CN114081893A - 花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用 - Google Patents
花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。本发明首次研究表明通过对矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷复配果胶后，在减轻高脂饮食引起的肝脏脂肪蓄积和损伤上发挥协同作用，其治疗非酒精性脂肪肝的效果相比于单独使用花色苷获得了显著的提升，表现出优异的非酒精性脂肪肝治疗效果，为非酒精性脂肪肝的治疗提供了一种高效、天然的药物选择。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域。更具体地，涉及花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
背景技术
非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除酒精和其他明确肝损伤因素所致，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪病变及脂质沉积为主要特征的临床病理综合征；包括原发性非酒精性脂肪肝和继发性非酒精性脂肪肝，其发病率在不断升高，且发病年龄日趋年轻化。单纯性脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。严重至非酒精性脂肪性肝炎，再到肝硬化则不可逆。NAFLD的形成主要与肥胖、糖尿病、营养不良等有关，而肥胖也是非酒精性脂肪肝的伴发性生理症状。61％～94％的脂肪肝患者表现为临床诊断性肥胖。肥胖人体重得到控制后，其脂肪浸润亦减少或消失。
目前，还没有建立NAFLD患者的专用疗法，减脂是常用处方之一。减肥药物如奥利司他属于特异性的胃肠道脂肪酶抑制剂，可以减少食物中脂肪的吸收，从而起到减脂的效果。但其副作用明显，表现为腹痛，排气增多，脂肪便，甚至出现大便失禁的现象。更严重的会出现上下呼吸道感染，头疼焦虑等。
天然来源药物相比西药而言，其具备药源丰富、价格便宜、副作用小、多环节整体性治疗等优势。花色苷通过发挥强抗氧化和抗炎等能力，拮抗心脑血管系统有害因子的产生，从而达到预防各类心血管疾病的目的。花色苷辅助抗心血管疾病、糖尿病以及抗肿瘤的功能活性被广泛研究且得到验证，如专利CN201710870304.7公开了桑葚花色苷可用于治疗非酒精性脂肪肝，但单一的花色苷作用效果有限，为了提升药效往往需要加大用量，因此，寻求可有效提升花色苷治疗非酒精性脂肪肝效果的天然组方以降低成本，提升非酒精性脂肪肝治疗效果具有重要的应用价值。
发明内容
本发明针对现有技术存在的不足，旨在提供一种天然、新型的预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物，本发明研究发现通过对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷复配果胶后，其治疗非酒精性脂肪肝的效果相比于单独使用花色苷获得了显著的提升，为非酒精性脂肪肝的治疗提供一种高效、天然的方案。
本发明的首要目的是提供花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
本发明的另一目的是提供花色苷和果胶联用在制备预防非酒精性脂肪肝的保健品或食品中的应用。
本发明的再一目的在于提供一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
本发明通过高脂饮食诱导形成肥胖小鼠模型(C57BL/6J)，用日常灌胃矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-glucoside，C3G)、果胶、C3G-果胶复合物进行干预，结果表明C3G和果胶联合、协同作用可显著降低高脂饮食诱导的小鼠体重增长，减轻脂肪肝导致的肝脏脂质蓄积和肝脏损伤，增加了肥胖小鼠结肠短链脂肪酸(Short chain fatty acids，SCFAs)总量，以及增加结肠中乙酸、丁酸和戊酸的含量，上调Ruminococcaceae和Lachnospiraceae的相对丰度，调节肠道菌群，有效改善和治疗高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝。
因此，本发明首先请求保护花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
本发明要求保护花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物时，包括但不限于，使用花色苷和果胶联用在有效剂量下对患者给药，来制备用于预防或治疗非酒精性脂肪肝引发的疾病，减轻非酒精性脂肪肝引发的疾病症状，或者延缓非酒精性脂肪肝引发的疾病的发展或发作的药品的用途。
果胶是一种具有多种功能的水溶性膳食纤维。膳食纤维如纤维素、葡聚糖、多聚果糖、木聚糖等在人的胃、小肠内基本不被消化，到达结肠后被微生物发酵。果胶能通过增加消化道粘度，减缓糖代谢和脂质代谢的吸收环节；果胶的结肠代谢产物短链脂肪酸有保护肠道粘膜、抗氧化、抗炎、降胆固醇、降血糖和预防心血管疾病等功能。花色苷作为水溶性极强的多酚类物质，与具有凝胶性质的果胶可以结合形成复合物，复合物的形成可以防止水溶性环境下花色苷的色素沉淀、增强花色苷的稳定性，延长其半衰期、降低花色苷在小肠中的损耗。在消化道的上部和下部，花色苷都可以从各种食物基质中释放出来，果胶在上消化道不被降解，仅在结肠被微生物发酵。因此果胶可以通过降低上消化道释放的花色苷的量来影响其降解的过程，增加了到达消化道下部的花色苷的浓度，使其充分发挥作用。
此外，基于花色苷和果胶对机体并无毒副作用，也可用于制备保健品、食品，用于日常服用以预防特定人群的非酒精性脂肪肝。因此，花色苷和果胶联用在制备预防非酒精性脂肪肝的保健品或食品中的应用也在本发明的保护范围内。适宜于特定人群日常服用，具有调节机体功能，预防非酒精性脂肪肝，并且对人体不产生任何急性、亚急性或者慢性危害。
优选地，所述花色苷为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。
优选地，所述花色苷和果胶的质量比为1：1～5。最优选为1：2。
优选地，所述非酒精性脂肪肝为原发性非酒精性脂肪肝或继发性非酒精性脂肪肝。
优选地，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为降低肝脏脂滴量、减轻肝脏脂质变性、减轻小叶内炎症、减轻肝脏脂肪蓄积。
优选地，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为提高结肠SCFAs、乙酸、丁酸和戊酸的含量。
优选地，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为上调Ruminococcaceae和Lachnospiraceae的相对丰度。
因此，提高Ruminococcaceae和Lachnospiraceae种群丰度的药物在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的制剂中的应用也在本发明的保护范围内。
本发明要求保护的花色苷和果胶在联合制备预防非酒精性脂肪肝的药物时，适宜于特定人群日常服用，具有调节机体功能，预防非酒精性脂肪肝，并且对人体不产生任何急性、亚急性或者慢性危害。
此外，本发明还提供一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物，该药物包含花色苷和果胶。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的载体，制成不同的剂型。
本发明要求保护的预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物除了对人类治疗有益以外，还可应用于兽医治疗宠物、引进品种的动物和农场的动物，包括哺乳动物，啮齿类动物等。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明首次研究表明相比于单独的花色苷、果胶，花色苷和果胶联用，在减轻高脂饮食引起的肝脏脂肪蓄积和损伤上发挥协同作用，表现出优异的非酒精性脂肪肝治疗效果，为非酒精性脂肪肝的治疗提供了一种高效、天然的药物来源。
附图说明
图1为各组小鼠体重、Lee’s指数变化结果(其中，A图为小鼠体重变化，B图为小鼠体重增量，C图为小鼠Lee’s指数)；
图2为各组小鼠肝脏病理切片组织油红O染色图(其中，A图为小鼠肝脏油红染色切片，B图为油红染色结果统计)；
图3为各组小鼠肝脏病理切片组织HE染色图(其中，A图为小鼠肝脏HE染色切片，B图为肝脏脂肪变性、气球样变和小叶炎症评分结果统计)；
图4为各组小鼠粪便中总SCFAs、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸含量图；
图5为各组小鼠结肠微生物Alpha、Beta多样性指数(其中，A图为Binary jaccard-Beta分析图，B图为Chao1指数-Alpha分析图)；
图6为各组小鼠结肠微生物门水平相对丰度变化(其中，A图为小鼠结肠微生物门水平Top15群落相对丰度对比图，B图为门水平相对丰度柱状图)；
图7为各组小鼠结肠微生物属水平相对丰度变化(其中，A图为小鼠结肠微生物属水平Top30群落相对丰度对比图，B图为属水平相对丰度柱状图)。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。
1.实验动物
本实验使用无特定病原体(Specified pathogens free，SPF)级健康雄性C57BL/6J小鼠(7周龄)50只，购买于维通利华生物有限公司。
2.动物饲料配方
本实验使用Research Diets公司制作的饲料，CD组小鼠摄入D12450J的普通饲料，HFD及HFD-C3G、HFD-P和HFD-C3G-P摄入D12451高脂饲料。普通饲料脂肪供能10％，高脂饲料脂肪供能45％。具体能量占比及配方见表1、2。
表1饲料能量占比表
表2饲料配方表
3.实验试剂
表3实验试剂与试剂盒
4.实验仪器
表4实验仪器设备
实施例1
1、实验方法
(1)C3G-果胶复合物水溶液的配制
先将20mg果胶用100ml，75℃生理盐水充分溶解并持续搅拌，直至冷却至40℃，再加入10mgC3G粉末并充分搅拌均匀。
(2)实验分组
小鼠检疫期结束后将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为5个实验组，每组10只。
空白对照饮食组(CD)：自由摄食D12450J的普通饲料；
高脂饲料饮食组(HFD)：自由摄食D12451高脂饲料；
C3G-高脂饲料饮食组(HFD-C3G)：自由摄食D12451高脂饲料；
果胶-高脂饲料组(HFD-P)：自由摄食D12451高脂饲料；
C3G-果胶高脂饲料饮食组(HFD-C3G-P)：自由摄食D12451高脂饲料。
HFD-C3G组每天灌胃C3G水溶液一次，C3G的摄入量为100mg/(kg.bw)，HFD-P组每天灌胃果胶水溶液一次，果胶摄入量为200mg/(kg.bw)，HFD-C3G-P每天灌胃C3G-果胶复合物水溶液一次，C3G-果胶复合物的摄入量为300mg/(kg.bw)，CD组与HFD组用生理盐水代替。
饲喂持续11周，记录实验期间每周小鼠体重变化。
(3)指标测试方法
1)数据获取过程及采取的指标
小鼠解剖前禁食12h，用异氟烷对小鼠进行麻醉，测量小鼠体长，用于计算Lee’s指数。麻醉后的小鼠摘眼球取血后，脱颈处死，解剖取出肝脏、肾脏、睾丸、附睾脂肪、肾周脂肪、肠道周围脂肪、肩胛骨棕色脂肪和白色脂肪，并迅速称重。
小鼠血液室温静置30min后，以4℃、3000rpm/min的条件离心15min，取上层清液分装于无菌离心管，置于-80℃冷冻保存。肝脏切分一份置于4％多聚甲醛，用于包埋和病理切片制备，其余部分置于冻存管。结肠内容物取出置于冻存管，用于微生物测序；收集粪便用于SCFAs测定。冻存管样品先置于液氮速冻后转移至-80℃冰箱保存。
2)肝脏组织病理学观察
冰冻切片油红O染色步骤：将脱水的肝脏组织置于OCT包埋台，并在其组织周围滴加OCT包埋剂；整个包埋台置于冷冻切片机的速冻台，直至OCT变硬，颜色变为白色；OCT包埋块按8～10μm切片。冰冻切片加入10％福尔马林室温孵育5min后除去液体，再次加入等体积福尔马林孵育1h；移除福尔马林后，60％异丙醇清洗并晾干；加入油红O工作液染色10min，移除油红，清洗洗涤，重复清洗4次，除去液体后风干。
石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色步骤：多聚甲醛固定后的组织用石蜡包埋，蜡块切成5μm；石蜡切片用二甲苯，无水、90％、80％、70％乙醇和去离子水脱蜡处理后，苏木素染色35s，后用流水冲洗5min；再用伊红染色3s，流水冲洗。再用70％、80％、90％、无水乙醇和二甲苯脱水处理；最后以中性树胶和二甲苯混合封片。
然后对切片进行镜检，拍片。并采用Image J软件对油红O染色切片进行光密度分析，并计算染色区域面积。用非酒精性脂肪肝的组织学评分系统(Nonalcoholic fattyliver disease activity score，NAS)对HE染色切片中的肝细胞脂肪变性、小叶内炎症、气球样变进行评分，并统计得分情况，方法参考NAS评分系统并略有调整，如表5所示。
表5非酒精性脂肪肝的组织学评分
Table 5 Histological score of nonalcoholic fatty liver disease
3)SCFAs的测定
配制0.02mg/mL二乙基乙酸(内标，溶于0.2M盐酸中)、0.15M草酸，使用前按4:1混合成浸提液。用浸提液配制SCFAs标准品乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸，并制作混合标准曲线。
准确称取小鼠肠道粪便于2mL离心管中，分别放入2粒玻璃珠，按1:10(m/v)加入上述浸提液，即100mg粪便加入1mL浸提液，均质后低温离心，取上清液过0.22μm滤膜置于进样小瓶内衬管内进行测定。通过标准曲线计算样品中SCFAs浓度。
用气相色谱测定小鼠粪便短链脂肪酸含量，检测器：氢火焰离子检测器(FID)；色谱柱：CP-FFAP CB column(25m×0.53mm×1.00μm，Agilent)；载气为氮气，流速10mL/min；尾吹气流速30mL/min；采用不分流进样；进样量为1μL；进样口温度250℃；柱温：初始温度100℃，以5℃/min程序升温至160℃，保持4min。
4)肠道微生物16SrDNA测序
基因组DNA的提取：采用DNA抽提试剂盒对小鼠结肠内容物DNA进行提取，采用琼脂糖凝胶电泳测定DNA的浓度及纯度。将DNA稀释后作为模板，根据测序区域的选择，进行PCR扩增。
细菌多样性鉴定对应的区域：16S V3-V4区(引物343F:5’-TACGGRAGGCAGCAG-3’和798R:5’-AGGGTATCTAATCCT-3’)。
PCR的扩增和建库：PCR的产物通过电泳检测，然后采用磁珠纯化，纯化之后作为二轮PCR扩增的原料，再次进行电泳检测，磁珠纯化，之后对PCR的产物进行Qubit定量分析。然后根据PCR的产物浓度进行等量混样，同时上机测序。
生物信息分析流程在上海欧易生物医学科技有限公司平台上进行。使用Trimmomatic软件对原始双端序列进行去杂，去杂后的双端序列利用FLASH软件进行拼接。测序数据进行预处理生成优质序列之后，采用Vsearch软件，将序列相似度大于或等于97％的归为一个OTU单元。使用QIIME软件包挑选出各个OTU的代表序列，采用Silva(version123)数据库进行比对。物种比对注释使用RDP classifier软件，置信区间大于0.7。
5)数据处理及统计分析
数据的组间差异性比较使用GraphPad Prism8.0进行分析，统计图使用GraphPadPrism8.0绘制。数据结果以平均值±标准差(Mean±SEM)表示，组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。*p<0.05为具有统计学显著性差异，**p<0.01表示差异极显著。
2、实验结果
(1)小鼠体重变化
小鼠体重变化如图1的A图所示。随着饲养时间延长，CD组小鼠体重平稳增长，HFD和高脂加饮食干预小鼠体重增长趋势大于CD组，在第6周HFD与CD组小鼠体重出现显著性差异(p<0.01)。统计饲养过程中小鼠体重增量，结果如图1的B图所示，HFD组小鼠增重量显著性高于CD组(p<0.01)，HFD-C3G组(p<0.05)、HFD-C3G-P组(p<0.05)显著降低了小鼠体重增量。饲养11周后，小鼠的肥胖指数(Lee’s)如图1的C图所示，结果表明HFD小鼠肥胖指数显著高于CD组(p<0.001)。
(2)肝脏组织病理学观察结果
对小鼠肝脏病理切片组织进行了油红O及HE染色分析，结果如图2所示。
油红O结果如图2的A图所示，结果表明，HFD组小鼠肝脏脂滴含量明显多于CD组，造成了小鼠脂肪肝；HFD-C3G和HFD-C3G-P有较少的脂滴存在，其中HFD-C3G-P组最为明显，脂肪肝得到缓解。肝脏油红O染色区域面积计算结果如图2的B图所示，数据显示HFD组小鼠与CD组相比，肝脏脂质蓄积显著增加(p<0.01)，HFD-C3G组(p<0.05)与HFD-C3G-P组(p<0.001)与HFD相比得到了显著改善，而HFD-P组无显著性差异。
肝脏HE切片染色结果图3的A图所示，CD组小鼠肝细胞大小均匀、边界清晰，呈单行排列。HFD组小鼠肝脏受到严重损伤，出现较多细胞肥大和脂质空泡(脂肪变性)，部分细胞出现从细胞核开始逐渐变透明的气球样变，各饮食干预组对肝脏细胞有不同程度的缓解作用。
通过NAS评分分析，结果如图3的B图所示，与CD组相比，HFD组小鼠肝脏脂肪变性(Steatosis)、小叶内炎症(Lobular inflammation)均显著增加(p<0.01)，肝细胞气球样变(Hepatocellular ballooning)有所增加。各饮食干预组肝脏脂肪变性有所缓解，但只有HFD-C3G-P组出现显著性差异(p<0.05)。HFD-C3G-P组(p<0.01)显著减少了高脂饮食小鼠肝脏的小叶内炎症，C3G和果胶单独干预组与CD组相比无显著性差异。
(3)肝脏是脂质代谢的主要场所，当脂质的合成速度大于其分解速度时，肝脏组织就有损伤或变性的风险。肥胖小鼠由于肝脏中过多的脂肪沉积，通常伴有肝脂肪变性。从小鼠肝脏病理切片油红O染色结果情况来看，高脂饮食给小鼠肝脏造成了严重的脂质蓄积，C3G、C3G-果胶复合物能有效减少高脂小鼠肝脏的脂滴量。并且C3G-果胶复合物干预的小鼠肝脏脂质蓄积减少最显著，效果最佳，说明C3G-果胶的复合摄入对减轻高脂饮食诱导的小鼠肝脏脂质蓄积更为有效。从肝脏病理切片HE染色结果来看，C3G-果胶复合物对肥胖小鼠肝脏脂质变性和小叶内炎症有显著降低效果，而单独的果胶干预作用无显著差异。
(4)小鼠SCFAs测定结果
如图4所示，HFD组小鼠的粪便中SCFAs含量发生了显著变化，对各种酸的含量进行差异性分析。总SCFAs结果显示HFD组的产量显著低于CD组，HFD-P与HFD-C3G组的总SCFAs含量与HDF相比无显著差异，而HFD-C3G-P组的总SCFAs含量显著高于HFD组。乙酸是产量最大的一类酸，与CD组相比，HFD组小鼠粪便乙酸含量显著降低，HFD-P组小鼠乙酸含量较HFD组有明显提升，HFD-C3G-P有显著性提升。丙酸和丁酸的产生与乙酸有相似的趋势，HFD-C3G-P大幅度提升。与CD组相比，HFD组小鼠粪便中戊酸的含量未显著下降，但HFD-C3G-P组的含量显著增加。
(5)小鼠结肠微生物结果分析
(5-1)小鼠结肠微生物Alpha、Beta分析
Beta多样性分析如图5的A图所示，每个点代表一个样本，同一组样本颜色相同，同组样本与其他组距离越大，表明差异越显著。Binary jaccard距离显示，HFD组与CD组和其他干预组几乎完全分开，说明各组样本微生物结构差异显著。微生物Alpha多样性分析如图5的B图显示，HFD-C3G、HFD-C3G-P、HFD-RE组Chao1指数有显著性下降，可能降低了与肥胖有关的菌群。
(5-2)小鼠结肠微生物门(Phylum)水平相对丰度
小鼠结肠微生物门水平Top15群落相对丰度对比图6的A图显示，优势菌门为Firmicutes、Bacteroidets和Proteobacteria，占菌落的90％以上，不同的组菌群结构发生了明显变化。对门水平上差异明显的菌门进行分析，结果如图6的B图所示。与CD组相比，HFD组Bacteroidets与Firmicutes的相对丰度无显著性差异。HFD-C3G-P与HFD组相比，Bacteroidets显著下降(p<0.05)，Firmicutes显著性增加(p<0.01)，Firmicutes/Bacteroidets显著上调。
(5-3)小鼠结肠微生物属(Genus)水平相对丰度
小鼠结肠微生物属水平Top30群落相对丰度对比图如图7的A图所示，优势菌属为Parabacteroides、Rikenellaceae_RC9_gut_group、Bacteroides、Alistipes等，不同分组的小鼠结肠菌群结构发生了明显变化。对属水平上差异明显的菌门进行分析，结果如图7的B图所示。与CD组相比，HFD组Parabacteroides，Alistipes(p<0.01)，Lachnospiraceae_NK4A136_group，Ruminiclostridium，Bifidobacterium的相对丰度明显降低，不同的饮食干预组有不同程度的逆转。HFD组Rikenellaceae_RC9_gut_group，Bacteroides，Blautia，Rikenella水平有显著增加，不同的饮食干预组有不同程度的改善作用。HFD-C3G(p<0.01)和HFD-C3G-P(p<0.001)显著增加了Parabacteroides的相对丰度。HFD-C3G(p<0.001)和HFD-C3G-P(p<0.001)显著降低了Bacteroides相对丰度。HFD-C3G(p<0.001)、HFD-C3G-P(p<0.001)显著增加了Alistipes的相对丰度。Rikenellaceae_RC9_gut_group、Rikenella的相对丰度在HFD-C3G(p<0.001)、HFD-P(p<0.05)和HFD-C3G-P组(p<0.001)中有显著逆转。HFD-C3G(p<0.01)、HFD-P(p<0.05)、HFD-C3G-P(p<0.01)逆转了高脂饮食诱导的Ruminiclostridium下降。HFD-P(p<0.05)、HFD-C3G-P(p<0.001)增加了Lachnospiraceae_NK4A136_group相对丰度。HFD-C3G(p<0.01)和HFD-C3G-P组(p<0.05)均显著增加了益生菌Bifidobacterium的相对丰度。
综上，C3G单独干预显著减轻了小鼠体重增量、减少了肝脏脂滴量；C3G-果胶复合物干预不仅显著减轻了小鼠体重增量、肝脏脂滴量，还显著减轻了肝脏脂质变性、小叶内炎症；而果胶单独作用对上述指标几乎没有显著性差异。结果显示，在减轻肝脏脂肪蓄积上，C3G-果胶复合物组减轻的程度显著高于C3G单独作用。并且，C3G-果胶复合物干预组对小鼠脂肪肝的减轻效果不仅明显大于C3G和果胶单独干预组，而且大于果胶和C3G组单独干预加和的效果，达到了发挥协同作用的标准。因此可以得出结论，C3G-果胶复合物对于肥胖小鼠有协同减脂作用，尤其在减轻高脂饮食引起的肝脏脂肪脂肪蓄积和损伤上协同效果明显。
C3G-果胶复合物显著增加了肥胖小鼠结肠SCFAs总量、乙酸、丁酸和戊酸的含量。C3G-果胶复合物显著上调了Parabacteroides、Bifidobacterium的相对丰度，显著增加了Alistipes的表达，C3G-果胶联用协同上调了Ruminococcaceae、Lachnospiraceae的相对丰度，这可能是C3G-果胶复合物对小鼠调节肝脏脂质蓄积起协同作用的关键。
C3G和果胶协同作用能显著降低高脂饮食诱导的小鼠体重增长，减轻脂肪肝导致的肝脏脂质蓄积和肝脏损伤。C3G-果胶复合物增加了肥胖小鼠结肠SCFAs总量、乙酸、丁酸和戊酸的含量，上调Ruminococcaceae和Lachnospiraceae的相对丰度，这可能是缓解小鼠脂肪肝的关键肠道微生物
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.花色苷和果胶联用在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。
2.花色苷和果胶联用在制备预防非酒精性脂肪肝的保健品或食品中的应用。
3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述花色苷为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。
4.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述花色苷和果胶的质量比为1：1～5。
5.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述非酒精性脂肪肝为原发性非酒精性脂肪肝或继发性非酒精性脂肪肝。
6.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为降低肝脏脂滴量、减轻肝脏脂质变性、减轻小叶内炎症、减轻肝脏脂肪蓄积。
7.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为提高结肠SCFAs、乙酸、丁酸和戊酸的含量。
8.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述预防和/或治疗非酒精性脂肪肝为上调Ruminococcaceae和Lachnospiraceae的相对丰度。
9.一种预防和/或治疗非酒精性脂肪肝的药物，其特征在于，包含花色苷和果胶。
10.根据权利要求9所述药物，其特征在于，还包括药学上可接受的载体，制成不同的剂型。
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