成中的用途 | |
| Dakhil et al. | THE POSSIBLE PROTECTIVE EFFECTS OF GUM ARABIC IN KIDNEY INJURY INDUCED BY ADENINE | |
| CN117883573B (zh) | Uba1作为作用靶点在制备治疗主动脉夹层的药物中的应用 | |
| CN110302363B (zh) | Il-22作为制备治疗pcos药物的应用及药物制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |